重症肌无力患者血清Th1/Th2/Th17细胞因子的变化及意义

目的：分析重症肌无力（MG）患者血清CD4^＋ T细胞主要细胞因子的水平,探讨不同亚型CD4^＋ T细胞分泌的细胞因子在MG发病机制中的作用。方法：用ELISA测定93例MG患者和34名健康对照者血清中各项细胞因子（IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13和IL-17）的水平,分组行统计学分析。结果：与健康对照组相比,MG患者Th1细胞相关各细胞因子（IL-2、IL-12、IFN-γ及TNF-α）均明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;Th2细胞相关的细胞因子IL-4、IL-10差异无统计学意义（P〉0.05）,仅IL-13水平升高;Th17细胞的细胞因子IL-17水平差异无统计学意义（P〉0.05）。MG眼肌型与全身型患者血清中各细胞因子水平的差异无统计学意义（P〉0.05）,在不同病程的MG患者中差异也无统计学意义（P〉0.05）。结论：Th1细胞因子在MG发病机制中发挥重要作用,而Th2细胞及其细胞因子在MG机制中的角色各异。     

CD40配体在重症肌无力发病机制中的作用探讨

目的　研究 CD4 0配体 (CD4 0 L)在重症肌无力 (MG)患者主要致病因素产生中的作用 ,从而探讨CD4 0 L 在 MG发病机制中的作用。方法　 MG急性期组 10例 ,MG非急性期组 15例 ,设健康对照组 16例。分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,分组用植物血凝素 (PHA)和美洲商陆原 (PWM)刺激剂刺激进行单个核细胞培养 :(1)PHA组 :即用 PHA刺激。培养后收集上清检测 γ-干扰素 (IFN- γ)和白细胞介素 4 (IL- 4 ) ;(2 ) PWM组 :即用 PWM刺激。培养后收集上清检测抗乙酰胆碱受体抗体 (Ach Rab)和抗突触前膜受体抗体 (Psm Rab)。比较两组中抗CD4 0 L 单克隆抗体 (CD4 0 L m c Ab)干预与否的差异并与健康对照组比较。结果　无论 MG急性期组或 MG非急性期组 ,刺激后 Ach Rab、Psm Rab、IFN- γ和 IL- 4水平均比健康对照组显著增高 (P<0 .0 0 1)。MG急性期组 IFN- γ高于 MG非急性期组 (P<0 .0 5 ) ,MG非急性期组 IL- 4高于 MG急性期组 (P<0 .0 5 ) ,CD4 0 L mc Ab干预后 4种因素均基本降至健康对照组水平 (P>0 .0 5 )。结论　在 MG的发生、发展过程中 Th细胞亚类出现不平衡 ,CD4 0 -CD4 0 L 共刺激因子均起重要作用     

辅助性T细胞及其细胞因子在重症肌无力中的作用

目的探讨辅助性T细胞及其相关细胞因子在全身型MG患者急性期发病中的作用。方法采用流式细胞术检测33例全身型MG患者和34例健康对照组外周血中Tfh细胞亚群CXCR5~+CD4~+T、CD45RO~+CXCR5~+CD4~+T、CD45RA~+CXCR5~+CD4~+T、ICOS~+CXCR5~+CD4~+T和PD-1~+CXCR5~+CD4~+T细胞占CD4~+T细胞的比例。采用流式液相多重蛋白定量(cell based assay,CBA)技术检测MG组及对照组血清中IL-17A、IFN-γ、IL-4、IL-21的含量。应用ELISA技术检测MG组及对照组血清中IL-22的含量。根据QMGs(the quantitative myasthenia gravis score,QMGs)对纳入研究的MG患者进行评分,QMGs反映了MG患者的病情严重程度。结果 MG组外周血中的循环Tfh细胞(ICOS~+CXCR5~+CD4~+T和PD-1~+CXCR5~+CD4~+T)较对照组增高(P=0.016,P0.001),且PD-1~+CXCR5~+CD4~+T细胞与MG患者病情严重程度正相关(r=0.405,P=0.019)。MG组血清IL-21、IL-17A、IFN-γ的含量较对照组升高,有统计学意义(P=0.007,P=0.016,P=0.007);MG组血清IL-4的含量较对照组略有增多,IL-22含量较对照组略有减少,但均无统计学意义。MG组IL-4含量QMGs呈负相关,差异具有显著性(r=-0.393,P=0.024)。结论 MG急性期ICOS~+和PD-1~+的循环Tfh细胞可能促进MG发病;IL-21、IFN-γ、IL-17A同样可能促进MG发病;IL-4可能对MG有保护作用。     

