缺血预适应对大鼠保留肾单位手术中缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的 探讨缺血预适应(IPC)动员肾祖细胞(RPC)归巢在保留肾单位手术(NSS)中对肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及其发生机制。方法 选取2~3月龄、体质量250~300 g的雄性SD大鼠54只,建立切除右肾的单肾模型后采用数字表法随机分为3组,每组18只:假手术组(Sham组,无血管夹闭),NSS组(肾动脉夹闭45 min后行NSS),IPC组(先进行肾动脉夹闭15 min,再灌注10 min预处理,再行NSS)。分别在术后12、24、72 h每组各取出6只大鼠,收集血液及肾组织标本,之后采用颈椎脱臼法处死大鼠。观察项目:(1)检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN);(2)组织病理学检查及肾小管损伤评分;(3)在24 h观察IPC对肾组织中RPC数量的影响,以及IPC对基质细胞衍生因子(SDF-1)、受体CXCR7表达水平的影响。结果 (1)术后12、24、72 h 时3组大鼠SCr和BUN值比较, IPC组分别为(65.0±10.78)、(91.5±15.12)、(52.6±11.68)μmol/L和(14.78±2.77)、(18.31±4.99)、(9.41±2.73)mmol/L,NSS组分别为(80.5±12.63)、(116.9±14.32)、(83.7±11.43)μmol/L和(18.58±4.18)、(28.86±5.64)、(19.49±3.83)mmol/L, Sham组分别为(41.5±7.36)、(39.7±7.55)、(42.7±7.15)μmol/L和(7.72±1.75)、(7.40±1.98)、(6.83±2.09)mmol/L;除72 h时IPC组与Sham组SCr和BUN值比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,在12 h和24 h,IPC组均高于Sham组、低于NSS组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(2)术后12、24、72 h肾小管损伤评分IPC组和NSS组均高于Sham组,术后12、24 h IPC组较NSS组肾小管损伤评分低,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(3)术后24 h,IPC组和NSS组大鼠肾组织中RPC数量明显增加、SDF-1和CXCR7表达显著升高,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 IPC可促进RPC归巢,缓解NSS中IRI损伤程度,保护肾功能,SDF-1/CXCR7轴可能在这一动员过程中发挥了重要作用。     

锌对疼痛后学习记忆障碍小鼠海马神经元P53蛋白表达的影响

目的 探讨锌对第5腰椎（L5）脊神经结扎横切所致神经病理性疼痛（NPP）模型的学习记忆功能障碍及海马组织中P53表达的影响。方法 成年小鼠（C57/BL6）48只, 随机分为3组(n=16 ),对照组（con）,NPP组及高锌NPP组（Zn-NPP）。对照组仅暴露L5脊神经不结扎,NPP组施行L5脊神经左侧结扎横切（L L5-SNT）手术,Zn-NPP组施行左侧L5-SNT手术后饮用硫酸锌水溶液。3组术后第29 天进行Morris水迷宫实验测量小鼠空间学习记忆能力,水迷宫实验结束后,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用免疫组织化学及免疫印迹法检测各组P53表达。结果 Morris水迷宫实验中,NPP组 (21.03±12.08)m/s,Zn-NPP组(16.97±8.59)m/s及con组(8.74±3.61)m/s,隐藏平台潜伏期逐渐缩短(P< 0.05), 并穿过平台所在象限的时间及路径占总游泳时间和总路径的比例逐渐增加(P< 0.05)。流式细胞术检测结果显示,con组（1.88%）,Zn-NPP（16.12%）及NPP组（33.17%）凋亡率逐渐增多(P< 0.05)。免疫组织化学结果显示,con组,Zn-NPP组及NPP组的P53阳性表达吸光度值在CA1区分别为 27.42±7.08、37.52±10.58及53.31±9.26;CA3区分别为29.51±8.31、36.21±7.91及56.71±8.09。 免疫印迹结果显示,con组,Zn-NPP组及NPP组的P53表达吸光度值分别为 0.12±1.01、0.37±1.13和0.86±1.22,吸光度值逐渐增多(P< 0.05)。 结论 锌可改善NPP后小鼠学习记忆能力。     

