长基因间非编码RNA 1475调控微小RNA-423-5p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨长基因间非编码RNA 1475(LINC01475)对微小RNA-423-5p(miR-423-5p)的靶向调控作用及在胃癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用。方法 采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测胃癌组织和细胞的LINC01475和miR-423-5p水平并进一步通过双荧光素酶报告基因实验鉴定两者的靶向关系。选择胃癌SGC-7901细胞并分为4组:对照组(未转染)、LINC01475过表达组(转染过表达载体pc DNA3.1-LINC01475+miR-NC)、miR-423-5p过表达组(转染miR-423-5p模拟物mimics+空载体pc DNA3.1)和共过表达组(转染pc DNA3.1-LINC01475+miR-423-5p mimics);采用q PCR、MTT法、划痕实验和Transwell小室实验评估转染效果、细胞活力及迁移侵袭能力的变化。结果 与癌旁组织相比,胃癌组织的LINC01475水平降低,而miR-423-5p水平升高,两者水平呈负相关(r=-0.686,P<0.05)。与人正常胃上皮GES-1细胞相比,胃癌细胞的LINC01475水平降...     

miR-524-5p调控HEG1表达对食管癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨miR-524-5p调控HEG1表达对食管癌细胞增殖、上皮间质转化（EMT）的作用机制。方法 qRT-PCR检测食管癌细胞和正常食管上皮细胞中miR-524-5p和HEG1mRNA表达水平。将KYSE30细胞分为mi R-524-5pmimic组、mi R-524-5pNC组、mi R-524-5p mimic+pc DNA3.1组和mi R-524-5p mimic+pc DNA3.1-H E G 1组,另设置不转染的细胞为正常对照组（C o n t r o l组）。C C K-8法检测K Y S E 3 0细胞增殖能力;Westernblot检测EMT相关蛋白、侵袭迁移相关蛋白和HEG1蛋白表达,划痕实验和Transwell实验检测KYSE30细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因检测mi R-524-5p和HEG1靶向关系。结果mi R-524-5p在四种食管癌细胞系TE-1、KYSE30、KYSE150、NEC中均低表达（P<0.05）,选择表达水平最低的KYSE30细胞作为后续实验细胞。HEG1 m RNA在四种食管癌细胞中均高表达（P<0.05）,并且...     

LINC00672对微小RNA-629-3p的靶向调控作用及胶质瘤细胞迁移侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 672(LINC00672)对微小RNA-629-3p(miR-629-3p)的靶向作用及胶质瘤细胞迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测胶质瘤细胞(U118、U87和U251)以及人星形胶质细胞NHAs的LINC00672和miR-629-3p水平,经DIANA Tools在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证LINC00672和miR-629-3p间的靶向关系。将U251细胞分为4组:空白对照组、阴性对照组(转染pcDNA)、LINC00672过表达组(转染pcDNA-LINC00672)和共过表达组(转染pcDNA-LINC00672+miR-629-3p模拟物mimics)。MTT法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测经转染处理后各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。qPCR与Western blotting检测EMT相关指标[E-钙黏蛋白(E-Cad)、N-钙黏蛋白(N-Cad)和纤维黏连蛋白(FN)]以及细胞周期依赖蛋白激酶2(CDK2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况。结果与NHAs细胞相比,胶质瘤细胞的LINC00672水平降低,而miR-629-3p水平升高(P<0.05);LINC00672能够靶向负调控miR-629-3p。LINC00672过表达组U251细胞的增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数较阴性对照组均明显降低(P<0.05);而共过表达组U251细胞的增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数较LINC00672过表达组升高(P<0.05)且与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性对照组相比,LINC00672过表达组U251细胞的E-Cad水平升高,而CDK2、MMP-9、N-Cad和FN水平降低(P<0.05);与LINC00672过表达组相比,共过表达组U251细胞的E-Cad水平降低,而CDK2、MMP-9、N-Cad和FN水平升高(P<0.05);空白对照组与阴性对照组U251细胞上述指标水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论LINC00672通过靶向调控miR-629-3p来抑制胶质瘤U251细胞的增殖、迁移侵袭和EMT过程,在胶质瘤中发挥抑瘤作用。     

LncRNA GATA3-AS1通过调控miR-362-3p/FABP5轴抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探究长链非编码RNA GATA3反义RNA 1(lncRNA GATA3-AS1)调控微小RNA-362-3p(miR-362-3p)表达对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测宫颈癌细胞中lncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p、FABP5表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA GATA3-AS1和miR-362-3p的靶向关系、miR-362-3p和FABP5的靶向关系;将细胞分为pcDNA-NC组、pcDNA-GATA3-AS1组、si-NC组、si-GATA3-AS1组、si-GATA3-AS1+inhibitor-NC组、si-GATA3-AS1+miR-362-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-362-3p mimics组、miR-362-3p mimics+pcDNA-NC组、miR-362-3p mimics+pcDNA FABP5组;Western blot检测蛋白表达;EdU法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移侵袭。结果:在宫颈癌细胞系中,GATA3-AS1、FABP5均为高表达,miR-362...     

