川芎嗪对视网膜色素变性小鼠干预作用的机制

目的:观察川芎嗪对视网膜色素变性rds小鼠的干预作用和机制。 方法:rds新生小鼠 84只，随机分为实验组和对照组，每组42只小鼠。实验组小鼠从出生时开始，腹腔注射盐酸 川芎嗪80 mg/kg，2次/d，直至生后35 d；对照组同时注射等量生理盐水。分别在用药 后0、3、7、1 4、21、28、35 d取实验组和对照组小鼠眼球，立即经10%中性甲醛固定，常规病理切片。另取眼球经2.5%戊二醛溶液固定，电子显微镜观察。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标 记技术(TUNEL)方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡，用免疫组织化学方法测定bcl-2在视网膜的表达。 结果:病理观察结果显示，经盐酸川芎嗪治疗后14、21、28 、35 d，rds小鼠光感 受器细胞核层数与未用药的对照组相比较，明显增加（P＜0.01）。电子显微镜观察结果显示，川芎嗪可减缓rds小鼠光感受器细胞和视网膜外段盘膜部位线粒体的病变，减少盘膜和外界膜的破坏。rds小鼠经盐酸川芎嗪治疗后3、7、14、21、28、35 d，光感受器细胞凋 亡率比对照组明显减少（P＜0.01）；治疗后3、7、14、21、28、35 d时，bcl -2在视网膜光感受器细胞及光感受器细胞内外段的表达明显增强（P＜0.05） 。 结论:盐酸川芎嗪可延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的减少，其作用机制可能是通过上调视网膜 外核层及光感受器细胞内外段bcl-2的表达延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡。     

NADPH氧化酶抑制剂对遗传性视网膜色素变性感光细胞凋亡的抑制作用

背景 我们先前的研究表明,rd小鼠遗传性视网膜色素变性（RP）过程中小胶质细胞活化与感光细胞的凋亡密切相关.研究显示,小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在小胶质细胞活化及神经元损伤中发挥重要作用,但NADPH氧化酶在RP过程中作用机制及其抑制剂的作用有待探讨.目的 探讨rd小鼠发生RP过程中NADPH氧化酶产生活性氧簇（ROS）的活化反应及其抑制剂对感光细胞的保护作用. 方法 按抛掷硬币法将60只SPF级rd小鼠随机分为香荚兰乙酮注射组和PBS对照组,香荚兰乙酮注射组小鼠于出生后9d（P9）腹腔内注射NADPH氧化酶抑制剂香荚兰乙酮10 mg/kg（0.01 ml/kg）,每日1次,连续5d（至P13）;PBS对照组rd小鼠以同样方式注射等容量的PBS;C57 BL/6N小鼠10只不注射任何药物作为rd小鼠的野生对照鼠.各组小鼠于出生后14 d（P14）处死并制备视网膜冰冻切片,采用二氢乙锭（DHE）荧光染色法检测3个组小鼠视网膜中ROS的表达;采用实时定量PCR（real-time PCR）法测定2个组rd小鼠视网膜感光细胞中视紫红质mRNA的定量表达;采用苏木精-伊红染色法检查2个组rd小鼠视网膜外核层厚度.结果 DHE荧光染色表明,小鼠视网膜中ROS表达呈红色荧光,注药组小鼠视网膜外核层中ROS的红色荧光明显强于C57BL/6N野生鼠,但明显弱于PBS对照组.Real-time PCR检测表明,香荚兰乙酮注射组小鼠感光细胞中视紫红质mRNA相对表达量为4.21 ±0.33,明显低于PBS对照组的0.93±0.24,差异有统计学意义（t=2.360,P=0.000）;香荚兰乙酮注射组小鼠视网膜外核层厚度为（35.95±1.63） μm,明显厚于PBS对照组的（23.17±1.38） μm,差异有统计学意义（t=3.850,P=0.016）.结论 在rd小鼠视网膜感光细胞变性过程中,NADPH氧化酶生成ROS的活化反应明显增强;香荚兰乙酮能够延缓rd小鼠感光细胞的凋亡过程.     

