miR-335 通过下调Fra-1 表达抑制人乳腺癌细胞增殖机制的实验研究

目的　探讨微小核糖核酸（microRNA,miR）-335 对人乳腺癌细胞增殖能力的影响,以及其可能存在的机制。方法　体外培养乳腺癌细胞及正常乳腺组织细胞,检测miR-335 及Fros 相关抗原1(fros related antigent-1,Fra-1) 的表达量;体外转染miR-335 mimics 后,通过细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8) 检测细胞的增殖能力,检测Fra-1 的表达变化及下游细胞增殖相关蛋白分子基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor- C,VEGF-C) 的表达量;生物信息学预测及双荧光霉素报告基因验证Fra-1 为miR-335作用靶基因。结果　乳腺癌细胞中miR-335 的表达量（0.755±0.034）低于正常乳腺细胞（1.495±0.029）,Fra-1 蛋白的表达量（2..347±0.120）高于正常乳腺细胞（1.319±0.038）,差异均有统计学意义（t=0.075,4.191, 均P ＜ 0.001）。转染miR-335 mimic 后48,72 h 乳腺癌细胞增殖能力（0.881±0.062,0.887±0.082）低于对照组细胞（1.326±0.051,1.493±0.038）,差异均有统计学意义（t=44.096,59.307, 均P ＜ 0.001）;转染miR-335 mimic 后乳腺癌细胞中Fra-1的蛋白表达量（0.567±0.091）低于未转染细胞（2.347±0.204）,差异有统计学意义（t=3.763, P<0.001）;转染miR-335 mimic 后细胞中MMP-9（0.469±0.027）,VEGF-C（0.540±0.041）的蛋白表达量低于对照组（0.958±0.058,1.024±0.171）,差异均有统计学意义（t=1.953,7.856, 均P ＜ 0.001）;荧光霉素报告基因实验结果显示miR-335 下调Fra-1 启动子核心转录区域（-164 ～ -52nt）的转录活性。结论　miR-335 通过抑制MMP-9 和VEGF-C 的表达,并下调Fra-1 启动子转录活性,抑制了体外乳腺癌细胞的增殖。     

自噬对肾小管细胞毒性损伤后线粒体功能的影响及相关机制研究

目的研究自噬对肾小管细胞毒性损伤后线粒体功能的影响及相关机制。方法将人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)分为杂化siRNA组(对照无关序列片段siRNA转染细胞)、杂化siRNA+顺铂组(对照无关序列片段siRNA转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)、沉默Pink1+顺铂组(Pink1沉默转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)和沉默Parkin+顺铂组(Parkin沉默转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)。培养12 h后,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定各组细胞存活率,JC-1法检测线粒体膜电位,荧光法检测各组细胞内三磷酸腺苷(ATP)的含量,Western blotting和免疫荧光探针检测自噬相关蛋白的相对表达。结果杂化siRNA+顺铂组的细胞存活率为(88.2±2.7)%,显著低于杂化siRNA组[(101.3±3.1)%](P<0.05);沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的存活率为(80.1±2.3)%、(79.4±3.0%),显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的线粒体膜电位和ATP含量为(0.90±0.01)、(0.82±0.01)nmol/mg,显著低于杂化siRNA组[(1.01±0.02)、(1.00±0.04)nmol/mg](P<0.05);沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的线粒体膜电位(0.79±0.02、0.77±0.02)和ATP[(0.66±0.05)、(0.66±0.02)nmol/mg]含量显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的Pink1、Parkin、Beclin蛋白的相对表达量和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.68±0.04、1.80±0.05、1.87±0.05、2.01±0.04)显著高于杂化siRNA组(1.00±0.04、1.00±0.05、1.01±0.01、1.04±0.02)(P<0.05);而沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的Pink1、Parkin、Beclin蛋白的相对表达量和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.17±0.05、0.69±0.05、1.37±0.05、1.43±0.02;1.22±0.04、0.57±0.06、1.39±0.03、1.38±0.10)显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的自噬阳性点数为(12.2±0.7)个,显著多于杂化siRNA组[(2.4±0.3)个](P<0.05);而沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的荧光点数[(5.3±0.8)、(5.6±0.5)个]显著少于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。结论顺铂处理可诱导HK-2细胞的线粒体自噬作用,从而改善顺铂引起的肾小管细胞毒性损伤和线粒体功能,其作用机制可能与Pink1/Parkin蛋白的表达情况有关。     

