急性脑梗死患者血小板CD62p及PAC-1的测定及意义

目的:观察急性脑梗死患者血小板膜选择素(CD62p)和GPⅡb/Ⅲa(PAC-1)的变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术(FCM)三色荧光标记技术检测40例脑梗死患者及30名正常人血小板膜CD62p和PAC-1的阳性百分率。结果:脑梗死患者24内血小板表达CD62p和PAC-1[分别为(33.1±7.5)%,(73.1±11.3)%]明显高于对照组[分别为(4.1±1.6)%,(8.5±2.1)%,均P<0.01],之后逐渐下降,第21天仍高于对照组。结论:急性脑梗死时血小板活化程度明显增高,测定血小板活化标志物CD62p及PAC-1为急性脑梗死抗血小板治疗提供了理论依据。     

聚丙烯酰胺接枝改性聚丙烯膜的血液相容性(英文)

背景:绝大多数高分子材料在与血液接触时都导致不同程度凝血,使其应用受到限制.因此研制有优良抗凝血性能的高分子材料成为生物人工肝材料临床研究中的关键问题.目的:体外检测新型人工肝反应器材料--聚丙烯酰胺接枝改性聚丙烯膜(PP-g-AAm)的血液相容性.方法:对改性前、后的聚丙烯膜行溶血试验、凝血酶原时间和活化部分凝血激酶时间试验,用流式细胞术检测血小板CD62P和CD63的表达率,扫描电镜观察两种膜上血小板的黏附情况.结果与结论:聚丙烯膜和PP-g-AAm膜的溶血率分别为1.32%和1.46%;聚丙烯膜的凝血酶原时间和活化部分凝血激酶时间较PP-g-AAm 膜明显缩短(P<0.05);PP-g-AAm 膜激活血小板表达CD62P、CD63的百分率都明显少于聚丙烯膜(P<0.05);扫描电镜观察两种材料表面黏附的血小板都有明显变形,但PP-g-AAm膜表面黏附的血小板明显少于聚丙烯膜.提示PP-g-AAm膜具有良好的血液相容性.     

冠心病患者血小板CD62p及GpⅡb/Ⅲa的变化

目的 观察冠心病患者血小板膜P选择素(CD62p)和GpⅡb/Ⅲa(PAC-1)的变化及其临床意义.方法 采用流式细胞术(FCM)三色荧光标记技术检测40例冠心病患者及30名正常人血小板膜CD62p和PAC-1的阳性百分率.结果 冠心病组血小板CD62p[(27.6±14.0)%]与PAC-1[(31.8±16.7)%]阳性百分率显著高于对照组[(3.1±1.5)%,(7.0±1.8)%,P均＜0.01].结论 CD62p和PAC-1是血小板活化的敏感和特异指标,全血流式细胞术测血小板功能可用于冠心病的监测和评价抗血小板药物的疗效,监测治疗干预的效果和预测并发症.     

2型糖尿病长期未进展者血小板表面分子CD40L,CD62p及hs-CRP变化分析

目的 连续观察3年,随访17例2型糖尿病长期未进展患者,检测血小板CD40L,CD62p表达水平,探讨CD40L、CD62p表达与超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平变化 情况.方法 采用流式细胞技术和免疫浊度法分别对17例2型糖尿病长期未进展患者与25例2型糖尿病迅速进展患者的血小板CD40L,CD62p表达及hs-CRP水平进行检测.结果 2型糖尿病长期未进展患者血小板CD40L表达率(34±7.2)%,CD62p(40±8.3)%和hs-CRP(10±3.2)mg/L;2型糖尿病进展迅速患者血小板CD40L表达率(53±6.3)%,CD62p(45±6.3)%和hs-CRP(15±2.8)mg/L;正常对照志愿者血小板CD40L表达率(9.2±3.4)%,CD62p(16±5.1)%和hs-CRP(3.4±1.8)mg/L.T2DM迅速进展组血小板CD40L,CD62p表达率与hs-CRP水平变化在随访的3年中变化显著增高;T2DM长期未进展组血小板CD40L表达率与hs-CRP水平变化在随访的3年中无显著变化,CD62p表达增加明显.结论 T2DM患者长期未进展者虽然血管内炎性得到改善,但血小板活化情况仍然在增强,罹患血栓性疾病的风险可能并未减低.     