锂对视网膜色素变性小鼠光感受器细胞凋亡的保护作用

目的 研究锂在视网膜色素变性小鼠模型上对光感受器细胞凋亡的神经保护作用.方法 实验研究.FVB/NJ视网膜色素变性小鼠出生后立刻用含锂的食物喂养,7和14 d时摘除眼球做视网膜冰冻切片,同时取血测血清锂浓度.HE、TUNEL和视杆细胞免疫荧光染色进行视网膜组织形态、光感受器细胞凋亡分析.结果 光镜下可见,对照组外核层可见TUNEL阳性细胞,出生后14 d外核层厚度和细胞层数(3或4层)明显低于7 d时的厚度(9或10层),而锂喂养组出生后14 d外核层的厚度和细胞层数明显高于对照组,与出生7 d时的外核层厚度及细胞层数无明显差异.结论 锂能够保护视网膜色素变性小鼠光感受器细胞免于凋亡.(中华眼科杂志,2008,44:248-252)     

米诺环素在小鼠视神经钳夹伤后早期对视网膜神经节细胞的保护作用

背景 米诺环素在多种中枢神经系统疾病的动物模型及临床试验中显示出神经保护效应,但是否对视神经损伤有保护作用研究尚少. 目的 探讨米诺环素在小鼠视神经钳夹伤后对视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用及其作用机制.方法 采用随机数字表法将136只清洁级雄性C57BL/6J小鼠随机分成正常对照组8只、生理盐水组64只和米诺环素组64只.正常对照组不做任何处理,生理盐水组和米诺环素组用反向镊钳夹小鼠左眼视神经3s以建立视神经钳夹伤动物模型,造模后米诺环素组立即以45 mg/（kg＆#183;d）的剂量腹腔内注射米诺环素0.4ml,造模后24 h注射剂量减半,以后每日注射1次,直至处死,生理盐水组小鼠以同样的方式注射等容量的生理盐水.两组小鼠分别于造模后第4、7、11、14天处死并制备视网膜铺片,用4＆#39;,6＆#39;-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色法观察各组小鼠RGCs层细胞密度的变化.取各时间点小鼠眼球制作视网膜冰冻切片,采用TUNEL法测定RGCs的凋亡;采用实时定量PCR（real-time PCR）法检测各组小鼠视网膜小胶质细胞表面CD11b mRNA的表达.结果 在视神经损伤后第4天和第7天,生理盐水组小鼠RGCs层的细胞密度分别为（77.50±2.38）个/0.01 mm2和（70.00±2.94）个/0.01 mm2,明显低于米诺环素组的（88.75±2.36）个/0.01 mm2和（81.00±3.92）个/0.01 mm2,差异均有统计学意义（t4d=-6.708,P＜0.01;t7d=-4.491,P＜0.01）;生理盐水组RGCs凋亡数分别为（12±1）个/mm和（4±1）个/mm,明显多于米诺环素组的（4±1）个/mm和（1±0）个/mm,差异均有统计学意义（t4d=12.832,P＜0.01;t7d=3.455,P=0.026）;造模后第11天和第14天,生理盐水组小鼠RGCs层的细胞密度与米诺环素组比较差异均无统计学意义（P=0.708、0.777）,且两组小鼠视网膜均未发现凋亡细胞.Real-time PCR检测显示,造模后第4天和第7天,生理盐水组小鼠视网膜细胞CD11b mRNA表达量与米诺环素组比较明显增加,差异均有统计学意义（t4d=8.312,P＜0.01;t7d=5.407,P＜0.01）,但在造模后第11天和第14天,2个组小鼠视网膜细胞CD11b mRNA表达量的差异均无统计学意义（P=0.055、0.170）.结论 米诺环素可能在小鼠视神经钳夹伤后早期通过抑制小胶质细胞活化的机制而减少RGCs的凋亡,从而对视神经发挥保护作用.     

