条件复制性腺病毒治疗肿瘤进展

近年来应用选择增殖型腺病毒进行肿瘤治疗发展迅速.动物实验和临床试验取得了大量令人鼓舞的结果.现将选择增殖型腺病毒的改造及临床试验治疗不同类型肿瘤方案的研究进展作一综述.     

肿瘤选择增殖型腺病毒载体研究进展

近年来，人们利用肿瘤细胞与正常细胞之间某些生物学性状的差异，构建了肿瘤选择增殖型腺病毒（CRAd）。其仅在肿瘤细胞中增殖，对正常细胞损伤小，以其为载体具有特别的优势。现就肿瘤CRAd的研究进展作一综述。     

肿瘤选择增殖型腺病毒载体研究进展

近年来,人们利用肿瘤细胞与正常细胞之间某些生物学性状的差异,构建了肿瘤选择增殖型腺病毒(CRAd)。其仅在肿瘤细胞中增殖,对正常细胞损伤小,以其为载体具有特别的优势。现就肿瘤CRAd的研究进展作一综述。     

基因-病毒治疗系统CNHK200-hA对肺癌治疗的研究

目的　构建抗肿瘤新生血管生成的基因治疗与病毒治疗相结合的基因 病毒治疗系统CNHK2 0 0 hA ,并对其肺癌的体内外治疗作用进行初步研究。方法　通过Westernblot分析 ,观察携带抗肿瘤新生血管生成基因angiostatink1 5 (hA)的基因 病毒治疗系统CNHK2 0 0 hA和非增殖型腺病毒对介导k1 5蛋白表达的影响 ;通过细胞病理作用及动物试验 ,比较CNHK2 0 0 hA和非增殖型腺病毒对人肺癌细胞株A5 4 9的杀伤作用及对肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用。结果　基因 病毒治疗系统CNHK2 0 0 hA能够介导hA基因在肺癌细胞内高效表达k1 5蛋白 ,其表达量高于非增殖型腺病毒Ad hA。细胞病理效应显示 ,CNHK2 0 0 hA对A5 4 9的杀伤作用明显优于Ad hA ,CNHK2 0 0 hA在感染复数 (MOI)值为 1时可完全杀伤A5 4 9细胞 ,而达到相同杀伤效应的Ad hA的MOI值为 1 0 0。动物试验显示 ,CNHK2 0 0 hA对肺癌的疗效明显好于Ad hA及肿瘤增殖型病毒ONYX 0 1 5。结论　插入了抗肿瘤新生血管生成基因hA的基因 病毒治疗系统CNHK2 0 0 hA ,可明显提高hA基因的表达量 ,其在体内外的抗肺癌作用较非增殖型腺病毒Ad hA及肿瘤增殖型病毒ONYX 0 1 5进一步提高。     

基因一病毒治疗系统CNHK200-hA对肺癌治疗的研究

目的构建抗肿瘤新生血管生成的基因治疗与病毒治疗相结合的基因一病毒治疗系统CNHK200-hA，并对其肺癌的体内外治疗作用进行初步研究。方法通过Western blot分析，观察携带抗肿瘤新生血管生成基因angiostatin k1-5(hA)的基因-病毒治疗系统CNHK200-hA和非增殖型腺病毒对介导k1-5蛋白表达的影响；通过细胞病理作用及动物试验，比较CNHK200-hA和非增殖型腺病毒对人肺癌细胞株A549的杀伤作用及对肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用。结果基因．病毒治疗系统CNHK200．hA能够介导hA基因在肺癌细胞内高效表达kl-5蛋白，其表达量高于非增殖型腺病毒Ad-hA。细胞病理效应显示，CNHK200-hA对A549的杀伤作用明显优于Ad-hA，CNHK200-hAA在感染复数(MOI)值为1时可完全杀伤A549细胞，而达到相同杀伤效应的Ad-hA的MOI值为100。动物试验显示，CNHK200-hA对肺癌的疗效明显好于Ad-hA及肿瘤增殖型病毒(ONYX-015。结论插入了抗肿瘤新生血管生成基因hA的基因-病毒治疗系统CNHK200-hA，可明显提高hA基因的表达量，其在体内外的抗肺癌作用较非增殖型腺病毒Ad-hA及肿瘤增殖型病毒ONYX-015进一步提高。     

