致耐受树突状细胞治疗免疫性血小板减少症小鼠的研究

目的:探讨地塞米松及1α-25-(OH)2D3诱导的致耐受树突状细胞(TolDC)治疗免疫性血小板减少症小鼠的疗效。方法:用地塞米松及1α-25-(OH)2D3诱导TolDC,光镜观察形态特点,流式检测细胞膜CD80、CD86水平。将TolDC腹腔注射给免疫性血小板减少症小鼠,观察症状并检测小鼠的血小板水平及血小板相关自身抗体。结果:地塞米松及1α-25-(OH)2D3诱导的树突状细胞毛刺少、突起短,CD80、CD86水平低,符合TolDC的特点。TolDC治疗组小鼠血小板水平较模型组高(P<0.05),血小板相关自身抗体水平较模型组低(P<0.05)。结论:地塞米松及1α-25-(OH)2D3诱导的TolDC能避免免疫性血小板减少症小鼠的血小板下降,血小板相关自身抗体减少,为其应用于自身免疫性血小板减少症的治疗提供了理论依据。     

大剂量地塞米松对免疫性血小板减少性紫癜患者浆细胞样树突状细胞功能及Toll样受体9 mRNA表达的影响

本研究探讨大剂量地塞米松对免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血浆细胞样树突状细胞(pDC)功能及Toll样受体9(TLR9)表达的影响。15例初诊的ITP患者给予地塞米松40 mg/d,连用4 d,采用免疫磁珠分离法体外分离15例正常对照及13例治疗有效患者治疗前后外周血中pDC;用CpG-ODN 2216刺激外周血pDC并与之共培养24 h,采用ELISA方法检测上清中IFN-α、IL-6、TNF-α的含量;用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测pDC的TLR9 mRNA表达量。结果表明,①治疗前pDC产生IFN-α、IL-6、TNF-α水平〔(960.83±164.65)pg/ml,(156.15±39.89)pg/ml,(137.31±35.44)pg/ml)〕明显高于正常对照组〔(616.67±105.98)pg/ml,(89.13±21.48)pg/ml,(88.53±25.81)pg/ml,P<0.05〕;治疗后pDC产生IFN-α、IL-6、TNF-α水平分别降至(678.46±128.88)pg/ml,(97.77±26.31)pg/ml,(103.08±26.42)pg/ml,与治疗前比较差异有统计学意(P<0.05),与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);②治疗前pDC的TLR9 mRNA的表达水平高于正常对照组(P<0.05);治疗后pDC的TLR9 mRNA的表达水平低于治疗前(P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学显著性(P>0.05)。结论:pDC分泌的细胞因子及其表达的TLR9在ITP发病中起重要作用;地塞米松可能通过下调TLR9的表达,抑制pDC分泌细胞因子的功能,而对ITP起到治疗作用。     

调节性T细胞与免疫性血小板减少症

调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在维持机体自身免疫耐受平衡状态中起重要作用.免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患者不仅Tregs数量减少,而且伴有明显的功能下降.但与其相关的细胞因子和分子机制等尚不明确.临床常用的治疗手段对Tregs的数量和功能...     

免疫性血小板减少症患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究

本研究检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞和调节性T细胞(Treg)的表达并初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在ITP中的作用及意义。ITP患者根据血小板计数及治疗效果分为治疗前组(活动组38例)、治疗后组(缓解组24例、部分缓解组10例、未缓解组4例),30例健康体检者设为对照组。用流式细胞术检测ITP患者、健康者外周血Th17细胞及Treg细胞分别占CD4+T细胞的百分率。结果表明,活动组、未缓解组Th17细胞的百分率均高于对照组(p<0.05);缓解组、部分缓解组亦高于对照组,但均无统计学意义(p>0.05);缓解组低于活动组,但无统计学意义(p>0.05)。活动组、部分缓解组、未缓解组Treg细胞百分率均明显低于对照组(p<0.01);缓解组亦低于对照组,但无统计学意义(p>0.05);缓解组高于活动组(p<0.05)。活动组、部分缓解组、未缓解组Th17/Treg细胞比率均高于对照组(p<0.05);缓解组亦高于对照组,但无统计学意义(p>0.05);缓解组低于活动组(p<0.05)。结论 :ITP患者活动组Th17细胞百分率、Th17/Treg细胞比率升高。ITP患者活动组...     

