冷缺血时间对大鼠部分肝移植存活率的影响

目的　建立新的稳定 5 0 %大鼠部分肝移植的模型上 ,研究不同冷缺血时间对移植术后存活率和肝再生的影响。方法　 A组为对照组 :5 0 %肝切除 ;实验组 :5 0 %部分肝移植组 (B、C、D组冷缺血时间分别为 4 5 min、4 h和 1 0 h)。观察各实验组生存率 ,并分别于移植术后 2 4 h、4 8h、96 h免疫组化检测各实验组增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达 ,采用统计学的方法分析不同冷缺血时间对大鼠部分肝移植术后 2 4小时存活率和肝再生的影响。结果　 B、C、D组存活率分别为 80 %、4 5 %、2 5 % ;PC-NA表达在术后 4 8小时达到峰值分别为 5 4± 5 .2 ;4 4± 3.0 ;2 0± 1 .9。D组 PCNA表达明显降低 (P<0 .0 5 )。结论　部分肝移植术后肝再生峰值较肝切除后延迟 ,冷缺血时间的延长降低了部分肝移植术后肝细胞增殖细胞核抗原表达和移植术后存活率     

小剂量环孢素A联用细胞毒T淋巴细胞A4-Ig治疗器官移植排斥反应

目的　研究小剂量环孢素A(CsA)联用细胞毒T淋巴细胞A4 Ig(CTLA4 Ig)治疗器官移植排斥反应的效果。　方法　采用Ono′s方法建立大鼠心脏移植排斥反应动物模型 ,将实验动物分为 4组。A组 :对照组 ,未给予任何治疗 ;B组 :腹腔内注射CsA ,10mg·kg-1·d-1,连续 7d ;C组 :术后第 2天 1次性注射CTLA4 Ig 10 0 μg ;D组 :术后 1～ 7d连续腹腔内注射CsA ,2mg .kg-1.d-1,术后第 2天加用CTLA4 Ig 5 0 μg。观察移植心脏存活天数及术后IL 2含量和组织学变化。　 结果　A、B、C、D 4组大鼠移植心脏存活时间分别为 ( 7 2± 0 7)、( 19 4± 2 1)、( 3 1 6± 1 8)和 ( 2 4 6± 2 1)d ,与对照组相比 ,各治疗组大鼠心脏存活时间明显延长 ,差异有显著性意义 (q =3 2 7 83 ,P <0 0 5 ) ,D组与C组相比差异无显著性意义 (q =1 86,P >0 0 5 ) ;各治疗组术后IL 2含量明显减低 ,与对照组相比差异有非常显著性意义 (q=9 82 ,P <0 0 1) ;A、B、C和D组排斥反应分级分别为Ⅳ、Ⅲ、Ⅰ和Ⅰ级。　结论　CTLA4 Ig抗排斥反应能力比CsA强 ,小剂量CsA联合使用CTLA4 Ig能增强治疗排斥反应疗效 ,两者具有正协同作用。     

抑制巨噬细胞对异种胰岛移植物的作用

目的　观察普伐他汀 (pravastatin)对异种胰岛移植物存活的影响。方法　将猪→小鼠胰岛移植模型分成A组 (对照组 )、B组 (CsA组 )、C组 (普伐他汀组 )、D组 (CsA +普伐他汀组 )。观察指标 :移植物存活时间、病理检查、免疫组化染色、血清NO含量及移植物IFN γmRNA的表达。结果　A、B、C和D组移植物平均存活时间分别为 (6 .2±0 .82 )d、(9.2± 1 .92 )d、(7.2± 1 .30 )d及 (1 1 .2± 1 .76)d,D组存活时间明显长于其它 3组 (P<0 .0 5) ;D组移植物浸润细胞较其它 3组少。术后第 4天 ,血清NO水平A组为 (1 0 5 .8± 1 9.3)mmol/L ,明显高于B组的 (88.2± 2 1 .4)mmol/L(P<0 .0 5)、C组的 (70 .7± 1 7.8)mmol/L(P<0 .0 1 )及D组的 (56 .3± 1 6 .4)mmol/L(P<0 .0 1 ) ,出现移植排斥时 ,C、D组的血清NO水平分别为 (83 .7± 1 0 .6)mmol/L及 (71 .3± 1 3 .8)mmol/L ,仍较A组低 (P<0 .0 5) ,B组为 (1 0 4 .7± 1 6 .3)mmol/L ,与A组比较差异无显著性意义 (P>0 .0 5)。术后第 4天血清IFN γmRNA表达 ,D组为 2 3 .5± 4 .6 ,较A组的2 8.8± 4 .8低 (P<0 .0 5) ,而B、C组与A组间差异无显著性意义 (P>0 .0 5)。结论　普伐他汀能抑制巨噬细胞活性 ,延长异种胰岛移植物存活 ,尤其与CsA联用效果更好     