E2F转录因子与肿瘤基因治疗

E2F转录因子与细胞增殖、凋亡及癌变密切相关.各种与E2F转录因子相关的肿瘤基因治疗已在动物实验中取得良好效果.早期基因1A区的2保守区(E1A-CR2)缺失和携带E2F1启动子的增殖型腺病毒载体,可选择性在多种肿瘤细胞中增殖,其增殖能力甚至超过了野生腺病毒,是非常有潜力的肿瘤基因治疗手段.现对E2F转录因子在细胞周期调控、凋亡、肿瘤发生及相关肿瘤基因治疗等方面的研究作一综述.     

E2F转录因子与肿瘤基因治疗

E2F转录因子与细胞增殖、凋亡及癌变密切相关。各种与E2F转录因子相关的肿瘤基因治疗已在动物实验中取得良好效果。早期基因1A区的2保守区(E1A-CR2)缺失和携带E2F1启动子的增殖型腺病毒载体，可选择性在多种肿瘤细胞中增殖，其增殖能力甚至超过了野生腺病毒，是非常有潜力的肿瘤基因治疗手段。现对E2F转录因子在细胞周期调控、凋亡、肿瘤发生及相关肿瘤基因治疗等方面的研究作一综述。     

非增殖型腺病毒和肿瘤特异性增殖型腺病毒携带IL-12基因治疗肝癌的体外实验研究

目的 比较携带小鼠IL-12基因的增殖型腺病毒(CNHK200-mIL12)和非增殖型腺病毒(Adv-mIL12)对IL-12基因的表达以及对肝癌细胞的杀伤能力。方法 通过MTT以及病毒增殖实验．评估E1B-55000缺陷的增殖型腺病毒CNHK200-mIL12和ONYX-015(dl1520),以及非增殖型腺病毒Adv-mIL12对人正常肝细胞株LO2、人肝癌细胞株HepG2和Hep3B的杀伤能力。采用蛋白质印迹分析和ELISA法,检测CNHK200-mIL12和Adv-mill2感染HepG2和Hep3B细胞后,小鼠IL-12基因的表达情况。结果 CNHK200-mIL12感染HepG2和Hep3B细胞后大量增殖,在感染后96h时检测,分别增殖3160倍和630倍,在极低的MOI(空斑形成单位／细胞)值和极短的时间内(HepG2细胞：MOI=0．2,第4天;Hep3B细胞：MOI=0．005,第2天),可大量杀伤肿瘤细胞,而对LO2细胞无明显杀伤。CNHK200-miLl2和Adv-mIL12感染HepG2细胞后,其IL-12基因表达量,前者是后者的101倍;感染Hep3B细胞后,前者是后者的20倍。结论 增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。     

溶瘤腺病毒联合化疗治疗肿瘤的研究

近年来用溶瘤腺病毒联合化疗治疗肿瘤的研究备受人们关注.肿瘤细胞对化疗药物的耐药性是目前临床上有效应用化疗方案的主要限制.溶瘤腺病毒能明显提高传统化疗对肿瘤细胞的杀伤效果,克服了传统肿瘤基因治疗中复制缺陷型腺病毒的转染效率低、靶向性差、抗癌基因表达量低的缺点.在肿瘤治疗中溶瘤腺病毒联合化疗将可能成为潜在有效的临床治疗方案.     