原发免疫性血小板减少症的规范化诊治

原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia, ITP)是一种获得性免疫介导的血小板减少性疾病,其发病机制为免疫失耐受导致的血小板破坏过多及巨核细胞产生血小板不足。临床表现主要为血小板减少性的出血及疲劳等症状。ITP的诊断无特异性指标,需排除其他的血小板减少性疾病。治疗目的为维持血小板在安全水平,预防出血,并提高患者生活质量。治疗指征为血小板≤30×10⁹/L和(或)有出血表现,对于老年患者、重体力劳动者、有高血压等出血风险较高的合并症患者以及需抗血小板、抗凝治疗患者等,可适当放宽治疗指征。一线治疗为糖皮质激素及静脉注射人免疫球蛋白;二线治疗包括促血小板生成药物、利妥昔单抗及脾切除等治疗;对于难治性ITP患者,可考虑维A酸等三线治疗。     

免疫性血小板减少症患者骨髓滤泡辅助性T细胞数量及功能的研究

本研究检测免疫性血小板减少症（ITP）患者骨髓滤泡辅助性T细胞（Tfh细胞）数量及功能,探讨Tfh细胞在ITP发病机制中的作用。选取2013年1月至10月在天津医科大学总医院血液科就诊的21例初治ITP患者、20例恢复期ITP患者及18名正常对照者,采用流式细胞术检测骨髓Tfh细胞数量、Tfh细胞功能相关分子CD40L、ICOS、IL-21的表达,采用RT-PCR技术检测BMMNC转录因子BCL-6mRNA相对表达水平;并将各项指标与疾病严重程度进行相关性分析。结果表明,ITP初治组骨髓CD4＋CXCR5＋／CD4＋细胞比例[（5．532±2．599）％]高于恢复期组[（4．064±2．026）％]和对照组[（4．048±1．413）％]（P〈0．05）;ITP初治组骨髓CD4＋CXCR5＋ICOS＋／CIM＋CXCR5＋细胞比例[（14．586±8．561）％]高于恢复期组[（12．884±10．161）％]和对照组[（7．487±5．176）％],初治组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）;ITP初治组和恢复期组骨髓CIM＋CXCR5＋CD40L＋／CD4＋CXCR5＋细胞比例[（15．309±10．756）％]及[（18．242±12．243）％],高于对照组[（8．618±5．719）％]（P〈0．05）;ITP初治组和恢复组骨髓CD4＋CXCR5＋IL-21＋／CD4＋CXCR5＋细胞比例1（58．560±26．285）％]及[（57．035±30．936）％]高于对照组[（36．289±24．868）％]（P〈0．05）;初治组、恢复组、对照组BCL-6mRNA的表达水平分别为（1．407±0．264）、（1．149±0．217）和（0．846±0．157）,差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论：Tfh细胞在ITP患者的骨髓中数量增加,功能分子表达增多,功能亢进,在ITP发病机制中可能有重要作用。     

