麦迪霉素产生菌880103#菌株的选育

麦迪霉素产生菌生米加链霉菌A03菌株经过多次诱变筛选及抗自身代谢物突变,得到了产量正变株;通过推理筛选的方法,应用初级代谢产物生物合成途径的调节突变株,分离得到了一主要组分麦迪霉素A_1高于对照菌株的优良菌株880103。并通过加入前体的方法,使其麦迪霉素A_1组分进一步提高。在试产中,该菌株与对照菌株相比,发酵单位相对提高16％,麦迪霉素 A_1组分相对提高 28％,成品效价相对提高4.7％;且发酵周期短、温度适中、遗传性能稳定、适应性强,是一株优于对照菌株的优质高产菌株。     

薄层扫描法测定麦迪霉素片中各组分的含量

麦迪霉素 (Ｍｉｄｅｃａｍｙｃｉｎ)是链霉菌经微生物发酵所产生的一种多组分大环内酯类抗生素[1] ,由于抗菌谱广 ,疗效显著 ,口服给药方便而被列入国家基本药物目录[2 ] 。国产麦迪霉素主要由麦迪霉素Ａ1、Ａ2 、Ａ3、Ａ4 等四个组分所组成[3] ,日本产麦迪霉素则以麦迪霉素Ａ1组分为主 ,由于麦迪霉素Ａ1的生物活性高于其他组分 ,要提高麦迪霉素的质量则必须控制麦迪霉素中各组分的比例 ,特别是提高麦迪霉素Ａ1的含量 ,为此寻找快速有效的麦迪霉素各组分分离和含量测定方法 ,对于控制产品质量 ,确保临床疗效 ,具有重要意义。笔者采用薄层扫…     

基因组重排选育麦迪霉素高产菌株

目的以生米卡链霉菌(Streptomyces mycarofaciens)突变株为研究对象,选育麦迪霉素高产菌株。探索并验证基因组重排技术在菌种选育中的重要作用。方法通过2轮多亲株灭活原生质体融合技术实现基因组重排。将来自不同育种方法的5株麦迪霉素高产菌株B64-5、01-GM-1、H-101、H-106和H-108作为第一轮亲本,在质量浓度为3 g.L-1溶菌酶3、2℃水浴60 min条件下制备原生质体,分别采用紫外线照射148 s和52℃加热60 min灭活原生质体,然后采用质量分数35%PEG 4000、37℃保温2 min诱导原生质体融合。融合子经过初筛和复筛,获得产量进一步提高的重组子作为亲本进行第二轮的多亲株灭活原生质体融合实验。用生物学方法测定麦迪霉素效价,用HPLC方法测定麦迪霉素A1含量。结果与结论经过2轮基因组重排实验成功选育出3株高产且遗传稳定的麦迪霉素生产菌株。其中1株菌株GSZ2-32发酵前补加前体X-1后摇瓶产量比原始出发菌株Streptomyces mycarofaciens var.464提高1.1倍,麦迪霉素A1(MDMA1)质量分数含量保持在80%以上。     

反相高效液相色谱法分离测定醋酸麦迪霉素

本文以磷酸盐缓冲液－甲醇（２７：７３）为流动相，在Ｃ１８柱上分离测定醋酸麦迪霉素。除主组分外，日本产品尚可分离到８个小组分，国内试制品可分离到５个小组分。流动相甲醇浓度及柱温对ＭＡ的保留及分离有较大影响。以苯丙酸诺龙为内标物定量测定，线性关系良好。麦迪霉素、交沙霉素、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等均不干扰对ＭＡ主组分的测定。     

麦迪霉素发酵工艺改进

改变种子培养基、发酵培养基配方及培养周期,能有效地提高麦迪霉素发酵效价。此外在发酵过程中,降低后期摇瓶转速、补加蛋氨酸、丙酸或丙醇均能提高发酵效价。     

螺旋霉素和麦迪霉素发酵中溶氧参数研究

研究了螺旋霉素与麦迪霉素产生菌在发酵过程中通气与搅拌对溶氧的影响,并发现溶氧与发酵过程中的有机酸、ATP、菌丝量、还原糖以及生物效价,都有密切联系。适当调节溶氧能提高抗生素的发酵水平.     

麦迪霉素化学效价测定法

麦迪霉素的效价一般用生物测定法测定,结果准确但测定时间长,尤其不能满足生产中发酵液效价测定对时间上的要求。本文所述化学效价测定法经在生产中使用,结果基本与生物效价法相符。 试验运用麦迪霉素与27N硫酸作用水解生成紫色产物,其颜色深浅与麦迪霉素强度之间关系符合比耳定律的原理,采用分光光度法测定。样品为四川抗菌素工业研究所提供的标准品及四川长征制药厂试验室生产的麦迪霉素。测定用72型分光光度计。     