钾通道阻滞剂对多发性硬化患者细胞因子分泌的影响

目的研究多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者髓鞘反应性CD4+T淋巴细胞分泌γ干扰素(INF-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的水平,并探讨钾通道阻滞剂对其分泌的影响。方法采用酶联免疫斑点方法(ELISPOT)对12例急性期MS患者、12例缓解期MS患者(经INF--β1b治疗)和10名健康对照的CD4+T淋巴细胞在有无髓鞘抗原和钾通道阻滞剂作用下分泌细胞因子INF-γ和IL-4的变化进行比较。结果 MS急性期外周血CD4+T细胞以分泌IFN-γ为主;MS急性期及缓解期的CD4+T淋巴细胞经髓鞘碱性蛋白(MBP)刺激后分泌IFN-γ的水平较未加抗原组均增高(P<0.05),加入Kv1.3通道阻滞剂海葵毒素(Stichodactyla helianthustoxin,SHK)后,MS急性期和缓解期的MBP反应CD4+T淋巴细胞IFN-γ分泌明显减低(P<0.05),而对IL-4无明显影响。结论 Kv1.3钾通道阻滞剂SHK能减少MS患者MBP反应CD4+T细胞分泌IFN-γ,提示髓鞘反应性CD4+T细胞上Kv1.3通道有可能作为治疗MS的新靶点。     

重症肌无力患者血清中可溶性CD40配体表达及临床意义

目的:研究重症肌无力(MG)患者血清中可溶性CD40配体(sCD40L)及抗乙酰胆碱受体抗体(AchRab)的水平,探讨sCD40L在MG发病中的作用。方法:研究对象为25例MG患者,分为急性期组13例,非急性期组12例,设正常对照组15例。取静脉血,分离血清,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清中可溶性CD40配体及抗乙酰胆碱受体抗体(AchRab)的含量。结果:MG急性期组中sCD40L及AchRab的含量比非急性期组及正常对照组显著升高(P<0.01),非急性期组sCD40L及AchRab的含量比正常对照组显著升高(P<0.05)。各组sCD40L与AchRab均呈正相关。结论:sCD40L含量增高可能与MG发生和加重有关。     

