肾小球系膜细胞转化生长因子-β1基因启动子中氧化低密度脂蛋白应答元件的研究

目的 :了解在氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)刺激下 ,转化生长因子 β1(TGF β1)基因启动子中顺式作用元件的应答情况。研究在大鼠肾系膜细胞中 ,Ox LDL对TGF β1基因启动子转录活性的影响作用。　 方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶切和亚克隆的方法 ,构建出 5个TGF β1启动子缺失体—虫荧光素酶 (luciferase)报告基因 ,利用其瞬时转染系膜细胞并检测luciferase相对活性。　 结果 :在Ox LDL(10 0mg/L)刺激下 ,luciferase的活性 12h即出现 ,并于 36h达到平台期。对Ox LDL刺激的应答 ,TGF β1启动子 15 5 0到 845之间可能存在着增强子 , 6 2 9到 4 2 2之间则可能有抑制子。计算机软件分析表明 ,前者内有一转录激活蛋白 1(AP 1)精确识别位点。　 结论 :在大鼠肾系膜细胞TGF β1基因启动子中 ,AP 1结合序列 (TGAGTCA)可能是应答Ox LDL的顺式作用元件。Ox LDL上调TGF β1的表达至少部分是通过AP 1蛋白来介导的 ,且Ox LDL可能通过蛋白激酶C(PKC)信号通路激活AP 1从而正调控TGF β1基因的转录过程。     

细胞因子和氯沙坦对人α1I型胶原基因启动子活性的调控

目的：探讨转化生长因子β1（TGFβ1）和血小板源生长因子（PDGF）对人α1I型胶原基因启动子活性的调控作用和氯沙坦药物干预的影响环节。方法：将不同长度的人α1I型胶原基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）“报告基因”组成重组体pCOLH1.5和pCOLH2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别加入不同浓度的TGFβ1、PDGF、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和氯沙坦,ELISA法测定CAT活性。结果：TGFβ1表现为剂量依赖性地促进pCOLH1.5和pCOLH2.5的活性,与对照组比较差别有非常显著性意义（P＜0．01）。PDGF（10－25μg/L）未发现有明显影响（P＞0．05）,AngⅡ则具有促进其活性作用。氯沙坦不但能抑制两个重组体的CAT表达,和AngⅡ共同作用时,pCOLH2.5CAT的升高幅度明显减少（P＜0．01）。结论：在肾小球系膜细胞中,TGFβ1具有促进人α1I型胶原基因启动子的转录活性,PDGF则未发现有显著促进或抑制效应。氯沙坦能下调人α1I型胶原基因启动子的激活,并可部分拮抗AngⅡ的促进作用。     

转化生长因子β1反义寡核苷酸抑制单侧肾切除糖尿病大鼠系膜增生

目的 探讨转化生长因子（TGF）β1反义寡核苷酸对单侧肾切除糖尿病大鼠系膜增生的作用。方法 采用人工合成TGF－β1反义、正义及错配的3组寡核苷酸经脂质体包裹柏转染单侧肾切除糖尿病大鼠肾小球系膜细胞（MC）。用细胞计数检测转染后MC的生长抑制率，用RT－PCR和ELISA方法检测TGF－β1 mRNA和蛋白的表达水平，并检测IV型胶原mRNA表达水平的变化。结果 TGF－β1反义寡核苷酸可抑制MC的存活，TGF－β1 mRNA及蛋白的表达水平下降，IV型胶原mRNA的水平也下降。结论 TGF－β1反义寡核苷酸不仅抑制TGF－β1 mRNA及蛋白的表达，而且还可抑制细胞外基质IV型胶原mRNA的表达，抑制MC的肥大，从而抑制单侧肾切除糖尿病大鼠系膜的增生。     

氟伐他汀对高糖环境中肾小球系膜细胞胞外信号调节激酶活性的影响

高糖环境中SD大鼠肾小球系膜细胞胞外信号调节激酶（ERK）活性、转化生长因子β1（TGF—β1）mRNA水平升高，Ⅳ型胶原含量增多，氟伐他汀可抑制上述反应，提示ERK通路的激活参与糖尿病肾病的发生、发展，氟伐他汀可能通过抑制ERK通路活化及TGF—β1表达发挥非降脂相关的肾保护作用。     