大豆异黄酮对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响及其机制

目的 探讨大豆异黄酮(SI)对局灶性脑缺血再灌注大鼠的血脑屏障(BBB)通透性的影响及相关机制。方法 72只健康成年SD大鼠均分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和SI预处理组(SI组),每组各24只。SI组每天按120 mg/kg体质量给予12 mg/mL SI灌胃1次,Sham组和I/R组每天用等体积生理盐水灌胃1次,均连续灌胃21 d。在实验第22天,I/R组和SI组大鼠用线栓阻断右侧大脑中动脉血流制作大脑中动脉缺血再灌注动物模型;Sham组不插入线栓,未阻断血流,其余手术操作与I/R和SI组一致。I/R组和SI组大鼠缺血2 h后,拔出阻塞的线栓恢复血流,再灌注24 h。根据Zea longa评分,选择造模成功的大鼠。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)检测大鼠脑梗死体积,干湿重法检测脑组织含水量,伊文思蓝(EB)示踪法检测BBB通透性,Western blot检测脑组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达。比较三组大鼠的测量数据,分析SI预处理对以上观测指标的影响。结果 SI组和I/R组大鼠的神经功能评分、脑梗死体积、脑组织含水量和脑组织内EB含量均高于Sham组,而SI组低于I/R组,分别为(1.50±1.13)、(2.33±0.82)和(0.00±0.00)分,12.5%±2.34%、37.50%±2.28%和0.07%±0.03%,81.75%±0.86%、84.17%±0.54%和78.24%±0.41%,(46.50±1.41)、(55.44±1.37)和(3.83±1.49)μg/g,差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。SI组和I/R组MMP-9、TIMP-1表达均明显高于Sham组,分别为0.81±0.23、1.15±0.14、1.15±0.14和2.31±0.20、1.62±0.21、1.62±0.21,差异均有统计学意义(P值均<0.01);与I/R组相比,SI组MMP-9表达减少、TIMP-1表达增加,差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。结论 SI可能通过下调缺血再灌注后脑组织MMP-9蛋白表达和上调TIMP-1蛋白表达,降低BBB的通透性,减轻缺血再灌注后脑水肿的程度和脑组织EB的含量。     

粒细胞集落刺激因子改善阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能及抗炎作用机制

目的 探讨粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对阿尔茨海默病（AD）大鼠认知障碍的改善作用及其对脑内炎症反应的影响。 方法 45只雄性SD大鼠,随机分为3组,包括假手术组、模型组、G-CSF组,每组15只。采用β-淀粉样蛋白1-42（Aβ _1-42）复制AD大鼠模型,并给予G-CSF治疗。观察并比较大鼠的学习记忆功能及脑组织病理学变化。采用Western blotting检测核因子κB p65（NF-κB p65）、磷酸化p-38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）蛋白的表达,采用Real-time PCR检测iNOS、COX-2、TNF-α和 IL-1β mRNA水平。 结果 模型组大鼠神经细胞数量明显减少,细胞核固缩明显,核仁不清。G-CSF组大鼠脑组织神经细胞核固缩现象均有显著改善。假手术组、模型组、G-CSF组逃避潜伏期分别为（35.68±6.73）s、（57.92±7.35）s及（40.27±8.91）s;目标象限游泳时间分别为54.72%±4.22%、36.73%±3.21%及44.68%±4.01%;穿过平台次数分别为（8.7±2.1）次、（3.9±1.6）次及（6.5±1.7）次;与模型组相比,假手术组、G-CSF组的逃避潜伏期均显著缩短,目标象限游泳时间显著增加,穿过平台次数显著增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。假手术组、模型组、G-CSF组NF-κB p65蛋白表达水平为0.144±0.033、0.502±0.035及0.473±0.061;p-p38 MAPK蛋白水平为0.194±0.021、0.511±0.039及0.266±0.048,与模型组相比,假手术组、G-CSF组NF-κB p65、p-p38MAPK蛋白水平均显著降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较,假手术组、G-CSF组iNOS、COX-2、TNF-α 和 IL-1β的蛋白和mRNA 水平显著降低（P<0.05）。 结论 G-CSF具有良好的抑制AD模型大鼠脑神经细胞凋亡,改善大鼠学习记忆功能障碍的作用,其作用可能通过抑制p38MAPK和NF-κB p65的信号通路的过度激活,下调iNOS、COX-2、TNF-α 和 IL-1β等炎性因子的表达,抑制脑内神经炎症状态而实现。     