MG患者外周血Th17细胞与AChR抗体产生的关系研究

目的探讨重症肌无力(MG)患者外周血中Th17细胞及相关细胞因子白细胞介素17(IL-17)在MG发病中的作用。方法收集40例MG患者和10名健康人(对照组)外周血标本,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Th17细胞比例,反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测PBMCs中维甲酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA水平,ELISA检测血清中IL-17水平,放射免疫沉淀法检测血清中抗乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)滴度;分离PBMCs中CD4~+T细胞和CD19~+B细胞与金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)进行共培养,培养系统中加入人IL-17和(或)IL-21中和抗体,放射免疫测定法检测培养液中AChR-Ab滴度。采用MG评分(quantitative MG scoring system,QMGs)对MG的严重程度进行评估,并对MG患者的Th17细胞比例、RORγt mRNA和IL-17水平与病情QMGs的相关性,以及MG患者抗AChR-Ab滴度与PBMCs中Th17细胞比例的相关性进行分析。结果 MG患者PBMCs中Th17细胞比例[1.11%(0.90%,1.34%)]高于健康对照组Th17细胞比例[0.26%(0.08%,0.36%)](z=5.494,P0.001),且与疾病严重程度呈正相关(r=0.4394,P=0.0046);血清中IL-17水平和PBMCs中RORγt mRNA相对表达[分别71.46(53.91,104.76)pg/mL、2.63(1.94,3.12)]均较健康对照组[分别18.82(12.73,29.80)pg/mL、1.13(0.98,1.28)]显著增高(均P0.001);MG患者血清中抗AChR-Ab滴度[2.34(1.19,3.60)nmol/L]较健康对照组[-0.08(-0.24,-0.03)nmol/L]显著增高(z=4.662,P0.001),且与Th17细胞比例呈正相关(r=0.7066,P=0.0001)。MG患者外周血T、B细胞与SEB共培养后抗AChR-Ab水平高于未加入SEB时及健康对照(均P0.01);加入抗人IL-21或IL-17中和抗体后,两者AChR-Ab滴度与未加入抗体时AChR-Ab滴度比较均降低(均P0.05),且均仍高于MG患者未加入SEB时及健康对照(P0.01);在培养上清中同时加入抗人IL-21和IL-17中和抗体时AChR-Ab滴度明显低于加入单种抗体时,而与未加入SEB时及健康对照差异无统计学意义(均P0.05)。结论 MG患者外周血中Th17细胞可能通过IL-17促进AChR-Ab产生,参与疾病的病理过程。     

重症肌无力患者外周血单个核细胞IFN-γ及IL-4的研究

目的　探讨重症肌无力 ( MG)患者乙酰胆碱受体 ( ACh R)特异性 T细胞免疫应答及其与乙酰胆碱受体抗体 ( ACh RAb)间的关系。方法　应用体外细胞培养和 ELISA方法检测 MG患者外周血单个核细胞 ( PBMNC)经 ACh R刺激后产生 IFN-γ和 IL-4的水平。结果　 MG患者 IFN-γ和 IL-4的诱生水平均比对照组明显升高( P<0 .0 1 ) ;ACh RAb阳性组 MG患者 IFN-γ和 IL-4的诱生水平明显高于 ACh RAb阴性组 ( P<0 .0 1和 P<0 .0 5 )。结论　MG患者无论为 ACh RAb阳性或阴性 ,均存在 ACh R特异性 T细胞激活 ,IFN-γ和 IL-4均与自身抗体的产生有关。     

重症肌无力患者CD40配体mRNA表达的研究

目前一般认为 ,重症肌无力 (MG)是T细胞依赖的 ,抗乙酰胆碱受体抗体 (AchRab)介导的器官特异的自身免疫病。其发生与T细胞的异常活化有关。T细胞传递共刺激信号以活化B细胞 ,诱导B细胞产生病理性抗体[1 ] ,共刺激因子CD4 0 /CD4 0L参与活化过程中信号的传导[2 ,3] 。本研究拟检测MG患者急性期、非急性期外周血单个核细胞 (PBMC)CD4 0LmRNA的表达 ,以了解CD4 0L在MG发病中的作用。1　资料1 1　一般资料 :MG患者 2 5例 ,均为 2 0 0 0年 3月至 2 0 0 2年 3月在广西医科大学一附院神经内科病房及门诊就诊的患者 ,根据病史、体征、…     

甲基强的松龙与硫唑嘌呤联合治疗对重症肌无力临床和免疫功能的影响

目的　通过检测重症肌无力 ( MG)患者乙酰胆碱受体 ( ACh R)特异性 IFN-γ、IL-1 0分泌细胞水平 ,观察大剂量甲基强的松龙 ( MP)与硫唑嘌呤 ( AZ)联合治疗对 MG患者 Th1及 Th2类细胞因子 ( CK)的影响。方法　用酶联免疫斑点 ( ELISPOT)技术检测 2 1例 MG患者免疫治疗前后外周血 ACh R特异性 IFN-γ、IL-1 0分泌细胞的数目。同时进行临床绝对评分。结果　 MP与 AZ联合治疗可使 MG患者外周血 ACh R特异性 IFN-γ分泌细胞的数目减少 ,对 IL-1 0分泌细胞影响不大。IFN-γ分泌细胞水平与临床绝对评分呈明显正相关 ( r=0 .5 1 2 ,P <0 .0 1 )。结论　 MP与 AZ联合治疗可抑制 MG患者 Th1类 CK的产生 ,恢复 Th1和 Th2类细胞因子之间的平衡 ,继而改善临床症状。 IFN-γ分泌细胞水平可作为反映肌无力严重程度的指标。     