免疫性血小板减少症患者的细胞免疫功能研究

目的探讨免疫性血小板减少症（ITP）患者免疫功能状态。 方法选取2016年5月至2017年2月在中国中医科学院西苑医院与北京中医药大学东方医院门诊就诊的ITP确诊患者40例,其中慢性22例（慢性组）、新诊断9例（新诊断组）、持续性9例（持续性组）,24名健康者作为对照（对照组）。应用流式细胞仪分析Th1、Th2、Th17、Treg、Breg细胞的表达。ITP组与对照组比较采用Wilcoxon检验,多组之间的比较采用Kruskal-Wallis检验。 结果ITP患者Th1、Th1/Th2高于健康对照组[（16.88±9.02）% vs（8.83±5.30）%、（10.9±9.08）% vs（4.61±3.13）%],差异具有统计学意义（Z=-3.753,P=0.001;Z=-3.596,P=0.001）,Th17、Breg、Th17/Treg低于对照组[（1.02±0.37）% vs（1.41±0.38）%、（1.35±1.37）% vs（2.07±0.86）%、（1.01±0.37）% vs（0.3±0.05）%],差异具有统计学意义（Z=-3.141,P=0.002;Z=-5.963,P=0.001;Z=-1.693,P=0.009）。新诊断组、持续性组和慢性组3组的Th1、Th1/Th2均高于健康对照组[（16.12±7.72）% vs（13.11±3.83）% vs（18.75±10.38）% vs（8.83±5.3）%、（11.63±8.77）% vs（7.77±3.43）% vs（12.03±10.65）% vs（4.61±3.13）%],差异具有统计学意义（Z=14.83,P=0.002;Z=13.363,P=0.004）;3组的Th17、Breg、Th17/Treg均低于健康对照组[（0.91±0.28）% vs（0.98±0.54）% vs（1.07±0.33）% vs（1.41±0.38）%、（1.77±1.58）% vs（1.14±0.52）% vs（1.26±1.54）% vs（2.07±0.86）%、（0.15±0.07）% vs（0.16±0.09）% vs（0.18±0.01）% vs（0.3±0.05）%],差异具有统计学意义（Z=10.04,P=0.018;Z=35.731,P=0.001;Z=3.200,P=0.030）;3组Th2细胞和Treg细胞与健康对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。3组之间Th1、Th1/Th2、Th17、Breg、Th17/Treg等指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论ITP免疫发病机制包括T和B细胞功能紊乱,T细胞表现为Th1/Th2与Th17/Treg失衡。不同分型ITP患者免疫细胞表现差异性不明显。     

Th17细胞在原发免疫性血小板减少症动物模型中的作用

目的 探讨Th17细胞在原发免疫性血小板减少症(ITP)中的作用。方法 采用腹腔注射大鼠抗小鼠CD41抗体(MWReg30)的方法诱导BALB/c小鼠产生ITP,之后分离外周血和脾单个核细胞,采用实时定量PCR法检测Th17细胞相关转录因子及细胞因子mRNA的表达水平,同时采用流式细胞术检测外周血和脾细胞内Th17细胞的比例。结果 ITP模型小鼠外周血及脾单个核细胞Th17细胞百分比分别为(1.410±0.307)％和(0.220±0.045)％,明显高于正常对照小鼠[分别为(0.457±0.089)％和(0.064±0.024)％](P值分别为0.007、0.006)。同时,ITP模型小鼠脾单个核细胞中IL-17F、IL-17A和IL-6 mRNA相对表达量分别为2.203±0.427、2.981±0.860和1.949±0.423,明显高于对照组(分别为1.099±0.250、1.005±0.253和0.990±0.110)(P值均＜0.05)。外周血有核细胞IL-21 mRNA相对表达量为1.857±0.533,明显高于正常对照(0.824±0.190)(P＜0.05)。结果 显示IL-17F和IL-17A的表达呈明显正相关性(r=0.934,P=0.000),IL-17F和IL-17A与IL-6也具有相关性(r =0.598,P=0.001;r=0.619,P=0.000)。结论 Th17细胞在ITP发病过程中起重要作用,它至少参与了血小板的清除。     