溶血卵磷脂酰基转移酶1自发突变小鼠视网膜组织和闪光视网膜电图改变

目的 观察溶血卵磷脂酰基转移酶1（LPCAT1）自发突变小鼠视网膜组织和闪光视网膜电图（F-ERG）改变情况。方法 Lpcat1基因自发突变纯合子的rd11新生小鼠60只（实验组）和与之同龄的野生型C57BL/6J小鼠60只（对照组）纳入实验。采用免疫荧光法检测两组小鼠视网膜组织中LPCAT1的表达情况。出生后3、6、9 d和2、4、6、8周,行视网膜石蜡切片观察视网膜显微结构;行全视野F-ERG检测,记录暗视杆体反应和明视锥体反应。结果 实验组小鼠视网膜组织中LPCAT1呈阴性表达;对照组小鼠视网膜组织中LPCAT1呈阳性表达,主要分布于视网膜光感受器内节,神经节细胞层可见少量表达。光学显微镜观察发现,实验组小鼠于出生后9 d左右视网膜外核层已基本形成,其光感受器细胞核层数随年龄增长而逐渐减少。对照组小鼠视网膜显微结构正常。F-ERG检测结果 显示,实验组小鼠出生后2、4周暗视杆体系统反应存在,呈降低趋势,出生后6~8周暗视杆体系统反应消失;对照组小鼠各时间点暗视杆体系统反应正常。出生后2周,实验组和对照组小鼠b波振幅分别为（72.8±15.6）、（105.2±21.1） μV,实验组较对照组降低,但差异无统计学意义（t=-2.760,P=0.025）。出生后4周,实验组和对照组小鼠b波振幅分别为（20.6±6.4）、（231.8±32.0） μV,实验组较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=-14.471,P=0.000）。实验组小鼠出生后2、4、6周明视锥体系统反应存在,呈降低趋势,出生后8周明视锥体系统反应消失;对照组小鼠各时间点明视锥体系统反应正常。出生后2、4周,实验组小鼠b波振幅分别为（46.8±7.2）、（78.0±8.2） μV;对照组小鼠b波振幅分别为（42.8±6.4）、（91.4±9.4） μV。两组比较,差异均无统计学意义（t=0.930、-2.401,P=0.379、0.043）。出生后6周,实验组和对照组小鼠b波振幅分别为（17.2±2.0）、（116.2±12.9） μV,实验组较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=-17.008,P=0.000）。结论 LPCAT1自发突变小鼠视网膜外层光感受器细胞核层数随年龄增长而逐渐减少,F-ERG暗视杆体和明视锥体反应异常。     

视网膜色素变性rds小鼠生后5周内视网膜外核层细胞光镜和电镜观察

目的观察遗传性视网膜色素变性rds小鼠在出生后5周内视网膜外核层细胞的光镜和超微结构变化，为进一步应用rds小鼠进行实验研究提供数据。方法rds新生鼠42只，在0d、3d、7d、14d、21d、28d、35d分别取11个眼球，立即经体积分数10％中性甲醛固定，光学显微镜下观察眼球水平位视网膜赤道部外核层细胞的厚度；另取1个眼球经体积分数2．5％戊二醛溶液固定，电镜观察外核层细胞及其盘膜。结果光镜观查结果显示：0d、3d视网膜的外核层和内核层未分开；7d的rds小鼠外核层和内核层已能区分，外核层光感受器细胞层数为（9．55±0．69）层；14d稍有增加为（10．09±0．70）层；21d后逐渐减少，为（9．00±0．63）层；28d为（8．27±0．65）层；35d为（7．91±0．70）层。电镜结果显示，rds小鼠视网膜的外核层细胞从出生后第14天凋亡细胞增加；第21天盘膜初步形成，但部分被破坏；线粒体在出生当天、第3天和7天丰富，第14天破坏较重；外界膜从第14天发展为不连续；从7d开始，视网膜色素上皮层出现多层和吞噬泡增多。结论rds小鼠从21d后视网膜外核层细胞逐渐减少，视网膜光感受器细胞外段的线粒体和外界膜破坏逐渐加重。这一结果为进一步开展rds小鼠的研究提供了科学依据。     

