一氧化氮介导内毒素所致体外培养肝细胞凋亡

目的 研究一氧化氮（NO）介导内毒素（LPS）所致的肝细胞损伤的细胞死亡类型。方法 采用体外肝细胞／库普弗细胞混合培养,以光镜、电镜及抽提细胞DNA电泳观察受LPS刺激后NO产生增多所致肝细胞损伤的形态学及生物化学改变情况。结果 受LPS刺激后,培养基中NO产物水平显著升高,肝细胞变小、变圆。细胞表达出泡,核染色质致密、结块,结块,核膜皱折变形等,DNA电泳呈明显“云梯形式”。而同时加用诱导型一氧化氮合酶抑制基胍后,培养基中NO产物水平显著降低,,光镜、电镜及DNA电泳分析肝细胞均上述改变。结论 NO介导LPS所致的混合培养肝细胞损伤主要为肝细胞凋亡,提示LPS通过刺激NO大量产生而诱导肝细胞凋亡可能是其致肝损害机制之一。     

内毒素体外诱导大鼠肝细胞凋亡

目的探讨内毒素在体外直接作用于大鼠肝细胞时，肝细胞所发生的病理及生物化学特性的变化。方法采用胶原酶灌注法分离肝细胞，体外培养后在培养基中直接加入内毒素，用光镜和透射电镜观察其形态学变化Ｚ提取肝细胞的Ｄ＼Ａ片段经琼脂糖凝胶电泳观察肝细胞生物化学性质的改变。结果内毒素直接作用的肝细胞在形态学上表现出染色质凝集等凋亡细胞的特征；在生物化学方面表现典型的凋亡梯形，此过程可以被凋亡抑制剂金红三羧酸（ａｕｒｌｎｔｒｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ，ＡＴＡ％制。肝细胞调亡的数量随内毒素剂量的增加而增加，并且在处理前２４小时之内随处理时间的延长而增加。结论内毒素在体外直接作用于肝细胞，可诱导肝细胞发生凋亡。     

甘草酸二铵抗内毒素体外致肝细胞凋亡的作用

甘草酸二铵为甘草提取制剂，具有较强的保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，我们拟用体外培养的HepG2细胞作为模型，观察甘草酸二铵对内毒素(LPS)致肝细胞凋亡的拮抗作用。     

酪氨酸对体外培养大鼠甲状腺细胞功能相关基因表达的影响

目的 研究酪氨酸对体外培养大鼠甲状腺细胞甲状腺球蛋白(TG)、甲状腺过氧化物酶(TPO)、钠碘转运体(NIS)及促甲状腺素受体(TSHR)mRNA表达的影响.方法 将体外培养大鼠甲状腺细胞分为对照组、酪氨酸Ⅰ组、酪氨酸Ⅱ组,每组5例,分别用含0、5％、10％酪氨酸的培养液培养96 h,收集甲状腺细胞,应用实时荧光定量PCR检测TG、TPO、NIS、TSHR mRNA表达.结果 对照组、酪氨酸Ⅰ组、酪氨酸Ⅱ组TG、NIS mRNA表达分别为1.11±0.36、2.08±0.45、2.52±0.65和1.21±0.36、1.94±0.57、2.10±0.56,组间比较差异有统计学意义(F值分别为10.48、4.42,P均＜0.05),其中酪氨酸Ⅰ组、酪氨酸Ⅱ组TG、NIS mRNA表达明显高于对照组(P均＜ 0.05).上述3组TPO、TSHR mRNA表达分别为1.02±0.54、1.14±0.29、1.17±0.38和0.81±0.44、0.91±0.30、0.90±0.19,组间比较差异无统计学意义(F值分别为0.18、0.26,P均＞0.05).结论 酪氨酸可能影响甲状腺细胞功能相关基因表达,增加碘在甲状腺的储存,通过作用于碘泵,调节甲状腺细胞的碘摄取功能.     