重症肌无力病人乙酰胆碱受体抗体的测定及临床意义

用ＥＬＩＳＡ（固相酶联免疫吸附）法测定１７２例ＭＧ病人血清乙酰胆碱受体抗体（ＡｃｈＲａｂ），结果显著高于健康献血员组和非ＭＧ病人组。不同性别、病程及临床类型与ＡｃｈＲａｂ无相关性，但４１～５０岁组的显著高于其他年龄组。６７例类固醇激素治疗组、２２例大剂量两种球蛋白治疗组、１２例胸腺切除术组及３例ＭＧ危象病人２４次血浆交换疗法（ＰＥ）组，治疗后伴随肌无力症状的好转，ＡｃｈＲａｂ均显著低于治疗前。结果表明：ＡｃｈＲａｂ测定为ＭＧ诊断提供了可靠的实验依据，为类固醇激素、大剂量丙种球蛋白、胸腺切除术和ＰＥ等治疗ＭＧ提供理论依据和疗效评定的实验指标，进一步证实了ＭＧ免疫学发病机理。     

重症肌无力患者胸腺手术后血清AchRab和CAEab的变化

目的：研究重症肌无力（MG）患者手术后血清乙酰胆碱受体抗体（AchRab）与抗骨骼肌柠檬酸提取物抗体（CAEab）的变化。方法：用固相酶联免疫吸附法测定血清AchRab和CAEab。结果：MG患者血清AchRab和CAEab的水平明显高于对照组（P＜0．01）。AchRab水平在手术后1个月开始下降（P＜0．05）,在手术后1年下降更明显（P＜0．01）;CAEab水平在手术后1个月和6个月下降不明显（P＞0．05）,在手术后1年下降有显著性差异（P＜0．05）。手术后1年患者血清中AchRab和CAEab水平仍高于对照组（P＜0．01）。结论：手术后血清AchRab和CAEab的检测有助于了解患者的病情。     

重症肌无力患者胸腺手术后血清AchRab和CAEab的变化

目的：研究重症肌无力（ＭＧ）患者手术后血清乙酰胆碱受体抗体（ＡｃｈＲａｂ）与抗骨骼肌柠檬酸提取物抗体（ＣＡＥａｂ）的变化。方法：用固相酶联免疫吸附法测定血清ＡｃｈＲａｂ和ＣＡＥａｂ。结果：ＭＧ患者血清ＡｃｈＲａｂ和ＣＡＥａｂ的水平明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。ＡｃｈＲａｂ水平在手术后１个月开始下降（Ｐ＜０．０５）,在手术后１年下降更明显（Ｐ＜０．０１）;ＣＡＥａｂ水平在手术后１个月和６个月下降不明显（Ｐ＞０．０５）,在手术后１年下降有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。手术后１年患者血清中ＡｃｈＲａｂ和ＣＡＥａｂ水平仍高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论：手术后血清ＡｃｈＲａｂ和ＣＡＥａｂ的检测有助于了解患者的病情。     

HLA and acetylcholine receptor antibody in patients with myasthenia gravis]

Human leucocyte antigen (HLA) and acetylcholine receptor antibody (AchRab) titer in the serum assayed were in 106 and 100 patients with myasthenia gravis (MG), respectively. 93 of the total patients had both HLA and AchRab assays. There is a strong association between HLA Bw46, Cx46 antigens and the patients with MG. The AchRab level in the patients with positive Bw46, Cx46 antigen is significantly lower than that of the patients with negative Bw46 Cx46 antigen. The geometric means (G) of AchRab were 2.99 and 4.74, respectively, P less than 0.05. From our study, We think the patients with MG could be divided into two groups, according to the clinical presentation, the AchRab level and the association with HLA Bw46, Cx46 antigens. The first group is that who present ocular muscular myasthenia, childhood or adolescence onset, lower level of AchRab titer and strong association with HLA Bw46 and Cx46. The second one is that who have general muscular myasthenia, adult onset, higher level of AchRab titer and no association with Bw46 and Cx46.     