β趋化因子受体CCR1在遗传性视网膜变性小鼠视网膜中的表达

目的探讨B趋化因子主要的受体之一β趋化因子受体1（CCR1）在视网膜变性模型小鼠（rd小鼠）的视网膜变性过程中的表达及其在感光细胞凋亡中的病理作用。设计实验研究。研究对象出生后8、10、12、14、16及18天的rd小鼠各10只（共60只）及同龄C57BL／6N对照小鼠各10只（共60只）。方法小鼠断颈处死,取双眼眼球制作冰冻切片或分离新鲜视网膜组织。逆转录多聚酶链反应（RT．PCR）测定各鼠龄rd小鼠及对照鼠视网膜CCR1mRNA的表达水平。免疫组织化学法观察CCR1蛋白在各鼠龄rd小鼠视网膜的定位表达。CCR1在感光细胞及凋亡细胞中的表达由免疫荧光双标法确定。主要指标视网膜CCR1mRNA及蛋白的表达、CCR1的细胞定位及与凋亡细胞的关系。结果CCR1mRNA在对照组及各鼠龄rd小鼠视网膜中均有表达,但在出生后12、14天rd小鼠视网膜中表达明显升高（光密度值分别为0．986±0．17和1．152＋0．22,P=0．010和0．008）。CCR1阳性染色细胞开始出现于出生后8天的rd视网膜外核层,并于12及14天达到高峰。对照组视网膜外核层无CCRl阳性染色。CCR1与视紫红质、CD11b或TUNEL染色免疫荧光双标结果显示,CCR1表达于感光细胞而非小胶质细胞中,部分CCR1表达于凋亡的感光细胞中。结论在rd小鼠视网膜中CCR1表达于感光细胞并随其变性程度加重表达升高。CCR1的活化可能在rd小鼠感光细胞凋亡中发挥作用。     

NOX2基因缺陷对rd1小鼠感光细胞凋亡的保护作用

目的 观察NADPH氧化酶2(NOX2)基因缺陷对遗传性视网膜变性小鼠1(rd1)感光细胞的保护作用。设计 实验研究。研究对象 出生后14天的NOX2基因缺陷rd1小鼠(实验组)6只及同龄NOX2基因缺陷的C57BL/6N小鼠(对照组1)、无NOX2基因缺陷的rd1小鼠(对照组2)、C57BL/6N野生正常小鼠(对照组3)各6只(共24只)。方法 对照组1与对照组2小鼠多次交配获得实验组小鼠并进行基因型鉴定。取该实验鼠及对照组小鼠眼球,对视网膜进行HE染色并测量视网膜外核层厚度,TUNEL染色并计算凋亡细胞占外核层细胞总数百分比、免疫荧光法CD1 1b抗体标记小胶质细胞并检测NOX2主要亚单位gp91^pbox蛋白的表达。主要指标 视网膜外核层厚度,感光凋亡细胞百分比,gp91^pbox蛋白的表达量,小胶质细胞活化情况。结果 与同龄对照组2相比,实验组小鼠视网膜内外核层排列整齐,其外核层厚度(36.18±2.59)μm明显大于对照组2小鼠(21.45±1.33)μm(t=8.77,P=0.001)。实验组小鼠视网膜凋亡细胞主要出现于外核层,但数量...     

NADPH氧化酶在rd小鼠遗传性视网膜变性中的活化表达

背景研究表明,小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在中枢神经系统神经元损伤及神经变性疾病中发挥重要作用。已有研究证实NADPH氧化酶在rd小鼠视锥细胞退行性改变中的作用,但关于其在rd小鼠视网膜变性早期视杆细胞病变过程中的作用研究较少。目的研究NADPH氧化酶在rd小鼠感光细胞凋亡过程中的活化表达,探讨其在遗传性视网膜变性中的致病作用。方法取出生后8、10、12、14、16、18d的rd小鼠各18只,过量麻醉法处死后提取视网膜总RNA和总蛋白,并制备视网膜切片,分别用实时荧光定量PCR及Western blot法测定在rd小鼠感光细胞凋亡过程中视网膜中NADPH氧化酶亚单位gp91phox mRNA及蛋白的定量表达变化;采用免疫组织化学及gp91phox和CD11b免疫荧光双染法确定gp91phox在不同鼠龄rd小鼠视网膜中的表达及定位,并与其近交系C57BL／6N小鼠进行比较。结果实时荧光定量PCR研究证实,C57BL／6N小鼠视网膜中未见gp91phox mRNA的表达,而生后8d的rd小鼠视网膜中即有少量gp91phox mRNA的表达,随着鼠龄的增加,gp91phox mRNA表达量（gp91phox mRNA／β-actin）逐渐增加,生后14d达到高峰。不同鼠龄rd小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量差异有统计学意义（F=17．81,P=0．00）;生后10、12、14、16、18d的Td小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量均明显高于出生后8d小鼠,差异均有统计学意义（均P〈0．05）,以出生后14d表达量最高,为1．136±0．370。随着小鼠鼠龄的增加,视网膜中gp91phox蛋白表达量（A值）与其基因表达变化趋势一致,不同鼠龄及C57BL／6N对照小鼠间视网膜中gp91phox蛋白表达的差异有统计学意义（F=354．00,P〈0．01）,不同鼠龄rd小鼠出生后视网膜中gp91phox蛋白表达量均明显高于C57BL／6N对照小鼠,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。免疫组织化学法检测表明,rd小鼠出生后10d视网膜内层gp91phox阳性细胞开始增多,出生后14d达到高峰,外核层也可见到gp91phox阳性细胞。免疫荧光双染结果显示,gp91phox与小胶质细胞标志物CD11b共表达,呈现橙色荧光。结论NADPH氧化酶在rd小鼠视网膜中的表达随着鼠龄的增长而增多,其表达与小胶质细胞活化及感光细胞的凋亡相平行,提示NADPH氧化酶可能在小胶质细胞活化导致的感光细胞凋亡中发挥致病作用。     