构建大鼠内囊电毁损痉挛模型

目的：构建一种新的痉挛动物模型以期最大程度地模拟痉挛后的病理生理改变。方法：应用脑立体定位仪，精确地进行深部内囊的损伤定位，采用电毁损内囊的方式制造大鼠痉挛模型。结果：造模后痉挛组大鼠右上肢伸直的幅度与造模前痉挛组、造模前后空白组和假手术组比较明显降低，有统计学意义（P〈0.01）。结论：电毁损内囊可作为大鼠痉挛性瘫痪的一种优选方案。     

低温等离子射频消融与喉部分切除术治疗早期声门型喉癌的疗效比较

目的 比较低温等离子射频消融与喉部分切除术治疗早期声门型喉癌的疗效。方法 回顾性分析2013年8月—2018年7月蚌埠医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科收治的60例早期声门型喉癌患者的临床资料。按治疗方式不同分为两组:等离子射频消融术30例(等离子组),均为男性,年龄52～74岁;喉部分切除术30例(喉部分切除组),均为男性,年龄53～72岁。对两组患者手术时间、术中失血量、术后疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分、术后住院时间、黏膜恢复得分、并发症发生及喉功能恢复情况进行比较分析。结果 (1)等离子组手术时间、术中失血量、术后疼痛VAS评分、术后住院时间、黏膜恢复得分分别为(12.56±2.34)min、(8.72±1.31)mL、(4.35±1.26)分、(3.53±1.41)d、(6.25±1.32)分,与喉部分切除组的(100.00±8.34)min、(80.71±1.05)mL、(5.37±1.12)分、(11.45±1.05)d、(3.25±1.34)分比较,差异均有统计学意义(t=55.291、234.873、3.311、24.682、8.741,P值均＜0.01)。(2)术后并发症比较:等离子组呛咳评分为(3.53±0.75)分,与喉部分切除组的(6.01±1.12)分比较差异有统计学意义(t=10.077, P＜0.01);等离子组术后感染发生率、肉芽增生发生率、复发率分别为0、16.67%(5/30)、3.33%(1/30),与喉部分切除组的6.67%(2/30)、10.00%(3/30)、3.33%(1/30)比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。(3)喉功能恢复情况:等离子组基频微扰(Jitter)、振幅微扰(Shimmer)及谐噪比(HNR)术前分别为0.82%±0.15%、6.37%±1.23%和(12.86±2.21),术后1年分别为0.61%±0.14%、4.62%±1.21%和(17.69±2.41);喉部分切除组Jitter、Shimmer和HNR术前分别为0.91%±0.27%、6.34%±1.01%和(13.19±2.66),术后1年分别为0.76%±0.17%、5.54%±0.96%和(16.01±1.57)。两组患者Jitter、Shimmer、HNR术前差异均无统计学意义(P值均＞0.05),术后1年差异均有统计学意义(P值均＜0.01);两组患者术后1年的Jitter、Shimmer低于术前,HNR高于术前,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 支撑喉镜下低温等离子射频消融术在早期声门型喉癌的治疗应用中,具有手术时间短、手术失血量少、住院时间短、术后黏膜及嗓音恢复较好等优势,术后呛咳发生率低的特点,值得临床推广应用。     