长基因间非编码RNA 1980靶向微小RNA-335-5p及对胃癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨长基因间非编码RNA 1980(LINC01980)对微小RNA-335-5p(miR-335-5p)的靶向调控作用及胃癌细胞迁移侵袭的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN-45和MGC80-3)的LINC01980和miR-33...     

LncRNA PVT1抑制miR-497-5p表达调控子宫内膜癌细胞增殖和迁移侵袭的分子机制研究

目的:研究长链非编码RNA PVT1和miR-497-5p在子宫内膜癌组织中的表达以及其对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用实时荧光定量法测定子宫内膜癌组织、癌旁正常组织及子宫内膜癌细胞HEC-1-B中PVT1和miR-497-5p的表达。用脂质体法将siRNA-PVT1和miR-497-5p mimic转染至子宫内膜癌细胞HEC-1-B;MTT法、Transwell法检测HEC-1-B细胞的增殖、迁移和侵袭。Targetscan在线分析网站预测和双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PVT1和miR-497-5p的靶向关系。将siRNA-PVT1和miR-497-5p inhibitor共转染至HEC-1-B细胞,MTT法、Transwell法检测HEC-1-B细胞的增殖、迁移和侵袭。结果:与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中PVT1表达显著上调,miR-497-5p表达显著下调（P<0.05）。沉默PVT1、过表达miR-497-5p均可抑制HEC-1-B细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。PVT1靶向miR-497-5p。抑制miR-497-5p的表达可逆转沉默PVT1对HEC-1-B细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:沉默PVT1可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与PVT1靶向miR-497-5p有关,将可为子宫内膜癌的靶向治疗提供新靶点。     

长链非编码RNA FENDRR对宣威肺癌XWLC-05细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:检测非编码RNA FENDRR长链在宣威肺腺癌XWLC-05株细胞与非小细胞肺癌(NSCLC) A549株细胞中的表达,及其对细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法:实时荧光定量PCR检测FENDRR基因在XWLC-05与A549细胞中的表达;构建过表达pEX-3-FENDRR质粒并转染XWLC-05细胞,慢病毒干扰LV3-FENDRR载体转染A549细胞,实时荧光定量PCR检测转染后XWLC-05和A549细胞内FENDRR的表达;MTS法检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:XWLC-05细胞中FENDRR基因表达明显较A549细胞低,成功提高转染pEX-3-FENDRR的XWLC-05细胞和降低转染LV3-FEN-DRR质粒的A549细胞中FENDRR mRNA水平.与对照组相比,过表达FENDRR可明显抑制XWLC-05细胞增殖[(1.23±0.13)vs(1.46±0.25),P＜0.05]并降低其迁移、侵袭能力(P＜0.05);干扰FENDRR表达,能够促进A549细胞增殖[(0.85±0.02) vs (0.77±0.08),P＜ 0.05]、迁移与侵袭能力(P＜0.05).结论:lncRNA FENDRR表达下调与宣威肺腺癌的发生发展相关,其在肿瘤恶性化过程中抑制肿瘤细胞的增殖与转移.     

基因间长链非编码RNA 113靶向微小RNA-493-3p对肺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨基因间长链非编码RNA 113(LINC00113)调控微小RNA-493-3p(miR-493-3p)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移过程中的分子功能.方法 采用实时定量PCR(qPCR)检测LINC00113和miR-493-3p在50对NSCLC癌组织和癌旁组织及4株NSCLC细胞株(A549、...     

长链非编码RNA SNHG1靶向miR-340-5p/CCND1轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1（LncRNA SNHG1）靶向miR-340-5p/细胞周期蛋白1（CCND1）轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:体外培养人食管上皮细胞、食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109,qRT-PCR法测定细胞中LncRNA SNHG1、miR-340-5p、CCND1 mRNA水平。将对数期NEC细胞分为对照组、sh NC1组、sh LncRNA SNHG1组、sh NC2组、sh CCND1组、sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组、sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组。CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室法测定细胞侵袭、迁移能力,Western blot法检测CCND1、Ki-67、MMP-2蛋白表达,双荧光素酶验证miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1的靶向关系,通过裸鼠瘤内注射转染试剂进行体内试验。结果:与人食管上皮细胞相比,食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109中LncRNA SNHG1、CCND1 mRNA表达升高,miR-340-5p表达降低（P＜0.05）,其中NEC细胞变化最显著,所以使用NEC作为下续研究菌株。与对照组、sh NC组相比,sh LncRNA SNHG1组NEC细胞LncRNA SNHG1、OD450、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2降低（P＜0.05）;与对照组、sh NC组相比,sh CCND1组CCND1 mRNA与蛋白表达、OD450、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2表达降低（P＜0.05）。miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1均靶向结合,与sh LncRNA SNHG1组相比,sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组OD450、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高（P＜0.05）;与sh CCND1组相比,sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组OD450、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高（P＜0.05）;裸鼠移植瘤实验进行了体内验证。结论:LncRNA SNHG1沉默可能通过调控miR-340-5p/CCND1表达抑制食管癌NEC细胞增殖、侵袭与迁移,裸鼠体内也验证了这一结果。     