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目的　介绍一种新的肝移植术式 -改良背驮式肝移植术 (腔静脉整形 )。方法　对 2 0 0 0年 6月至2 0 0 2年 4月期间采用改良背驮式肝移植 (腔静脉整形 )技术完成的 69次肝移植术的临床资料进行总结 ,并与同期采用经典原位肝移植技术完成的 3 2例肝移植病人资料进行对比。结果　改良背驮式肝移植组和经典原位肝移植组无肝期时间分别为 (4 2 1± 12 4)min和 (71± 18)min(P <0 0 5 ) ;失血量分别为 (2 40 0± 115 0 )mL和 (5 3 0 0± 2 10 0 )mL(P <0 0 5 ) ;输血量分别为 (2 80 0± 13 0 0 )mL和 (5 40 0± 190 0 )mL(P <0 0 5 ) ;术后 1天腹腔引流量分别为 (3 72± 89)mL和 (12 66± 43 8)mL(P <0 0 5 ) ;前者无腔静脉并发症发生 ,后者发生腔静脉并发症 9例。结论　改良背驮式肝移植术能明显简化切肝、植肝手术操作 ,显著缩短无肝期时间、减少出血、输血量以及腔静脉并发症 ,优于经典的原位肝移植术和背驮式肝移植术 ,并适用于各种肝移植适应证     

风湿性心脏病二尖瓣和主动脉瓣Ⅰ、Ⅲ型胶原重建的研究

目的　对风湿性心脏病二尖瓣、主动脉瓣胶原重建进行定性、定位、定量研究。方法手术切除风湿性二尖瓣和主动脉瓣组织各 3 0枚 ,尸检中取人正常二尖瓣和主动脉瓣组织各 5枚。应用免疫组织化学技术结合图像自动分析方法观察二尖瓣和主动脉瓣Ⅰ、Ⅲ型胶原分布及含量的变化。结果　正常二尖瓣组织Ⅰ、Ⅲ型胶原分别为 11.78± 0 .86、8.72± 0 .64 ,明显高于主动脉瓣组织 (9.5 6± 0 .3 2、6.82± 0 .3 4) (P <0 .0 5 ) ,二尖瓣Ⅰ /Ⅲ胶原比值 (1.3 6± 0 .0 6)低于主动脉瓣(1.42± 0 .0 8) (P <0 .0 5 ) ;风湿性病变时 ,二尖瓣和主动脉瓣Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及Ⅰ /Ⅲ比值均增加 ,分别为 (2 2 .3 2± 2 .82、10 .76± 1.0 8、2 .0 6± 0 .12 )和 (16.86± 2 .3 6、9.12± 1.76、1.86± 0 .3 2 ) ,以Ⅰ型胶原为主 ,明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。结论　风湿性二尖瓣和主动脉瓣胶原重建以Ⅰ型胶原增加为主 ,呈修复性纤维化改变。     

大鼠胰腺移植急性排斥反应中调节激活正常T细胞表达和分泌因子的作用

目的　探讨在大鼠胰腺移植急性排斥反应中调节激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)的作用。方法　对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型施行胰腺移植。术后1、4、7、10d4个时间点取材,采用酶联免疫吸附法检测受体血清RANTES的浓度,免疫组织化学法测定移植胰腺组织RANTES蛋白表达水平。结果　急性排斥反应在术后7d达高峰。术后1、4、7、10d受体血清RANTES浓度在同系移植组分别为(3 5 7.87±63 .2 6)、(2 74.77±5 8.2 2 )、(2 65 .87±43 .40 )、(2 67.5 5±48.91)ng/L ,除1d外与对照组比较差异无统计学意义(2 5 1.18±44 .94)ng/L ;在异系移植组分别为(3 88.48±10 4.45 )、(5 86.72±90 .0 6)、(746.2 8±92 .64 )、(63 1.49±10 6.3 4)ng/L ,与对照组比较差异有统计学意义(P <0 .0 5 )。移植胰腺组织RANTES蛋白的表达强度在同系移植组中与对照组比较无显著变化,而在异系移植组随排斥反应的发展呈动态变化,在4d为中度阳性,至7d表达为强阳性。结论　胰腺移植急性排斥反应过程与RANTES的表达密切联系,移植术后对RANTES进行动态检测有助于胰腺移植急性排斥反应的早期诊断     