间质干细胞荷载溶瘤腺病毒治疗肿瘤进展

溶瘤腺病毒是具有高度的肿瘤靶向性和良好的转染率,但全身应用后机体的免疫防御机制明显限制了溶瘤腺病毒的治疗效果。细胞荷载溶瘤腺病毒可能是克服这一瓶颈的有效策略,间质干细胞对肿瘤细胞有天然的靶向性同时可荷载溶瘤腺病毒提高抗肿瘤效果,本文主要对间质干细胞荷载溶瘤腺病毒治疗肿瘤的研究领域及研究进展进行综述。      

特异性增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ治疗胃癌的体外实验研究

 目的　研究增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ在胃癌细胞BGC-823中的特异性增殖能力、目的基因表达能力、肿瘤杀伤作用及安全性。方法　通过增殖实验比较CNHK300-mIFN-γ与CNHK300在胃癌细胞BGC-823与成纤维细胞BJ中的增殖能力;ELISA法检测CNHK300-mIFN-γ和复制缺陷型腺病毒Ad-mIFN-γ在不同细胞中mIFN-γ蛋白的表达量;MTT与细胞病变效应（CPE）实验观察CNHK300-mIFN-γ对胃癌细胞的杀伤效应及安全性。结果　增殖实验结果表明CNHK300-mIFN-γ能选择性地在端粒酶阳性的胃癌细胞中大量增殖;ELISA实验结果表明CNHK300-mIFN-γ在胃癌细胞BCG-823中mIFN-γ的表达量可至（171.93±33.61）ng／ml,表达量高于复制缺陷型腺病毒Ad-mIFN-γ[（0.92± 0.24）ng／ml];MTT与CPE实验表明CNHK300-mIFN-γ对胃癌细胞BGC-823有较强的杀伤作用,对正常细胞并无明显杀伤。结论　增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ感染胃癌细胞BGC-823后能高效增殖并大量表达mIFN-γ蛋白,对胃癌细胞有明显杀伤作用且安全性良好。     

肿瘤基因治疗的腺病毒策略

 腺病毒载体是目前肿瘤临床试验中使用最为广泛的载体之一。在过去的十几年里，随着人们对腺病毒活动周期的逐步了解，已经开发出了一系列专门针对恶性肿瘤细胞的靶向腺病毒载体。这些载体可以在特定的细胞中表达治疗性基因或进行自主复制，显示了其在肿瘤治疗方面的独特优势。但目前对腺病毒进行的各种改进方式都存在不同程度的缺陷，因此仍需进一步研究。文章讨论腺病毒载体用于肿瘤基因治疗方面的一些基本情况及其在临床应用的潜力。     

重组人p53腺病毒制品在肿瘤治疗中的研究进展

重组人p53腺病毒（Ad—p53）由正常人肿瘤抑癌基因p53和重构的Ⅴ型腺病毒基因重组而成。重组人p53腺病毒（Ad—p53）制品目前已经在临床上对头颈部肿瘤、肝癌、卵巢癌、食管癌、乳腺癌、软组织肉瘤等病种的治疗取得了突破性的进展,结合其他肿瘤治疗方式（如手术、放疗、化疗）对肿瘤治疗效果会更好。     

特异性增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ表达mIFN-γ及体外肿瘤杀伤实验

目的:构建增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ和增殖缺陷型腺病毒AdEasy-mIFN-γ,比较两者在肿瘤细胞中表达mIFN-γ蛋白的能力以及CNHK200-mIFN-γ,ONYX-015及野生型腺病毒Ad5在正常及肿瘤细胞中的增殖力,进一步观察其抗瘤效果.方法:以病毒增殖试验检测病毒在细胞中的增殖能力;透射电镜观察CNHK200-mIFN-γ在Hep3B细胞中的增殖复制;检测病毒感染肿瘤细胞后mIFN-γ的表达;CPE实验观察增殖病毒对细胞的杀伤效应.结果:CNHK200-mIFN-γ和ONYX-015仅在肿瘤细胞中增殖,且前者增殖力较强.CNHK200-mIFN-γ在肿瘤细胞中表达mIFN-γ,且表达量与病毒增殖密切相关,而AdEasymIFN-γ在肿瘤细胞中的mIFN-γ表达几乎不能测到.ONYX-015与CNHK200-mIFN-γ对正常的细胞无杀伤性,但能有效地杀伤癌细胞.结论:外源基因mIFN-γ的插人没有改变增殖病毒在肿瘤细胞中选择性增殖的特性.增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ具有良好的肿瘤选择性及增殖性,且可以有效表达mIFN-γ,并且有效杀伤癌细胞,显示其良好的临床应用前景.     