重症肌无力患者血清白细胞介素—6水平测定

目的探讨重症肌无力(MG)与白细胞介素-6(IL-6)的关系.方法采用双抗体夹心ELISA法对30例MG患者用糖皮质激素(GC)治疗前、治疗2个月后和22例正常对照血清IL-6、乙酰胆碱受体抗体(AchRab)水平进行检测.结果MG患者组血清IL-6水平显著高于对照组(P＜0.01),MG患者组血清IL-6水平在用GC治疗2个月后显著降低(P＜0.01),其血清IL-6与血清AchRab水平呈正相关(r=0.693,P＜0.01).结论IL-6与MG发病密切相关,IL-6参加了MG的免疫病理过程;检测血清IL-6水平对MG临床有重要价值;GC可抑制IL-6合成及AchRab产生.     

重症肌无力病人胸腺切除术后血清自身抗体水平变化和临床转归分析

６９例重症肌无力（ＭＧ）病人行胸腺切除术，术前血清乙酰胆碱受体抗体水平均高于正常，术后半年抗体水平明显下降，胸腺增生组（２０例）尤为显著．胸腺瘤组（４９例）术前胸腺瘤相关抗体水平增高，但术后半年内无明显变化．６９例ＭＧ患者胸腺切除术后４年，症状总缓解率为７６．８１％，其中胸腺增生组９５％，胸腺瘤组６９．３９％。作者认为，对于伴有胸腺增生或胸腺瘤的ＭＧ患者，胸腺切除术是有效的，应该列为治疗的第一选择。     

血清乙酰胆碱受体抗体、突触前膜抗体和胸腺瘤相关抗体与重症肌无力发病关系的研究

本研究用ＥＬＩＳＡ法同步、动态地检测了２８５例ＭＧ患者血清乙酰胆碱受体抗体（ＡｃｈＲａｂ）、突触前膜抗体（ＰｓＭａｂ）和胸腺瘤相关抗体（ＣＡＥａｂ）的变化。实验结果表明，ＭＧ患者体内增高的ＡｃｈＲａｂ是ＭＧ发病的主要体液因素。部分血清ＡｃｈＲａｂ阴性ＭＧ患者（１７．５％）的发病，可能与血清ＰｓＭａｂ异常有关。另一部分血清ＡｃｈＲａｂ和ＰｓＭａｂ均异常的ＭＧ患者（１２．６％），则可能同时存在骨骼肌神经肌接头突触前和突触后的损害。血清ＣＡＥａｂ测定在辅助诊断胸腺瘤方面具有高度的灵敏度和特异性，可作为临床早期诊断胸腺瘤的过筛检查。     

重症肌无力免疫病原学研究Ⅰ重症肌无力患者血清免疫学研究

本文用ＥＬＩＳＡ法同步、动态地观测了２８５例ＭＧ患者血清ＡｃｈＲａｂ、ＰｓＭａｂ和ＣＡＥａｂ的变化。实验结果表明ＭＧ患者体内增高的ＡｃｈＲａｂ是ＭＧ发病的主要体液因素。部分血清ＡｃｈＲａｂ阴性ＭＧ患者（１７．５％）的发病可能与血清ＰｓＭａｂ异常有关。另一部分血清ＡｃｈＲａｂ和ＰｓＭａｂ均异常的ＭＧ患者（１２．６％）则可能同时存在骨骼肌神经肌肉接头突触前和突触后的损害。血清ＣＡＥａｂ测定在辅助诊断胸腺瘤方面具有高度的灵敏度和特异性，可作为临床早期诊断胸腺瘤的过筛检查。