腘动脉与后膝关节囊间隙联合隐神经阻滞及“鸡尾酒”疗法在老年患者全膝关节置换术中的应用效果观察

目的 探讨超声引导下腘动脉与后膝关节囊间隙（IPACK）联合隐神经阻滞及“鸡尾酒”疗法在老年患者全膝关节置换术（TKA）中的应用效果。方法 前瞻性随机对照研究。纳入2020年10月—2021年9月蚌埠医学院第一附属医院60例择期行单侧TKA的老年患者,其中男19例、女41例,年龄60~85（69.0±6.1）岁。按照数字表法将患者随机分为3组,每组20例：IPACK联合隐神经阻滞及“鸡尾酒”疗法为A组,坐骨神经联合股神经及股外侧皮神经阻滞组为B组,单纯全身麻醉为对照组。观测指标：（1）比较患者年龄、性别、体质量指数、麻醉前生命体征（平均动脉压、心率、外科容积指数）等基线资料;（2）比较患者术中的生命体征变化;（3）比较患者术前和术后24 h炎性因子白细胞介素（IL）-1β、C反应蛋白（CRP）浓度;（4）比较患者术后6、12、24和48 h运动及静息数字评价量表（NRS）疼痛评分;（5）比较患者术后首次自主下床活动时间、术后住院时间,以及术后12、24和48 h膝关节活动度;（6）比较患者术后一般临床情况（苏醒时间、拔管时间、瑞芬太尼用量）、镇痛泵按压次数、镇痛的补救率及相关不良反应（恶心呕吐、嗜睡、心动过缓）的发生情况。结果 （1）3组患者的基线资料比较差异均无统计学意义（P值均>0.05）。（2）术中切皮、扩髓及手术结束时,A、B组的平均动脉压、心率、外科容积指数均低于对照组,差异均有统计学意义（P值均<0.05）。（3）患者术后24 h的IL-1β、CRP浓度对照组均高于A、B组（P值均<0.05）,A组与B组比较差异均无统计学意义（P值均>0.05）。（4）术后6、12、24、48 h,A、B组静息及运动NRS疼痛评分均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P值均<0.05）。（5）术后12、24、48 h,A组患者的膝关节活动度（38.4°±8.9°、67.4°±8.2°、82.1°±8.8°）明显大于B组（29.5°±9.6°、61.3°±7.1°、72.3°±7.1°）和对照组（30.8°±6.8°、59.9°±7.6°、69.2°±7.4°）,差异均有统计学意义（F=6.27、5.45、14.73,P值均<0.05）,B组与对照之间差异均无统计学意义（P值均>0.05）;术后住院时间和首次自主下床活动时间A组最短,为（27.0±5.8）h、（3.8±0.8）d,对照组为（39.6±6.4）h、（4.6±0.9）d,B组为（47.7±4.0）h、（5.2±0.8）d,差异均有统计学意义（F=71.33、11.71,P值均<0.001）。（6）A、B组的苏醒时间、拔管时间及瑞芬太尼用量、术后镇痛补救与不良反应均低于对照组,差异均有统计学意义（P值均<0.05）;A、B组比较差异均无统计学意义（P值均>0.05）。结论 老年患者TKA行IPACK联合隐神经阻滞及“鸡尾酒”疗法,术中及术后患者镇痛效果较好,住院时间短,运动功能干扰小,对TKA后老年患者的早期功能锻炼起到一定的积极作用。     

人大脑内囊的影像解剖

目的 探讨正常汉族成人内囊的影像解剖。方法 选择健康汉族成人1000名(2000侧),按年龄18~30、31~40、41~50、51~60、61~80岁分为5组,每组男、女各100名。所有受试者均行三维（3D）磁化强度预备梯度回波序列T1WI,应用3D分析软件（Midobl）手工勾画出各个解剖值,软件自动计算出其解剖参数值。
结果 左、右侧内囊前肢前后径测量值为（16.93±1.67）mm和（16.60±1.72）mm,左、右侧内囊后肢前后径测量值为（28.42±1.92）mm和（27.68±1.81）mm。 左、右侧内囊前肢左右径测量值分别为（11.25±1.52）mm及（11.10±1.53）mm,左、右侧内囊后肢左右径测量值分别为（20.10±2.33）mm及（19.44±2.17）mm。 标准轴面上,左、右侧内囊前后肢之间夹角分别为（125.66±2.38）°及（126.01±34.11）°。 结论 高分辨率MRI能提供较为精确的内囊图像及测量数据,本实验提供了中国汉族正常成人内囊的参考值范围。     