外源性一氧化碳分子对脓毒症时血小板膜糖蛋白过度表达和血小板活化的抑制作用及机制

目的 探讨外源性一氧化碳释放分子(CORM-2)对脓毒症时血小板膜糖蛋白表达和血小板活化的抑制作用.方法 将120只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、盲肠结扎+穿孔术(CLP)组、CLP+无活性CORMS(iCORM-2)组和CLP+CORM-2组.CLP+CORM-2组除伤后使用CORM-2外,其他处理同CLP组.于伤后6 h、12 h、24 h分别检测小鼠血浆纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)的水平;全血电阻法检测血小板聚集功能;用流式细胞术检测血小板膜糖蛋白CD61和CD62p的表达水平;同时Western Blot检测造血系细胞特异蛋白-1(HS1)分子磷酸化水平.结果 与假手术组比较,12 h、24 h CLP组血浆FIB、D-D的水平明显增加[分别为(4.65±0.73)g/L,(5.76±0.88)g/L和(229.93±62.91)mg/L,(182.96±46.32)mg/L,P<0.01)],血小板聚集率明显增高,血小板膜糖蛋白CD61和CD62p的表达增加[分别为(94.87±11.22)%,(95.93±7.43)%和(34.81±4.76)%,(32.88±6.94)%,P<0.05)].HS1分子磷酸化水平增加;CLP+CORM-2组血浆FIB、D-D的水平均显著降低[分别为(3.32±0.42)g/L,(3.68±0.46)g/L和(169.57±35.14)mg/L,(141.82±18.46)mg/L,P<0.05)],血小板聚集率下降明显,膜糖蛋白CD61和CD62p的表达也得到有效下调[分别为(72.12±11.67)%,(73.68±8.76)%和(21.38±1.61)%,(24.65±5.96)%,P<0.05],HS1分子磷酸化水平得到有效抑制.结论 外源性CORM-2能明显下调脓毒症时血小板膜糖蛋白CD61和CD62p的表达以及HS1分子磷酸化水平,并抑制血浆NB、D-D的升高,继而降低血小板黏附及聚集率,有效抑制脓毒症时血小板的过度活化.     

冠心病患者血小板CD62p及GpⅡb/Ⅲa的变化

目的　观察冠心病患者血小板膜P选择素(CD62p)和GpⅡb/Ⅲa(PAC 1)的变化及其临床意义。方法　采用流式细胞术(FCM)三色荧光标记技术检测40例冠心病患者及30名正常人血小板膜CD62p和PAC 1的阳性百分率。结果　冠心病组血小板CD62p[ (27. 6±14. 0)% ]与PAC 1[ (31. 8±16. 7)% ]阳性百分率显著高于对照组[ (3. 1±1. 5)%, (7. 0±1. 8)%,P均<0. 01]。结论　CD62p和PAC 1是血小板活化的敏感和特异指标,全血流式细胞术测血小板功能可用于冠心病的监测和评价抗血小板药物的疗效,监测治疗干预的效果和预测并发症。     

