Th2细胞移植减低异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的实验研究

免疫抑制剂和Ｔ细胞去除虽然可以明显降低移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)的发生 ,但存在继发感染、白血病和其它恶性肿瘤高复发的问题。如何改良Ｔ细胞 ,提高异基因骨髓移植(ａｌｌｏ ＢＭＴ)效果成为引人注目的问题。我们采用体外诱导的Ｔｈ2细胞进行ａｌｌｏ ＢＭＴ ,探讨该种Ｔ细胞对ＧＶＨＤ发生的调控作用。材料和方法1　材料　Ｃ5 7ＢＬ/ 6鼠 (Ｈ 2ｂ ,8周 ,雄性 )、ＢＡＣ鼠 (ＢＡＬＢ/ｃ×Ｃ5 7ＢＬ/ 6 ,Ｈ 2ｂ×ｄ ,Ｆ1,10周 ,雌性 )由第一军医大学清洁动物实验部提供。ＲＰＭＩ 16 40培养基为Ｇｉｂｃｏ公司产品 ,鼠白细胞介素 4(ｍＩ…     

应用扩增的Treg预防异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的实验研究

目的：探讨扩增后的CD4+CD25+调节T细胞(regulatory T cell ,Treg)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法：利用免疫磁珠法分选小鼠Treg细胞； 以抗鼠 CD3ε 单抗、抗鼠CD28 单抗 、鼠重组 IL-2及辐射过的Balb/C小鼠脾细胞为共刺激因子，扩增TREG细胞；建立C57BL/6→BALB/c小鼠allo-BMT模型,接受移植小鼠随机分为3组,移植骨髓后6-8小时后分别予尾静脉输注扩增的Treg细胞、CD4+CD25-T细胞和RPMI 1640培养液(空白对照)。以移植后GVHD表现,肝、脾、小肠组织病理形态、生存期为观察指标并进行组间比较。结果：经免疫磁珠法分选可获得高纯度(91.80±2.15)%及具较强活力(97.58±1.23)%的Treg细胞；移植后(四周左右)的扩增后Treg细胞移植组小鼠肝、脾、小肠GVHD病理损害较同期CD4+CD25-T细胞移植组与空白对照组小鼠有一定程度的减轻。3组小鼠移植后平均存活时间分别为（61. 45±27. 88）天、(18.58±12. 39)天和(26. 37±15. 65)天, 扩增后Treg细胞移植组小鼠平均存活时间较CD4+CD25-T细胞、空白对照组小鼠延长(P<0.05)。结论：allo-BMT后输注增殖的Treg细胞可以减轻移植后GVHD程度,延长小鼠生存时间。     

肝细胞生长因子对急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病和移植物抗白血病的影响

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠异基因骨髓移植(alloBMT)后移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗白血病(GVL)的影响及其可能的相关机制。方法随机将20只裸鼠(用于观察白血病复发)分为对照组(A组)和实验组(B组),将20只BALB/c小鼠(用于观察GVHD)分为对照组(C组)和实验组(D组),实验组在移植0天至移植后7天注射HGF,对照组注射PBS。流式细胞术检测HGF对alloBMT后ALL小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的影响。记录ALL小鼠BMT后的存活时间。观察移植后ALL小鼠肝脏、小肠的GVHD病理变化。ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNFα)的水平。结果A、B、C、D4组小鼠alloBMT后中位生存时间分别为(7.00±1.58),(9.00±1.58),(11.00±3.95),(24.00±13.44)d,D组生存时间明显延长(P值均<0.05)。D组CD4+T淋巴细胞[(10.39±1.15)%]较C组[(13.50±1.81)%]明显降低(P<0.01),CD8+T淋巴细胞[(12.25±2.85)%]较C组[(6.12±1.99)%]明显增加(P<0.01)。D组TNFα水平[(112.10±18.99)pg/ml]明显低于C组[(143.90±25.35)pg/ml](P<0.01)。GVHD明显减轻。结论HGF具有减轻ALL小鼠alloBMT后GVHD程度并且保留GVL的作用。     

基因工程化Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的作用

目的 探讨输注慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将鼠Foxp3基因转导入BALB/c小鼠的CD4+CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.建立小鼠异基因骨髓移植模型,在移植时联合输注基因工程Treg,通过受...     

