基因沉默整合素连接激酶对滋养细胞生物学功能的影响

目的：研究基因沉默整合素连接激酶（ILK）对人滋养细胞TEV-1细胞增殖、迁移和侵袭等的影响。方法：构建ILK-siRNA慢病毒载体后,转染人TEV-1细胞,分ILK基因沉默组（KD组）和空白质粒转染组（NC组）进行;qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达,MTT法、Transwell法和划痕实验等检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：基因沉默ILK后,TEV-1细胞的ILK基因和蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）,证明干扰ILK表达成功。沉默ILK后,TEV-1细胞的增殖能力、侵袭能力、迁移能力均显著下降（P＜0.05或P＜0.01)。ILK-siRNA转染TEV-1细胞后,MMP-9和p-GSK3β mRNA和蛋白水平显著下降（P＜0.01）。结论：沉默ILK通过下调GSK3β和MMP-9的表达抑制人滋养细胞的增殖、迁移和侵袭。     

右美托咪定减轻皮质酮抑制神经干细胞的增殖作用及机制

目的：探讨右美托咪定（DEX）减轻皮质酮（CORT）抑制神经干细胞（NSCs）的增殖作用及其可能的作用机制。方法：取孕15 d SD大鼠，分离胎鼠大脑皮质培养原代NSCs，进行NSCs标志蛋白神经上皮干细胞蛋白（Nestin）和胚胎干细胞关键蛋白（SOX2）染色鉴定；RT-PCR法检测肾上腺α-2受体各亚型α-2A受体、α-2B受体及α-2C受体在NSCs上的表达；将NSCs分为Control组、DMSO组、CORT组（CORT 1 μmol/L孵育24 h）和DEX组（DEX 0.01、0.1、1 μmol/L预处理1 h后，再加入CORT继续孵育24 h）。LDH法检测NSCs的细胞毒性；EdU法检测细胞增殖能力；Western blot检测NSCs GSK-3β/β-catenin通路GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1表达水平。结果：分离的原代细胞经Nestin蛋白和SOX2蛋白染色鉴定NSCs的纯度超过97%；RT-PCR结果显示肾上腺α-2受体的3种亚型在NSCs上均有表达；LDH法显示各组之间LDH的释放量差异无统计学意义。EdU法显示与Control组比，CORT组的NSCs增殖能力显著被抑制（P＜0.05）；与CORT组相比，当DEX剂量增加至1 μmol/L时，NSCs的增殖能力有所恢复（P＜0.05）。Western blot结果表明与Control组、DMSO组比，CORT组p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1蛋白的相对表达量显著下降（P＜0.05），与CORT组比，1 μmol/L DEX预处理后，p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1蛋白的相对表达量有所提升（P＜0.05），Total GSK-3β蛋白在各组间的相对表达量没有明显变化；PI3K磷酸化抑制剂LY294002拮抗DEX对NSCs增殖的保护作用（P＜0.05）。结论：DEX可以减轻CORT抑制NSCs的增殖作用，其机制与GSK-3β/β-catenin信号通路有关。     

人参皂苷Rh2通过调控GSK-3β/Wnt双信号通路影响骨肉瘤细胞增殖和凋亡

目的：探讨人参皂苷Rh2（Rh2）对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并进一步研究Rh2在骨肉瘤中抗肿瘤作用的机制。方法：分别以不同浓度的Rh2 处理骨肉瘤细胞,用MTT法检测骨肉瘤细胞活性的变化;用基质凝胶（Matrigel）侵袭和孔膜法（Transwell）迁移实验检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力的变化;用Annexin V-FITC/PI调亡检测试剂盒及流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的调亡变化;用Western blot法检测细胞侵袭、凋亡相关蛋白的表达情况。结果：骨肉瘤细胞经过不同浓度的Rh2处理后,MTT实验结果表明Rh2在一定浓度范围内可以显著抑制骨肉瘤细胞的生长（P ＜0.05）。Matrigel侵袭和Transwell迁移实验结果表明Rh2可以有效抑制骨肉瘤细胞的侵袭与迁移（P ＜0.05）。Annexinv-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测结果表明,Rh2可以促进骨肉瘤细胞的凋亡反应（P ＜0.05）。Western blot实验结果则显示Rh2 可以上调Bax、E-cadherin蛋白的表达,并抑制Bcl-2、PARP、MMP2、MMP9 蛋白的表达。Rh2 还可以通过激活GSK-3β并抑制β-catenin、Cyclin D1和C-myc相关蛋白来达到调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭反应的作用。结论：Rh2可以抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,这种作用可能是通过激活GSK-3β并抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