氟西汀通过上调海马内溴结构域蛋白4的表达改善慢性束缚应激所致小鼠的抑郁样行为

目的 探讨氟西汀（FLX）对慢性束缚应激（CRS）所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4（BRD4）表达的影响。 方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照（NS）组、抑郁模型（CRS）组、氟西汀干预（CRS+FLX）组。慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,应激的第8天至第21天 CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射氟西汀（10mg/kg）,NS组及CRS组注射等体积生理盐水。采用糖水偏好实验、喷糖实验、强迫游泳实验、新旧事物识别实验和旷场实验检测各组小鼠行为变化;采用Western blotting及Real-time PCR法检测小鼠海马BRD4蛋白和mRNA的表达情况。 结果 与NS组相比,CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为,包括糖水偏好百分比显著降低（P<0.01）,喷糖实验舔糖时间缩短（P<0.05）,强迫游泳不动时间增加（P<0.01）,新事物辨别指数降低（P<0.0001）,抗抑郁药FLX干预可逆转CRS所诱导的上述抑郁样行为表现（P<0.05）;与NS组相比,CRS组小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达明显下调（1.;0000 ± 0.04577 比 0.08337 ± 0.01658;1.0000 ± 0.04379 比 0.6672 ± 0.03193,P<0.05）,而FLX可上调抑郁小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达（0.08337 ± 0.01658 比 0.4983 ± 0.08574;0.6672 ± 0.03193比0.8572 ± 0.03181,P<0.05）。 结论 氟西汀可能通过上调海马BRD4的表达改善小鼠抑郁样行为。     

坐骨神经损伤后长链非编码RNA的聚类分析及长链非编码RNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响

目的 探讨坐骨神经损伤后长链非编码RNA（LncRNA）差异表达的基因,以及LncRNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响。方法 选取10周龄无特定病原体级雄性SD大鼠24只,随机分为0 d（T0）、3 d（T1）、7 d（T2）和14 d（T3）4组,每组6只,建立坐骨神经损伤动物模型。分别于模型建立后第0、3、7、14天取相应组大鼠坐骨神经损伤处的残端组织提取RNA,制备RNA基因芯片进行Heatmap聚类分析,筛选出各个时间点发生差异表达的基因,并选择其中差异表达显著的基因LncRNA MX1。培养iCell-r030大鼠雪旺细胞,分为对照组、Control siRNA组（siRNA组）和LncRNA MX1 siRNA组（siRNA-MX1组）,使用相应试剂进行转染。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组雪旺细胞的LncRNA MX1mRNA表达情况,采用Transwell小室检测雪旺细胞的迁移能力,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EDU）实验检测雪旺细胞的增殖能力。结果 各组大鼠均造模成功,实验过程中无大鼠死亡。大鼠损伤坐骨神经组织LncRNA差异基因Heatmap聚类分析的热图显示,与T0组比：T1组共3 066个LncRNA基因发生差异性表达,其中1 634个LncRNA基因表达上调,1 432个LncRNA基因表达下调;T2组共2 498个LncRNA基因发生差异性表达,其中1 634个LncRNA基因表达上调,864个LncRNA基因表达下调;T3组3 567个LncRNA基因发生差异性表达,其中有1 643个LncRNA基因表达上调,1 924个 LncRNA基因表达下调。各组差异表达的LncRNA基因中LncRNA MX1的差异倍数数值较大,差异表达显著。大鼠雪旺细胞qRT-PCR结果显示,转染LncRNA MX1 siRNA后,siRNA-MX1组LncRNA MX1的相对表达量为1.0±0.2,低于对照组的2.3±0.2和siRNA组的2.2±0.2,差异有统计学意义（F=78.47,P<0.001）;而对照组和siRNA组组间差异无统计学意义（P>0.05）。迁移、增殖试验结果显示,siRNA-MX1组细胞迁移数量为（24.1±4.2）个、EDU阳性细胞与DAPI阳性细胞的比率为27.5%±2.8%,低于对照组的（50.3±7.8）个、44.1%±7.2%和siRNA组的（49.2±6.2）个、41.8%±7.0%,差异均有统计学意义（F=93.15、121.26,P值均<0.001）;而对照组和siRNA组间差异均无统计学意义（P值均>0.05）。结论 大鼠坐骨神经损伤后LncRNA MX1差异表达显著,下调LncRNA MX1在大鼠雪旺细胞中的表达可显著降低细胞的迁移、增殖能力。     

