miR-208a通过调控QKI5表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

  目的   研究miR-208a调控QKI5表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及作用机制。  方法  将雄性SD大鼠32只随机选择分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、I/R+antagomir阴性对照组（I/R+anta-miR-NC组）和I/R+miR-208a antagomir 组 （I/R+anta-miR-208a组）,构建大鼠心肌I/R模型后检测各组大鼠心脏左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）和左室每搏量（SV）;ELISA法检测血清肌酐激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（cTnI）以及IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF-α）水平;采用HE染色观察各组心肌组织病理变化,采用TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡;RT-PCR检测心肌组织miR-208a和QKI5 mRNA表达,Western blot检测心肌组织QKI5蛋白和凋亡蛋白Caspase-3的相对表达水平。  结果  与Sham组比较,I/R组中LVEF、LVFS、SV值降低,心肌细胞凋亡率升高,血清中CK-MB、cTnI和IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织中miR-208a和Caspase-3表达升高,而QKI5表达水平降低（P < 0.05）;与I/R+anta-miR-NC组比较,I/R+anta-miR-208a组中LVEF、LVFS、SV值升高,心肌细胞凋亡率降低,血清中CK-MB、cTnI和IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织中miR-208a和Caspase-3表达水平降低,而QKI5表达升高（P < 0.05）。相关性分析发现miR-208a与QKI5表达呈负相关。  结论  抑制miR-208a可能通过调控QKI5表达减轻心肌缺血再灌注损伤中炎症反应,发挥心肌保护作用。     

miR-145-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及其机制

目的 探讨miR-145-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法 80只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术+尾静脉注射agomir-NC组(sham+ago-NC)、假手术+尾静脉注射agomir-miR-145-5p组(sham+ago-miR)、脓毒症+尾静脉注射agomir-NC组(CLP+ago-NC)和脓毒症+尾静脉注射agomir-miR-145-5p组(CLP+ago-miR),每组20只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型。绘制小鼠生存曲线，ELISA法检测血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)水平以及促炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达，HE染色观察心肌组织微观结构，超声仪检测心脏收缩功能(LVEF、LVFS),免疫荧光染色检测CD68、Ly6G、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况，碘化丙啶染色评估心肌细胞焦亡，qRT-PCR检测miR-145-5p表达，Western blot检测NLRP3、AS...     

miR-21-5p对川崎病内皮细胞焦亡的作用及其机制研究

目的探究miR-21-5p对川崎病（KD）内皮细胞焦亡的作用及其机制。方法采用随机数字表法将16只C57BL/6小鼠分为KD组和PBS组,每组8只。利用干酪乳杆菌细胞壁提取物（LCWE）腹腔注射小鼠,构建KD模型。利用LC-WE处理小鼠冠状动脉内皮细胞（MCAECs）,构建KD体外细胞模型。在使用LCWE处理的基础上,根据转染miR-21-5p抑制剂（miR-21-5pinhibitor）或inhibitor阴性对照物（inhibitor-NC）、miR-21-5p模拟物（miR-21-5pmimics）或mimics阴性对照物（miR-NC）、用或不用含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）抑制剂MCC950,将MCAECs分组为：（1）LCWE组和对照组;（2）LCWE+inhibitor-NC组和LCWE+miR-21-5pinhibitor组;（3）LCWE组、LCWE+MCC950组、LCWE+MCC950+miR-NC组和LCWE+MCC950+miR-21-5pmimics组。采用HE染色观察小鼠冠状动脉组织病理学变化;采用qRT-PCR法检测miR-21-5p表达变化;采用Westernblot检测焦亡相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（caspase-1）、caspase-1前体（pro-caspase-1）、消皮素D蛋白（GSDMD）p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达;采用细胞计数盒法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测LDH活性。结果与PBS组相比,KD组小鼠冠状动脉组织病变明显,冠状动脉组织中NLRP3介导的细胞焦亡、miR-21-5p表达水平均升高（均P＜0.01）。与对照组相比,LCWE组MCAECs细胞活力明显降低并且miR-21-5p表达水平明显升高（均P＜0.01）。与LCWE+inhibitor-NC组相比,LCWE+miR-21-5pin-hibitor组细胞miR-21-5p表达水平、NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMDp30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低（均P＜0.01）,而细胞活力明显升高（P＜0.05）。与LCWE组相比,LCWE+MCC950组NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMDp30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低（均P＜0.01）,且细胞活力明显升高（P＜0.01）,而进一步转染miR-21-5pmimics明显逆转了以上变化（均P＜0.01）。结论在KD中,miR-21-5p通过激活NLRP3炎症小体调节血管内皮细胞焦亡,从而加剧血管内皮细胞损伤。提示抑制miR-21-5p可以部分改善KD期间的血管内皮细胞损伤,miR-21-5p可以作为治疗KD的潜在干预靶点。     