miR-338-3p对甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化的调控作用

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)过表达靶向沉默信息调节因子（SIRT）6对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化（EMT）的影响。方法 采用荧光素酶报告实验分析miR-338-3p与SIRT6的靶向关系。构建SIRT6 pcDNA载体过表达SIRT6,将miR-338-3p mimic与pcDNA-SIRT6单独或联合转染至TPC-1细胞,根据转染质粒的不同分为6组：对照组（不作处理）、mimic-NC组（转染mimicNC）、miR-338-3pmimic组（转染miR-338-3pmimic）、pcDNA-SIRT6组（转染pcDNA-SIRT6）、mimicNC+pcDNA-SIRT6组（共转染mimic-NC和pcDNA-SIRT6）和miR-338-3p mimic+pcDNA-SIRT6组（共转染miR-338-3p mimic和pcDNA-SIRT6）。分别检测各组TPC-1细胞的克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率及上皮型钙黏蛋白（E-cad）、神经型钙黏蛋白（N-cad）和波形蛋白的表达量。结果 miR-338-3p的...     

维奈克拉增强MDS 细胞系对地西他滨化疗敏感性机制的实验研究

目的 研究维奈克拉（venetoclax,VCX）对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS) 细胞系地西他滨（decitabine,DAC）化疗敏感性的可能作用机制。方法 CCK-8 法检测不同浓度VCX 对MDS 细胞（SKM-1 和MUTZ-1 细胞系）增殖活力的影响;将MUTZ-1 细胞根据不同处理分为4 组:对照组、VCX 组、DAC 组和VCX+DAC组;Annexin V-FITC/PI 法检测各组细胞凋亡率;Western blotting 检测细胞中凋亡相关蛋白[ 细胞色素C（cytochromeC）,裂解型半胱天冬酶3（cleaved Caspase-3）表达水平],B 细胞白血病/ 淋巴瘤2(B cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2) 与Bcl-2 相关蛋白X（Bax）比值;JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒检测各组SKM-1 和MUTZ-1 细胞的线粒体膜电位;H2DCF-DA 荧光探针法检测细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量;Western blotting 检测细胞中自噬相关蛋白Beclin1,P62 和LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ比值。结果 随VCX 浓度升高,MUTZ-1 细胞增殖活性明显降低,且呈浓度依赖性（F=0.003,P=0.001）。与对照组（4.28%±1.66%）相比,VCX 组（13.75%±3.02%）,DAC 组（12.39%±4.16%）和VCX+DAC组（18.10%±3.50%）细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义（F=45.782,P<0.05）。与对照组（1.01±0.02,1.04±0.02,1.01±0.04） 相比,VCX 组（1.67±0.05,2.23±0.10,0.43±0.05）,DAC 组（1.62±0.08,1.85±0.06,0.49±0.07） 和VCX+DAC 组（3.24±0.10,3.81±0.19,0.13±0.01） 细胞中凋亡相关蛋白cytochrome C,cleavedCaspase-3 蛋白表达及Bcl-2/Bax 比值明显升高,差异均有统计学意义（F=116.384,282.069,248.035,均P<0.05）。与对照组（2.05±0.34,8.78±1.37）相比,VCX 组（8.72±1.26,14.02±1.45）,DAC 组（8.44±2.13,13.20±2.41）和VCX+DAC 组（15.66±2.90,26.45±1.53）细胞线粒体膜电位及ROS 含量明显升高,差异具有统计学意义（F=66.782,69.071,均P<0.05）。与对照组（1.05±0.04,1.02±0.08,1.01±0.07）相比,VCX组（1.62±0.15,2.60±0.19,0.56±0.15）,DAC 组（1.67±0.17,2.45±0.20,0.54±0.14）和VCX+DAC 组（3.72±0.21,3.58±0.27,0.13±0.09）自噬相关蛋白Beclin1,LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ表达明显升高,而P62 蛋白表达则明显降低,差异均有统计学意义（F=118.257,209.422,236.92,均P<0.05）。与DAC 组比较,VCX+DAC 组细胞凋亡率、cytochrome C,cleaved Caspase-3,Beclin1 蛋白表达水平,LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ比值和ROS 含量均明显降低（t=2.473,28.564,17.291,16.115,7.021,9.319）;线粒体膜电位、Bcl-2/Bax 比值和P62 蛋白表达均明显升高（t=4.621,9.244,4.278）,差异具有统计学意义（均P ＜ 0.05）。DAC 组和VCX 组细胞中上述检测指标差异均无统计学意义（均P ＞ 0.05）。结论 VCX 可能通过调节细胞凋亡、自噬和氧化应激来促进MDS 细胞对DAC 的化疗敏感性。     

