1,25-二羟维生素D_3对MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨 1 ,2 5 二羟维生素D3 (1 ,2 5 dihydroxyvitaminD3 ,1 ,2 5 (OH) 2 D3 )对成牙本质细胞系MDPC 2 3细胞增殖和碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase,ALP)活性的影响。方法 :细胞培养 ,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法。结果 :1 ,2 5 (OH) 2 D3 明显抑制MDPC 2 3细胞增殖 ,而促进MDPC 2 3细胞内碱性磷酸酶活性 ,呈一定的剂量和时间依赖性。结论 :1 ,2 5 (OH) 2 D3 可调节成牙本质细胞增殖和ALP活性 ,在成牙本质细胞增殖和矿化过程中可能发挥重要的作用     

1,25-二羟维生素D3对MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3(1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3)对成牙本质细胞系MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.方法:细胞培养,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法.结果:1,25-(OH)2D3明显抑制MDPC-23细胞增殖,而促进MDPC-23细胞内碱性磷酸酶活性,呈一定的剂量和时间依赖性.结论:1,25-(OH)2D3可调节成牙本质细胞增殖和ALP活性,在成牙本质细胞增殖和矿化过程中可能发挥重要的作用.     

熊果酸对成牙骨质细胞增殖及矿化功能的影响

目的:观察熊果酸对鼠成牙骨质细胞系OCCM-30增殖、周期、凋亡及矿化功能的影响。方法:一定浓度熊果酸处理成牙骨质细胞后,cck-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,微量酶标法检测碱性磷酸酶活性,茜素红染色法定量及定性检测矿化结节量。结果:熊果酸组(2.5 μmol/L)相比于对照组,细胞增殖率和细胞周期增殖指数升高,早期凋亡率降低,碱性磷酸酶活性和矿化结节量上调。结论:一定浓度熊果酸可促进成牙骨质细胞增殖,G1期百分比降低,抑制早期凋亡,增强碱性磷酸酶活性,促进矿化结节的形成。     

牙本质基质蛋白1基因反义核酸对MDPC-23细胞碱性磷酸酶活性和矿化能力的影响

目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)基因反义寡核苷酸 (AS -ODN)对成牙本质细胞系MDPC -2 3细胞碱性磷酸酶 (ALPase)活性和矿化能力的影响 ,深入研究成牙本质细胞的分化和牙本质形成的机制。方法 :以稳定表达DMP1的MDPC -2 3细胞为靶细胞、不同浓度DMP1反义核酸为阻断剂 ,观察不同作用时间对MDPC -2 3细胞ALPase活性的影响。用Westernblot法检测 10 μmol/LAS -ODN不同作用时间细胞DMP1表达情况 ,并观察连续作用 10d对该细胞矿化能力的影响。结果 :与正常组和S -ODN组比较 ,不同浓度的AS -ODN能够降低MDPC -2 3细胞ALPase活性 ,其中 10 μmol/LAS -ODN降低ALPase活性最为显著 (作用 5d时OD值最低 ,为 0 .3 3 78± 2 .0E)。Westernblot法检测到DMP1在MDPC -2 3细胞的表达在 10 μmol/LAS -ODN加入 12h后减弱 ,2 4h后完全阻断。此浓度AS -ODN连续作用细胞 10d后 ,vonKossa染色显示细胞中出现明显的钙盐沉积 ,矿化结节的数量和大小明显少于对照组。结论 :DMP1反义核酸能够降低MDPC -2 3细胞AL Pase活性和矿化能力 ,提示DMP1参与调节成牙本质细胞矿化过程 ,可能具有启动牙本质矿化的作用。     

TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)对成牙本质细胞系MDPC—23增殖和细胞周期的影响。方法：细胞培养，MTT比色测定法和流式细胞仪(flow cytometry，FCM)分析技术。结果：TGF-β1能明显抑制MDPC—23细胞增殖，无剂量依赖性，但呈时间依赖性；FCM结果显示，TGF-β1作用后，MDPC—23细胞G1％升高，而S％显著降低，反映细胞增殖活性的增殖指数Prl值(S G2M)％增高。结论：TGF-β1抑制成牙本质细胞系MDPC—23细胞增殖和DNA合成。     