姜黄素通过NLRP3/Caspase-1/IL-1β轴对低氧性肺动脉高压的干预作用

目的：探讨姜黄素对低氧性肺动脉高压（HPH）的作用及其机制。方法：同时研究肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）和SD大鼠肺组织,PASMCs和SD大鼠都设置为常氧组（N）、低氧组（H）、低氧+姜黄素组（HC）3组。CCK-8法测3组PASMCs细胞活力,Western blot法检测3组PASMCs和肺匀浆中NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白表达差异。血流动力学检测3组大鼠的平均肺动脉压（mPAP）及右心肥大程度,HE染色观察3组大鼠肺血管重塑程度。结果：与N组比,H组PASMCs的数量有明显增加（P＜0.05）,H组PASMCs和肺匀浆中NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均上升（均P＜0.05）,H组大鼠的mPAP及右心肥大指数明显升高（均P＜0.05）,发生明显肺血管重塑;与H组比,HC组PASMCs的数量明显降低（P＜0.05）,PASMCs和肺匀浆中NLRP3、Cas-pase-1、IL-1β蛋白表达均下降（均P＜0.05）,HC组大鼠的mPAP及右心肥大指数明显降低（均P＜0.05）,肺血管重塑改善。结论：姜黄素可能通过抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β轴,改善低氧PASMCs异常增殖、HPH大鼠肺血管重塑和右心肥大,降低肺动脉压力。     

钠-氢交换蛋白调节细胞内环境酸化并激活肝癌细胞焦亡的作用及相关机制

目的探讨钠-氢交换蛋白1（NHE1）调节细胞内环境酸化并激活肝癌细胞焦亡的作用及相关机制。方法采用Westernblot和RT-qPCR法检测4株肝癌细胞中NHE1蛋白及mRNA表达水平,选出表达最高的MHCC97细胞株进行实验。小干扰RNA（siRNA）技术沉默MHCC97细胞中NHE1,将常规培养的MHCC97细胞作分为对照组、NHE1无关对照的序列转染的细胞作为siRNA-NC组、NHE1转染的细胞株作为siRNA-NHE1组,检测3组细胞活性,细胞凋亡情况,细胞中半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、炎性小体（NLRP3）、消皮素D（GSDMD）表达水平,培养基中IL-1β、IL-18水平以及细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出水平,观察NHE1沉默对细胞焦亡的影响。另取NHE1沉默后细胞设立NHE1沉默组和Caspase-1抑制组（用Caspase-1抑制剂AC-YVAD-CMK干预）,观察阻断Caspase-1对细胞焦亡的影响。结果NHE1沉默后的MHCC97细胞活性下降（P＜0.05）,凋亡增多;细胞Caspase-1、NLRP3表达水平,培养基IL-1β、IL-18水平及LDH漏出水平升高,GSDMD表达水平降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。阻断Caspase-1后细胞活性增强（P＜0.05）,凋亡减少;细胞Caspase-1、NLRP3表达水平,培养基IL-1β、IL-18水平及LDH漏出水平降低,GSDMD表达水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论NHE1沉默会造成细胞内酸化,同时激活细胞焦亡,这是NHE1在肝癌中的作用机制之一;阻断Caspase-1可以抑制细胞焦亡。     