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。     

miR-455-3p 通过靶向调控转脂蛋白4 抑制卵巢癌细胞SKOV-3 的增殖、迁移及上皮间质转化

[摘要] 目的：探讨miR-455-3p 对卵巢癌细胞SKOV-3 增殖、迁移能力及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并研究其作用机制。方法：人卵巢上皮细胞株IOSE80、卵巢细胞系SKOV-3 和A2780 细胞培养完成后,将miR-455-3p mimic 及其阴性对照分别瞬时转染至细胞中。qPCR 实验检测IOSE80、SKOV-3 和A2780 细胞miR-455-3p 和转脂蛋白4（fatty acid-binding protein 4,FABP4）mRNA表达水平,Wb检测FABP4 和EMT相关蛋白的表达水平,CCK-8 法检测细胞增殖活性,Transwell 实验用于评估细胞迁移能力,生物信息学预测miR-455-3p 的靶基因,应用双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p 与FABP4 的靶向关系。结果：与正常卵巢上皮细胞IOSE80 相比,卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780 中miR-455-3p 低表达（均P<0.05）,而FABP4 高表达（均P<0.05）。此外,过表达miR-455-3p 明显抑制SKOV-3 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.05）。过表达miR-455-3p 通过上调E-cadherin 表达、下调N-cadherin 和Vimentin 表达而抑制EMT进程（均P<0.05）。FABP4 是miR-455-3p 的靶基因,且miR-455-3p 能特异性结合FABP4 3’-UTR,并负调控其表达水平（P<0.05）。过表达FABP4 能够明显逆转miR-455-3p 对SKOV-3细胞增殖和迁移的抑制作用（均P<0.05）。结论：miR-455-3p 在卵巢癌中作为一个抑癌蛋白,通过靶向调控FABP4 从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及EMT,有望成为卵巢癌新的潜在治疗靶点。     

lncRNA MIR205HG通过调控miR-122-5p促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA) MIR205HG对食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法:RT-PCR检测食管鳞状细胞癌组织以及癌旁组织中MIR205HG的表达量;CCK-8实验检测MIR205HG对食管鳞状细胞癌细胞Eca-109和TE-10增殖的影响;Western blot实验检测侵袭相关蛋白MMP-1和MMP-9以及血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达水平。结果:结果显示,MIR205HG在食管鳞状细胞癌组织中的表达量显著高于癌旁组织的表达量（P＜0.05）;与转染对照si-RNA相比,当细胞转染si-MIR205HG时,MIR205HG的表达量显著被抑制（P＜0.05）;干扰MIR205HG显著抑制食管鳞状细胞癌细胞Eca-109和TE-10的增殖和侵袭（P＜0.05）;此外,si-MIR205HG促进miR-122-5p的表达,且MIR205HG与miR-122-5p表达量呈负相关（P＜0.05）;进一步的研究结果表明,抑制miR-122-5p逆转si-MIR205HG对TE-10细胞增殖和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:MIR205HG能够促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控miR-122-5p来实现的,这一结果能够为食管鳞状细胞癌的临床治疗和诊断提供分子基础。     

Epigenetic silencing of microRNA-199a-5p promotes the proliferation of non-small cell lung cancer cells by increasing AKAP1 expression