ECE2通过上调E2F1和MYC来促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的　通过检测内皮素转化酶2（ECE2）在乳腺癌中的表达，探究其对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响及潜在分子机制。方法　选取20 例临床乳腺癌组织及其对应癌旁正常组织样本，通过qRT-PCR 检测ECE2 基因在乳腺癌组织中的表达特征。通过siRNA 介导敲低ECE2 表达，利用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕迁移实验和细胞周期实验分别验证敲低ECE2 表达对乳腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及凋亡的影响。通过分析与ECE2 共表达基因参与的信号通路，探索ECE2 在乳腺癌发展进程中的潜在分子机制，进一步通过细胞增殖回补实验进行验证。结果　20 例临床乳腺癌组织中ECE2 表达较癌旁正常组织显著上调（30.342±6.564 vs 21.753±8.244），差异有统计学意义（t=3.645，P=0.000）。转染敲低ECE2 表达后，siECE2#1 组和siECE2#2 组在24，48，72 h 的吸光度值较对照组明显降低，差异有统计学意义（F=71.409~211.681，均P ＜ 0.01）。siECE2#1 组（0.515±0.014）和siECE2#2 组（0.511±0.006）细胞克隆形成速率明显低于对照组（3.473±0.147），差异有统计学意义（F=467.152，P ＜ 0.001）。siECE2#1 组（56.423±1.137）和siECE2#2 组（42.036±0.754）细胞迁移愈合速率显著低于对照组（78.124±1.352），差异有统计学意义（F=805.162，P ＜ 0.001）。siECE2#1 组和siECE2#2 组细胞凋亡率较对照组明显降低，细胞周期显著阻滞在G1 期。siECE2#1 组和siECE2# 组细胞中E2F1 mRNA 和蛋白表达水平明显低于对照组，差异均有统计学意义（F=703.020，136.301，均P＜ 0.001）；MYC mRNA 和蛋白表达水平也明显低于对照组（F=613.395，102.573，均P ＜ 0.001）。在敲低ECE2 表达的乳腺癌细胞中分别回补E2F1 和MYC 后，细胞增殖速率回归至正常水平。结论　ECE2 高表达诱导促癌基因E2F1和MYC 的高表达进而促进乳腺癌细胞的增殖及迁移，阻碍细胞周期停滞在G1 期，参与乳腺癌的发展进程。     