核因子—kB反义寡核苷酸对系膜细胞炎症因子基因表达的影响

目的：探讨NF－kB反义寡核苷酸（oligodeoxynucleotide,ODN)对人肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响，为利用NF－kB反义ODN治疗肾小球炎性病变奠定基础。方法：人工合成p65反义、正义及错配ODN并行全程硫代磷酸化修饰。应用核酸酶保护法观察阳离子脂质体介导的不同浓度的ODN（0．001、0．01、0．1、1、10μmol/L)对系膜细胞TNF－α、IL－1α、IL－1β、MCP－1、IL－8、TGF－β1 mRNA表达的影响，以正义ODN（10μmol/L)及错配ODN（10μmol/L)作为对照组。结果：正常培养状态下，系膜细胞可组成型表达TNF－α、IL－1β、IL－8和TGF－β1 mRNA，而不表达IL－1α和MCP－1 mRNA。细菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS)刺激后上述6种炎症因子表达显著上调。p65反义ODN可呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的系膜细胞炎性细胞因子TNF－α，IL－α，IL－1β，MCP－1和IL－8的基因表达，而对TGF－β1无显著抑制作用；p65正义及错配ODN均不能抑制炎性细胞因子的表达。结论：p65反义ODN可明显抑制LPS诱导的肾小球系膜细胞炎性细胞因子的表达，提示NF－kB在肾小球疾病进展中起关键性调控作用，其反义ODN有可能应用于肾脏病变的实验性治疗之中。     

NeuroD-1/Beta-2基因与糖尿病

神经分化因子1（NeuroD-1）又名β细胞E盒转录激活因子2（Beta-2），是一种bHLH蛋白。作为转录因子，Beta-2能识别顺式元件中的特异靶序列并与之结合，对靶基因的转录起到激活或阻遏的作用；也可与其他转录因子相互作用，协同调节靶基因的最终活性状态。近来发现Beta-2基因突变与糖尿病有关。     

双月安环己烷草酸铂对肝癌细胞DNA损伤修复基因表达影响及其机制

目的 初步明确肝癌细胞中特异性表达缺失的DNA损伤修复基因（GADD45β）近端启动子序列，并探索双月安环己烷草酸铂（Oxaliplatin）对人肝癌细胞HepG2中GADD45β基因表达影响及可能机制。方法 以30～50个碱基间隔体外人工合成GADD45β近端启动子序列（-547至-436），分别插入pGL3 basic荧光素表达质粒的荧光素基因上游，以电穿孔法转染HepG2，根据启动子活性强度结合TRANSFAC数据库分析可能存在的转录调节因子结合位点；以Northern印迹和实时荧光定量PCR比较Oxaliplatin作用前后HepG2细胞GADD4513表达，并在此基础上进一步比较Oxaliplatin对GADD45β启动子活性的诱导作用。结果 GADD45β近端启动子中含有E2F1（-470／-436）和核因子（NF）-κB（-547／-520）转录调节因子与启动子结合位点，并可能存在“抑制区”。Oxaliplatin能明显诱导HepG2中GADD45β表达，并呈剂量效应正相关关系，同时Oxaliplatin能相应诱导E2F-1启动子活性。结论 Oxaliplatin能明显诱导肝癌细胞中特异性缺失的GADD45β基因表达，增强转录调节因子E2F-1的表达水平是其可能的作用机制。     

丹参对TGF-β1刺激的NIH/3T3细胞c-fos mRNA表达和AP1蛋白结合活性的影响

目的:研究丹参对TGFβ1刺激的NIH/3T3成纤维细胞功能的影响.方法:将正常大鼠进行丹参灌胃,分离含药血清,温育TGFβ1刺激的NIH/3T3成纤维细胞.RT-PCR法检测c-fos基因表达,Gel mobility shift assay法检测AP1蛋白的结合活性.结果:经TGFβ1刺激后,细胞c-fos mRNA表达及AP1蛋白结合活性明显增强,丹参含药血清可分别抑制由TGFβ1引起的细胞c-fos mRNA表达及AP1蛋白结合活性的增强.结论:丹参可以抑制TGFβ1刺激的NIH/3T3成纤维细胞中的c-fos基因表达及AP1蛋白结合活性.     