羟基红花黄色素A对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞焦亡的影响

目的 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡信号通路探讨羟基红花黄色素A(Hydroxy saffloweryellow A,HSYA)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠H9c2心肌细胞焦亡及肥大的影响。方法 体外培养H9c2细胞,分别设空白对照组、模型组(1μmol/L AngⅡ)、HSYA低剂量组(1μmol/L AngⅡ+6.25μmol/L HSYA)、HSYA中剂量组(1μmol/L AngⅡ+12.5μmol/L HSYA)、HSYA高剂量组(1μmol/L AngⅡ+25μmol/L HSYA)、单给HSYA组(25μmol/L HSYA)。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率;罗丹明标记的鬼笔环肽细胞染色法检测细胞面积;BCA法测定心肌细胞内总蛋白质含量;ELISA试剂盒检测细胞培养液中白细胞介素-1β(Interleukin1β,IL-1β)的分泌水平;Western blot法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18蛋白表达水平。结果 HSYA可明显提高AngⅡ诱导H9c2细胞活力下降;改善AngⅡ诱导的H9c...     

卡维地洛对ox-LDL诱导内皮细胞中NLRP3炎症小体介导焦亡及炎症的影响

目的研究卡维地洛对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞中NLRP3炎症小体介导焦亡及炎症的调控作用。方法人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组、ox-LDL组、低剂量组(0.01 mmol/L)、高剂量组(0.1 mmol/L);转染阴性对照腺病毒(Ad-NC)或过表达NLRP3腺病毒(Ad-NLRP3)后分为Ad-NC组、Ad-NC+ox-LDL组、Ad-NC+高剂量组、Ad-NLRP3+高剂量组。检测各组细胞活力和白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,以及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved Caspase-1表达水平。 结果ox-LDL组细胞活力低于对照组,IL-1β、IL-18及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved Caspase-1均高于对照组(P＜0.05)。低剂量组和高剂量组细胞活力高于ox-LDL组,IL-1β、IL-18及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved Caspase-1均低于ox-LDL组(P＜0.05)。转染NLRP3腺病毒后,Ad-NLRP3+高剂量组和Ad-NC+ox-LDL组细胞活力低于Ad-NC+高剂量组,IL-1β、IL-18及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved Caspase-1均高于Ad-NC+高剂量组(P＜0.05)。 结论卡维地洛显著抑制ox-LDL诱导HUVEC中NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡及炎症反应。     

miRNA-34a对无血清培养诱导心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的：探讨miRNA-34a（miR-34a）对无血清培养诱导的大鼠心肌细胞凋亡及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）表达水平的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞H9C2,实验分实验组（转染miR-34a inhibitor）、空白对照组（无转染miR inhibitor）和阴性对照组（转染随机合成NC microRNA片段）。转染24h后无血清培养饥饿诱导细胞凋亡,Western bolt法检测Caspase-3及Bcl-2的表达。结果实验组细胞Caspase-3表达低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。Bcl-2表达明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论转染miR-34a inhibitor可以下调miR-34a的表达,减少无血清培养诱导H9C2细胞的凋亡,Bcl-2的表达增加可能参与了其保护机制。     

黄芪丹参配伍调控ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境中心肌细胞焦亡

目的 探讨黄芪丹参配伍对乳酸诱导的酸性微环境中心肌细胞焦亡损伤的保护作用及基于酸敏感离子通道1a(ASIC1a)/钙离子-钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)信号通路的调控机制。方法 采用Lactate刺激H9C2心肌细胞建立pH 6.5酸性微环境细胞损伤模型。分为正常对照组、模型组、黄芪丹参提取物(HQ)组、HQ+ASIC激动剂Nocistatin组和ASIC抑制剂NS383阳性药对照组。采用CCK-8法测定心肌细胞活力,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,免疫荧光检测ASIC1a表达,qPCR分析NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达,Western blot检测ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白的表达。结果 在pH 6.5酸性环境中,心肌细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡明显增加(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达明显增加(P<0.01),ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspas...     

抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

目的 探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用,分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法 将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基;高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基;高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ;高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950;高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后,CCK-8法测定细胞活性;CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化;免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平;Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和Cleaved-GSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果 与CON组相比,HG组细胞活性明显下降（P<0.01）,心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及焦亡相关因子NLRP3,GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P<0.01）均明显升高,铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P<0.01）。与HG组相比,HG+MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P<0.01）,细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及 NLRP3、GSDMD 和 GSDMD-NT 的蛋白表达明显降低（P<0.05）,GPX4 蛋白表达增高（P<0.01）。与HG组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）;但与HG+MCC950组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性明显降低（P<0.01）,ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高,GPX4蛋白表达降低（P<0.05）。结论 MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成,减少焦亡和铁死亡的发生;抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生;线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。     

NLRP3炎症小体介导单核细胞增生李斯特菌感染小鼠和巨噬细胞的细胞焦亡

目的:探讨单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)感染引起小鼠和巨噬细胞的细胞焦亡作用机制.方法:体内实验,C57B/6小鼠分为Lm组和阴性对照组(NC组),分别经小鼠尾静脉注射Lm菌液5×104 CFU/鼠和无菌PBS,24 h后取脾脏、肝脏、脑组织,蛋白质印迹法检测焦亡及核苷酸结合...     

急性冠状动脉综合征患者血浆miR-133a、miR-208b表达水平及其与心肌损伤和冠状动脉病变程度的相关性

目的 分析急性冠状动脉综合征(ACS)患者血浆微小RNA(miR)-133a、miR-208b表达水平及其与心肌损伤指标和冠状动脉病变程度的相关性.方法 选取2018年5月—2019年5月云南省第三人民医院心内科收治的ACS患者106例作为研究对象,其中不稳定型心绞痛(UAP)51例(UAP组),急性心肌梗死(AMI)...     

NLRP3炎性小体在胃癌细胞中的表达及对其焦亡、增殖、侵袭、迁移的影响

目的 研究胃癌细胞中NLRP3炎性小体的表达及其对增殖、侵袭和迁移的影响。并初步探讨NLRP3介导caspase-1依赖的焦亡信号通路在胃癌发展中的作用。 方法qRT-PCR和Western blotting法分别检测人胃黏膜上皮细胞(GES-1)和人胃癌细胞(MKN45及MGC803)中NLRP3、caspase-1表达;随后下调NLRP3,检测胃癌细胞NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白的表达;Western blotting检测GSDMD、白细胞介素(IL)-18、IL-1β蛋白表达;ELISA法检测细胞培养液上清液中IL-1β、IL-18含量;乳酸脱氢酶(LDH)实验、流式细胞术检测细胞焦亡;CCK-8法及细胞周期试剂盒检测细胞增殖情况;Transwell和划痕实验检测胃癌细胞侵袭和迁移能力。 结果NLRP3、caspase-1在胃癌细胞中较GES-1表达增高(P < 0.01)。下调NLRP3后,胃癌细胞LDH释放率及焦亡率显著降低(P < 0.01);GSDMD、IL-1β、IL-18表达降低(P < 0.01);细胞增殖阻滞在G₁期(P < 0.01);细胞增殖以及侵袭迁移能力显著减弱。 结论NLRP3在胃癌中高表达,其表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移以及其介导的caspase-1依赖焦亡信号通路关键蛋白的表达。     