肝癌组织中lncRNA-PRR34-AS1的表达特性及其对肝癌细胞增殖、迁移的影响和潜在分子机制

目的　分析长链非编码RNA-PRR34-AS1在肝癌组织中的表达特性，探究其对肝癌细胞增殖、迁移的影响及潜在分子作用机制。方法　收集2020年6月～12月于榆林市第二医院行手术治疗的30例肝癌患者癌组织及其对应癌旁正常组织标本，采用实时荧光定量PCR实验（RT-qPCR）检测组织中LncRNA-PRR34-AS1相对表达水平。通过转染siRNA介导敲低PRR34-AS1基因表达，利用细胞增殖实验和细胞迁移实验验证PRR34-AS1对肝癌细胞增殖、迁移的影响；通过生物信息学数据库网站预测PRR34-AS1与JAK1结合的基因位点，双荧光素酶报告基因实验验证两者靶向关系，探究其在肝癌发生发展中的调控作用。结果　30例临床肝癌组织中PRR34-AS1表达显著高于癌旁正常组织（5.714±0.612 vs 2.981±0.572)，差异有统计学意义(t=17.870，P=0.000），PRR34-AS1具有高表达预后差的临床特征。敲低PRR34-AS1后，转染24，48和72 h时siRNA-PRR34-AS1#1组和siRNA-PRR34-AS1#2组细胞增殖率较对照组明显降低，差异均有统计学意义（F=83.440～89.297，均P<0.001）；siRNA-PRR34-AS1#1组（38.451±4.263）和siRNA-PRR34-AS1#2组（42.106±3.512）细胞愈合迁移速率较对照组（83.247±6.205）显著减慢，差异均有统计学意义（F=83.357，P＜0.001）。JAK1是PRR34-AS1的靶基因，siRNA-PRR34-AS1#1组（0.453±0.019）和siRNA-PRR34-AS1#2组（0.476±0.022）细胞中JAK1相对表达较对照组相比（1.002±0.003）明显降低，差异均有统计学意义（F=716.287，P＜0.001）。转染敲低JAK1表达后，各转染时间点siRNA-JAK1#1组和siRNA-JAK1#2组细胞增殖速率较对照组明显减缓，差异均有统计学意义（F=45.465~76.548，均P<0.05）。30组临床肝癌组织中JAK1表达显著高于癌旁正常组织（5.963±1.214 vs 4.052±0.876)，差异有统计学意义(t=6.992，P=0.000），PRR34-AS1与JAK1表达呈显著正相关（r=0.907，P<0.05）。在敲低PRR34-AS1表达的肝癌细胞中回补JAK1后，肝癌细胞增殖、迁移速率又回归到正常水平。结论　肝癌中PRR34-AS1显著高表达，其可能通过正向调控JAK1表达影响JAK/STAT信号通路，进而调控促进肝癌细胞的增殖和迁移。     

TUBA1C促进人肺腺癌细胞系增殖和迁移的机制研究

目的　探究TUBA1C 在肺腺癌中的表达特征及其对人肺腺癌细胞系增殖、迁移的影响和相关潜在分子机制。方法　通过临床数据库GEPIA 检索TUBA1C 在肺腺癌中的表达特征以及与临床预后相关性;通过30 组临床组织样本探究TUBA1C 在肺腺癌及其临近正常组织中的表达特征;通过siRNA 介导敲低TUBA1C 表达,利用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕迁移实验和细胞周期实验分别检测TUBA1C 对肺腺癌细胞生物学行为的影响;通过分析与TUBA1C 共表达基因参与的信号通路,探索TUBA1C 在肺腺癌发展进程中的潜在分子机制,并进一步通过回补实验进行验证。结果　GEPIA 数据库检索显示肺腺癌中TUBA1C 显著高表达（P<0.05）,且高表达的病人具有不良预后（logrankP=9.3E-5）。30 组肺腺癌临床样本中TUBA1C 表达水平（6.4±1.3）显著高于癌旁正常组织（5.2±0.9）,差异有统计学意义（t=4.157,P ＜ 0.001）,且随着癌症的不断恶化,TUBA1C 表达逐渐升高（P=0.003 49）。转染培养3,4 和5天时siTUBA1CA#1 组和siTUBA1CA#2 组细胞增殖A 值明显低于对照组,差异均有统计学意义（F=7.000~27.780,P＜ 0.05）。siTUBA1CA#1 组（41.2±1.5）和siTUBA1CA#2 组（40.3±1.3）细胞克隆形成率明显低于对照组（72.4±2.2）,差异有统计学意义（F=342.482,P ＜ 0.001）;两实验组细胞迁移率为73.4±3.2 和72.1±2.8,明显低于对照组（98.6±1.7）,差异有统计学意义（F=95.778,P ＜ 0.001）;细胞周期较对照组相比显著阻滞在G1 期。siTUBA1CA#1 组（0.21±0.02,0.33±0.03）和siTUBA1CA#2 组（0.20±0.03,0.36±0.02）细胞中E2F1 和MYC mRNA 表达水平较对照组（1.01±0.03,1.00±0.02）明显降低,差异有统计学意义（F=883.773,758.294,均P ＜ 0.001）。在敲低TUBA1C 表达的细胞中分别回补E2F1,MYC 以及共回补E2F1 和MYC 后,细胞增殖速率、迁移速率及细胞周期较单纯敲低TUBA1C 组相比均逐渐恢复正常（P<0.01）,接近正常水平。结论 　肺腺癌中TUBA1C 高表达,通过激活促癌基因E2F1 和MYC 的表达促进肺腺癌细胞的增殖、克隆形成及迁移,诱导细胞凋亡,参与促进肺腺癌的发展进程。     