Wnt/β-catenin信号通路调控人神经干细胞衰老过程的研究

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路对人神经干细胞（neural stem cells, NSCs）衰老的调控作用。方法将人胚胎干细胞分化为NSCs,经MPTP（1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶）处理后,检测细胞的衰老表型和Wnt/β-catenin相关蛋白表达变化。分别应用AR-A014418、DKK1蛋白激活、抑制Wnt/β-catenin通路后,检测Wnt/β-catenin信号通路改变对细胞衰老表型的影响。检测各实验组和对照组中促炎因子CCL3、CXCL10、CXCL11、TNF-α的表达变化。结果经MPTP处理后,NSCs显示衰老表型,表现为SA-β-gal阳性细胞明显增多,胞内ROS水平明显升高、细胞增殖活性受到抑制（P<0.01）。同时,Wnt1、β-catenin蛋白表达降低,磷酸化GSK3β表达升高。AR-A014418激活了Wnt/β-catenin通路,缓解了细胞的衰老表型;DKK1蛋白抑制了Wnt/β-catenin通路,加重了细胞的衰老表型。Wnt/β-catenin通路能调控NSCs衰老过程中促炎因子的表达。结论Wnt/β-catenin信号通路能够调控MPTP诱导的NSCs衰老过程。     

HER3影响辐照诱导的Luminal A型乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的：探讨敲低人表皮生长因子受体?3（human epidermal growth factor receptor?3,HER3）表达及联合辐照对Luminal A型乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法：利用短发夹RNA（shRNA）稳定转染乳腺癌细胞MCF?7和ZR75?1,敲低HER3表达。蛋白免疫印迹实验（Western blot）检测细胞转染效率。将转染空病毒的对照组（shRNA?Control）与HER3敲低组（shRNA?HER3）细胞进行6?Gy X线辐照,细胞划痕实验及侵袭实验（Transwell assay）分析各组乳腺癌细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测紧密连接蛋白Claudin?1的表达变化。结果：敲低HER3后,乳腺癌细胞MCF?7和ZR75?1内HER3蛋白表达水平明显降低。单纯辐照的乳腺癌细胞,迁移和侵袭能力增强,Claudin?1蛋白表达增加;而敲低HER3及联合辐照后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力降低,Claudin?1蛋白表达明显降低。结论：敲低HER3表达可以降低辐照诱导的luminal A型乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能通过下调紧密连接蛋白Claudin?1的表达而实现。     