rd小鼠遗传性视网膜变性中内质网应激蛋白的激活

目的 探讨rd小鼠遗传性视网膜变性光感受器细胞变性凋亡中内质网应激反应蛋白的表达变化.方法 实验研究.取出生后8、10、12、14、24 d的rd小鼠和同年龄段的正常对照C3B小鼠.免疫印迹法检验视网膜中GRP78/BiP、半胱天冬酶-12酶原(procaspase-12)和活性caspase-12、p-PERK、p-eIF2a蛋白表达变化.免疫荧光染色共聚焦显微镜观测GRP78/BiP、caspase-12、p-PERK和p-eIF2a的表达部位及表达量的变化.用SPSS单因素方差分析对数据进行统计学分析,以P＜0.01为差异有统计学意义.结果 伴随rd小鼠遗传性视网膜变性过程免疫印迹结果显示GRP78/Bip、半胱天冬酶-12酶原和活性caspase-12、p-PERK、p-eIF2a蛋白的表达上调,与正常对照组之间的差异具有统计学意义(F=65.82,55.76,152.29,50.54,20.91;P＜0.05);免疫荧光染色结果显示GRP78/Bip、easpase-12、p-PERK和p-eIF2a主要表达于视网膜光感受器细胞的内节和光感受器细胞核中.结论 在rd小鼠遗传性视网膜变性光感受器细胞变性凋亡中,内质网应激反应蛋白的激活对于光感受器细胞的凋亡具有重要作用.应用内质网应激反应调节剂可能对此类疾病起到有效治疗作甩.     

Delay of photoreceptor cell degeneration in rd mice by systemically administered phenyl-N-tert-butylnitrone

PURPOSE: To study the effect of systemic administration of phenyl-N-tert-butylnitrone (PBN) on the degeneration of photoreceptor cells in rd mice. METHODS: PBN was injected intraperitoneally into FVB/rd mice on postnatal days (P) 5 to 14 (group A), and P10 to 18 (group B). At days P14, 16, 18, 20 and 27, morphological changes and apoptosis were analyzed by staining with hematoxylin and eosin or DAPI. The effect of PBN on apoptosis was analyzed in retinal pigment epithelial (RPE) cells by the measurement of caspase-3 activity. RESULTS: In control and group B mice, the outer nuclear layer (ONL) of the retina was composed of 8-10 rows at P12, and rapidly decreased to one row at P18. In group A mice, the ONL was preserved with 5-7 rows at P18, and decreased to one row at P22. PBN inhibited caspase-3 activity in cultured RPE cells. CONCLUSIONS: PBN delayed, but did not block, the degeneration of photoreceptor cells in rd mice. PBN may exert its inhibitory effect during the early phase of photoreceptor cell degeneration.     

Activation of the TRAAK two-pore domain potassium channels in rd1 mice protects photoreceptor cells from apoptosis

AIM: To investigate the expression of TWIK-related arachidonic acid-stimulated K+ channel (TRAAK) in retinal degeneration mice (rd1) and further evaluate how TRAAK affect photoreceptor cell apoptosis. METHODS: The rd1 mice were distributed into blank (no treatment), control (1.4% DMSO, intraperitoneal injection) and riluzole groups (4 mg/kg·d, intraperitoneal injection) from postnatal 7d to 10, 14 and 18d; C57 group (no treatment), as age-matched wild-type control. The thickness of the outer nuclear layer (ONL) of retina was detected by paraffin section hematoxylin and eosin staining. The expression of TRAAK and the apoptosis of the ONL cells were detected by immunostaining, Western blotting, and real-time polymerase chain reaction. RESULTS: The channel agonist riluzole activated TRAAK and delayed the apoptosis of photoreceptor cells in ONL layer of rd1 mice. Both at mRNA and protein levels, after riluzole treatment, TRAAK expression was significantly upregulated, when compared with the control and blank group. Then we detected a series of apoptosis related mRNA and protein. The anti-apoptotic factor Bcl-2 downregulated and the pro-apoptotic factors Bax and cleaved-caspase-3 upregulated significantly. CONCLUSION: Riluzole elevates the expression of TRAAK and inhibits the development of apoptosis. Activation of TRAAK may have some potential effects to put off photoreceptor apoptosis.     