丹参多酚酸盐对重度慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血小板和内皮细胞功能的影响

目的 探讨丹参多酚酸盐(DSM)对重度慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血小板和血管内皮细胞功能变化的影响.方法 将40例中重度AECOPD患者按随机数字表法分为常规治疗组、DSM组,每组20例;并选择同期20例健康者作为健康对照组.两组常规治疗相同;DSM组每日加用DSM0.2 g静脉滴注,连用2周.应用酶联免疫吸附法检测血浆膜糖蛋白140(GMP140)和血管性血友病因子(vMF),应用流式细胞术检测血小板膜糖蛋白P-选择素/血小板质膜蛋白(CD62P/CD61)表达双阳性血小板百分率.结果 两个治疗组治疗前GMP140C常规治疗组(17.51±2.75)μg/L,DSM组(16.94±2.57)μg/L]、vMF水平(常规治疗组(13.64±2.37)μg/L,DSM组(14.14±2.17)μg/L]及CD62P/CD61双阳性血小板百分率[常规治疗组(20.24±2.64)%,DSM组(19.54±2.69)%]较健康对照组[(9.25±1.80)μg/L、(6.13±1.17)μg/L、(11.21±1.11)%]均显著上升(均P<0.01);治疗后两组GMP140、vMF水平及CD62P/CD61双阳性血小板百分率显著降低,且DSM组的下降幅度[GMP140(3.91±0.57)μg/L,vWF(3.86±0.71)μg/L,CD62P/CD61(3.69±0.62)%]较常规治疗组[GMP140(2.30±0.33)μg/L,vWF(2.72±0.45)μg/L,CD62P/CD61(2.24±0.45)%]更为显著(均P<0.01),但是均高于正常水平.结论 DSM有显著抑制血管内皮细胞和血小板活化的作用,可预防血栓性疾病.     

血小板活化与高血压分期、危险度分层的关系

目的探讨血小板α颗粒膜糖蛋白(CD62p)、溶酶体颗粒膜糖蛋白(CD63)与高血压分期、危险度分层的关系.方法应用流式细胞术测定85例高血压患者及29名正常对照组的血小板糖蛋白CD62p、CD63的百分率,同时用放射免疫法检测血浆内皮素.结果高血压病组血小板CD62p、CD63阳性的百分率显著高于正常对照组(P<0.05～<0.01),且随着高血压患者血压分期水平及危险度分层递增而增加,差异有显著性(P<0.05～<0.01).血小板CD62p、CD63与血浆内皮素呈显著正相关(r分别为0.41、0.40,P均<0.05).结论活化血小板标志物测定与高血压病分期、危险度分层具有显著的相关性,对于高血压恶化的早期诊断具有一定的应用价值.     

糖尿病视网膜病变血小板膜糖蛋白及血小板聚集功能的检测意义

目的探讨血小板CD62p、CD63的表达及聚集功能的变化与糖尿病视网膜病变的关系。方法对35例糖尿病视网膜病变患者分别用流式细胞仪和多功能血液聚集仪测定血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的表达及聚集功能,并与糖尿病无血管并发症组和健康对照组比较。结果糖尿病视网膜病变组血小板膜糖蛋白CD62p(8.74±3.01)、CD63(9.38±3.25)的表达及聚集功能(58.9±9.7)均分别显著高于健康对照组的2.89±1.72(P<0.001)、3.06±2.11(P<0.001)、33.7±12.4(P<0.001)和糖尿病无血管并发症组的6.02±2.78(P<0.001)、6.89±2.97(P<0.005)、4.51±8.90(P<0.001);糖尿病无血管并发症组又均显著高于健康对照组(P<0.001)。结论血小板活化与糖尿病视网膜病变的发生、发展有密切联系。血小板膜糖蛋白CD62p、CD63和聚集功能的检测,对糖尿病视网膜病变的早期诊断及早期预防和治疗具有重要临床价值。     

急性脑梗死患者活化血小板的检测及临床价值

目的通过检测急性脑梗死患者血小板膜糖蛋白（CD62p）及血小板激活复合物（PAC-1）,探讨脑梗死患者血小板活化的临床意义。方法采用流式细胞仪测定45例急性脑梗死患者在发病48 h、6～8 d、3周时及35名正常对照者的血浆CD62p及PAC-1阳性百分率。结果脑梗死患者48 h内血浆CD62p（25.1%±7.4%）和PAC-1（65.2%±9.9%）阳性率明显高于正常对照组（4.0%±1.3%;8.2%±2.2%）（P〈0.01）。此后至3周逐渐下降,但仍高于正常对照组（P〈0.01）。结论急性脑梗死患者血小板处于高度活化状态,监测血小板活化程度对病情轻重的预测及指导临床用药有重要价值。     