二苯乙烯苷对APP 可变剪接的调节和干预作用

目的：β淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）聚集形成的老年斑是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的重要病理特征之一,由淀粉样前体蛋白（amyloid precusor protein,APP）经成淀粉途径多次水解形成。人APP 基因表达受可变剪接调控,人脑内有三种APP 可变剪接异构体产物。根据这些APP 可变剪接异构体是否表达外显子7,可分为APP-KPI+ 和APP-KPI- 两种类型。据报道,APP-KPI+ 在脑内的表达水平与Aβ的产生呈正相关。GSK3β是脑内和AD 相关的最主要的激酶之一,它的活性在AD 脑内增加,是AD 治疗中的一个潜在的重要靶点。我们的前期研究发现,二苯乙烯苷（stibene glucoside,TSG）能够减少APP 转基因小鼠脑内Aβ含量和淀粉样斑块数量,改善学习记忆功能,但TSG 对APP 可变剪接和GSK3β的影响尚不清楚。方法：构建包含APP 外显子7、8 可变剪接的微型基因（mini-gene）。人胚胎肾细胞（HEK-293FT）、小鼠神经母细胞瘤细胞（Neuro-2a,N2a）内转染APP mini-gene 来模拟APP 外显子7、8 在体内的剪接。在神经细胞N2a 内过表达GSK3β或下调其表达,用RT-PCR 和qPCR 观察GSK3β对APP 可变剪接的影响。在HEK-293FT 细胞内共表达剪接因子ASF 和磷酸激酶GSK3β,用HA 抗体免疫共沉淀ASF,GSK3β抗体检测ASF 与GSK3β之间是否存在相互作用。将ASF、GSK3β单独或者共转染至HeLa 细胞中,用荧光二抗进行染色,观察ASF 和GSK3β的细胞定位。APP/PS1 转基因鼠TSG（50 mg·kg-1·day-1）灌胃处理12 个月,用Western blot 或qPCR 观察鼠脑内相关蛋白在mRNA 和蛋白水平发生的改变。结果：APP mini-gene 在HEK-293FT 和N2a 细胞系内进行表达,RT-PCR 结果可见三个条带,经测序分别是APP770,APP751 和APP695。过表达GSK-3β促进APP 微型基因产物APP-KPI+ 在N2a 细胞内的表达,siGSK3β则抑制APP-KPI+ 表达量;不同浓度LiCl 处理SH-SY5Y 细胞,内源性APP-KPI 表达量随LiCl 浓度增高而降低。SR 蛋白ASF 对APP-KPI+ 的表达影响最大,是最为重要的APP 可变剪接调控因子。GSK3β可以被ASF 免疫共沉淀,存在生理上的相互作用,并且免疫共定位实验显示ASF 与GSK3β有很好的细胞内共定位。TSG 抑制细胞内APP-KPI+ 的表达量,同时发现细胞内AKT-GSK3β信号通路可被TSG 激活。在体内实验中,5 月龄APP/PS1 转基因小鼠灌胃给药TSG12 个月后,脑内AKT 和GSK3β磷酸化水平增加,APPKPI+表达水平降低。结论：成功构建了研究APP-KPI 表达的微型基因。TSG 可以激活神经细胞和APP/PS1 转基因鼠脑内的AKT-GSK3β通路;GSK3β通过与剪接因子ASF 相互作用,从而抑制其促进APP-KPI+ 生成的能力;在体内长期喂食TSG 可降低APP-KPI+ 表达。     

SOX2-OT/SOX2轴通过Gli1介导的上皮间质转化调控肺鳞癌H520细胞的迁移

目的 探讨SOX2-OT在肺鳞癌细胞H520迁移能力调控中的作用并阐明其机制。方法 选用肺癌细胞株中SOX2-OT高表达的肺鳞癌细胞H520,敲低其SOX2-OT转录水平,通过细胞划痕实验和穿膜实验对细胞迁移能力进行检测,qRT-PCR和免疫印迹方法检测上皮间质转化（EMT）相关因子的表达。通过过表达Gli1进一步分析SOX2-OT的作用机制;用miR-200c抑制剂或类似物转染细胞,分析SOX2-OT对Gli的正向调控机制。结果 敲低SOX2-OT抑制了H520细胞的侵袭和迁移能力,同时伴随着细胞EMT表型的变化。SOX2-OT能够正向调控转录因子Gli1,Gli1过表达可逆转SOX2-OT敲低对细胞迁移能力的抑制作用。miR-200c抑制剂可有效逆转SOX2-OT敲低导致的SOX2下调。结论 SOX2-OT/SOX2轴通过Gli1介导的EMT过程来调控肺鳞癌细胞H520的迁移和侵袭能力。     