组蛋白去甲基化酶FBXL11抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化

目的 研究组蛋白去甲基化酶FBXL11对牙髓干细胞定向分化能力的影响.方法 成骨分化诱导培养基诱导牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化.逆转录病毒转染构建过表达FBXL11的牙髓干细胞稳定转染细胞,进行FBXL11获得性功能研究.碱性磷酸酶活性实验及碱性磷酸酶染色检测成骨/成牙本质分化早期分化指标-碱性磷酸酶活性.茜素红染色及钙离子定量分析检测牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化能力.实时定量RT-PCR检测FBXL11及成骨/成牙本质分化相关基因-骨涎蛋白、骨桥蛋白和骨钙素的表达.结果 成骨诱导牙髓干细胞抑制FBXL11的表达.过表达FBXL11明显抑制牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、牙髓干细胞体外矿化能力以及骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达.结论 组蛋白去甲基化酶FBXL11具有抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化的潜能.     

人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :观察人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法 :分对照组和实验组 ,对照组是转染不含目的基因的空白质粒 pcDNA3的培养上清 ,实验组是转染pcDNA3 -hDSP重组质粒的培养上清。取第 5代人牙乳头间充质细胞 ,接种于 96孔板 ,对照组 6孔 ,实验组 10孔 ,用MTT法检测hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖的影响 ,用碱性磷酸酶检测试剂盒检测hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果 :hDSP能明显抑制体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖 (P <0 .0 1) ,但能促进细胞内和培养上清中碱性磷酸酶的分泌 (P <0 .0 1)。结论 :hDSP能促进人牙乳头间充质细胞的分化和矿化     

肿瘤坏死因子受体相关分子6在成牙本质细胞中表达的研究

目的 :研究肿瘤坏死因子受体相关分子 6(TRAF6)是否在成牙本质细胞中表达。方法 :通过westernblot、免疫组化染色研究TRAF6蛋白在成牙本质样细胞系MDPC 2 3中的表达。结果 :Westernblot结果显示MD PC 2 3细胞总蛋白中有大小约 60Kda的TRAF6蛋白条带 ;免疫组化法表明TRAF6在MDPC 2 3细胞浆呈阳性表达。结论 :本实验从蛋白水平证实了成牙本质样细胞MDPC 2 3表达TRAF6,提示TRAF6可能是一种新发现的影响成牙本质细胞分化的胞内信号转导分子     

阻断氯离子通道对小鼠成牙本质细胞MDPC-23生物学特性影响的研究

目的：研究氯离子通道对小鼠成牙本质细胞MDPC-23生物学特性的影响。方法：应用MTT、生化分析、荧光染色等方法,观察NPPB阻断氯离子通道之后MDPC-23细胞增殖,ALP活性以及形成细胞外矿化基质的能力等方面的变化。结果：氯离子通道被阻断后,细胞的增殖速度减慢,培养上清中的碱性磷酸酶活性明显增高,而且细胞外矿化结节的形成时间比对照组缩短。结论：阻断氯离子通道可抑制成牙本质细胞MDPC-23的增殖,但对其矿化有一定的促进作用。     

FGF18对成牙本质细胞样细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究FGF18对成牙本质细胞样细胞MDPC-23增殖和ALPase活性的影响。方法：用MTT法和酶动力法分别检测MDPC-23细胞经不同浓度的FGF18刺激48h和72h后细胞增殖和ALPase活性的变化。结果：在一定范围内,FGF18显著促进MDPC-23细胞的增殖和ALPase活性,随着浓度的增高和时间的延长,作用更加明显。结论：FGF18可能促进小鼠成牙本质细胞的增殖和分化。     

小鼠牙本质涎磷蛋白启动子报告基因载体的构建和启动子活性分析

目的：克隆小鼠牙本质涎磷蛋自（dentin sialophosphopmtein,DSPP)基因启动子，构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析各种载体中DSPP启动子活性。方法：细胞基因组提取，PCR，瞬时转染和报告基因检测。结果：从MDPC-23细胞基因组中克隆出长为1.5kbp的DSPP启动子，将启动子酶切成不同的片断，克隆到虫工业基础光素酶报告基因载体pC1.3-Enhancer,构建出4种含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，将这些报告基因载体瞬时转染至MDPC-23细胞，载体中的启动子具有不同的活性。结论：成功构建了含小鼠DSPP启动子片段的报告基因载体，为以后研究DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。     