促凋亡蛋白Smac和Caspase9在内毒素诱导体外肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨内毒素致肝细胞凋亡和内毒素血症在重症肝炎发病中的作用机制.方法 培养L02肝细胞并进行传代,采用内毒素10 mg/ml分别在4小时、8小时、16小时和24小时进行刺激,并将其分为4小时、8小时、16小时和24小时组和对照组5组,采用流式细胞术和荧光染色检测肝细胞凋亡以及免疫组化法检测Smac和Caspase9的表达.结果 内毒素直接作用的L02细胞在形态学上表现出胞浆浓缩核凝聚成团块、形成凋亡小体,应用Hcechst对内毒素刺激的L02细胞进行染色并在荧光显微镜下观察,Hcechst染色显示凋亡细胞呈蓝色荧光.流式细胞仪分析内毒素刺激4小时、8小时、16小时和24小时后晚期凋亡率分别为2.3%、4.0%、6.2%和18.2%,呈进行性增高(P<0.01),与对照组晚期凋亡率(0.3%)比较有显著性差异(P<0.05),Smac和Caspase9蛋白随着刺激时间的增长表达率逐渐增高(P<0.01),与对照组比较,各刺激组Smac和Caspase9蛋白表达显著增高(P<0.05).各组Smac与Caspase9蛋白表达呈正相关关系(r=0.527,P<0.001).且Smac和Caspase9蛋白在胞浆中呈棕黄色表达.结论 内毒素在体外可以通过促凋亡蛋白Smac及增强下游通路Caspase9的活性直接诱导正常肝细胞凋亡.     

内毒素诱导肝细胞凋亡及肝细胞生长因子的抑制作用观察

目的观察内毒素(LPS)诱导肝细胞凋亡的作用及肝细胞生长因子(HGF)对LPS的拮抗作用。方法HepG2细胞传代培养24 h,分三组。对照组加原培养液,LPS组加含LPS(20μg/ml)的培养液,干预组加含LPS(20μg/ml)、HGF(40 U/L)的培养液．继续培养16 h。Tunel标记法检测细胞凋亡。结果LPS组细胞凋亡率为98．65%±0．64%．干预组为35．97%±0．45%,两组相比,P＜0．01。结论LPS可诱导肝细胞凋亡,HGF可抑制LPS所诱导的肝细胞凋亡。     

GCDC诱发体外培养大鼠肝细胞凋亡的实验研究

在阻塞性黄疸中因胆汁瘀积引起胆盐的升高,进而导致肝损害,但其损害机制尚未阐明．阻塞性黄疸（阻黄）时胆盐对肝细胞凋亡的影响知之甚少．我们用ＤＮＡ含量流式细胞术（ＦＣＭ）和末端脱氧核苷酸转移酶（ＴｄＴ）介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）研究不同浓度的甘氨鹅脱氧胆酸钠（ＧＣＤＣ）对体外培养大鼠肝细胞凋亡状态的影响,以探讨阻黄肝损害的病理机制．１　材料和方法１．１　材料　①肝细胞的分离与培养：采用胶原酶原位肝灌注法．健康♂Ｗｉｓｔａｒ大鼠,氯胺酮０－２ｍｇ／ｋｇｉｐ,麻醉后固定体位,消毒皮肤后…     

红细胞生成素对大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨红细胞生成素(EPO)对大鼠心肌缺血-再灌注损伤(IRI)时心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因、蛋白表达的影响。方法以左冠状动脉前降支穿线结扎法制备心肌缺血再灌注模型,以TUNEL法检测凋亡细胞,S-P免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白表达,RT-PCR测定Bcl-2、BaxmRNA。结果EPO的干预使凋亡细胞指数明显下降,并上调Bcl-2基因及蛋白表达(P<0.05),而对Bax基因及蛋白表达无显著影响。结论EPO对大鼠心肌IRI具有显著的抑制细胞凋亡的作用。     