干细胞的生物学特性：异基因骨髓细胞防治小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病

目的:研究可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的粒-巨噬细胞集落刺激因子短期培养的异基因骨髓细胞,对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病的防治及与移植物抗白血病的关系.方法:实验于2002-06/2003-03在第二军医大学免疫研究所完成.选择纯种近交系C57BL/6小鼠作为供,BALB/c小鼠作为受,用^60Coγ射线照射后,随机分为5组,每组10只.①未处理组:接受照射后,尾静脉注射磷酸盐缓冲液.②移植物抗宿主病组:照射后移植骨髓细胞和脾细胞.③粒-巨噬细胞集落刺激因子组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养的骨髓细胞和脾细胞.④LacZ基因修饰组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养后LacZ基因修饰的骨髓细胞和脾细胞.⑤可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养后可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的骨髓细胞和脾细胞.经上述处理后主要观察:①各组小鼠生存期.②隔3日鼠尾静脉采血检测各组小鼠外周血白细胞的变化,以观察不同方法对造血功能恢复的影响.③各组小鼠脾脏淋巴细胞杀伤活性的改变.结果:纳入BALB/c小鼠50只,均进入结果分析.①小鼠生存期:可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组平均存活期较移植物抗宿主病组明显延长(35 d,12.5 d,P＜0.05).②小鼠脾脏淋巴细胞杀伤活性的改变:可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组小鼠脾脏淋巴细胞杀伤同种肿瘤细胞的活性明显高于LacZ基因修饰组和粒-巨噬细胞集落刺激因子组.③对造血功能恢复的影响:处理后各组小鼠外周血白细胞计数均明显降低.6 d白细胞开始逐渐回升,尤以移植粒-巨噬细胞集落刺激因子组、LacZ基因修饰组和可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组小鼠白细胞回升明显.结论:可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的骨髓细胞能有效地抑制移植物抗宿主病的产生,有利于骨髓移植小鼠恢复造血功能.骨髓细胞异基因移植是一种有效防治移植物抗宿主病的新方法.     

异基因骨髓移植并发移植物抗宿主病小鼠体内IL-22的细胞来源

本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病（GVHD）时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL／6和BALB／c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组（normal）、单纯照射组（TBI）、骨髓移植组（BMT）和骨髓联合脾细胞诱导GVHD组（BS）。ELISA法检测小鼠血浆中IL-22的水平;流式细胞术检测IL-22的细胞来源及所属亚群情况。结果表明,Bs组小鼠血浆中IL-22水平最高,与正常小鼠相比差异有统计学意义（P〈0．01）;BS组小鼠脾、淋巴结和外周血中淋巴细胞均可产生IL-22,且IL-22＋CD4＋T细胞百分率高于IL-22＋CD8＋T细胞;除Th22细胞外,Th1细胞和Th17细胞也是GVHD小鼠体内IL-22的细胞来源,但以Th22细胞分泌IL-22为主。结论：GVHD小鼠体内可产生高水平的IL-22,其主要来源于IFN-γ-IL-17-IL-22＋的Th22细胞。     

移植物抗宿主病研究的进展

本文就对移植抗宿主病（ＧＶＨＤ）的研究历史进行了简要的回顾,并综述了ＧＶＨＤ研究中的主要问题,Ｔ细胞亚群的功能,细胞因子网络,移植物抗白血病效应与ＧＶＨＤ关系等方面研究的进展。对ＧＶＨＤ研究中所应用的实验系统地进行了述评。     

供体Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响

本研究探讨供体CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗GVL)效应的影响。建立BALB/c→C57BL/6小鼠EL4白血病骨髓移植模型,体外磁珠分离纯化供鼠CD4+CD25+T细胞,在骨髓移植的同时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞。以移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理形态等为观察指标并进行组间比较。结果显示:白血病对照组小鼠平均生存时间为(17.9±0.7)天,均存在白血病细胞浸润;移植对照组及效应T细胞组平均生存时间为(23.2±1.6)天和(22.3±1.9)天,肝脏、皮肤和小肠病理切片显示均存在GVHD病理改变;Treg细胞组小鼠平均生存时间为(47.3±6.5)天,70%的受鼠获得长期存活,病理显示无GVHD及白血病细胞浸润,其GVHD评分较移植对照组及效应T细胞组明显降低(p0.05)。结论:在小鼠allo-BMT中联合输注供体CD4+CD25+T细胞可减少及减轻GVHD,并保留GVL效应。     