小鼠牙本质涎磷蛋白5′端非编码区启动子报告基因载体的构建和分析

目的：克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphopmtein，DSPP)基因启动子，构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析各种载体中DSPP启动子活性：方法：PCR、报告基因载体构建、瞬时转染和报告基因检测。结果：PCR获得DSPP启动子的3个不同片段，将它们克隆到萤火虫荧光素酶报告基因载体pG13-Enhancer，构建出3种含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，将这些报告基因载体瞬时转染至MDPC-23细胞，载体中的启动子具有不同的活性。结论：成功构建了含小鼠DSPP启动子片段的报告基因载体，为以后研究DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。     

Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23中的表达及功能

目的研究Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23作为转化生长因子(TGF)β信号分子的作用。方法常规条件下培养MDPC-23细胞,在TGF-β1刺激培养1h后,观察细胞内Smad分子的定位变化。将Smads真核表达载体分别与报告基因载体p3TP-Lux瞬时共转染至MDPC-23,在TGF-β1刺激培养24h后,裂解细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测细胞裂解液中的荧光素酶活性。结果MDPC-23细胞表达Smad2和Smad3蛋白分子,主要定位于细胞质,在TGF-β1刺激1h后,Smad2和Smad3从胞质向胞核转位聚集。TGF-β1可诱导p3TP-Lux基础启动子活性,约增加13倍。过表达野生型Smad3蛋白可促进TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导,但是过表达Smad3突变体抑制TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导。和Smad3作用相比,过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1诱导p3TP-Lux启动子活性无明显影响。结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,Smad信号途径存在并参与介导TGF-β1诱导的转录调控。     

The in vitro effects of CCN2 on odontoblast-like cells

ObjectiveTo investigate the in vitro effects of CCN2 on odontoblast-like cells proliferation and differentiation.DesignMDPC-23 cells were cultured in DMEM supplemented with 5% FBS. CCN2 was either added to culture media or coated onto culture polystyrene, addition or coating of dH2O was served as control. In the addition group, CCN2 (100 ng/mL) was added into culture media. In the coating group, CCN2 at the concentration of 1000 ng/mL was employed. Cell proliferation was performed using CCK-8 assay. Cell differentiation and mineralization were analyzed by ALPase activity assay, real time RT-PCR and alizarin red staining. One-way ANOVA with post-hoc tukey HSD test was used for statistical analysis.ResultsMDPC-23 cells exhibited robust proliferative activity upon exposure to either soluble or immobilized CCN2. ALP activity of cells cultured on CCN2-modified surface was continuously strengthened from day six (0.831 ± 0.024 units/μg protein versus 0.563 ± 0.006 units/μg protein of control) till day eight (1.035 ± 0.139 units/μg protein versus 0.704 ± 0.061 units/μg protein of control). Gene expression of BSP, OCN and OPN were promoted by soluble CCN2 after 48 h exposure. Moreover, gene expression of BSP, OCN, OPN, ALP, COL1 A1, Runx-2, DSPP and DMP-1 was significantly enhanced by immobilized CCN2. Finally, mineralization of MDPC-23 cells was accelerated by both soluble and immobilized CCN2 to different extent.ConclusionsThe findings indicate that CCN2 promoted proliferation, odontogenic gene expression and mineralization of MDPC-23 cells. It is proposed that CCN2 may be a promising adjunctive formula for dentin regeneration.     

Smad分子在骨形成蛋白2调控成牙本质细胞Ⅰ型胶原基因表达中的作用

目的　研究Smad蛋白在骨形成蛋白 2 (bonemorphogeneticprotein 2 ,BMP 2 )调控小鼠成牙本质细胞系MDPC 2 3内Ⅰ型胶原α2链 [collagenα2 (Ⅰ ) ,COL1A2 ]表达中的作用。方法　细胞免疫组化观察MDPC 2 3细胞内BMP 2细胞内信号分子Smad1、Smad5和Smad6的表达。瞬时转染和报告基因检测观察Smad1、Smad5和Smad6在BMP 2调控COL1A2基因转录中的作用。结果　MDPC 2 3细胞表达Smad1、Smad5和Smad6。BMP 2能诱导含COL1A2基因启动子的荧光素酶报告基因活性。Smad1或Smad5过表达增强BMP 2诱导的COLIA2基因启动子活性 ,而Smad6过表达抑制BMP 2诱导的COL1A2基因启动子活性。过表达Smad1或Smad5突变型载体可以阻断BMP 2的诱导能力。结论　在MDPC 2 3细胞内 ,Smad信号途径存在并发挥功能 ,参与调控BMP 2对COL1A2基因的转录。Smad信号途径可能在BMP 2调控成牙本质细胞分化和牙本质形成过程中发挥重要作用