酸洗脱血小板表面HLA-Ⅰ类抗原对血小板活化和凋亡的影响

目的探讨酸洗脱血小板表面HLA-Ⅰ类抗原对血小板活化和凋亡的影响。方法将10(人)份健康人机采血小板(0.5 ml/份)用pH3柠檬酸缓冲液处理(同时以PBS处理作对照组)后,利用多色流式细胞技术检测血小板表面HLA-Ⅰ类抗原及P-选择素(CD62p)的表达,Annexin V染色检测血小板的早期凋亡率。结果 pH3柠檬酸缓冲液及PBS处理后的血小板表面HLA-Ⅰ类抗原的表达为(23.83±9.93)%vs.(98.15±2.20)%(P<0.05),CD62p的表达为(45.94±10.13)%vs(20.29±4.24)%(P<0.05),血小板的早期凋亡率为(65.29±15.74)%vs(14.65±5.09)%(P<0.05)。结论 pH3柠檬酸缓冲液处理血小板可有效去除血小板表面HLA-Ⅰ类抗原,并同时诱导血小板的活化和凋亡。     

急性心肌梗死患者血小板活化标志物与超微结构的变化

目的 探讨急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者血小板α颗粒糖蛋白(platelet activationdependent granule membrane protein,PADGEM or GMP-140,CD62P)、血小板源生长因子受体αβ亚型(platelet-derived growth factor receptor-αβ,PDGFR-αβ)表达,血小板超微结构的变化.方法 采用流式细胞仪测定36例急性ST段抬高心肌梗死患者和同期34名健康体检者(对照组)外周血中血小板的血小板a颗粒糖蛋白(CD62P)、血小板源生长因子受体αβ亚型(PDGFR-αβ)表达,采用扫描电子显微镜观察血小板超微结构,并进行比较.结果 急性STEMI组治疗前血小板α颗粒糖蛋白、血小板源生长因子受体αβ表达率分别为(3.65±1.87)%,(0.43±0.39)%,治疗后为(0.96±0.79)%,(0.28±0.24)%,对照组相应为(0.67±0.35)%,(0.27±0.22)%.STEMI组的血小板α颗粒糖蛋白、血小板源生长因子受体αβ表达率,治疗前较对照组高(分别为P＜0.01和P＜0.05),治疗后明显降低.STEMI组扫描电镜观察血小板表而超微结构变化明显.结论 STEMI血小板处于活化状态,血小板活化指标血小板α颗粒糖蛋白可作为冠心病病情监测的有效指标,血小板源生长因子受体αβ有参考价值,扫描电镜观察可发现血小板活化的超微病理结构改变.

Abstract：

Objective To investigate the expressions of platelet activation-dependent granule membrane protein and platelet-derived growth factor receptor-αB, and the ultra-microstructure changes of platelets in patients with acute ST-segment elevation myocardial infarction(STEMI). Method The expressions of platelet activationdependent granule of glycoprotein (CD62P)and platelet derived growth factor receptor αβ subtype (PDGFR-αβ)of platelets in peripheral blood in 36 patients with acute ST-segment elevation myocardial infarction(STEMI) hospitalized and another 34 healthy subjects over the same period (control group) were investigated by flow cytometry and data were analyzed. The changes of ultra microstructure and activity of blood platelets in those patients and control group were observed under the scanning electron microscope. Results The expressions of CD62P and PDGFR-αβin patients with STEMI group before treatment were (3.65 ± 1.87) % and (0.43 ± 0.39) %, respectively, and those after treatment were (0.96 ± 0.79) % and (0.28 ± 0. 24) %, respectively, whereas those in control group were (0.67 ± 0.35) % and (0.27 ± 0.22) %, respectively, which were much lower in control than those in patients with STEMI before treatment (P ＜ 0.01 or P ＜ 0.05) respectively. There were statistically significant differences in the expressions of CD62P and PDGFR-αβ in patients group between pre-treatment and posttreatment (P ＜0.01 or P ＜0.05), respectively. Obvious ultra-microstructure changes of platelet surface in patients with STEMI group were observed. Conclusions Due to platelet activation in AMI, the expressions of CD62P can be used as effective indicators for monitoring coronary heart disease, and the PDGFR-αβ can be used as a reference indicator. The platelet surface ultra-microstructure changes during platelet activation in patients with AMI can be found by scanning electron microscopy.     