溶瘤腺病毒的研究进展

 引言受某些肿瘤患者在感染病毒后出现自发性肿瘤缓解这一现象的启发,早在上个世纪初便有溶瘤病毒治疗的研究[1] 。腺病毒发现后不久也曾被用来治疗头颈部恶性肿瘤,注射腺病毒后肿瘤有不同程度缩小,但治疗后肿瘤易复发,效果难以持久;直到1996年,Bischoff等[2 ] 首次报道去除部分E1B的重组腺病毒Onyx 0 15能在p5 3异常的肿瘤细胞选择性复制引起肿瘤杀伤作用,溶瘤腺病毒研究才再次受到广泛关注并且发展迅速,出现了许多新型溶瘤腺病毒种类,使溶瘤腺病毒成为恶性肿瘤一种新的治疗平台。1　溶瘤腺病毒的作用机理[1,3- 5]许多种DNA病毒,如腺病毒、SV4 0、HPV 16等都可以改变宿主细胞细胞周期,其原因主要是病毒产生一些蛋白作用于宿主细胞细胞周期调节蛋白,使静止期细胞进入细胞周期以利于病毒DNA的复制。不同病毒影响细胞周期的机制不一,腺病毒主要通过Rb和p5 3细胞信号通路干扰宿主细胞细胞周期。1.1　Rb和p5 3细胞信号通路(见图1) :Rb(眼癌蛋白,retinoblastomaprotein)的作用是与E2F(使细胞从G1期进入S期的一种转录因子)结合,细胞内游离E2F水平下降,细胞由...     

重组腺病毒p53基因治疗肝癌研究进展

目的：探讨重组腺病毒p53基因（recombinant humanAd—p53,rAd—p53）治疗肝癌的抗肿瘤机制及临床应用。方法：应用PubMed、万方和CNKI数据库,以“肝癌、重组腺病毒p53基因、基因治疗、实验研究和临床应用”为关键词,检索1994—06—01—2013—11—31文献739篇,纳入标准：1）p53基因与肝癌发生的相关性;2）重组腺病毒p53基因抗肿瘤机制;3）重组腺病毒p53治疗肝癌的实验研究;4）重组腺病毒p53治疗肝癌的临床应用研究。根据纳入标准选择符合分析的文献36篇。结果：p53基因是公认的肿瘤抑制基因,具有促使肿瘤细胞自杀和帮助缺陷细胞修复的作用。rAd—p53是复制缺陷型5型腺病毒载体与人p53基因重组的肿瘤基因治疗制品。rAd-p53通过多种途径发挥抗肿瘤作用,包括使肿瘤的细胞周期阻滞和发生程序性死亡,促进放射线对肿瘤细胞引起的细胞周期阻滞和凋亡,刺激机体产生抗肿瘤免疫反应,抑制肿瘤血管内皮生长因子,控制肿瘤的血管生成,使注射部位瘤组织产生局部血供障碍和坏死。此外,还能增加肝癌细胞的放化疗敏感性,间接增强抗肿瘤疗效。rAd-p53基因疗法为肝癌治疗开辟了崭新的途径,多项-l盘床研究疗效良好。结论：rAd—p53基因对肿瘤的作用机制体现了在抗肿瘤治疗方面的有效性,并在基础研究及临床应用中均取得了显著进展,再肝癌的防治中将取得更大的突破。     