肝癌患者血浆肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子含量变化及意义

目的　探讨原发性肝癌 (PLC)患者血中Th1、Th2细胞因子变化规律及患者机体细胞免疫功能低下的原因。方法　应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测PLC患者、良性肝胆疾病及肝硬化患者外周静脉 (PV)及脾静脉 (SV)血中肿瘤坏死因子 α(TNF α)、粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)及白细胞介素 4(IL 4)的含量。结果　PLC患者PV及SV血中TNF α、GM CSF含量 [(12 4.90± 48.81)ng/L ,(10 1.88± 47.2 4)ng/L ,(2 4.91± 12 .69)ng/L ,(2 2 .0 4± 12 .5 7)ng/L]低于良性病组 ,而IL 4含量 [(0 .92± 0 .3 6)ng/L ,(1.11± 0 .45 )ng/L]高于良性病组。Ⅱ、Ⅲ期PLC患者PV及SV血中TNF α、GM CSF含量低于Ⅰ期 ;IL 4含量高于Ⅰ期 ;Ⅱ、Ⅲ期PLC患者SV血中TNF α、GM CSF含量均低于PV血中含量 ,而SV血中IL 4含量则高于PV血中含量。结论　PLC患者机体存在着Th1、Th2细胞因子失衡 ;中、晚期PLC患者血中Th1细胞因子含量下降、Th2细胞因子含量升高 ;这可能是导致PLC患者细胞免疫功能下降的原因之一 ;中、晚期PLC患者的脾脏可能存在某些免疫抑制因素 ,并可能参与了抑制机体细胞免疫功能的形成过程。     

血清1,25(OH)_2D测定及女性正常值的建立

目的　研究建立血清 1,2 5( OH) 2 D含量的检测方法及女性正常值。方法　用特定的试剂和分离柱分离纯化样品后 ,放免分析法测定 ,并观察不同年龄段女性人群的血清 1,2 5( OH) 2 D含量变化规律。结果　女性健康人群的血清 1,2 5( OH) 2 D正常值范围是 5.5～ 60 .8pg/ ml,均值是 2 7.7± 11.0 pg/ml,且血清 1,2 5( OH) 2 D含量随着年龄的增加逐渐下降 ( P<0 .0 1) ,两者呈中度相关 ( r=- 0 .4 73,P<0 .0 1)。结论　血清 1,2 5( OH) 2 D含量的正常值范围应按不同性别、不同年龄段设置和建立     

重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响

目的　了解重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响。方法　建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性 2种大鼠肝纤维化模型 ,在造模的同时给予不同剂量的重组人肝再生增强因子 (hALR)。在不同的时间点留取大鼠肝组织标本 ,提取总RNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平。结果　在两种模型中hALR低剂量组大鼠肝组织I型胶原 (CCl4模型 2、4、6、8周分别为 1 .71± 0 .2 6、3 .42± 0 .67、3 .76± 0 .43、3 .3 3± 0 .69;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为 3 .86± 0 .66、2 .98± 0 .40 ) ,Ⅲ型胶原(CCl4模型 2、4、6、8周分别为 0 .97± 0 .1 6、2 .0 3± 0 .3 2、1 .86± 0 .3 3、1 .66± 0 .2 3 ;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为 2 .63± 0 .3 4、2 .0 2± 0 .3 2 )的基因表达水平在模型形成的不同阶段均明显低于模型组 ;高剂量hALR组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平均明显低于低剂量组。结论　重组人肝再生增强因子可能有抑制大鼠实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的作用。     