促肝细胞生长素对肝细胞凋亡的影响

缺血再灌注是肝脏疾病中常见的临床病理过程 ,如肝脏手术、肝脏移植及失血性休克的输血抢救等 ,均存在肝组织缺血再灌注损伤。随缺血再灌注损伤时间及程度不同 ,既可出现可逆性损伤 ,也可出现不可逆性损伤。最近的研究表明 ,在肝缺血再灌注损伤中有肝细胞凋亡存在 ,这是一种不可逆性损伤[1] 。因此 ,在缺血再灌注过程中如何保护肝脏 ,减少不可逆损伤 ,提高肝脏对缺血再灌注损伤的耐受性 ,具有很重要的意义。材料和方法一、实验动物及缺血再灌注模型的制备Ｗｉｓｔａｒ大鼠 (黑龙江省肿瘤研究所提供 ) 5 0只 ,雌雄各半 ,重 2 0 0～ 2 5 0 ｇ…     

内毒素诱导产生的一氧化氮对体外肝细胞的损伤作用

目的 探讨NO在LPS所致肝损害中的作用。方法 采用LPS刺激体外肝细胞、Kupffer细胞或两者混合培养,观察NO产生情况及培养肝细胞形态改变。结果 LPS刺激后,各级培养上清中NO产物水平均显著升高,尤其Kupffer细胞单独培养及肝细胞/Kuppffer细胞混合培养组升高更加显著,分别约为对照组的10倍和8倍,并且混合培养组中肝细胞形态出现明显改变,贴壁肝细胞变小、变园,核内染色质致密、结块,部分染色质边积,核膜皱折变形。而加用iNOS抑制剂氨基胍则培养上清中NO产物水平明显降低(约降低60％～65％),肝细胞形态未见明显改变。结论 通过诱导肝细胞、尤其Kupffer细胞产生大量NO而介导肝细胞损伤可能是LPS所致肝损害的重要机理之一。     

重组人生长激素对内毒素致肝细胞凋亡效应的抑制作用

目的观察内毒素（LPS）对肝细胞的直接作用及重组人生长激素（rhGH）的干预效果。方法内毒素诱导肝细胞损害,HepG2细胞传代培养24h后,换用含内毒素（20μg/ml）和/或rhGH、肝细胞生长因子（HGF）的新鲜培养液继续培养16h,观察药物对LPS作用的干预效果。结果HepG2细胞经LPS作用16h,透射电镜观察既有形态正常的细胞,同时也出现典型的凋亡细胞表现为胞浆浓缩核凝聚成块状,凋亡小体形成,细胞器（包括线粒体）结构基本正常;TUNEL标记后胞核呈棕褐色染色,而对照细胞无阳性染色信号,证实LPS作用16h后HepG2细胞已发生凋亡。将rhGH与LPS同时加入培养液中共同作用16h,rhGH可明显减少HepG2细胞经LPS诱导的细胞凋亡数量对照组为（99±0.8）%,rhHG处理组为（36±5.6）%,P＜0.001。结论重组人生长激素可以抑制LPS致肝细胞凋亡作用。     

凉血化瘀方对内毒素所致肝细胞凋亡的干预作用

目的 :研究内毒素脂多糖 (L PS)诱导的肝细胞凋亡在暴发性肝衰竭 (HFH)发病机制中的作用及凉血化瘀方对其的影响。方法 :腹腔注射 L PS于 D-氨基半乳糖 (Gal N)致敏的小鼠 ,造成 HFH模型 ,用脱氧核苷酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术 (TUNEL 法 )、苏木精 -伊红染色及透射电镜观察肝细胞凋亡和病理损伤情况及药物的干预作用。结果 :造模 6 h模型组大量凋亡阳性细胞表达 ,治疗组则明显减少 (P <0 .0 1)。至 2 4 h肝细胞损害以坏死为主 ,其程度与细胞凋亡相一致。结论 :肝细胞凋亡存在于内毒素肝损伤过程中 ,且与肝细胞损害程度相关 ,凉血化瘀方对 HFH的治疗作用可能与其对肝细胞凋亡的抑制有关。     