溶瘤腺病毒肿瘤靶向治疗：从实验室到临床

过去几十年从实验室到临床对溶瘤腺病毒进行了广泛的研究.有多种策略增强溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性,包括将腺病毒基因组中参与细胞周期节点调控的功能基因(如E1A或E1B)进行突变或(和)利用肿瘤特异性启动子调控E1A基因的靶向转录调控,利用不同血清型腺病毒或RGD基序改变溶瘤腺病毒进入肿瘤细胞方式的靶向转导调控,以及利用细胞载体将溶瘤腺病毒传送至远处的肿瘤部位.溶瘤腺病毒作为一种载体,输送免疫调节基因或治疗性基因,通过增强抗肿瘤免疫,或引起肿瘤细胞凋亡、自杀等产生协同抗肿瘤效应.溶瘤腺病毒临床试验涉及到多种实体瘤,显示其临床应用是安全的,毒性作用轻至中度,患者能很好耐受,但有明确客观抗肿瘤反应的临床病例较少见,联合诸如化、放疗等治疗方法有助于提高临床效果. 未来的方向应强化溶瘤腺病毒免疫学相关机制的研究、突破妨碍溶瘤腺病毒研究的一些技术性瓶颈、优化细胞载体、提高溶瘤腺病毒远处传递的靶向性,以及寻找更具潜能的肿瘤干细胞作为靶点.此外,需要扩大临床试验的研究范围和加强与其他治疗方式特别是免疫治疗联合应用的研究.     

肿瘤的靶向双基因-病毒治疗策略

我们曾创建基因治疗与病毒治疗相结合的肿瘤治疗新策略，即在肿瘤特异复制的靶向腺病毒ZD55中，加上基因的靶向基因-病毒治疗，这可能是取得肿瘤治疗良好效果的策略之一。     

糖化重组生存素腺病毒疫苗抗肿瘤作用的实验研究

背景与目的：生存素在调控细胞凋亡和有丝分裂过程中起着重要作用,在正常分化的组织中不表达或表达极低,而在胚胎组织和大部分肿瘤组织中广泛表达,而这一特点为恶性肿瘤的基因治疗提供了很好的靶标.本研究制备糖化重组生存素腺病毒疫苗,观察其抗肿瘤作用并探讨其作用机制.方法：将重组生存素腺病毒和甘露聚糖在氧化条件下偶联,同时建立小鼠结肠癌和Lewis肺癌模型,以糖化重组生存素腺病毒疫苗治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤体积和小鼠生存时间.对小鼠肿瘤组织作TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡.为了检测疫苗的保护作用,预先以糖化重组生存素腺病毒疫苗免疫接种小鼠,或合用抗CD4、CD8和NK单克隆抗体阻断相应的淋巴细胞亚群,再接种肿瘤,观察小鼠肿瘤生长情况.结果：糖化重组生存素腺病毒疫苗治疗组小鼠肿瘤生长受到明显抑制,无明显不良反应发生,小鼠的生存时间明显延长,肿瘤细胞凋亡明显增加.同时,糖化重组生存素腺病毒疫苗能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫,这一免疫反应依赖于CD4和CD8淋巴细胞,也部分依赖于NK细胞.结论：糖化重组生存素腺病毒疫苗能诱导机体产生特异性的主动免疫反应,诱导肿瘤细胞凋亡,具有明确的抗肿瘤作用,值得进一步研究.     

肿瘤增殖病毒治疗肿瘤的研究现状

增殖病毒用于肿瘤治疗的研究受到人们的极大关注。本文介绍了增殖病毒治疗肿瘤的研究现状,包括腺病毒、单纯疱疹病毒、呼吸道肠道病毒、新城疫病毒及自主微小病毒。亦对增殖病毒应用于载体的情况作了说明。