血管紧张素Ⅱ与糖尿病肾病的关系

糖尿病时，由于慢性高血糖症、血流动力学改变等原因使肾脏局部的血管紧张素Ⅱ（AgⅡ)活性往往增高。活性增高的AgⅡ通过直接或间接诱导转化生长因子－β（TGF－β）表达，刺激肾脏局部单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）、纤溶酶原激活物抑制剂－1（PAI－1）的表达，促进肾小管间质成纤维细胞的增殖、分化，导致大量单核巨噬细胞浸润肾小球，细胞外基质（ECM）成分合成增多、降解减少。这些病理过程在肾小球、肾小管间质硬化中起重要作用。阻断或拮抗AgⅡ、TGF－β的活性及下游途径有助于防止、延缓糖尿病肾病的发生、发展。     

KLF6与早期肝纤维化

Kruppel样因子6（KLF6）是一种核转录调控因子,也称Zf9（zinc finger factor 9）或CPBP（core promoter-binding protein）,可以特异性结合靶基因启动子区域的GC盒、CACCC盒等核心元件而发挥生物学效应。近年来国外研究表明：在活化的肝星状细胞（HSC）中,可见KLF6的表达,KLF6可通过调节TGFβ1及Ⅰ型TGFβ、Ⅱ型TGFβ受体、尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂、α1（1）型胶原的表达,在肝纤维化过程中发挥其作用,现就KLF6与早期肝纤维化的关系综述如下。     

全反式维甲酸对TGF—β诱导肾小球系膜细胞CTGF及信号通路的影响

目的探讨全反式维甲酸（atRA）在转化生长因子β（TGF—β）／Smad信号通路中诱导系膜细胞表达结缔组织生长因子（CTGF）的作用。方法培养第4代大鼠。肾小球系膜细胞分组：对照组;TGF—β（5、10ng／ml）组;TGF—β＋Staurosporine组;药物组：atRA（10^-3、10^-6、10^-9mol/L）预处理24h后,再加TGF—β（10ng／ml）共培养。分别提取4、12、24h细胞总蛋白,用Western blot法测CTGF蛋白和Smad2蛋白的表达。结果在外源性TGF—β刺激下,CTGF、Smad2蛋白的表达明显增加（P〈0．05）。与TGF—β组比较,药物组CTGF、Smad2蛋白表达明显减少（P〈0．05）,呈时间和浓度依赖性;各组不同时间段内Smad2蛋白和CTGF蛋白表达呈正相关（P〈0．05）。结论TGF-β可刺激大鼠肾小球系膜细胞CTGF和Smad2蛋白的表达,atRA可以抑制其表达,且此作用可能与Smad2信号通路有关。     

细胞因子和氯沙坦对人α1Ⅰ型胶原基因启动子活性的调控

目的探讨转化生长因子β1(TGF β1)和血小板源生长因子(PDGF)对人α1 Ⅰ型胶原基因启动子活性的调控作用和氯沙坦药物干预的影响环节.方法将不同长度的人α1 I型胶原基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)"报告基因"组成重组体 pCOLH 1.5和pCOLH 2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别加入不同浓度的TGF β1、PDGF、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和氯沙坦,ELISA法测定CAT活性.结果 TGF β1表现为剂量依赖性地促进pCOLH 1.5和pCOLH 2.5的活性,与对照组比较差别有非常显著性意义(P＜ 0.01).PDGF(10～25 μg/L)未发现有明显影响(P＞ 0.05),AngⅡ则具有促进其活性作用.氯沙坦不但能抑制两个重组体的CAT表达,和AngⅡ共同作用时,pCOLH 2.5 CAT的升高幅度明显减少(P＜ 0.01).结论在肾小球系膜细胞中,TGF β1具有促进人α1 Ⅰ型胶原基因启动子的转录活性,PDGF则未发现有显著促进或抑制效应.氯沙坦能下调人α1 Ⅰ型胶原基因启动子的激活,并可部分拮抗AngⅡ的促进作用.     

大鼠肾小球系膜细胞产生的生长抑制性因子——转化生长因子β

本文观察了肾小球系膜细胞产生的自分泌生长抑制因子的情况。结果显示,肾系膜细胞培养上清中含有抑制自身生长的活性物质,后者有耐酸性;HPLC分析洗脱液中最主要的抑制性活性物质的分子量为16～30kD;抗-转化生长因子β(TGFβ)抗体能中和其大部分抑制活性物质;生物学方法检测表明,上清中含有活性TGFβ.此外,培养液中加入抗TGFβ抗体,能明显增强细胞的增殖.结果表明,大鼠肾系膜细胞能产生活性TGFβ,后者是一种自分泌的生长抑制性因子.     