干细胞的生物学特性:异基因骨髓细胞防治小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病

目的:研究可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的粒-巨噬细胞集落刺激因子短期培养的异基因骨髓细胞,对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病的防治及与移植物抗白血病的关系。方法:实验于2002-06/2003-03在第二军医大学免疫研究所完成。选择纯种近交系C57BL/6小鼠作为供者,BALB/c小鼠作为受者,用60Coγ射线照射后,随机分为5组,每组10只。①未处理组:接受照射后,尾静脉注射磷酸盐缓冲液。②移植物抗宿主病组:照射后移植骨髓细胞和脾细胞。③粒-巨噬细胞集落刺激因子组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养的骨髓细胞和脾细胞。④LacZ基因修饰组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养后LacZ基因修饰的骨髓细胞和脾细胞。⑤可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养后可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的骨髓细胞和脾细胞。经上述处理后主要观察:①各组小鼠生存期。②隔3日鼠尾静脉采血检测各组小鼠外周血白细胞的变化,以观察不同方法对造血功能恢复的影响。③各组小鼠脾脏淋巴细胞杀伤活性的改变。结果:纳入BALB/c小鼠50只,均进入结果分析。①小鼠生存期:可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组平均存活期较移植物抗宿主病组明显延长(35d,12.5d,P<0.05)。②小鼠脾脏淋巴细胞杀伤活性的     

骨髓间充质干细胞对骨髓移植后移植物抗宿主病和移植排斥的影响

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BM—MSC)具有干细胞特性，体外培养呈贴壁生长，成纤维细胞样形态，不表达造血干细胞(hemaropoietic srem cells，HSC)的标志。它能抑制异基因骨髓移植(Allo—BMT)后移植物抗宿主病(GVHD)的发生，也可抑制器官移植后的排斥。其机理可能与为HSC提供保护、抑制T淋巴细胞的反应性、提供相匹配的HLA—Ⅰ类抗原有关。     

骨髓间充质干细胞对异基因骨髓移植后aGVHD和GVL的影响

为了观察骨髓间充质干细胞(BMMSC)对异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)和移植物抗白血病(GVL)效应的影响，以急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠为动物模型，对其进行allo-BMT的同时，静脉输注体外培养的供鼠BMMSC，同时设立单纯allo—BMT对照组。记录受鼠存活时间；观察受鼠发生aGVHD一般反应及病理学变化；用流式细胞术检测受鼠CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的差异；采用性染色体检查检测嵌合状况。结果显示：BMMSC推迟aGVHD发生的时间；降低CD4^ T细胞的同时增加CD8^ T细胞的数量；明显延长受鼠allo—BMIT后的生存时间。结论：BMMSC与allo-BMT联合进行具有一定的GVL效应；BMMSC能抑制allo—BMT后aGVHD的发生，但同时具有一定的GVL效应。     

异种骨髓移植移植物抗宿主反应的实验动物模型

为了观察大鼠和小鼠间异种骨髓移植中移植物抗宿主病 (GVHD)的现象 ,建立动物模型。受体BALB/c小鼠接受 8.5Gy全身照射后 ,一组 (n =10 )输入SD大鼠骨髓细胞 4× 10 7,另一组 (n =10 )输入SD大鼠骨髓细胞 4× 10 7及脾细胞 2× 10 7,观察 6 0天 ,记录受鼠发生GVHD情况。结果表明 :单纯骨髓细胞输入组 8只鼠存活超过 6 0天 ,另 2只鼠分别于 18天和 31天死亡 ,肝、小肠病理切片未见明显GVHD。而骨髓细胞及脾细胞输入组均于14天内死亡 ,肝、小肠病理切片证实有GVHD。结论 :大、小鼠间异种全骨髓细胞移植未见明显GVHD ,建立GVHD模型需要加入脾细胞     