Preanalytical requirements for flow cytometric evaluation of platelet activation: choice of anticoagulant

Accurate assessment of in vivo or in vitro platelet activation requires optimal preanalytical conditions to prevent artefactual in vitro activation of the platelets. The choice of anticoagulant is one of the critical preanalytical conditions as anticoagulants exert different effects on the activation of platelets ex vivo. We tested the effectiveness of Diatube-H (also known as CTAD; sodium citrate, theophylline, adenosine and dipyridamole) and citrate vacutainer tubes in preventing artefactual activation of platelets and preserving functional reserve. Platelet surface expression of the CD62P (reflecting alpha granule release), CD63 (reflecting lysosomal release) and modulation of normal platelet membrane glycoproteins CD41a and CD42b, were measured in whole blood and in isolated platelets immediately after collection and at 6, 24 and 48 h after venipuncture. Samples taken into Diatube-H showed less spontaneous platelet activation than did those taken into citrate. To measure in vitro platelet functional reserve, thrombin was added as agonist to blood stored for varying periods up to 48 h. Although Diatube-H suppressed in vitro platelet activation for up to 4 h, in samples kept for 6-24 h before thrombin addition, the inhibitory effect was lost and platelets responded fully to agonist activation. Hence, Diatube-H preserved platelets and allowed for measurement of in vivo platelet activation as well as thrombin-induced in vitro platelet activation after 6-24 h, in both whole blood and isolated platelets.     

一种新的血小板活化释放试验监测阿司匹林的治疗反应

目的 建立一种新的血小板活化释放试验用于监测阿司匹林的治疗反应.方法 采用ARA活化抗凝全血中血小板,应用血细胞分析仪检测MPC的变化.抽取5名健康志愿者外周血标本,取血后迅速混匀,用于MPC、LTAARA和血小板CD62P表达的检测,以优化检测条件,包括ARA活化浓度(分别为0、0.5、1.0、1.5、5.0、10.0 mmol/L)的选择和ARA活化血小板时间的选择(37℃水浴中5、10、20、30、40、50、60、70、80、90 min);评价该方法的稳定性(取血后0、1、2、3 h分别检测)、重复性(MPC、LTAARA、血小板CD62P表达的检测分别重复测定10次,计算批内及批间CV);并通过体外乙酰水杨酸试验验证该方法监测阿司匹林治疗反应的可行性.ARA活化血小板后用CD61-PerCP和CD62P-PE标记,流式细胞仪测定CD62P表达阳性的血小板百分率,对MPC与CD62P的相关性进行分析.选择口服阿司匹林至少7 d的患者为服药组,共93例;选择未口服或停止口服阿司匹林7 d以上的患者为对照组,共100例.用该方法检测服药组与对照组患者ARA(终浓度0.5 mmol/L)活化前后MPC的变化,并与LTAARA方法进行比较,评价该方法的准确性.结果 ARA终浓度为0.5 mmol/L时,血小板活化充分,MPC与血小板膜表面CD62P呈负相关(r=-0.755,P<0.01).37℃水浴活化30 min后MPC达到稳定,取血后室温3 h内MPC保持稳定,新鲜全血MPC的批内CV为1.35%,固定质控全血批间CV为0.71%和0.74%.随着全血中乙酰水杨酸浓度升高(0～6.95 μmol/L),ARA活化血小板后MPC逐渐升高,CD62P逐渐减低,二者呈负相关(r＝-0.765,P<0.01).服药组MPC差值为(8.2±8.6)g/L,MPC变化率为(3.4±3.6)%,对照组分别为(37.4±10.3)g/L、(15.7±4.0)%,差异均有统计学意义(t=21.522、22.409,P均<0.01).MPC变化率ROC曲线下面积为0.992,当临界值为8.7%时,其监测阿司匹林治疗反应的敏感度为96.8%,特异度为99.0%.MPC变化率与LTAARA具有很好的相关性(r=0.720,P<0.01).结论 本研究建立了一种新的监测阿司匹林治疗反应的血小板活化释放试验,可以替代LTAARA用于临床常规检测.