膝关节骨性关节炎推拿手法的力学特征和上肢核心肌群的疲劳研究

探讨膝关节骨性关节炎推拿手法的生物力学特征和生理学(表面肌电)特征,定量分析推拿手法的力学指标,建立一种客观评价推拿医生上肢核心肌群的疲劳状况的方法。招募10位推拿科医生,实时采集推拿医生拇指垂直压力和上肢表面肌电信号,研究垂直强度、次做功期与主做功期的时间比;研究操作该推拿手法时的上肢核心肌群;研究核心肌群的疲劳状况。结果表明,该推拿手法1 min内按压4次,平均垂直强度为(228±13)N,主做功期持续时间为(4.83±0.88)s,次做功期持续时间为(11.43±1.94)s,有效做功时间比为2.37±0.63。由上肢各肌肉群的平均积分肌电值(iEMG)和贡献率的降序可知,手法涉及上肢的核心肌群为拇短展肌(8.32±0.29,21.65%)、尺侧腕屈肌(5.67±0.32,14.74%)、肱三头肌(4.79±0.36,12.46%)、桡侧腕屈肌(4.60±0.12,11.96%)。在4 min的推拿过程中,拇短展肌的平均中值频率(MF)和平均功率频率(MPF)的下降程度是最大的,分别为30%和22%,即拇短展肌更易发生疲劳。因此,所研究的膝关节骨性关节炎推拿手法的生物力学特征和生理学(表面肌电)特征,为后续的人因工程研究和研制可替代推拿医生手法的自动化装置奠定良好的基础。     

重组人粒细胞集落刺激因子增加脑缺血周边区纤维结合蛋白的表达

目的:验证重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是否能改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能,并观察纤维结合蛋白表达。方法:线栓法复制大鼠大脑中动脉梗塞模型,皮下注射rhG-CSF,10μg·kg^-1·d^-1,连续5d。进行神经功能缺损评分。采用免疫组织化学方法观察纤维结合蛋白以及5溴-2脱氧尿苷(Brdu)的表达。运用免疫荧光双标法,观察缺血周边区Brdu和纤维结合蛋白以及神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP)和纤维结合蛋白的双阳性表达。结果:①手术7d、14d、21d干预组的神经功能缺损评分分别为4.00±0.89、3.83±1.17、3.50±1.38,手术对照组分别为5.50±1.38、5.83±1.47、5.66±1.63,手术干预组明显低于手术对照组(P<0.05);②手术干预组缺血周边区的纤维结合蛋白和Brdu免疫阳性细胞数均明显多于手术对照组(P<0.05);③手术组缺血周边区见Brdu和纤维结合蛋白以及GFAP和纤维结合蛋白的双阳性细胞;④手术干预组缺血周边区的血管周围可见簇状分布的纤维结合蛋白免疫阳性细胞。结论:rhG-CSF可增加脑缺血之后缺血周边区纤维结合蛋白的表达和改善神经功能。     