响应面方法优化生米卡链霉菌基因工程菌W-08发酵培养基

目的 优化生米卡链霉菌基因工程菌W-08发酵培养基,以提高麦迪霉素A1产量.方法 首先,用Plackett-Burman设计评价发酵培养基的8个成分对麦迪霉素A1的影响.然后用最速上升实验确定重要成分在中心复合设计中的取值变化范围.最后采用中心复合设计响应面方法优化了重要成分的浓度.结果 葡萄糖和鱼粉对麦迪霉素A1影响最大(P<0.05),是重要成分,其优化浓度分别为20.15g/L和1.80g/L.发酵培养基优化后麦迪霉素A1效价达到1410.16μg/mL,比优化前的A1效价1021.10μg/mL提高了38.1%.结论 数理统计实验设计和分析的方法成功地用于了生米卡链霉菌基因工程菌W-08发酵培养基优化.该方法结果准确可靠、有效且节约时间.     

三种剂型麦迪霉素兔体内的血药浓度测定

目的：测定3种剂型麦迪霉素的血药浓度,并进行比较。方法：对中国大耳白兔分别给予剂量为0.3g口服用麦迪霉素混悬剂,直肠用普通麦迪霉素栓剂及麦迪霉素微囊栓剂,管碟法测定麦迪霉素含量。结果：麦迪霉素混悬液和麦迪霉素普通栓剂在给药后1.5小时,方可达到最高血药浓度（混悬液为2.15μg/ml,普通栓剂为4.85μg/ml),但在体内的滞留时间较短,基本上在5小时之内即降至最低抑菌浓度以下。麦迪霉素微囊栓剂在较短的时间（1小时）达到最高血药浓度（2.58μg/ml),且可维持血药浓度大于最低抑菌浓度8-9小时。结论：麦迪霉素微囊栓剂较之其它2种剂型具有更好的使用效果和较广泛的应用前景。     

微生物比浊法测定麦迪霉素胶囊的效价

目的:建立麦迪霉素胶囊效价的微生物比浊法.方法:分别采用微生物比浊法和管碟法对麦迪霉素胶囊的含量进行测定和比较研究.结果:麦迪霉素胶囊效价测定的线性范围为1.0～3.3 U/ml;r=0.999 5,平均回收率为98.76%,RSD=1.52%(n=9). 结论:微生物比浊法具有简便、精确、快速的特点,可以应用于该产品的质量控制.     

国产麦迪霉素的组分分离和鉴定

用柱层析法分离得到国产ＭＤＭ的二个成分，其结构经波谱分析和其它理化性质的分析，证明是ＳＦ－８３７Ａ１和ＬｅｕｃｏｍｙｃｉｎＡ６，质谱结果表明，它们都含有碳霉氨基糖，碳霉糖和内酯环。     

柱晶白霉素的高效液相色谱分析

本文报道了高效液相色谱法分离测定自产的和日本进口的柱晶白霉素的组分含量的方法。色谱柱是Nucleosils C_(18)。移动相是甲醇-0.2mol/L醋酸铵(65:35v/v)。紫外检测器,波长231nm。测定结果表明,自产品与进口品各组分保留时间和主要组分含量基本相同。     

An in-vitro study on the metabolism of rokitamycin and possible interactions of the drug with rat liver microsomes

This in-vitro study was designed to identify the enzyme(s) involved in the major metabolic pathway of rokitamycin, i.e. the formation of leucomycin A7, and to assess possible interactions of the drug with rat liver microsomes. Formation of leucomycin A7 was NADPH-independent and was not appreciably inhibited by anti-rat NADPH cytochrome P-450 reductase serum or cimetidine, a nonspecific inhibitor of cytochrome P-450 isoforms. Eadie-Hofstee plots for the formation of leucomycin A7 were indicative of apparently monophasic behaviour for six rat liver microsomes tested. The mean (+/- s.d.) kinetic parameters, Km, Vmax and Vmax/Km, for the formation of leucomycin A7 from rokitamycin were 47+/-13 microM, 390+/-56 nmol min(-1) (mg protein)(-1) and 8.6+/-1.6 mL min(-1) (mg protein)(-1), respectively. Three esterase inhibitors (100 microM), bis-nitrophenylphosphate, physostigmine and metrifonate inhibited the formation of leucomycin A7 by more than 60%. Metabolism of rokitamycin was inhibited by terfenadine, but not by mequitazine, whereas chlorpheniramine and theophylline activated the formation of leucomycin A7. Rokitamycin, leucomycin A7, leucomycin V, erythromycin and clarithromycin were weak inhibitors of CYP3A-catalysed 3-hydroxylation of quinine with mean IC50 values ranging from 71 to >100 microM. It is concluded that in rat liver microsomes the formation of leucomycin A7 from rokitamycin is catalysed mainly by an esterase (possibly cholinesterase, EC3.1.1.8), but not by cytochrome P-450 enzyme(s). Although in this in-vitro animal study CYP3A activity was barely inhibited by rokitamycin, the possibility cannot be totally discounted in man when rokitamycin is co-administered with drugs metabolized by CYP3A.     