Abstract：

Objective To establish a new method for monitoring aspirin response by platelet activated-release experiment.Methods The platelets in whole blood were activated by ARA,and the MPC was measured by hematology analyzer.Blood samples were drawn from five healthy volunteers for measuring MPC,LTAARA and platelet membrane CD62P expression.Blood samples were mixed thoroughly right after venipuncture. The concentration of ARA (0,0. 5,1.0,1.5,5.0 and 10. 0 mmol/L) and the time for platelet activation (5,10,20,30,40,50,60,70,80 and 90 min in 37℃ water bathe) were optimized to evaluate the stability (0,1,2 and 3 h after venipuncture) and reproducibility (MPC, LTAARA and platelet membrane CD62p were measured ten times and the CV was calculated). Platelets were mixed with acetylsalicylic acid at different concentrations in vitro in order to verify the validity for monitoring aspirin response. The percentage of CD62p positive platelets after activated by ARA was measured using flow cytometer with CD61-PerCP and CD62p-PE antibodies. The correlation between MPC and CD62P was determined. 100 patients without taking or stop taking aspirin more than 7 days and 93 patients who took aspirin at least 7 days were enrolled. Duplicate measurements of platelet function were performed using the change of MPC (ARA 0. 5 mmol/L) and LTA (ARA 0. 5 mmol/L) among two patient groups to evaluate the accuracy of the new method. Results Platelcts were completely activated by ARA at final concentration of 0. 5 mmol/L. MPC negatively correlated with platelet membrane CD62p(r=-0. 755,P<0. O1 ). MPC was stable for 30 minutes in 37 ℃ water bathe after ARA activation. The result of MPC was consistent at room temperature within 3 hours after blood collection. This method had good reproducibility. CV in batch using fresh whole blood was 1.35% and CV between batches using commercial control whole blood were 0. 71% and 0. 74%. With the concentration of acetylsalicylic acid increased (0-6. 95 μmol/L), MPC increased as CD62P decreased, which showed negative correlation (r=-0. 765 ,P <0. 01 ). The difference of MPC before and after ARA activation (ΔMPC) and MPC variance ratio of the group taking aspirin were ( 8. 2±8. 6) g/L and ( 3.4±3.6) %, and they were (37.4±10. 3 ) g/L and ( 15.7±4.0) % in control group, respectively.ΔMPC and MPC variance ratio showed significant difference between the two groups ( t=21. 522, 22. 409, all P < 0. 01 ). Area under the ROC curve for MPC variance ratio was 0. 992 with sensitivity of 96. 8% and specificity of 99.0% for monitoring the aspirin response using the cut-off of 8. 7%. MPC variance ratio had good correlation with LTAARA (r = 0. 720, P < 0. O1 ). Conclusions A new method for monitoring aspirin response by platelet activated-release experiment is established. It may replace LTAARA for routine clinical examination.     