免疫性血小板减少症125例临床分析

本研究旨在探讨免疫性血小板减少症(ITP)患者的临床特点。回顾性分析125例于2005年1月-2010年5月在我院住院治疗的ITP患者的临床资料、实验室检查结果及治疗效果。结果表明,125例患者发病中位年龄41岁,男女比为1∶1.78;治疗前平均血小板计数(28.59±23.05)×109/L;69.1%(67/97)的患者有风湿免疫检查异常;肝炎病毒和细小病毒B19携带率分别为37.3%(22/59)和44.8%(26/58);慢性患者CD3+T细胞为(62.7%±14.11%),在急性患者为(55.44%±14.31%)。慢性患者CD19+B细胞为(12.83%±6.96%),在急性患者为(19.47%±6.93%);91例患者行骨髓细胞膜抗体检查显示,54.9%(50/91)的患者抗体阴性,45.1%(41/91)患者抗体阳性;急性患者阳性率63.0%(17/27),在慢性患者为37.5%(24/64);激素联合环孢素治疗有效率为81.7%(49/60),部分难治性患者对RCP化疗或硫唑嘌呤细胞毒药物治疗的有效率分别为57.14%(4/7)和40.0%(2/5)。结论:ITP患者常合并病毒感染或风湿免疫学异常,急性患者以体液免疫功能亢进为主,慢性患者则表现为细胞免疫功能亢进;骨髓细胞膜抗体阳性的患者多是急性患者,因此在治疗方案的选择上应根据不同的发病机制选择不同作用机制的药物或药物组合,以取得更好的疗效。     

树突状细胞与移植免疫耐受

树突状细胞（dendritic cells，DC）在机体外周与中枢免疫耐受维持中发挥重要作用，其以多种机制参与自身免疫耐受的形成，且具有极强可塑性，因此成为近年来移植免疫耐受领域的研究热点。本文概述了DC的分型及作用、DC诱导免疫的间接通路、Flt3L和凋亡细胞的作用、基因工作修饰DC及免疫抑制剂。     

Th17细胞及白介素17在原发性免疫性血小板减少症中的表达和临床意义

本研究检测原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞比例和IL-17水平的变化,并探讨其临床意义。应用流式细胞术和ELISA方法分别检测48例ITP患者及28例对照组外周血中Th17细胞比例及IL-17水平。结果显示,ITP患者Th17细胞比例为(1.40±1.35)%,较对照组升高(P<0.05),Th17细胞比例在糖皮质激素治疗组低于未使用糖皮质激素治疗组(P<0.05)。ITP患者Th17分泌的IL-17量为(19.624±5.187)pg/ml,较正常对照组升高(P<0.05),但IL-17水平在糖皮质激素治疗组与未使用糖皮质激素治疗组的差异无统计学意义。结论:Th17细胞在ITP发病中可能发挥一定作用,糖皮质激素可能通过抑制Th17细胞发挥治疗作用。     

原发性免疫性血小板减少症患者外周血细胞miRNA差异表达分析

本研究通过建立原发性免疫性血小板减少症(ITP)外周血细胞微小RNA(miRNA)表达谱,探讨miRNA在ITP患者和正常健康对照者外周血细胞中的表达差异。应用Exqion miRCURYTM芯片分析ITP患者和正常对照者外周血白细胞miRNA差异表达;分层聚类分析ITP患者和正常对照者之间miRNA表达谱的差异;应用实时PCR方法对表达差异miRNA进行验证。结果表明,在ITP患者与正常对照者外周血白细胞间有159个差异表达的miRNA,其中79个表达显著上调,80个表达显著下调。分层聚类分析显示,ITP存在特异性miRNA表达谱。实时PCR检测结果与芯片分析结果一致。结论:ITP患者外周血细胞存在miRNA表达异常,提示miRNA表达变化可能参与了ITP的发病。     

人脐带血CD34^＋细胞体外诱导树突状细胞及其激活T细胞抗肿瘤免疫反应的实验研究

树突状细胞 (dendriticcells ,DCs)是目前已知的体内功能最强 ,并唯一能激活初始型T细胞的抗原呈递细胞[1 ] 。临床上将负载了肿瘤抗原的DCs回输机体用于某些恶性肿瘤的治疗 ,已收到了令人鼓舞的抗肿瘤效应[2 ,3] 。但是 ,目前无论用骨髓CD34 细胞或外周血单个核细胞 (MNC)作体外诱导 ,要获得足够数量的DCs进行生物治疗 ,在技术上尚存在相当大的困难。为探讨脐带血作为DCs来源组织的可能性 ,我们利用脐带血CD34 细胞在体外进行DCs的定向诱导分化 ,并对诱导的DCs进行了功能检测。材料与方法材料来源CD34 细胞MACS免疫磁性分离…     