化学修饰物甲氧基聚乙二醇对异基因骨髓移植影响的研究

为了探讨经甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰的骨髓移植物对异基因移植并发症———移植物抗宿主病(GVHD)的影响,将BALB/cH2d小鼠经60Coγ线8.0Gy照射后随机分3组。A组经尾静脉注射RPMI1640,B组注射615H2k小鼠的骨髓及脾细胞混合悬液,C组注射等量的mPEG修饰后的骨髓及脾细胞混悬液。通过小鼠外观的观察、存活率和存活时间的测定及组织病理检查研究GVHD程度,通过染色体检查研究植入情况。研究结果表明:B组出现脱毛等表现较C组早,程度重,重症病例多(P≤0.05)。B组死亡小鼠30天存活率20%,平均存活时间为12.1±2.4天,C组为50%,平均存活时间为16.1±2.9天(P≤0.05);B组出现Ⅲ度GVHD比例为59%,C组为20%(P=0.050),B组和C组的异基因骨髓成功植入。结论:mPEG修饰的骨髓移植物可减轻GVHD程度,有望延长生存时间,提高生存率。     

高压氧对异基因骨髓移植后aGVHD影响的实验研究

本研究探讨高压氧（HBO）在抗异基因骨髓移植后aGVHD和提高生存率中的作用及机制。给受致死量照射的C57BL／6受鼠注入供鼠BALB／c骨髓与脾淋巴细胞的混合液，分别给与高压氧、环孢素A、氨甲蝶呤处理。用流式细胞仪检测脾T细胞及其亚群和黏附分子CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD11a^＋、CD4^＋CD18^＋、CD8^＋CD11a^＋、CD8^＋CD18^＋的表达，用ELISA和RT-PCR法检测细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNFα的表达。结果表明：HBO组小鼠11天的活存率明显高于异基因移植组及CsA＋MTX组；HBO和CsA＋MTX可明显降低脾组织中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD11a^＋、CD4^＋CD18^＋、CD8^＋CD11a^＋、CD8^＋CD18^＋的表达（P〈0.05）；HBO组小鼠血清IL-2和TNFα的浓度及脾组织中IL-2和TNFα mRNA的含量都低于异基因骨髓移植组（P〈0.05），但高于CsA＋MTX组；HBO组小鼠脾组织中IL-4和IL-10 mRNA的含量显著高于异基因骨髓移植组和CsA＋MTX组（P〈0、05）。结论：高压氧在对抗aGVHD和提高活存率方面优于环孢素A和氨甲蝶呤，其抗aGVHD的作用机制与调节促炎／抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达及抑制T淋巴细胞作用有关。     

自体骨髓混合HLA半相合异体骨髓移植治疗恶性血液病(英文)

为了博采异基因BMT的GVL效应与ABMT不受供者限制的优点,作者用小鼠同基因混合H-2半相合异体骨髓移植,证实二者在一定比例混合移植后能耐受GVHD的发生且具明显的GVL效应。本研究作者报告了临床自体骨髓混合HLA半相合异基因骨髓移植,同时在体外高热及液体培养净化联合IL-2激活骨髓细胞,移植后又注射IL-2,以提高体内外对残留肿瘤细胞的净化效应,减弱GVHD反应和增强GVL效应。观察证实:移植过程是安全的,16例中无一例发生急性GVHD;近期疗效较好,移植后16例中5例复发,复发率为31.3％;11例未复发,其中7例随访7个月仍存活或且CCR,最长1例已无病存活35个月,余4例死于并发症和其它非血液病;16例除1例因早期死于HVOD外,余皆成功造血重建;对存活6例供受者性别不同患者性染色体分析发现移植后3例形成嵌合体,最长者已11个月余,目前仍在观察中。这一研究为临床恶性血液病治疗提供了一个新的途径。     