优化流式细胞术测定保存血小板CD62p表达

CD62p阳性率是保存血小板质量监测的重要指标之一。为在静脉全血内血小板CD62p测定方法的基础上优化建立流式细胞术(FCM)测定保存血小板表达CD62p的方法，在血小板检测标本内加入0．1mmol/L潘生丁稳定血小板；对TBS溶液进行了改良，添加了1．1mmol/L的EDTA和100μmol/L潘生丁，用以代替PBS；采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)制备的阴、阳性对照；进行方法学评价。结果表明：加入0．1mmol/L潘生丁和1．1mmol/L的EDTA可以有效防止实验过程中的血小板人为激活；采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)制备的阴、阳性对照既可优化FCM分析方法，还可用于检验所购荧光抗体的质量，保证实验结果的有效性。采用泛血小板特异性标志物CD61可灵敏特异地识别血小板，提高了实验抗干扰能力。制备保存血小板时采用的是专用大号采血针，抽血流畅，对血小板CD62p表达测定人为影响很小，明显优于用注射器采集患静脉全血的做法。CD62p测定灵敏度可达1％，制备的标本可稳定48小时。结论：利用该流式细胞术可以灵敏而特异地测定保存血小板的CD62P表达率；该方法简便易行，提高了结果的准确性，具有良好的稳定性和重复性。     

腺苷对血小板体外激活的抑制作用

本研究的目的主要是研究腺苷对血小板的体外激活抑制作用,为血小板冻干前处理过程筛选血小板功能保护剂提供依据.采用流式细胞术（FCM）测定血小板膜表面CD62P和PAC-1的表达,应用APACT-2聚集仪测定瑞斯托菌素（restocetin）、凝血酶（thrombin）、二磷酸腺苷（ADP）和没食子酸（propyl gallate）诱导的血小板聚集率.研究结果表明,冻干预处理后血小板膜表面CD62P表达显著增加,腺苷浓度为0.75 mmoL/L时可抑制CD62P表达,且呈剂量效应;腺苷可抑制没食子酸诱导的血小板聚集反应,但对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集无抑制作用,腺苷浓度≥1.0 mmol/L对凝血酶诱导的聚集有显著抑制作用.因此,腺苷可抑制体外处理导致的血小板激活,对瑞斯托霉素和凝血酶诱导血小板聚集反应无明显抑制.结论：腺苷可作为血小板体外激活抑制剂及冻干前处理的功能保护剂.     

植酸钠和百维利肽体外抑制血小板活化的实验研究

目的探讨植酸钠和百维利肽在体外对血小板激活的抑制和功能保护的作用。方法测定血小板对诱导剂的聚集反应、血小板CD62p和PAC-1表达、凝血酶激活后血小板的CD62p和PAC-1再表达以及血小板聚集功能,研究在离心、洗涤和重悬等体外处理过程中,不同浓度的植酸钠和百维利肽对血小板的激活损伤、血小板功能保存和血小板促凝血活性的影响。结果经体外处理后的血小板CD62p和PAC-1表达显著增加;1mmol/L植酸钠可抑制PAC-1表达,但对血小板CD62p和PAC-1再表达无明显抑制作用,血小板对诱聚剂仍有聚集反应性;百维利肽浓度为1μmol/L时,对CD62p和PAC-1表达有较强的抑制作用,CD62p和PAC-1表达率仅为0.78%和0.24%,抑制血小板CD62p和PAC-1再表达,保留血小板除凝血酶之外诱导的聚集反应;植酸钠浓度≤2mmol/L可显著延长血小板发生聚集的时间,≥3mmol/L时,血小板不聚集;百维利肽浓度≤3μmol/L时,血小板聚集时间无明显延长。结论1mmol/L的植酸钠可抑制血小板GPⅡb/Ⅲa构象的改变,并保留血小板的部分凝集和再表达功能;1μmol/L的百维利肽可作用于凝血酶的激活途径,抑制血小板激活,且能部分保留血小板的再表达和聚集功能,适当减少其作用浓度会对血小板有更好的功能保护效果。     