核转录因子FoxH-1参与人α2(Ⅰ)型胶原基因的转录调控

核转录因子FoxH-1是DNA结合蛋白winged helix转录因子家族的新成员。在TGFD信号通路中，FoxH-1能结合到TGF β下游基因（如MIX．2）启动子区域，导致基因激活转录，表明FoxH-1在TGF β信号通路中起到转录调节的作用。TGF β能刺激HSC分泌Ⅰ型胶原，这是肝脏发生纤维化的主要环节，[第一段]     

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生？…

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况，方法：从６日龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：（１）经１０＾－８，１０＾－７，１０＾－６和１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的Ａ     

肝素对大鼠肝星状细胞中转化生长因子β1启动活性的影响

在影响转化生长因子(TGF β1)合成的化学物质和药物中,葡萄糖和低分子量肝素可以在肾脏系膜细胞中促进或降低TGF β1 mRNA和蛋白的合成,而且这些作用是通过影响TGF β1基因的启动子活性而发挥的。拟通过检测报告基因活性探讨葡萄糖和肝素对TGF β1启动子的影响。     

TGFβ1反义基因抑制糖尿病肾病肾系膜增生的作用

近年发现转化生长因子β1(1GFβ1)在糖尿病肾病发生和发展过程中起着重要作用，TGFβ1中和抗体抑制糖尿病肾病肾脏肥大的研究结果提示，TGFβ1反义基因对糖尿病肾病可能有相同作用。反义基因包括反义寡核苷酸、反义RNA和核酶。文中阐述了其抑制糖尿病肾病肾系膜增生的原理，并对其优越性进行比较。TGFβ1反义基因是通过在转录、翻译水平封闭TGFβ1使其表达下降。理想载体的选择，基因转移效率的提高和转移的特异性是糖尿病肾病基因治疗亟待解决的问题。     

糖尿病大鼠肾小球产生转化生长因子β的研究

多肽生长因子合成和活性的异常是导致糖尿病肾病系膜区扩张的机理之一.本文检测了糖尿病大鼠肾小球TOFB的水平,并探讨了体外高糖环境对系膜细胞产生TGFβ的影响.制备STZ诱发的糖尿病模型,4周后用生物学方法检测肾小球培养上清中的TGFβ水平,结果发现糖尿病大鼠肾小球分泌的总TGFβ及活性TGFβ均比对照显著增加,其中活性TGFβ水平的增加更为明显;体外高糖培养后的系膜细胞产生的总TGFβ明显下降,而活性TGFβ却有上升.结果表明高糖环境下肾小球和系膜细胞确实存在着TGFβ分泌和激活的异常,TGFβ可能参与了糖尿病肾病系膜区扩张的形成。     

肿瘤生长因子β1及血小板衍生生长因子对肝窦内皮细胞整合素α6β1及黏着斑激酶表达的影响

目的：观察肿瘤生长因子β1(TGFβ1）及血小板衍生生长因子（PDGF）对大鼠肝窦内皮细胞（sinusoidal endothelial cell,SEC)整合素α6β1表达及黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK)活性的影响。方法：用胶原酶原位灌注、Prercoll不连续密度梯度离心法分离大鼠SEC，并进行体外培养。采用细胞－ELISA和免疫沉淀－蛋白质酪氨酸激酶活性测定法，分别观察TGFβ1及PDGF对SEC表面整合素α6β1表达及FAK活性的影响。结果：经TGFβ1及PDGF作用24h后，α6β1蛋白表达明显强于对照组（P＜0．05），且呈剂量依赖性。作用至48h，表达继续增强，细胞中FAK的活性也明显增高（P＜0．05），虽于48h后回落，但仍明显高于对照组。结论：TGFβ1及PDGF可促进SEC表面整合素α6β1的表达及FAK活性增高，可能是它们参与肝纤维化发生的机制之一。     

肝细胞核因子-1β基因与MODY5

肝细胞核因子 - 1β(HNF- 1β)又名变异型肝细胞核因子 - 1(VHNF- 1)或肝细胞因子 - B3(L FB3) ,是一种核蛋白。作为转录因子 ,HNF- 1β能识别启动子、启动子近侧元件和增强子等顺式元件中的特异靶序列并与之结合 ,对靶基因的转录起到激活或阻遏的作用 ;也可与其它转录因子相互作用 ,协同调节靶基因的最终活性状态。近来发现 HNF- 1β基因(TCF2 )突变与青少年起病的成年型糖尿病 (maturity- onsetdiabetes of the young,MODY)伴肾脏畸形有关 ,现就此作一介绍。一、HNF- 1β及 HNF- 1β基因HNF- 1β属组织特异性的包含同源结构…