血清miR-133a在脓毒症心肌损伤患者诊断及预后评估中的临床价值

目的探讨miR-133a在脓毒症心肌损伤患者临床诊断及预后评估中的价值。方法选取脓毒症心肌损伤患者50例作为研究对象（观察组）,根据入住ICU 28 d内是否存活,分为存活组（30例）及死亡组（20例）。另选取该院体检中心健康体检者25例作为对照组;收集其临床资料及相关观察指标,检测患者入组后第24、48、72小时患者血清心肌肌钙蛋白Ｉ（cTnI）、CK-MB,计算急性生理学与慢性健康状况评分系统 Ⅱ（APACHEⅡ评分）及序贯器官衰竭评分（SOFA评分）,运用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应技术（qRT-PCR）检测所有受试者血清miR-133a的表达水平,分析其与cTnI、APACHEⅡ评分的相关性,分析血清miR-133a在脓毒症心肌损伤患者诊断及预后评估中的价值。结果观察组与对照组在性别、年龄、体质指数方面差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比,观察组心率、平均动脉压、WBC、乳酸、cTnI、CK-MB、BNP、APACHEⅡ评分、SOFA评分均明显升高（P<0.05）。观察组血清miR-133a表达水平与对照组相比明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。在入组24、48、72 h时,死亡组患者的cTnI、CK-MB浓度以及APACHEⅡ评分、SOFA评分、miR-133a表达水平均明显高于存活组,差异有统计学意义（P<0.05）,各个时间点检测的miR-133a表达水平和cTnI含量以及APACHEⅡ评分均呈显著正相关,差异有统计学意义（P<0.05）。乳酸、APACHEⅡ评分、cTnI、miR-133a表达水平等因素是脓毒症心肌损伤患者预后的影响因素（P<0.05）。结论脓毒症心肌损伤患者血清miR-133表达水平与cTnI及APACHE Ⅱ评分相关性好,可以作为诊断脓毒症心肌损伤的潜在生物学标记物,对预测疾病严重程度及预后有一定的临床价值。     

shRNA干扰NLRP3对晚期糖基化终末产物诱导的心肌细胞炎症反应的影响

目的  探讨沉默NOD 样受体家族pyrin域3 (NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3, NLRP3)炎性小体对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)诱导的心肌细胞损伤的调节作用及机制。 方法  H9c2心肌细胞分为4组:对照组、 AGEs组、AGEs+sh-Ctrl组、 AGEs+sh-NLRP3组,后两组细胞首先将短发夹RNA（shRNA）对照（sh-Ctrl）和shRNA干扰NLRP3（sh-NLRP3）质粒分别转染入H9c2细胞,然后后3组细胞用100 mg/L AGEs处理24 h,建立H9c2损伤模型,对照组细胞用溶剂处理24 h。Western blot检测NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)、 Caspase-3、 Caspase-9、核转录因子κB(nuclear factor κB, NF-κB) P65和磷酸化P65（p-P65）的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-18和IL-1β的水平,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光染色检测细胞核中NF-κB P65的水平。结果  AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组NLRP3、 ASC、Caspase-3和Caspase-9的表达均高于对照组( P<0.05)。与AGEs组相比,AGEs+sh-NLRP3组NLRP3、ASC、Caspase-3和Caspase-9的表达均下降( P<0.05)。与对照组相比,AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组IL-6、IL-18、IL-1β水平升高,细胞凋亡率上升(P<0.05)。AGEs+sh-NLRP3组IL-6、IL-18、IL-1β水平和细胞凋亡率低于AGEs组( P<0.05)。AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组NF-κB P65磷酸化水平及细胞核的NF-κB P65水平高于对照组(P<0.05)。与AGEs组相比,AGEs+sh-NLRP3组NF-κB P65磷酸化水平及细胞核的NF-κB P65水平降低( P<0.05)。结论  沉默NLRP3可通过抑制NF-κB P65的活化减轻AGEs诱导的心肌细胞凋亡及炎症反应。     