小鼠H-2单倍相合非清髓骨髓移植后细胞因子表达的动态研究

为了探讨H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植后细胞因子表达变化在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发生发展中的意义，建立了H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植模型，环孢菌素A（CsA）联合霉酚酸酯（MMF）预防aGVHD，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测移植后不同时间点上小鼠脾脏中IL-2、INF-γ、IL-4及IL—10的mRNA的表达。结果显示：仅接受非清髓性预处理小鼠的脾脏中各因子的mRNA表达较预处理前略有升高。未做aGVHD预防给药的小鼠（第2组）IL-2、IFN-γ的mRNA表达水平在移植后急剧升高，分别在21天、14天达峰值，之后显著下降，35天时基本恢复至移植前水平。接受GVHD预防给药的小鼠（第3组）IL-2、IFN-γ的mRNA表达的变化趋势与第2组相似，但峰值明显低于第2组。第2组和第3组小鼠IL-4的mRNA表达水平均在移植后14天达峰值，但第3组的峰值较第2组为高，且在此后的下降中较第2组缓和。IL—10的mRNA表达水平在移植后逐渐升高，在14天达到一个高峰，21天时下降，之后再次升高直至35天。结论：H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植后脾脏内IL-2、IFN-γ、IL-4及IL—10均呈上调表达，应用CsA和MMF则可下调IL-2和IFN-γ的mRNA表达水平，从而降低了aGVHD的发生率和严重程度。     

同种异基因小鼠骨髓移植后脾细胞的动力学研究

本研究建立同种异基因小鼠骨髓移植模型,监测移植后脾细胞的动力学变化,了解移植后外周免疫器官的免疫重建。供鼠为C57BL／6小鼠,受鼠为BALB／c小鼠。将受鼠分为单纯照射组（R组）、照射＋输注骨髓单个核细胞组（B组）、照射＋输骨髓单个核细胞＋输脾单个核细胞组（S组）。移植后观察小鼠体重、体位、活动性、毛发、腹泻及生存期,每周检测外周血白细胞及血红蛋白,于移植后第2、7、14、27、60天计数S组小鼠脾脏单个核细胞数,检测S组小鼠脾脏单个核细胞中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、B220^＋及CD11c^＋细胞的相对计数,濒死前行肝、小肠、皮肤病理检查。结果显示：S组小鼠中89％于移植后第6—78天死于aGVHD。移植后脾脏单个核细胞迅速下降,于移植后第2天降至最低点,持续至第7天,之后逐渐回升,第14天升至移植前水平;CD8^＋细胞和B220^＋细胞于移植后第2天基本降至最低点,CD8^＋细胞恢复最快,在第7天接近移植前水平,且大多为供者型,而B220^＋细胞恢复最慢,从第2—14天持续低水平,之后逐渐回升,但直至第60天仍未恢复至移植前水平;CD3^＋细胞和CD4^＋细胞降低缓慢,于第7天开始出现少量供者型细胞,总的比例逐渐下降,至14天降至最低点,之后逐渐回升,第60天时均恢复至移植前水平;CD11c^＋细胞移植后除第14天升高外,其它时间点比例变化不明显,也是由受者型逐渐向供者型转化。结论：C57BL／6为供体,BALB／c为受体并给予7．5Gy^60 Coγ清髓的预处理条件下,输注骨髓单个核细胞1×10^7,脾单个核细胞1×10^7建立同种异基因移植模型,移植后脾细胞呈明显的动力学变化,CD8^＋细胞重建最快．茸次为CD3^＋、CD4^＋细胞．B220^＋细胞重建最慢。     

同种异基因Th2细胞移植对GVHD和GVL效应的作用

为探讨同种异基因Th2细胞移植是否可以减低移植物抗宿主病(GVHD)的发生和保留移植物抗白血病(GVL)效应的作用,在体外用rmIL-4,Con A和离子霉素把供鼠(C57BL/6H-2b)T细胞优势化诱导培养为Th2细胞,再把Th2细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给红白血病受鼠模型(EL9611H-2d).结果表明未处理的对照组,受鼠平均存活时间为(10.6±1.3)天,10只均死于白血病;环磷酰胺化疗组,小鼠平均存活(18.7±4.2)天,10只小鼠最终均死于白血病;骨髓细胞和脾T淋巴细胞移植组,小鼠平均存活(22.7±7.4)天,9/10只均死于GVHD;骨髓细胞和Th2细胞移植组,3/10只在28天内死于GVHD,其余7/10只无GVHD发生,白血病发病时间明显推迟,平均存活(36.9±10.8)天,在50天时检查有2只鼠无白血病证据.研究证明体外极向化诱导培养的Th2细胞移植可减低GVHD发生的同时保留了抗白血病的能力.