siRNA 干扰的 DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究

目的：探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-catenin、MMP14表达情况。结果转染DKK1 siRNA至Ishikawa细胞使细胞中DKK1基因表达水平降低21.00%（t＝3.05,P＜0.05）, DKK1蛋白表达降低39.35%（t＝40.97,P＜0.01）。侵袭实验中DKK1 RNAi组的细胞均数140.8±4.733,高于空白对照组的细胞均数123.7±6.700,癌细胞的侵袭能力增强13.82%。迁移实验中DKK1 RNAi组细胞均数（152.0±3.528）高于空白对照组（130.6±4.061）,癌细胞的迁移能力增强16.39%。DKK1 siRNA处理后,细胞中活性β-catenin、MMP14荧光增强,提示表达水平上升。结论 DKK1具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的作用。Wnt/β-catenin信号通路参与了DKK1这一作用过程。DKK1不失为抑制子宫内膜癌转移的有效治疗靶点。     

PINK1基因突变增强帕金森病相关毒物神经毒性作用的线粒体机制

目的:研究PINK1基因突变对帕金森病相关毒物对于神经元线粒体功能的影响。方法:用N27细胞系构建可稳定表达PINK1-L347p突变基因的可诱导型细胞系,Western Blot方法测定PINK1-L347p的表达。Image J软件测定稳定表达PINK1-L347p突变基因的N27细胞内线粒体的长宽比和圆形度。MTT比色法检测不同浓度的1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)或百草枯(PQ)对空质粒对照组(EV组)和稳定表达PINK1-L347p组(L347p组)细胞存活率的影响。结果:流式细胞术和Western Blot验证了PINK1-L347p突变基因稳定表达的N27细胞系构建成功。L347p组的线粒体形态明显过度断裂,与EV组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与EV组比较,L347p组对MPP+或PQ的敏感性增强(P<0.05);PINK1-L347p细胞系中诱导剂ponA干预组细胞死亡率明显高于无诱导剂PonA干预组(P<0.05)。结论:PINK1突变可导致线粒体形态学改变和功能异常,PINK1-L347p突变可增加哺乳动物多巴胺神经元对于MPP+和PQ的敏感性,更易导致细胞死亡。     

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。 方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。 结果（1） A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍（P＜0.05）;A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的 7.40 ± 1.05 倍（P＜0.05）;而A549/DDP 细胞let-7b 的表达水平是A549 细胞的（26.54 ± 2.90）%（P＜0.05）;（2）A549 转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor 后对顺铂的敏感性下降（P＜0.05）;A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor, mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加（P＜0.05）;（3）A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor 后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组（P＜0.05）;而A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor 以及 let-7b mimic 后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组（P＜0.05）;（4）A549 转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组（P＜0.05）;而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后, 细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖, 抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。      