小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡

目的 研究小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡情况。 方法 将成年C57Bl/6J小鼠36只分为2组：实验组小鼠18只左眼视网膜下注射1.4%透明质酸钠造成视网膜脱离，对照组小鼠18只左眼仅作巩膜穿刺。分别于手术后1、3、7和28 d摘除眼球，视网膜切片进行组织化学、免疫荧光染色，共聚焦显微镜检查。抗视锥和抗视杆细胞的抗体分别标记视锥和视杆细胞，dUTP缺口末段标记法(TUNEL)标记凋亡细胞。通过计数存活和凋亡的视锥和视杆细胞来定量光感受器细胞的凋亡和细胞丢失。 结果 凋亡细胞只存在于脱离部分视网膜的外核层，凋亡细胞在视网膜脱离后1 d即可检测得到，3 d时达到高峰，7 d后陡然减少。视网膜脱离后视杆和视锥细胞的死亡呈现同样的时程。 结论 凋亡是视网膜脱离后光感受器细胞死亡的主要病理改变。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 124-127)     

小胶质细胞活化与rd小鼠遗传性视网膜变性

目的研究小胶质细胞活化与rd小鼠遗传性视网膜变性的关系。方法对出生后8、10、12、14、16及18d的rd小鼠及对照小鼠视网膜进行感光细胞凋亡TUNEL法检测及形态计量学分析。CD11b免疫组织化学染色标记视网膜小胶质细胞。结果rd小鼠出生后10d视网膜感光细胞层开始出现TUNEL染色阳性细胞,第16d达到高峰。视网膜小胶质细胞在rd小鼠出生后10d开始活化,第14d达到高峰。小胶质细胞向感光细胞层的迁移与感光细胞凋亡之间存在紧密的时间和空间关系。结论rd小鼠视网膜变性以感光细胞凋亡为主。小胶质细胞活化可能在视网膜变性过程中发挥重要作用。     

内源性促红细胞生成素对大鼠脱离视网膜光感受器细胞的保护作用

背景促红细胞生成素（EPO）对多种视网膜疾病模型中视网膜神经元具有一定的保护作用,但EPO对视网膜脱离（RD）后光感受器细胞是否具有保护作用尚不清楚。目的探讨内源性EPO对RD状态下光感受器细胞的保护作用及可能机制。方法利用视网膜下腔注射质量分数1．4％透明质酸钠建立大鼠RD模型,按每组情况各组玻璃体腔内分别单次注射PBS或不同剂量的外源性可溶性EPO受体（EPOsR）,采用计算机产生随机数字法将72只SD大鼠随机平均分为正常对照组、RD组、RD＋PBS组、RD＋EPOsR2、20、200ng组。分别于造模后3d和14d用过量麻醉法处死大鼠并获得大鼠视网膜标本,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测光感受器细胞的凋亡情况,并分别采用Westernblot和免疫荧光法检测视网膜中caspase-3的活性,RD造模后14d进行组织病理学检查并测量外核层（ONL）厚度。结果RD造模后3d,RD组ONL出现凋亡细胞核,玻璃体腔注射EPOsR组光感受器细胞凋亡进一步增加,随着玻璃体腔注射EPOsR的剂量增加,ONL凋亡细胞核有增加趋势。Westernblot和免疫荧光检测结果均显示,各组视网膜caspase-3表达的条带灰度值分别为（0．15±0．04）、（0．49±0．03）、（0．50±0．07）、（0．63±O．03）、（0．69±0．04）、（0．83±0．04）,各组的总体差异有统计学意义（F=76．016,P=0．000）,RD＋EPOsR200ng组的caspase-3活性均强于其他各组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。RD造模后14d,正常对照组、RD组、RD＋PBS组、RD＋EPOsR2、20、200ng组的ONL厚度分别为（47．39±3．39）、（33．96±3．54）、（31．83±5．21）、（31．40±2．63）、（24．99±2．06）、（19．30e3．71）μm,总体差异有统计学意义（F=44．733;P=0．000）;EPOsR处理组ONL厚度明显薄于单纯RD组和RD＋PBS组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论RD状态下,EPOsR通过剂量依赖的方式诱导视网膜细胞的凋亡和caspase-3活性增强,而缺氧状态下视网膜神经上皮的内源性EPO表达增强可通讨抑制casDase-3活性和抗凋亡作用发挥对光感受器细胞的保护作用。     