转录因子LAP反式激活α1(I)胶原基因在肝脏星状细胞中的表达

目的　了解激活的肝脏星状细胞 (hepaticstellatecell,HSC)中一种肝脏组织特异的转录因子 肝脏激活蛋白 (liveractivatorprotein ,LAP)在α1(I)基因表达调控中的作用。方法　采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注、Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC ,并进行体外培养使之活化。构建含人α1(I)胶原基因启动子片段 ( -80 4～ 14 5 2或 -80 4～ 2 2 2碱基 )的荧光素酶报告基因质粒。用构建的报告基因质粒与LAP表达质粒一起 ,用阳离子脂质体介导的方法 ,瞬时共转染激活的HSC细胞。α1(I)基因启动子的活性通过测定荧光素酶活性来确定。结果　构建的含α1(I)基因第一内含子片段的荧光素酶报告基因 (PGL3 col)比不含α1(I)基因第一内含子的报告基因〔PGL3 col( △intron)〕在HSC中有较强的表达 (荧光素酶活性为 3 15± 45U/mg蛋白与 2 2 0± 70U /mg蛋白 ,P <0 .0 5 )。瞬时共转染LAP表达质粒可明显增强PGL3 col及PGL3 col( △intron)报告基因在HSC中的表达 (荧光素酶活性分别为 5 87± 62U /mg蛋白与3 15± 45U /mg蛋白及 3 2 6± 5 2U/mg蛋白与 2 2 0± 70U /mg蛋白 ,两者比较 ,P <0 .0 5 )。 结论　LAP可以反式激活 (诱导 )α1(I)基因在活化的HSC中表达 ,在其转录调控中起重要作用     

表皮细胞生长因子与碱性成纤维细胞生长因子促进创面修复效应的比较性研究

目的 采用小型猪背部创伤模型,定量研究与比较重组人表皮细胞生长因子与重组人碱性成纤维细胞生长因子的促修复效应与作用机制。方法 以创伤模型制作器切割小型猪背部皮肤,造成典型全层皮肤损伤。将１６只小型猪背部的１６０个创面分成两大组,分别以三种不同剂量的ｒｈＥＧＦ（５０,１０及０．５μｇ／创面）和ｒｈＦＧＦ（１５０、９０及３０Ｕ／ｃｍ＾２创面）治疗,每组同时各设溶媒为阴性对照。以伤腔容积与创面愈合面积,     

Surgical Site Infections and their economic significance in hepatopancreatobiliary surgery: A retrospective incidence,cost, and reimbursement analysis in a German centre of the highest level of care

Surgical site infections (SSI) in open Hepatopancreatobiliary (HPB) surgery are common complications. They worsen patients’ outcomes and prolong hospital stays. Their economic significance in the German diagnosis related groups (DRG) system is mostly unknown. To investigate their economic importance, we evaluated all cases for SSIs as well as clinical and financial parameters undergoing surgery in our centre from 2015 and 2016. Subsequently, we carried out a cost‐revenue calculation by assessing our billing data and the cost matrix of the InEK (German Institute for the Payment System in Hospitals). A total of 13.5% of the patients developed a superficial, 9% a deep incisional, and 2.4% of the patients an organ space SSI. Compared with Patients without SSI, Patients with SSI had more comorbidities, were older, and their average length of stay was extended by 19 days (P < .001). The financial loss per SSI‐case was €‐7035.65 despite increased reimbursement, which resulted in a calculated total loss for the hospital of €‐802 064.62 in 2015 and 2016. Surgical site infections are common complications of open HPB surgery, which lead to a significant increase in the cost per case. Further prevention strategies need to be developed. Besides, an adjustment of revenues must be demanded.     

碱性成纤维细胞生长因子在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在卵巢上皮性肿瘤的生物学行为中的作用。方法 应用免疫组织化学对１０例正常卵巢组织和８０例卵巢上皮性肿瘤进行对照研究,同时应用Ｍｉａｓ－２００图像分析系统进行定量分析,并研究恶性肿瘤中ｂＦＧＦ的表达强度与临床分期以及肿瘤类型和病理分级间的关系。结果 （１）ｂＦＧＦ主要在卵巢上皮性肿瘤细胞浆内表达,在交界型和恶性肿瘤中,部分阳性细胞同时存在细胞核表达。（２）     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对骨骼肌源性干细胞的促增殖效应