慢性髓性白血病人源树突状细胞的细胞毒作用及其体外扩增

本研究观察来源于慢性髓性白血病患者的CD34 细胞经两步培养扩增后产生的树突状细胞的抗白血病 免疫功能。从慢性髓性白血病患者骨髓或外周血中分离出CD34 细胞或外周血单个核细胞分别进行两步培养。 首先将其与rhFlt3-L和rhTPO共育7天,再与rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4共同培养14天,以诱导树突状细胞产 生:同时以rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4直接诱导体系作对照。获得的DC通过流式细胞仪检测免疫表型,电镜分 析细胞超微结构及G显带法进行的染色体分析后,并用MTT法检测DC刺激T细胞增殖能力及T细胞对CML细 胞的杀伤作用.结果表明:慢性髓性白血病的CD34 细胞经过rhFlt3-L和rhTPO的初始扩增培养7天后,CD34 细 胞总数扩增77±5倍。用rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4诱导培养14天,DC产率达到(39±8)％,细胞扩增倍数及 DC比例均明显高于直接诱导产生的培养方法(P<0.01),且此DC能刺激自体或异体T细胞增殖,进而杀伤CML 细胞。结论:两步法体外扩增培养可明显提高DC前体总数及产率,优于直接诱导培养;CML细胞来源的DC可诱 导产生抗白血病免疫反应。     

TRAIL在原发免疫性血小板减少症患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的：探讨原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia,ITP）中TRAIL的表达及其在发病机制中的作用。方法使用Ficoll密度梯度离心法,收集28例ITP患者和30例健康对照的外周血单个核细胞（PBMC）。采用实时荧光定量PCR检测TRAIL基因的表达,采用 ELISA方法检测血清中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-4和 IL-10的量,并分析TRAIL与患者TNF-α,INF-γ,IL-10和血小板计数的相关性。结果与健康对照组相比,ITP患者 PBMC中 TRAIL表达显著增高（2.80±0.43 vs 1.00±0.24,t＝19.72,P＜0.001）。与健康对照组相比,ITP患者血清中IFN-γ和TNF-α升高（52.43±11.04 pg/ml vs 23.26±8.15 pg/ml;69.14±10.89 pg/ml vs 36.14±13.17 pg/ml,t＝10.36～11.50,P值均＜0.001）,IL-10降低（11.18±6.13 pg/ml vs 33.28±9.85 pg/ml,t＝10.17,P＜0.001）,IL-4的变化差异无统计学意义（35.75±12.52 pg/ml vs 40.16±14.26 pg/ml,t＝1.25,P＞0.05）。且ITP患者TRAIL的表达与血清中IFN-γ,TNF-α正相关（r＝0.432,0.541,P 值均＜0.05）,与 IL-10,血小板计数负相关（r＝-0.424,-0.553,P 值均＜0.05）。结论TRAIL可能通过介导细胞因子免疫紊乱,参与了 ITP的发生与发展,这为进一步研究 ITP的免疫干预治疗提供了新的线索和思路。     

小鼠调节性树突状细胞分泌的外泌体诱导免疫耐受的实验研究

本研究探讨小鼠调节性树突状细胞（rDC）分泌的外泌体（regulatory exosomes，rDex）诱导免疫耐受的作用，并与正常未成熟树突状细胞的外泌体（immature exosomes，iDex）诱导免疫耐受的作用进行比较。取C57BL／6（H-2^b）小鼠骨髓细胞诱导未成熟树突状细胞（iDC），TGF—β1联合IL-10诱导调节性树突状细胞（rDC），流式细胞术检测两种DC的表型。采用超速离心结合膜超滤的方法分别提取rDex和iDex。建立小鼠皮肤移植模型．以C57BL／6小鼠为供者，以BALB／c（H-2^d）小鼠为受者，按对受者处理的不同实验分3组，iDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的iDex，rDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的rDex，另设PBS对照组，观察移植皮肤存活情况。通过单向混合淋巴细胞反应（MLR）观察供者及非亲缘异基因供者DBA／2对同种异基因小鼠T细胞增殖情况。结果表明：TGF—β1、IL-10可下调DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达。移植皮片平均存活时间（MST），在对照组为7、8天，iDex组为10．7天，rDex组为18．8天；iDex组的移植皮片MST明显长于对照组（P〈0．05）；rDex组的移植皮片MST明显长于iDex组（P〈0．01）。MLR结果证明iDex组和rDex组B／C小鼠均对C57小鼠的脾细胞产生特异性耐受，尤其是rDex组；对非亲缘异基因DBA供者的脾细胞两组仍表现出强烈的免疫应答。结论：iDex和rDex均有诱导免疫耐受的作用，且rDex作用较iDex作用好。     