WNK3激酶高表达对白介素-1β诱导HEK293细胞凋亡的保护作用

目的： 观察WNK3激酶高表达对白介素-1β （IL-1β）诱导人胚肾细胞（HEK293细胞）凋亡的作用。方法：HEK293细胞分为3组：Vector+NS组、Vector+IL-1β组和WNK3+IL-1β组。Vector+NS组、Vector+IL-1β组转染对照Vector,WNK3+IL-1β组转染WNK3。药物干预时,Vector+NS组加入等量0.9%氯化钠溶液,Vector+IL-1β组、WNK3+IL-1β组加入10 ng/mL IL-1β。分别于培养0、12、24、36和48 h时,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性。孵育0、18、36 h时应用Western blot法检测Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9等凋亡蛋白。在IL-1β干预0、30、60 min时采用Western blot法检测JNK通路蛋白。 结果： Vector+IL-1β组在给药后细胞活性逐渐下降,在48 h达到最低值,WNK3+IL-1β组下降幅度较缓和,与同时间点Vector+IL-1β组比较细胞活性回升,在48 h时差异有统计学意义（ P＜0.01）。IL-1β孵育后cleaved Caspase-3和cleavedCaspase-9表达量增加。与36 h的Vector+IL-1β组比较WNK3+IL-1β组的cleaved Caspase-3显著减少,2组的cleaved Caspase-9在18 h及36 h时差异亦存在统计学意义（ P＜0.05）。WNK3转染后p-JNK的表达水平较未转染WNK3组的上升幅度降低（ P＜0.05）。 结论： IL-1β诱导HEK293细胞活性下降,而转染WNK3质粒可以有效逆转部分细胞活性。WNK3激酶通过减少JNK的磷酸化抑制Caspase途径的活化,减少细胞凋亡,起到在不利条件下保护肾脏细胞的作用。     

祛瘀护膜剂调控NLRP3/Caspase-1信号通路对RE模型大鼠食管黏膜修复的影响

目的 从食管黏膜屏障修复的角度,探讨祛瘀护膜剂对反流性食管炎(RE)模型大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)信号通路的影响,揭示祛瘀护膜剂治疗RE的作用机制.方法 将大鼠随机分空白组,模型组,西药组,祛瘀护膜剂低、中、高剂量组,每组10只.除空白组...     

哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3炎症小体及血清中IL-1β和IL-18表达变化及其意义

目的：观察哮喘患儿外周血单个核细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症小体表达水平及血清中下游因子白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18）水平变化,探讨其对患儿病情评估的意义。方法：176例哮喘患儿根据临床表现分为急性发作期组（n=91）、慢性持续期组（n=49）和缓解期组（n=36）,同期从门诊体检中心选取健康儿童60名作为对照组,采用肺功能仪检查各组研究对象肺功能。采用实时荧光定量PCR法检测各组研究对象外周血单个核细胞中NLRP3、含有CARD结构域的凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1） mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测各组研究对象血清中IL-1β和IL-18水平。结果：与对照组比较,急性发作期组、慢性持续期组和缓解期组哮喘患儿第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%）和第1秒用力呼气容积所占肺活量比值（FEV1/FVC）均降低,且急性发作期组<慢性持续期组<缓解期组,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA表达水平及血清中IL-1β和IL-18水平均高于对照组（P<0.01）;急性发作期组患儿外周血单个核细胞中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA表达水平及血清中IL-1β和IL-18水平高于慢性持续期组和缓解期组（P<0.05）,且慢性持续期组患儿高于缓解期组（P<0.05）。Pearson相关分析,哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3 mRNA表达水平与ASC、Caspase-1 mRNA表达水平和血清中IL-1β、IL-18水平均呈正相关关系（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;ASC mRNA表达水平与Caspase-1 mRNA表达水平和血清中IL-1β、IL-18水平呈正相关（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;Caspase-1 mRNA表达水平与血清中IL-1β和IL-18水平呈正相关关系（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;血清中IL-1β水平与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;IL-18水平与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）。结论：哮喘患儿外周血NLRP3炎症小体及下游因子IL-1β和IL-18水平升高,且与哮喘患儿的临床分期有关,NLRP3炎症小体通路可能促进了儿童哮喘的发病过程。