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）和表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）单独及联合应用对骨骼肌源性干细胞（muscle derived stem cells，MDSCs）生长的影响。方法取出生24h内的昆明小鼠15只，采用连续预贴壁法从小鼠后肢肌分离培养MDSCs，用含2％胎牛血清的DMEM培养基促进其向骨骼肌细胞分化。取原代MDSCs及MDSCs分化细胞，采用免疫细胞化学染色检测干细胞标志Sca-1和骨骼肌细胞标志α-Sarcomeric肌动蛋白的表达。HE染色观察细胞肌管形成。MTT比色法检测不同浓度（6．25、12．50、25．00、50．00、100．00ng／ml）的bFGF和EGF单独应用96h对MDSCs增殖的影响以及二者（100．00ng／ml）联合作用24、48、72和96h对MDSCs增殖的影响。结果从新生小鼠后肢肌成功分离培养MDSCs，免疫细胞化学染色90％以上的MDSCs呈Sca-1阳性，分化形成的肌管呈α—Sarcomeric肌动蛋白阳性。HE染色可见肌管形成。bFGF、EGF对MDSCs的促增殖效应随浓度的增加而增加。与阴性对照组比较，bFGF于12．50ng／ml出现促增殖效应（P〈0．05）；25．00ng／ml组与12．50ng／ml组比较，作用提高（P〈0．01）；50．00、100．00ng／ml组较25．00ng／ml组无明显提升（P〉0．05）；EGF的作用与bFGF类似，但于50．00ng／ml时趋于饱和。与阴性对照组比较，EGF于72h、bFGF于96h表现促增殖效应（P〈0．01），而二者联合应用于24h即表现促增殖效应（P〈0．01），并于48、72和96h增殖效应均较单独应用显著提高（P〈0．05）。结论bFGF和EGF都能促进MDSCs的增殖，联合作用更快、更强。     

In Healthy Adults,Biological Activity of Vitamin D,as Assessed by Serum PTH,Is Largely Independent of DBP Concentrations

Vitamin D insufficiency, as measured by 25‐hydroxyvitamin D (25[OH]D) levels, has been associated with important health outcomes. The majority of vitamin D in circulation is bound to vitamin D–binding protein (DBP) and albumin, and recent genetic studies have demonstrated that serum DBP is a major determinant of 25(OH)D concentrations in adults. The impact of circulating DBP levels on vitamin D's biologic action, is unclear, but is of particular relevance to vitamin D epidemiology, because a lack of control for DBP levels could strongly influence the association of vitamin D with disease. Serum parathyroid hormone (PTH) levels can act as a biological readout of 25(OH)D activity. We therefore assessed the relationship between serum total and free 25(OH)D and PTH with and without adjusting for DBP, in 2073 subjects of European descent. Total 25(OH)D levels correlated positively (r = 0.19, p = 1.8 × 10^?17) with DBP, whereas the free 25(OH)D correlated negatively (r = ?0.14, p = 5.0 × 10^?12). Total and free 25(OH)D levels correlated negatively with PTH (r = ?0.29, p = 1.3 × 10^?39; r = ?0.26, p = 1.9 × 10^?33, respectively). Including age, body mass index (BMI), sex, estimated glomerular filtration rate, calcium, and season of blood draw as covariates, total 25(OH)D levels were significantly associated with log‐transformed PTH (lnPTH) levels (linear term: β = ?0.010, p < 0.0001, squared term: β = 0.00004, p < 0.0001) and this association was not changed by adjusting for DBP. These findings provide evidence that in a largely vitamin D–sufficient cohort, the biological effect of vitamin D on PTH levels is mainly independent of DBP concentration. Accordingly, this study may provide useful information for studies investigating the relationship between vitamin D, DBP, and disease. © 2014 American Society for Bone and Mineral Research.     

神经生长因子保护受伤脊髓组织的实验研究

为了解神经生长因子（ＮＧＦ）对损伤的脊髓组织的作用，采用Ａｌｅｎ氏ＷＤ装置，以１０ｇ冲击棒自２．５ｃｍ高度下落撞击ＳＤ大鼠Ｔ８脊髓，并于蛛网膜下腔内置入导管。术后，实验组经导管注入ＮＧＦ溶液；对照组则注入生理盐水。术后４，８及２４ｈ，取脊髓损伤段标本，分别经干湿法、原子吸收光谱法测量水、钙含量。结果发现：损伤脊髓段组织钙含量明显增高，组织水肿严重；脊髓损伤后，应用ＮＧＦ可显著改善这些变化。这一实验结果证实ＮＧＦ对受伤的脊髓有明显的保护作用，其保护作用与稳定钙离子水平有关。     

生长因子与椎间盘再生

目的：追溯近阶段国内外有关生长因子与椎间盘修复研究的进展。方法：广泛渣阅近期有关生长因子与椎间盘修复的文献，综述生长因子在椎间盘突的表达，生长因子对椎间盘细胞的作用等特点，结果：多种生长因子在椎间盘生长发育和退变过程中表达，外源性生长因子能促进培养的椎间盘细胞分化增殖，合成蛋白多糖和胶原，运用腺病毒可将生长因子基因转染至椎间盘细胞。结论：生长因子在椎间盘的生长发育和退变过程中起调节作用，可望运用生长因子进行椎间盘退变治疗和修复重建。重庆