MicroRNA (miR)-199a-5p expression is downregulated in a variety of malignancies, including non-small cell lung cancer (NSCLC), and its low expression is associated with a poor prognosis. However, to the best of our knowledge, the mechanism underlying miR-199a-5p downregulation in NSCLC and its target effectors remain to be elucidated. The present study revealed the downregulation of miR-199a-5p expression in NSCLC tissues and cell lines compared with in para-carcinoma tissues and a lung epithelial cell line. Further experiments indicated that the methylation levels of the miR-199a promoter were markedly higher in NSCLC tissues compared with in para-carcinoma tissues. The DNA methyltransferase inhibitor 5-Aza-2′-deoxycytidine markedly increased the expression levels of miR-199a-5p in NSCLC cells. Furthermore, it was identified that miR-199a-5p mimics transfection decreased the expression levels of A-kinase anchoring protein 1 (AKAP1) at both the mRNA and protein levels by targeting the 3′ untranslated region of AKAP1 mRNA. The in vitro experiments demonstrated that miR-199a-5p overexpression inhibited the proliferation and tumorigenicity of NSCLC cells, whereas overexpression of AKAP1 partially recovered the malignant phenotypes, suggesting that AKAP1 may be a downstream effector targeted by miR-199a-5p. Collectively, the present findings indicated that miR-199a-5p may be a novel regulator of AKAP1, and that miR-199a-5p may be a potential tumor suppressor in NSCLC.     

miR-1180-5p通过激活CDKN1A基因表达抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-1180-5p（miR-1180-5p）对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法：合成dsControl （dsControl 组）和miR-1180-5p（miR-1180-5p 组）,分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR 和Western blotting 分析转染后各组细胞CDKN1A、Cyclin D1 和CDK6 mRNA及蛋白的表达变化,采用流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和Transwell 实验分别检测细胞周期分布、增殖活力、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力。结果：qPCR结果显示,相比dsControl,转染miR-1180-5p 后VCAP 和LNCaP 细胞中CDKN1A mRNA 表达明显上调(P<0.01);Cyclin D1 和CDK6 mRNA表达明显下调(P<0.05 或P<0.01)。Western blotting 与qPCR 结果相符。转染miR-1180-5p 后VCAP和LNCaP 位于G0/G1 期的细胞比例增加(P<0.01),而位于S 期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05),细胞周期被阻滞在G0/G1 期。转染miR-1180-5p 后,两种前列腺癌细胞增殖活力较dsControl 组明显降低(P<0.05),miR-1180-5p 组两种细胞的克隆数量明显较少（P<0.01）,同时miR-1180-5p 组两组细胞迁移和侵袭能力均下降（P<0.01）。结论：miR-1180-5p 能显著激活前列腺癌细胞中CDKN1A基因的表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物行为。     

PAK5通过上皮-间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭

目的:探讨p21活化激酶-5（p21-activated kinase 5,PAK5）蛋白对乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制。方法:观察PAK5过表达对乳腺癌细胞形态的影响,人乳腺肿瘤细胞MCF-7通过慢病毒感染稳定表达Flag-PAK5。然后提取感染细胞的总蛋白进行蛋白免疫印迹检测上皮-间质转化（EMT）标志物上皮-钙黏蛋白（E-cadherin）,纤维连接蛋白（Fibronectin）和波形蛋白（vimentin）的表达。最后通过Transwell实验检测过表达PAK5对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:过表达PAK5蛋白能够使细胞形态由鹅卵石样像梭形变化,下调E-cadherin蛋白,促进乳腺癌细胞迁移和侵袭。结论:PAK5可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生上皮－间质转化,促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生。     

miR-203a-3p通过靶向PRMT5抑制胃癌细胞增殖

目的:探讨miR-203a-3p在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响.方法:收集胃癌组织标本44例,采用Real-time PCR方法检测胃癌组织标本中miR-203a-3p的表达,并分析其表达水平与临床病理参数的关系;生物信息学预测miR-203a-3p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证;免疫组化检测胃癌组织标本中PRMT5的表达情况,分析其表达水平与miR-203a-3p表达的相关性;利用脂质体介导的瞬时转染方法过表达miR-203a-3p或同时过表达miR-203a-3p和PRMT5,并通过CCK-8实验检测胃癌细胞的增殖情况.结果:胃癌组织中miR-203a-3p的表达水平与正常组织对照相比显著降低(P<0.01),并且miR-203a-3p的表达水平与肿瘤细胞的分化程度显著相关;荧光素酶报告基因实验证实miR-203a-3p可以直接结合在PRMT5 3'-UTR上,即PRMT5是miR-203a-3p的直接靶基因;在胃癌组织标本中,PRMT5表达水平显著高于正常组织对照(P<0.01),并且其表达水平与miR-203a-3p表达呈显著负相关(r=-0.4124,P<0.01);过表达miR-203a-3p后,胃癌BGC823细胞的增殖能力显著低于miR-NC对照组(P<0.01),并且,"挽救"实验表明在过表达miR-203a-3p的细胞中同时过表达PRMT5后会部分恢复miR-203a-3p对细胞增殖的抑制(P<0.01).结论:miR-203a-3p可通过下调靶基因PRMT5的表达,进而抑制胃癌细胞增殖.因此,miR-203a-3p可作为胃癌疾病临床治疗的潜在靶点.