Retardation of photoreceptor degeneration in the detached retina of rd1 mouse

PURPOSE: To study the neuroprotective effect of experimental retinal detachment (RD) on photoreceptor degeneration in rd1 mice. METHODS: RD was produced in the eyes of rd1 mice at postnatal day (P) 9. These eyes were collected and compared to controls without RD. The effects of RD on retinal degeneration were evaluated by histochemical staining of nuclei in the outer nuclear layer (ONL), rod and cone photoreceptors, and retinal vessels at P30 in retinal sections and flatmounts. Apoptotic photoreceptors were detected by TdT-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) at P15. Mice with or without RD were also reared in darkness and evaluated immunohistochemically at P30. RESULTS: The numbers of rhodopsin-positive (rod), peanut agglutinin-positive (cone), and diamino-2-phenyl-indol-stained (rod-plus-cone) cells in the ONL were increased by 2.0-fold, 1.3-fold, and 1.2-fold, respectively, in the rd1 eyes with RD compared to those without RD at P30. In the detached retina, the cone photoreceptor inner/outer segment structures and the deep retinal vessels surrounding the inner nuclear layer and the ONL, but not the ganglion cell layer, were preserved. At P15, TUNEL-positive cell numbers in the ONL were significantly reduced in the eyes with RD. Light exposure had no effect on photoreceptor degeneration in the eyes with or without RD. CONCLUSIONS: RD mediates the preservation of cone and rod photoreceptors in the ONL and surrounding vascular structures by reducing the rate of apoptosis of photoreceptors in rd1 mice. Light deprivation does not appear to be one of the mechanisms of photoreceptor protection in the detached retinas in these mice.     

银杏叶提取物对大鼠视网膜光损伤后感光细胞的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物（EGb 761）对视网膜光损伤后感光细胞 的保护作用。 方法:72只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组 、模型组、模型+生理盐水组和模型+ EGb 761组，每组 各18只大鼠。模型组、模型+生理盐水组和模型+EGb 761组暗适应24 h后持续光照6 h，光照强度为（2740±120）lx ，建立光损伤模型。模型+EGb 761组和模型+生理盐水组分别于光照前7 d每日腹腔注射0.35 % EGb 761（100 mg/kg）和相应体积的生理盐水，光照后继续给药14 d；于光照后4 d对 各组进行视网膜原位凋亡细胞检测，并于光照后7、14 d作组织病理学检查并计数视盘 上、下方视网膜外核层（ONL）感光细胞层数。 结果:光照后4 d，除 正常对照组外，其余 各组ONL均出现凋亡感光细胞，但模型+ EGb 761组ONL凋亡感光细胞数明显少于模型组和模 型+生理盐水组。光照后7 d，模型组和模型+生理盐水组感光细胞核层数均为3~4层，模型+ EGb 761组为7~8层；模型+ EGb 761组平均感光细胞核层数（6.92 ± 0.82）少于正常对照 组（8.40±0.95）（t=-1.416，P＜0.05），但显著多于模型组（5.96±1.36）和 模型+生理盐水组（5.90±1.40）（t=1.024，1.084；P＜0 .05）。光照后14 d，模型 组和模型+生理盐水组感光细胞核为0~1层，而模型+ EGb 761组仍存有3~4层；模型+ EGb 76 1组平均感光细胞核层数（5.52±1.06）仍显著多于模型组（3.44±2.15）和模型+ 生理 盐水组（3.37±1.91）（t=2.082，2.146；P＜0.05）。 结论:EGb 761能部分抑制视网膜光损伤后感光细胞凋亡，对感光细胞具 有一定的保护作用。