miR-495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用的影响及机制研究

目的 探讨微小核糖核酸(microRNA,miR) -495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用下的影响及机制。方法 采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株Eca109（Eca109-RAD）及分次顺铂递增法诱导建立顺铂耐药型细胞株Eca109（Eca109-DDP）,实时荧光定量聚合酶链反应 (qRT-PCR) 检测miR-495 在Eca109-RAD 及Eca109-DDP 细胞中的表达。Eca109-RAD 及Eca109-DDP 分为NC 组和miR-495 mimic 组,转染后qRT-PCR 检测各组细胞中miR-495 的表达,CCK8 检测不同放射剂量对Eca109-RAD 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,及不同浓度的顺铂对Eca109-DDP 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,NC 组和miR-495 mimic 组经放射及顺铂处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western blot 检测各组细胞中凋亡相关蛋白caspase 3,Bax 和Bcl-2 蛋白的表达。结果 与Eca109 细胞（0.99±0.01）相比,Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（0.48±0.03 ）及Eca109-DDP 细胞中miR-495的表达（0.52±0.05）均降低,差异有统计学意义(t=27.930,15.970, 均P=0.000)。与NC 组细胞相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（4.82±0.48 vs 1.00±0.03）及Eca109-DDP 细胞中miR-495 的表达（5.68±0.54vs 1.00±0.01）均显著增加,差异有统计学意义(t=13.760,15.100, 均P=0.000)。与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞对放疗敏感度增加,差异均有统计学意义(t=6.780 ～ 18.860,P = 0.000 ～ 0.001);与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-DDP 细胞对顺铂敏感度增加,差异均有统计学意义(t=7.510 ～ 21.630,均P=0.000)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞平板克隆形成能力（46.33±5.69 个vs 93.33±4.51 个）及Eca109-DDP（34.67±2.52 个vs 89.00±4.03 个）细胞平板克隆形成能力显著降低(t=11.210,19.800, 均P=0.000) 。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞凋亡率（25.66%±2.41% vs 8.39%±0.82%）及Eca109-DDP 细胞凋亡率（21.05%±5.37% vs 8.67%±1.15%）均显著增加(t=11.750,10.030,P=0.000,0.001)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞及Eca109-DDP 细胞中Bcl-2 蛋白表达均降低(t=4.650,7.450,P=0.006,0.001),Bax 和caspase 3 蛋白的表达均增加(t= 7.100 ～ 14.290, P=0.000 ～ 0.001)。结论 MiR-495 可能通过调控凋亡相关蛋白促进食管癌细胞放化疗敏感度。     

miR-124 靶向调控CMTM6 增强CIK 对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的 研究细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer ,CIK）细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸（miRNA,miR）-124 在此过程中的调节作用及可能机制。方法 收集2017 年3 月～ 2019 年10 月鄂州市中心医院神经外科收治的30 例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR 法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL 跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6 (chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontainingfamily member 6,CMTM6) mRNA 表达量及相关性。诱导培养CIK 细胞后,分别与胶质瘤细胞C6 和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor 及阴性对照序列,通过CCK-8 实验检测CIK 细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124 与CMTM6 基因的靶向关系,qRT-PCR 和Western blot 检测胶质瘤细胞中miR-124,CMTM6 mRNA 及蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124 表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086) 显著降低,CMTM6 mRNA 表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089) 显著升高,差异有统计学意义（t=39.051,26.337,均P ＜ 0.001）,二者呈负相关（r2=0.262）。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic 转染及其与CIK 细胞共培养对C6(72.84%±3.81% vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18% vs 74.59%±3.47%),U87 细胞(71.93%±3.94% vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24% vs 76.28%±3.64%) 增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义（q=16.340,15.486,14.087, 13.886,均P ＜ 0.001）。双荧光素酶报告实验显示,miR-124 和CMTM6 具有明显的靶向关系。Western blot 结果显示,与转染阴性对照+CIK 组比较miR-124 mimic 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068) 显著降低,转染miR-124 inhibitor 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6 蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068) 显著增加,差异均有统计学意义（q=13.817,10.839, 7.327,17.558,均P ＜ 0.001）。结论 CIK 细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124 可通过靶向抑制CMTM6 增强CIK 细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。     

靶向survivin的siRNA并氟尿嘧啶转染对HepG2增殖影响

目的研究靶向survivin的小分子干扰RNA（siRNA）和氟尿嘧啶（5-FU）联用对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及对凋亡的影响。方法将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组及5-FU＋siRNA转染组。转染采用脂质体法。采用RT-PCR法分别检测HepG2细胞survivin mRNA转录水平;MTT法分别检测靶向survivin的siRNA和5-FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果 siRNA转染组、5-FU＋siRNA转染组survivin mRNA表达较空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组明显下降（F=326.78,q=5.78～7.12,P〈0.05）。5-FU＋siRNA转染组细胞增殖抑制率为51.58%±1.35%,与其他各组相比明显增高（F=1 293.24,q=15.31～82.26,P〈0.01）。5-FU＋siRNA转染组与其他各组相比细胞凋亡率明显增高（F=13 568.68,q=110.47～327.16,P〈0.01）。结论将靶向survivin的siRNA和5-FU联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