白血病细胞系来源的树突状细胞诱导及其抗肿瘤免疫功能研究

树突状细胞（DC）在抗肿瘤免疫反应中起关键作用，但大多数白血病病病人有DC功能缺陷，在外体扩增DC并增强其抗肿瘤免疫功能及以DC为基础的肿瘤疫苗是对白血病有效的免疫治疗方法，为了探讨由不同的髓性白血病细胞诱生DC的条件及其抗白血病反应，选用HL－60，K562和THP－1细胞与不同的细胞因子组合诱生DC，以光学和电子显微镜术观察形态特征，用流式细胞术和单克隆抗体检测细胞表型，以同种混合淋巴细胞反应观察刺激淋巴细胞增殖，用^51Cr释放法检测诱生细胞的细胞术和单克隆抗体检测细胞表型，以同种混合淋巴细胞反应观察刺激淋巴细胞增殖，用^51Cr释放法检测诱生细胞的细胞毒作用，用ELISA法测定DC培养及DC＋血单个核细胞培养的血清中IL－12及INF－γ的量，结果表明，由K562，HL－60和THP－1细胞诱生的DC具有村突状细胞的形太学特征，细胞表达DC的表面分化抗原，其中GM－CSF＋IL－4＋TNF-γ刺激HL－60－DC和THP－DC和GMCSF＋IL－4＋IL－12刺激的K562－DC中有抗原表达。3种细胞诱生的DC对混合淋巴细胞反应CTL反应有强刺激细胞因子能诱导髓性白细胞产生DC，不同细胞需要不同的细胞因子和培养条件，这些DC表达抗原呈递细胞的表型具有刺激T淋巴细胞增殖和诱导CTL反应以及分泌IL－2和促进T细胞分泌INF－γ的作用。     

细菌活化的浆细胞样树突状细胞在白血病自发缓解中的作用

白血病自发缓解（spontaneous remission,SR）临床罕见,多认为与严重感染等因素有关,确切机制不详.浆样树突状细胞（pDC）和髓样树突状细胞（mDC）是机体调节免疫的重要细胞,分别发挥调节初始免疫和继发免疫的关键作用.在感染诱发的白血病SR患者中观察到pDC数量明显增多并伴有IFN-α水平升高,推测细菌感染激活了pDC,在SR中发挥重要作用.本研究旨在探讨细菌能否活化pDC并观察其功能.选择健康献血员及白血病SR患者,以梯度密度离心法分离获得外周血单个核细胞（PBMNC）,应用免疫磁珠阴性选择及流式细胞阳性分选法,得到纯化的人pDC和mDC.将所得pDC分别与不同细菌共培育,利用流式细胞术及ELISA法检测共培育后细胞表面标志（CD40、CD86和HLA-DR）及细胞因子（IFN-α、IL-12、IFN-γ IL-2、IL-4、IL-10）分泌水平的变化.结果表明：金葡菌、铜绿假单胞菌能激活pDC分泌大量IFN-α并促使初始CD4＋T细胞向Th1分化.经细菌激活的pDC表面分子CD40、CD86表达明显增高,具有较强的刺激T细胞增殖能力.结论：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌细菌具有活化pDC的能力,活化的pDC能够产生大量干扰素,发挥初始免疫效应,提示细菌活化的pDC在感染诱导的白血病SR中可能发挥了重要作用.细菌活化pDC的确切机制尚需进一步研究.