HPLC定量分析制剂中雷公藤氯内酯醇含量

雷公藤氯内酯醇(T_4)是从雷公藤中分离得到的一个新化合物,但含量很低,因此进行了以雷公藤内酯醇(To)为原料合成T_4的研究。T_4具有较强的免疫抑制活性,且毒性低于雷公藤内酯醇,有希望开发成新药在临床应用。为了控制T_4制剂的质量,本文系统地研究了反相高效液相色谱法分离和测定T_4的条件,结果以甲醇-水(1:1)作流动相,能满意地分离和测定T_4的含量,最小检测量为10 ng,采用内标法定量,方法快速、准确。     

高效液相色谱法测定骨复康胶囊中龙血素A的含量

目的建立骨复康胶囊中龙血素A的含量测定方法。方法采用HPLC法测定骨复康胶囊中龙血素A的含量。Kromasil C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱;甲醇-1%冰醋酸溶液（55：45）为流动相;检测波长为280 nm;流速为1.0 l/min;柱温：35℃。结果龙血素A在0.476～4.284μg范围内呈现良好的线性关系;回收率为99.51%,RSD为0.78%（N=6）。结论该方法简便、准确,重现性好,可用于骨复康胶囊的质量控制。     

滋肾通关胶囊质量标准的建立

目的：建立滋肾通关胶囊的质量标准。方法：采用TLC法鉴别处方中的知母、黄柏、肉桂。用HPLC法测定知母中的芒果苷和黄柏中的小檗碱的含量。色谱柱：Kromasil C18（200mm×4．6mm,5μm）;流动相：乙腈（A）-33mmol·L^-1磷酸二氢钾缓冲液（B）,采用梯度洗脱;检测波长：317nm;柱温：25℃;流速：1ml·min^-1。结果：TLC鉴别色谱特征斑点明显。芒果苷进样量在0．0057～0．1086mg·ml^-1范围内线性关系良好。平均加样回收率为97．52％,RSD=1．07％（n=6）。盐酸小檗碱进样量在0．0081～0．2576mg·ml^-1范围内线性关系良好。平均加样回收率97．85％,RSD=1．04％（n=6）。结论：所建立的TLC和HPLC法,专属性强,重复性好,可用于滋肾通关胶囊的质量控制。     

RP-HPLC法测定独一味胶囊中木犀草苷的含量

目的:建立测定独一味胶囊中木犀草苷含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为UltimateXB-C18,流动相为甲醇(A相)-0.2%醋酸溶液梯度洗脱(0～35min,A相33%;35～37min,A相33%～70%;37～47min,A相70%;47～50min,A相70%～33%),检测波长为349nm,流速为1.0mL·min-1,进样量为10μL,柱温为30℃。结果:木犀草苷进样量在0.0411～2.0560μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9998);平均加样回收率为98.06%、96.71%、95.75%,RSD=1.70%。结论:该法稳定、简便,可用于独一味胶囊的质量控制。     

高效液相色谱法测定香菊颗粒中黄芪甲苷含量

目的：建立测定香菊颗粒中黄芪甲苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为 Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-水（32：68）,流速为1.0 mL / min,蒸发光散射检测器,气流为2.8 mL / min,漂移管温度为105℃,柱温为30℃。结果黄芪甲苷进样量在0.436~13.080μg 范围内与峰面积线性关系良好（ r =0.999）,平均回收率为95.70%,RSD 为1.85%（ n =6）。结论该方法操作简便,精密度好,结果准确可靠。     

RP-HPLC法测定痛经康口服液中丹酚酸B的含量

目的建立以反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定痛经康口服液中丹酚酸B含量的方法。方法色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-1.0%甲酸（31：10：59）,流速为1.0ml/min,柱温为25℃,检测波长为286nm。结果丹酚酸B进样量在0.292～2.916μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r=1）;平均回收率为99.71%,RSD=1.18%。结论本法灵敏简便、重现性好、专属性强,可用于痛经康口服液的质量控制。     

HPLC荧光法测定复方丹参片中丹参酮ⅡA的含量

目的：建立测定复方丹参片中的主药丹参提取物丹参酮ⅡA含量的高效液相色谱荧光分析方法。方法：色谱柱：Shim—peckCLC—ODS（250mm×4．6Film,5／,zm）,流动相：甲醇．水（75：25,v／v）．流速：1．0ml·min^-1;柱温：40℃;激发波长：329nm,发射波长：435nm。用超声方法提取复方丹参片中丹参酮ⅡA。结果：丹参酮ⅡA在5．0～30．0ng范围内浓度呈良好线性关系（r=0．9995,n=6）;平均回收率为98．86％,RSD为0．85％（n=9）。结论：丹参酮ⅡA在复方丹参片中的含量高,以丹参酮ⅡA为指标建立复方丹参片质量评价方法,对药品质量控制的建立具有重要的意义。高效液相色谱荧光检测法灵敏度高、杂峰干扰少、操作简单、检测结果准确、重复性好,适合于复方丹参片中丹参酮ⅡA含量测定。