甾醇-O-酰基转移酶1介导的线粒体分裂促进血管钙化

目的 阐明甾醇-O-酰基转移酶1(SOAT1)介导的线粒体分裂在血管钙化（VC）中的作用。方法 将小鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）分成4组：si-NC+Con(SOAT1阴性对照siRNA转染到VSMCs中)、siNC+β-甘油磷酸（β-GP）(SOAT1阴性对照siRNA转染到VSMCs中)、si-SOAT1+Con(SOAT1 siRNA转染到VSMCs中)和si-SOAT1+β-GP(SOAT1 siRNA转染到VSMCs中)。进行CCK-8、伤口愈合试验和茜素红染色评估VSMCs的增殖、迁移、成骨分化。分析VSMCs的线粒体形态和氧化应激水平。20只C57BL/J小鼠随机分为四个不同的组，每组5只：对照组（Ctrl组）、5/6肾切除加高磷酸盐饮食治疗组（NTP组）、NTP+si-NC组和NTP+si-SOAT1组。免疫荧光分析小鼠主动脉侏儒相关转录因子2(RUNX2)、SOAT1和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。结果 在β-GP中培养的不同时间段（0、1、3、5、7 d和14 d）,VSMCs中成骨标记RUNX2、SOAT1的蛋白水平以时间依赖性方式逐渐增强（P <0...     

长链非编码RNA CDKN2BAS 在子宫内膜癌组织表达及其生物学功能研究

目的 探讨长链非编码RNA CDKN2BAS（long non-coding RNA CDKN2BAS,LncRNA CDKN2BAS）在子宫内膜癌（endometrial cancer,EC）组织表达,以及沉默该基因对人EC 细胞HEC-1B 生物学功能的影响。方法 收集2018 年3 月～ 2021 年3 月在黄石市中心医院接受手术治疗的107 例EC 患者资料,实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)检测癌组织和癌旁组织中LncRNA CDKN2BAS 表达。培养HEC-1B 细胞,分成siRNA 组、si-NC 组和C 组,分别转染LncRNA CDKN2BAS 抑制序列、对照序列和不作任何处理,并分别采用qRT-PCR,MTT 实验和Transwell 实验检测细胞中LncRNA CDKN2BAS 表达及其对HEC-1B 细胞增殖活性、迁移和侵袭力影响。结果 EC 组织中LncRNACDKN2BAS 表达量为2.73±0.25,高于癌旁组织中的1.00±0.13,差异具有统计学意义（t=63.903,P<0.001）;LncRNA CDKN2BAS在FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期（2.83±0.25）、组织学分级G3级（2.85±0.24）和出现淋巴结转移（2.84±0.26）的EC 组织中的表达量较Ⅰ～Ⅱ期（2.67±0.23）,G1 ～ G2 级（2.67±0.22）和未出现淋巴结转移（2.68±0.22）的EC 组织明显升高（t=3.246,3.894,3.270,均P<0.05）;siRNA 组细胞中LncRNA CDKN2BAS 表达量低于si-NC 组和C 组（0.30±0.12 vs 1.02±0.10,1.01±0.12）,差异具有统计学意义（F=77.210,P<0.05）;siRNA 组细胞24,48,72 和96h 时A 值低于si-NC 组和C 组,差异具有统计学意义（F=5.003 ～ 8.495,均P<0.05）;siRNA 组迁移细胞数和侵袭细胞数低于si-NC 组和C 组,差异具有统计学意义（F=21.956,22.407,均P<0.05）。结论 EC 组织中LncRNACDKN2BAS 表达量升高,沉默人EC 细胞HEC-1B 中LncRNA CDKN2BAS 表达可抑制细胞增殖活性,减少细胞迁移和侵袭数量。     

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的 探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法 获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果 miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p...     