SPAG5通过影响JAK2/STAT3信号通路磷酸化促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的：探究人类精子相关抗原5（sperm?associated antigen 5,SPAG5）对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法：采用qRT?PCR和Western blot筛选相应SPAG5高表达细胞株和低表达细胞株;分别设计并构建重组SPAG5敲减/过表达质粒（siRNA?SPAG5/OE?SPAG5）,通过慢病毒表达质粒系统,制备敲减/过表达SPAG5的稳定细胞株;采用CCK?8增殖实验和裸鼠成瘤实验,检测乳腺癌细胞增殖能力的变化;采用细胞划痕实验、Transwell细胞实验检测乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的变化;采用qRT?PCR和Western blot检测JAK2/STAT3通路和下游蛋白的变化;采用WP1066抑制JAK2/STAT3通路,检测细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：相较于各自对照组,SPAG5敲减的 si1?MDA?MB?231组细胞SPAG5 mRNA 和蛋白水平显著降低,SPAG5过表达的OE?MCF?12A组细胞SPAG5 mRNA 和蛋白水平显著升高（P＜0.05）;同时,si1?MDA?MB?231组细胞的增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,OE?MCF?12A组细胞得到增强（P＜0.05）;si1?MDA?MB?231组细胞的JAK2/STAT3通路磷酸化水平和下游蛋白表达受抑制（P＜0.05）,OE?MCF?12A组细胞的JAK2/STAT3通路磷酸化水平和下游蛋白表达水平提高（P＜0.05）;抑制JAK2/STAT3通路后SPAG5对乳腺癌细胞增殖和侵袭的促进作用消失（P＜0.05）。结论：SPAG5通过JAK2/STAT3信号通路增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

苦参碱调控Wnt/β⁃catenin途径抑制宫颈癌细胞系Caski细胞侵袭迁移

目的：基于Wnt/β?catenin途径探索苦参碱抑制人宫颈癌细胞系Caski细胞侵袭迁移的分子机制。方法：Caski细胞用不同浓度苦参碱处理后,MTT法检测细胞增殖抑制情况;Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞侵袭迁移情况;ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP?9）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的分泌变化;实时荧光定量PCR检测细胞糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK?3β）、Wnt2B蛋白的表达情况;免疫蛋白印迹检测细胞β连环蛋白（β?catenin）、磷酸化β连环蛋白（p?β?catenin）含量。结果：苦参碱对Caski细胞的增殖具有抑制作用（P＜0.05）,且呈现时间、浓度依赖性;苦参碱抑制Caski细胞的侵袭迁移率（P＜0.05）,对Caski细胞分泌MMP?9、VEGF的能力具有显著抑制作用（P＜0.05）;苦参碱可显著降低Caski细胞Wnt2B mRNA的表达及β?catenin的蛋白含量,增加Caski细胞中GSK?3β mRNA的表达和p?β?catenin的蛋白含量。结论：苦参碱通过促进Caski细胞Wnt/β?catenin通路中GSK?3β mRNA表达,提高p?β?catenin蛋白含量,降低Wnt2B mRNA表达、β?catenin蛋白含量以及Caski细胞内MMP?9、VEGF的分泌,进而抑制Caski细胞的侵袭迁移。     

五味子乙素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制膀胱癌增殖、迁移和侵袭

目的：探讨五味子乙素（schisandra B,SchB）对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法：采用不同浓度的五味子乙素溶液（0、20、40、80μmol/L）处理膀胱癌细胞，CCK-8法检测五味子乙素对膀胱癌细胞增殖的影响；Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测五味子乙素对膀胱癌细胞迁移的影响；Transwell侵袭实验检测五味子乙素对膀胱癌细胞侵袭能力的影响；Western blot检测细胞内β-catenin、c-myc蛋白表达水平的变化。结果：五味子乙素呈时间和剂量依赖性抑制T24和UM-UC-3细胞的增殖能力（P<0.05）。细胞划痕愈合率、迁移和侵袭细胞数随着五味子乙素浓度增加而降低（P<0.05）。五味子乙素能够下调膀胱癌细胞内β-catenin和c-myc蛋白的表达（P<0.05）。结论：五味子乙素可抑制人膀胱癌T24和UM-UC-3细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活可能是其发挥抑癌作用的主要机制。     

岩藻糖基转移酶II对前列腺癌细胞生物学功能的影响及机制

目的：探讨岩藻糖基转移酶II（FUT2）对前列腺癌细胞生物学功能的影响及其潜在机制。方法：通过免疫组化技术检测FUT2 在前列腺癌组织中的表达情况。利用脂质体转染技术构建低表达FUT2的前列腺癌细胞株及其对照细胞株,并通过MTT实验、平板克隆实验、Transwell实验检测干扰FUT2表达对前列腺癌细胞生物学功能的影响。采用Western blot检测β-catenin、Cyclin D1和ICAM-1等蛋白表达水平。结果：FUT2在前列腺癌组织中的表达水平明显升高（P ＜0.05）。干扰FUT2的表达后,前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,Cyclin D1表达下调,ICAM-1表达上调（P ＜0.05）。结论：FUT2促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