地奥心血康对心肌缺血再灌注损伤的抗脂质过氧化作用的研究

目的:揭示地奥心血康(DK)对心肌缺血再灌注损伤的抗氧化作用与机制。方法:用成年杂种犬复制心肌缺血再灌注损伤模型。多道生理记录仪监测心功能指标;酶法测定AST、CK、LDH含量;荧光法测血清与心肌细胞膜MDA含量;电子自旋共振(ESR)记录微分谱线进行体外羟自由基捕捉实验。结果:①生理盐水对照(NS)组随着缺血再灌注时间的延长,LVSP,±dp/dt_max呈进行性下降;而DK组缺血再灌注后LVSP和±dp/dt_max虽有下降,但显著高于NS组(P＜0.05);②血清中AST,CK,LDH含量随缺血/再灌时间延长均增高,于再灌120min后DK显著低于NS组(P＜0.05);③血清MDA含量于再灌注240min时DK组显著低于NS组(P＜0.05);④DK组心肌细胞膜MDA含量也显著地低于NS组(P＜0.05);⑤在DK浓度为0.71%、1.43%和2.14%时,羟自由基强度分别减少66%、80%和100%。结论:DK对心肌缺血再灌注损伤犬的心功能和心肌细胞膜有明显的保护作用,其很强的清除羟自由基的功能是实现这种保护效应的重要机制。     

超活化血小板裂解液对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞影响的实验研究

目的 探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法 选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象,其中男3例、女3例,年龄26～49岁、中位年龄33岁,受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本,先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP);再加入0.08 mmol/L CaCl₂, 37 ℃孵育激活血小板;然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原,获得sPL。培养RA-FLS,分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组,分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度;细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性;流式细胞术测定各组细胞的凋亡率;体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。结果 (1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL,TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL,IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL,组间比较差异均有统计学意义(F=12.186、11.934、10.709,P值均＜0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%,细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%,小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个,迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个,侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个,组间比较差异均有统计学意义(F=8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组,细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组,而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用,对RA-FLS凋亡具有促进作用,且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。     

长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制

目的 探讨长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 选取2018年1月—2019年10月南京江北医院骨科脊柱骨折患者手术切除的正常椎间盘标本18例,其中男11例、女7例,年龄为22~46 （38.3±4.3）岁,PfirrmannⅠ级6例、Ⅱ级12例。取椎间盘标本常规分离、培养髓核细胞,使用10 ng/mL IL-1β处理髓核细胞获得退变髓核细胞。将退变髓核细胞分为沉默对照组、KLHL7-DT沉默组、过表达对照组、KLHL7-DT过表达组。4组细胞分别对应转染沉默对照序列、siRNA-KLHL7-DT沉默序列、过表达对照序列、KLHL7-DT过表达序列。取转染后4组退变髓核细胞采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）蛋白的表达情况。结果 （1）KLHL7-DT过表达组EdU染色阳性细胞/DAPI染色阳性比值（0.147±0.002）低于过表达对照组（0.203±0.007）,而KLHL7-DT沉默组比值（0.428±0.050）高于沉默对照组（0.240±0.032）,差异均有统计学意义（t=14.25、-5.44,P值均<0.05）。（2）KLHL7-DT过表达组细胞凋亡率（19.01%±0.41%）高于过表达对照组（14.38%±0.31%）,KLHL7-DT沉默组细胞凋亡率（16.08%±0.59%）低于沉默对照组（17.42%±0.36%）,差异均有统计学意义（t=15.69、3.36,P值均<0.05）。（3）Western blot结果显示,KLHL7-DT过表达组细胞Aggrecan和Col Ⅱ蛋白的相对表达量（分别为0.34±0.29、0.57±0.11）均低于过表达对照组（1.00±0.22、1.05±0.10）,KLHL7-DT沉默组Aggrecan和Col Ⅱ蛋白的相对表达量（分别为1.77±0.14、1.63±0.12）均高于沉默对照组（1.10±0.18、0.98±0.08）,差异均有统计学意义（t=3.10、5.54、-5.05、-7.66,P值均<0.05）。结论 上调KLHL7-DT的表达可抑制退变髓核细胞的增殖,促进退变髓核细胞的凋亡,其机制可能是通过调节细胞外基质Aggrecan、Col Ⅱ蛋白的合成,进而参与椎间盘退变的发展。