下调组织蛋白酶B对人食管鳞癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的:研究下调组织蛋白酶B(cathepsin B,CB)对人食管鳞癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的抑制作用并探讨其体内抗肿瘤机制.方法:建立裸鼠荷瘤模型,利用CB siRNA和对照siRNA注射荷瘤裸鼠,监测肿瘤生长变化,采用RT-PCR及Western blot法检测治疗前后瘤体内CB及黏附分子Syndecan-1表达的变化.结果:成功构建了CB siRNA转染荷瘤裸鼠模型.与对照siRNA组和空白对照组相比,CB siRNA组荷瘤裸鼠肿瘤体积下降,组间比较差异具有统计学意义(F=483.992,P＜0.05).转染CB siRNA后,CB蛋白及mRNA表达均显著下调,组间比较差异具有统计学意义(F=733.255及932.681,均P＜0.01),Syndecan-1蛋白及mRNA表达则均显著升高,组间比较差异具有统计学意义(F=404.234及1 509.951,均P＜0.01).结论:CB siRNA可以有效抑制人食管鳞癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长,并下调CB的表达和上调Syndecan-1的表达,本研究为食管鳞癌的分子治疗提供了一定的理论依据.     

急性毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞中SIRT1水平表达与预后的相关性研究

目的 分析急性毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞中沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)水平表达与预后的相关性。方法 选择2019年10月～2021年1月在唐山市妇幼保健院就诊的156例急性毛细支气管炎患儿作为研究对象,并根据出院后6个月是否发生喘息分为喘息组（n=51）和非喘息组（n=105）。用Ficoll密度梯度离心法分离外周血中单个核细胞,用蛋白质免疫印迹法检测单个核细胞中SIRT1水平。比较喘息组和非喘息组治疗前后SIRT1水平,并分析其与急性支气管炎治疗后喘息的关系。结果 喘息组的过敏史占比高于非喘息组[25.49%(13/51) vs 6.67%(7/105)],差异有统计学意义（χ2=10.882,P=0.001）。喘息组治疗前、治疗后的SIRT1水平均低于非喘息组（0.13±0.03 vs 0.18±0.05,0.31±0.06 vs 0.37±0.08）,差异均有统计学意义（t=7.703,5.814,均P=0.000）。治疗前SIRT1判断急性毛细支气管炎患儿治疗后发生喘息的受试者工作特征（ROC）曲线下面积为...     

人肺腺癌细胞系中SIRT1表达与奈达铂敏感性的关系

目的探讨5株人肺腺癌细胞系HCC827、H1650、H1975、A549和H1299中沉默信息调节因子1(Sirtuin 1,SIRT1)与奈达铂(Nedaplatin,NDP)药物敏感性的关系。方法采用实时定量PCR及western blot检测5株人肺腺癌细胞系SIRT1 m RNA及蛋白质表达水平;NDP作用于细胞后,用CCK-8法检测细胞活力并计算半数生长抑制浓度值(the half growth inhibition concentration,IC50);通过si RNA干扰技术下调A549、H1299、H1650和H1975细胞系中SIRT1的表达,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测NDP对细胞存活率和细胞凋亡的影响。结果与HCC827细胞(m RNA和蛋白质相对表达量分别为1.00和0.11±0.02)相比,H1650、H1975、A549和H1299细胞中SIRT1 m RNA(分别为4.53±0.74、3.11±0.64、15.76±2.28和18.09±1.17)和蛋白质表达水平(分别为0.23±0.03、0.21±0.02、0.52±0.11和0.56±0.08)均明显上调,差异有统计学意义(F分别为122.10和26.50,P0.01);A549和H1299细胞对NDP的敏感性[IC50值分别为(7.38±1.59)μmol/L和(8.14±1.43)μmol/L]明显高于HCC827、H1650和H1975细胞[IC50值分别为(26.16±4.35)μmol/L、(22.29±3.26)μmol/L和(24.41±2.58)μmol/L],差异有统计学意义(F=30.86,P0.01)。A549和H1299细胞转染并经NDP处理后,si SIRT1组细胞存活率明显高于NC组(F分别为235.10和39.20,P0.01),细胞凋亡率明显低于NC组(t分别为7.29和6.68,P0.05);而在H1650和H1975细胞中,si SIRT1组细胞存活率明显低于NC组(F分别为185.40和60.09,P0.01),细胞凋亡率明显高于NC组(t分别为6.15和31.36,P0.01)。结论在SIRT1高表达的A549和H1299细胞中SIRT1表达增加了细胞对NDP敏感性,而SIRT1中表达的H1650和H1975细胞中SIRT1表达降低了细胞对NDP的敏感性,提示在人肺腺癌细胞中SIRT1可能在铂类耐药发挥双重作用。