大蒜活性成分二烯丙基三硫化物调控Wnt通路抑制香烟烟雾增强的胃癌干细胞干性

目的:探讨大蒜活性成分二烯丙基三硫化物(diallyl trisulfide,DATS)能否干预香烟烟雾促进的SGC-7901源胃癌干细胞干性,并探究Wnt通路在其中的作用.方法:用不同浓度(0％、0.25％和0.50％)的香烟烟雾悬液和DATS单独或联合处理SGC-7901源胃癌干细胞7 d,显微镜下观察胃癌干细胞球...     

eIF3b在三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的：探讨真核细胞翻译起始因子3 的亚基b（eIF3b）基因在三阴性乳腺癌（TNBC）增殖和侵 袭中的作用。方法：采用免疫组化法检测50 例TNBC组织中eIF3b蛋白的表达;应用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、细胞计数试剂盒8（CCK-8）、细胞克隆形成、细胞划痕实验、细胞侵袭实验,以及蛋白质印迹（Western blot）法分别检测RNA干扰（RNAi）前后MDA-MB-231细胞株eIF3b mRNA表达、细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭能力的变化,以及β-Catenin、C-myc蛋白的表达。结果：50例TNBC中eIF3b高表达率为74%,显著高于癌旁正常组织（P ＜0.01）,与Ki-67 表达、淋巴结转移有关（P ＜0.05）,而与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P ＞0.05）。RNAi后MDA-MB-231细胞株的eIF3b mRNA水平显著下降（P ＜0.05）,细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组（P ＜0.05）,Western blot结果显示β-Catenin蛋白和C-myc蛋白表达水平显著低于对照组（P ＜0.05）。结论：eIF3b在TNBC组织中高表达;eIF3b基因沉默可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与阻断Wnt/β-Catenin信号通路影响细胞周期有关。     

SOX7在肾细胞癌中的表达及其对肾癌细胞生物学行为的影响

目的:研究Y性别决定基因7(sex determining region Y-box7,SOX7)在肾细胞癌的表达以及对肾癌细胞生物学行为的影响.方法:qRT-PCR和甲基化特异性PCR(MSP)检测SOX7在肾细胞癌组织和肾癌细胞(A498、ACHN、786-O)中的mRNA表达及甲基化状态;免疫组织化学法(immu...     

miR-211对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化功能的影响及机制

目的 研究microRNA-211(miR-211)对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化(EMT)功能的影响及其相关机制.方法 SKOV-3卵巢癌细胞株分别转染miR-211模拟物(211M组)及其阴性对照模拟物(NCM组),并设立未转染对照组,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-211含量;Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法检测3组细胞Snail、α-连环蛋白(α-Catenin)和与性别决定相关的高迁移率基因群4(SOX4)表达水平;采用Western blot法检测SOX4过表达对miR-211抑制EMT的拮抗作用;双荧光素酶实验检测miR-211与SOX4的关系.结果 211M组miR-211的表达水平明显上调,表达水平为未转染对照组的(706.67±30.95)倍(P<0.05).211M组迁移细胞数量为(12.32±0.77)个/视野,明显低于未转染对照组的(82.25±1.05)个/视野(P<0.05).211M组侵袭细胞数量为(9.22±0.32)个/视野,明显低于未转染对照组的(62.10±1.77)个/视野(P<0.05).211M组细胞Snail蛋白表达量明显降低,α-Catenin蛋白表达量明显升高,SOX4蛋白表达量明显降低.SOX4+211M组卵巢癌细胞中Snail蛋白表达量明显升高, α-Catenin蛋白表达量明显降低.双荧光素酶检验结果显示SOX4为miR-211的下游靶基因.结论 miR-211可能通过降低下游靶基因SOX4水平影响EMT相关蛋白表达,抑制卵巢癌SKOV-3细胞的EMT功能.     