波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法将INS-1细胞随机分为三组。正常对照组(NG):含5.5 mmol/L葡萄糖;持续高糖组(SHG):含33.3 mmol/L葡萄糖;波动性高糖组(IHG):含5.5 mmol/L或33.3 mmol/L葡萄糖,每24 h交替换液1次,均培养3 d。3 d后检测各组INS-1细胞活性及凋亡百分率,胰岛素分泌量,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及胰岛素(insulin)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)mRNA表达水平。结果与NG组相比,SHG组与IHG组凋亡率均明显升高,细胞活性明显降低,Bax、CytC及Caspase-3表达明显增强,胰岛素分泌量及insulin、PDX-1 mRNA表达水平均明显降低(P均<0.01);与SHG组相比,IHG组细胞活性及胰岛素分泌量明显降低,凋亡率及Caspase-3明显增加(P均<0.01),Bax、CytC表达水平与insulin及PDX-1 mRNA表达水平均未见统计学差异。结论波动性高糖能导致胰岛细胞凋亡增加和功能障碍,其机制可能与上调Bax、CytC、Caspase-3及降低insulin与PDX-1基因表达等相关。     

利多卡因对体外培养人关节软骨细胞凋亡的影响

目的 通过检测10 mg/ml和20 mg/ml利多卡因干预后体外培养人关节软骨细胞凋亡率的变化,探讨短时间利多卡因对正常软骨细胞是否有毒害作用.方法 正常人关节软骨组织进行消化培养获取软骨细胞,分别用PBS、10 mg,/ml利多卡因和20 mg/ml利多卡因处理24h,然后利用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率.结果 10 mg/ml和20 mg/ml利多卡因作用后都可使体外培养的软骨细胞凋亡率明显升高,同10 mg/ml利多卡因相比,20 mg/ml更能促进软骨细胞凋亡.结论 利多卡因能够导致体外培养关节软骨细胞凋亡的增加,关节内注射利多卡因有可能加速骨性关节炎发生,临床应慎用.     

针刺血清对体外培养破骨细胞凋亡的影响

目的观察正常大鼠及去卵巢模型大鼠针刺血清对体外培养新生大鼠破骨细胞凋亡的影响。方法将60只12月龄雌性SD大鼠随机分为正常针刺组、正常对照组、假手术组、模型组、针刺预防组和针刺治疗组,制备针刺血清和对照血清。自新生SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞,加含10%针刺血清或对照血清的DMEM培养液培养48h后,流式细胞术检测破骨细胞凋亡情况。结果与正常对照组大鼠血清比较,正常针刺组血清使破骨细胞凋亡率提高0.6%。模型组与假手术组比较,破骨细胞凋亡率降低4.0%,针刺预防组和针刺治疗组与模型组比较,破骨细胞凋亡率分别提高了5.4%和1.5%。结论针刺具有促进破骨细胞凋亡的作用。     

血小板活化因子对体外培养肝细胞的作用

血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ＰＡＦ）是一具有广泛生物活性的脂质递质,与内毒素有着密切的关系,后者对肝脏的损害较为明确［１］．新近我们研究发现ＰＡＦ在各型病毒性肝炎中特别是重症肝炎患者显著增高,与肝细胞坏死程度及血中内毒素水平呈正相关,提示ＰＡＦ参与了内毒素介导的肝脏损害［２］．但ＰＡＦ对体外肝脏细胞是否有损害作用目前尚未见报道．１　材料和方法１．１　材料　胶原酶、链酶蛋白酶、ＰＡＦ标准品、内毒素（ＬＰＳ,Ｏ１１１：Ｂ４）为Ｓｉｇｍａ公司产品,ＲＰＭＩ１６４０…     

重型肝炎患者血浆对体外培养猪肝细胞的影响

有研究证实肝衰竭患者血浆或血清对体外培养的HepG2、HHY41细胞有毒性作用。现阶段生物人工肝临床研究的主要细胞材料为猪肝细胞，肝衰竭患者血浆对其毒性作用研究鲜见报道，因此研究旨在采用猪肝细胞，观察我国数量众多的慢性乙型病毒性重型肝炎患者血浆对其体外影响。     

玉米赤霉烯酮对体外培养大鼠肝细胞的影响

通过测定大鼠肝细胞培养液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、白蛋白及细胞内ＤＮＡ的含量、探索玉米赤霉烯酮（Ｆ－２毒素）对体外培养大鼠肝细胞的损伤作用。结果表明：Ｆ－２毒素对肝细胞分泌ＬＤＨ无影响，但可使白蛋白和ＤＮＡ合成下降。