急性血小板分离制备心脏手术患者富血小板血浆的质量分析

为评价心脏直视手术患者急性血小板分离制备的富血小板血浆（platelet—richplasma,PRP）的效率和效果,对PRP质量进行了分析。20例ASAⅡ—Ⅲ级择期心脏手术患者在麻醉诱导后进行全血采集和血小板分离。分别测定分离前（T1）的全血,分离后（T2）的PRP和回输前（T3）的PRP中的血小板数（Plt）、血小板平均体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）、血浆内pH、血浆乳酸（IA）浓度和乳酸脱氢酶（LDH）浓度、细菌培养结果、血小板CD62p和PAC-1阳性率以及ADP激活后的CD62p和PAC-1阳性率。结果表明：与全血相比,分离后的PRP中的血小板计数为（783±184）×10^9／L,MPV、PDW和pH值显著降低（P〈0．01）,LA、LDH浓度及CD62p和PAc-1阳性率无明显变化;回输前PRP血小板计数为（765±167）×10^9／L,MPV、PDw和pH值与T1相比显著降低（P〈0．01）,而LDH浓度、CD62p和PAC-1阳性率与T1和T2比较显著增高（P〈0．05或P〈0．01）;ADP激活后的CD62p和PAC-1阳性率各阶段无明显差异。结论：本研究所采取的方法可在术前高效分离心脏手术患者的血小板,而且不引起血小板活化;PRP在术中振荡保存后有部分血小板出现活化,但血小板整体活化功能无明显改变。     

小剂量阿司匹林对老年冠心病患者血小板活化功能的影响

目的探讨长期口服小剂量阿司匹林对老年冠心病患者血小板活化功能的影响。方法116例冠心病患者随机分为ASA50组、ASA100组及对照组,运用流式细胞仪(FCM),准确测定各组经体外二磷酸腺苷(ADP)及花生四烯酸(AA)共同活化的血小板膜表面糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa、CD62P)的阳性表达率,观察并分析比较老年人血小板膜表面糖蛋白的阳性表达率的变化。结果(1)血小板膜表面糖蛋白GPⅡb/Ⅲa的阳性表达率在ASA50及ASA100组分别为(64.40±15.71)%,(57.22±15.82)%,两种剂量阿司匹林均较对照组(75.8±15.71)%明显降低(P<0.05)。CD62P(P-Selectin)的阳性表达率分别为(68.01±9.57)%,(60.44±9.30)%,阿司匹林组与对照组(78.59±6.38)%比较明显降低(P<0.05)。(2)ASA50组与ASA100组两组间比较,PAC-1的阳性表达率为(64.40±15.71)%与(57.22±15.82)%,两组间差异无统计学意义(P>0.05);CD62P的阳性表达率为(68.01±9.57)%与(60.44±9.30)%,两组间差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论小剂量阿司匹林可有效抑制血小板活化功能,每日服用50mg和100mg阿司匹林对血小板活化功能的抑制无显著差异,双相激活血小板可以客观反映体内阿司匹林对血小板活化功能的影响。     

左旋精氨酸和西洛他唑对血小板体外激活的抑制作用

本实验旨在研究左旋精氨酸(L-arginine)和西洛他唑(cilostazol)在体外对血小板激活的抑制和功能保护作用,为可逆性血小板抑制剂在血小板保存中的应用提供依据。采用对血小板CD62p和PAC-1表达及凝血酶激活后再表达率的流式细胞分析(FCMs)、血小板聚集试验以及血小板凝血活性检测等手段,观察血小板激活、血小板功能状态。结果表明,体外处理后血小板CD62p和PAC-1表达率显著增加,西洛他唑和左旋精氨酸对这一过程CD62p和PAC-1表达有较强抑制作用,且随浓度增加而递增。西洛他唑可抑制凝血酶激活后CD62p和PAC-1的表达,左旋经氨酸仅抑制凝血酶激活后的PAC-1表达。左旋精氨酸和西洛他唑对3种诱导剂诱导的血小板聚集呈现不同程度的抑制作用,抑制作用随浓度递增。左旋精氨酸≥15mmol/L时,血小板聚集时间延长甚至不凝集。西洛他唑在浓度1-4mmol/L范围均延长血小板聚集时间。结论:5mmol/L和10mmol/L的左旋精氨酸均可抑制血小板体外处理过程的激活,且血小板的聚集和再表达功能不受影响,5mmol/L作用更佳。1mmol/L浓度西洛他唑抑制血小板体外激活,可保留血小板部分聚集活性和再表达能力。