SOX4基因在前列腺癌中的表达及二烯丙三硫对其表达的调节作用

目的 研究SOX4基因在前列腺癌患者中的表达;探讨二烯丙三硫 (DATS)对SOX4表达阳性前列腺癌细胞的生物学作用及对SOX4表达的调节作用。方法 采用免疫组织化学PV 9000二步法检测141例前列腺癌患者SOX4的表达,观察其与临床病理指标和预后的关联。采用不同浓度(0、20、40、60μmol/L)DATS处理前列腺癌Vcap细胞株,细胞增殖活性MTS法测定Vcap细胞的增殖能力;细胞体外侵袭实验检测40μmol/L DATS对Vcap细胞侵袭能力的作用;实时定量PCR (Real time PCR)检测40μmol/L DATS作用后,Vcap细胞中SOX4 mRNA的表达水平变化。结果 SOX4蛋白在21%(28/135)的前列腺癌患者中过表达,与Gleason评分、远处转移呈正相关(P<0.05)。SOX4是影响患者生存的独立预后因素。体外实验显示,20~60μmol/L DATS对前列腺癌细胞株Vcap的生长有较明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。40μmol/L DATS明显抑制Vcap细胞的侵袭能力,并在mRNA水平上下调SOX4的表达。结论 SOX4的过表达提示前列腺癌患者预后不良。DATS抑制前列腺癌Vcap细胞的增殖和侵袭能力,并在mRNA水平上显著下调SOX4的表达。     

香参壳方对人胃癌细胞上皮间质转化及转移的影响

目的 考察香参壳方调节人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化(EMT)及转移的作用机制。方法 体外培养SGC-7901细胞,随后加入不同浓度的香参壳方含药血清进行干预。划痕实验及Transwell小室法观察SGC-7901细胞的迁移与侵袭能力,MTT法考察SGC-7901细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中N-cadherin、Vimentin、E-cadherin、p-GSK3β/GSK3β、β-Catenin表达水平。结果 香参壳方可有效抑制SGC-7901细胞的迁移及侵袭能力,抑制其增殖,同时下调细胞中N-cadherin、Vimentin、p-GSK3β/GSK3β及β-Catenin的表达,上调E-cadherin的表达。结论 香参壳方主要通过介导GSK3β/β-Catenin信号通路抑制胃癌细胞的EMT,降低弱细胞迁移与侵袭能力,从而发挥其胃癌术后的辅助治疗作用。      

下调乙酰辅酶A合成酶2通过诱导自噬抑制非小细胞肺癌细胞增殖

目的：探讨乙酰辅酶A合成酶2（ACSS2）在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中的表达及其对细胞增殖、侵袭的调控机制。方法：采用蛋白质印迹（Western blot）实验检测并分析NSCLC细胞系A549和H1299与人成纤维细胞HFF-1中ACSS2表达的差异。利用慢病毒在NSCLC细胞系中构建ACSS2敲低（ACSS2 KD组）和对照细胞系（NC组）。采用MTT实验及细胞克隆形成实验分析ACSS2 对NSCLC细胞增殖的影响。采用划痕实验和Transwell实验分析ACSS2对NSCLC细胞的迁移和侵袭能力的影响。Western blot及免疫荧光实验分析敲低ACSS2 对细胞自噬的影响。结果：与人成纤维细胞HFF-1相比,NSCLC细胞中ACSS2 的蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05）。与NC组相比,ACSS2 KD组细胞增殖能力和细胞活力显著降低,ACSS2 KD组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低（均P ＜0.01）。Western blot和免疫荧光实验显示,敲低ACSS2 细胞自噬活性明显增加,自噬小体增多（P ＜0.01）。但是,敲低ACSS2几乎不影响caspase3和caspase8的蛋白表达水平（P ＞0.05）。ACSS2 shRNA+Beclin1/Atg7-shRNA共转染A549细胞（ACSS2+Beclin1/Atg7 KD组）,结果显示与ACSS2KD组比,ACSS2 KD+Beclin1/Atg7 KD组细胞增殖能力有所增强,克隆形成数目明显增多（P ＜0.05）。结论：ACSS2在NSCLC细胞中高表达,促进细胞的增殖、侵袭。下调ACSS2可诱导NSCLC细胞发生自噬性细胞死亡,抑制细胞增殖。