肺炎链球菌假想的溶菌酶样蛋白的活性分析和鉴定

目的 探索肺炎链球菌中一种假想的溶菌酶样蛋白的活性.方法 生物信息学分析该基因的功能结构域;利用长臂同源PCR对该基因进行敲除,观察D39野生菌和缺陷菌在生物学性状的改变;利用底物PNP-(GIcNAc)和溶壁微球菌,构建过表达载体,绘制生长曲线,对截断和全长蛋白的溶菌酶活性进行鉴定.结果 生物信息学分析结果显示该基因的编码产物为β-1,4-N-乙酰胞壁酸糖苷酶,属于糖基水解酶25家族;野生菌为长链生长,缺陷菌呈短链状;溶菌酶和假想的溶菌酶样蛋白均可使底物释放出游离的对硝基苯酚,A405nm吸光度值分别为1.166和0.792;同时也可使得溶壁微球菌发生溶解;含过表达质粒的肺炎链球菌较之野生菌,溶解较快.结论 假想的溶菌酶样蛋白具有溶菌酶活性,是一种新的溶菌酶.     

硬性透气性角膜接触镜材料体外溶菌酶的短期吸附动力学

背景:镜片沉淀物的形成是角膜接触镜配戴的常见问题之一,其中蛋白沉淀最易形成。研究氟硅丙烯酸酯硬镜溶菌酶吸附动力学可进一步完善硬镜蛋白吸附数据,为降低其表面蛋白吸附量和预防硬镜表面污染提供有意义的指导。目的:考察氟硅丙烯酸酯硬镜在体外对溶菌酶的吸附情况。方法:配制质量浓度为2.0g/L溶菌酶溶液(溶液Ⅰ)及不同浓度三氟乙酸溶液;解析率实验,将对照组与实验组镜片浸入溶液Ⅰ37℃振荡孵育,Hank’s平衡盐溶液清洗氟硅丙烯酸酯硬镜,然后将对照组镜片浸入去离子水中,实验组镜片浸入不同浓度三氟乙酸,于不同时间点取出;溶菌酶短期吸附动力学实验,对照组镜片浸入去离子水中,实验组镜片浸入溶液Ⅰ37℃振荡孵育不同时间点,Hank’s平衡盐溶液清洗氟硅丙烯酸酯硬镜,后用0.2%三氟乙酸解析吸附溶菌酶;BCA法测定各溶液中溶菌酶的量。结果与结论:氟硅丙烯酸酯硬镜吸附溶菌酶可用三氟乙酸解析,三氟乙酸解析溶菌酶受解析时间和解析浓度的影响。三氟乙酸解析溶菌酶最佳时间1h,最适浓度0.2%。氟硅丙烯酸酯硬镜吸附溶菌酶(体外模拟24h),10min～1h溶菌酶吸附量递增,1h达吸附饱和,1～24h吸附量稳定,饱和吸附量为0.349mg/cm2。解析时间为10,30min时,溶菌酶解析率较低,40min～24h解析率较好(90%～100%)。     

胃癌患者血清溶菌酶水平的探讨

<正> Fogelson 及 Lobstein最先注意到患肿瘤的病人可发生血清溶菌酶活力增高;Currie指出肿瘤患者血清溶菌酶水平升高,可作为巨噬细胞介导的宿主抵抗力的一个标志。因此在一定条件下可应用于临床,以预测宿主的反应。     

短小棒状杆菌菌苗(CPV)对小鼠腹腔巨噬细胞和血清中溶菌酶的影响

本文观察了不同品系及相同品系不同鼠龄的小鼠腹腔Mφ和血清溶菌酶含量,发现年幼鼠和年老鼠的腹腔Mφ和血清溶菌酶量较年青鼠低,经注射CPV后,白色非近交系和C57BL/6近交系鼠的PEC数量增多,主要是Mφ增加,Mφ体积明显增大,PEC溶菌酶量和血清溶菌酶量均增加,它们呈现平行关系。因而认为测定血清溶菌酶量的变化可以作为CPV激活Mφ的一种指标。     

急胜白血病患者尿中溶菌酶的制备

溶菌酶(Lysozyme)又称胞壁质酶(Muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramide Glycanohydrolase),是分子量14000道尔顿稳定的多糖水解酶,它广泛存在于鸟类和家禽的蛋清,哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁、白细胞及其他体液和组织细胞内,是机体防御系统的重要成员。临床上常通过血中溶菌酶测定评价机体抗感染能力,通过尿中溶菌酶的测定评价肾的滤过能力,为肾脏疾病的诊断和疾病程度的判断服务。本实验室在建立溶菌酶放射免疫分析测定方法中采用普通的生化技术,简便快速的从白血病人尿中提取溶菌酶,并对其纯度、生物活性进行测定。解决了建立溶菌酶放射免疫分析中需要的标准品。     

溶菌酶的免疫调节作用的实验和临床研究

有关溶菌酶的抗原决定族及其与免疫活性细胞相互作用的分子机制研究工作最近才开始。溶菌酶对花环形成过程的影响及其与某些特定的T、B细胞群相互作用尚未研究。本文报导溶菌酶对淋巴细胞在体外形成花环和转化为母细胞的影响,以及在肺部炎症疾病时(雾化)吸入溶菌酶对免疫系统的作用     

鼻分泌物中溶菌酶含量的测定

<正> 溶菌酶存在于人体的分泌液和组织液中,具有抑制和溶解细菌的作用,是机体非特异性免疫的一个环节。鼻分泌物中溶菌酶的含量,国内未见文献报告。为了研究鼻腔局部的免疫功能,我们进行了含量测定,并观察其与pH值的关系。 一、实验方法: (一)鼻分泌物的收集:取4×1.5cm~2滤纸,浸     

溶菌酶对头孢他啶诱导的细菌内毒素释放的抑制作用

目的研究溶菌酶对头孢他啶诱导的细菌内毒素（ＬＰＳ）释放抑制作用。方法头孢他啶作用于对数生长期的Ｅ．ｃｏｌｉＯ１１１∶Ｂ４,ＳａｌｍｏｎｅｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＬＴ２或Ｅ．ｃｏｌｉＪ５,培养液中含或不含溶菌酶。抗菌素作用３小时后,收集培养上清,测定释放到上清液中的内毒素浓度;将培养上清加入到巨噬细胞中,测定ＴＮＦ－α和ＩＬ－６诱生能力。结果头孢他啶５０μｇ／ｍｌ可引起３种细菌迅速溶解,并导致较高浓度的内毒素释放到培养上清液中,该上清液在体外培养的巨噬细胞上和小鼠体内诱导大量的肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）和白细胞介素６（ＩＬ－６）产生;溶菌酶可阻止头孢他啶引起的细菌溶解,但不影响其杀菌效力,同时明显降低培养上清中的内毒素浓度;并降低对巨噬细胞炎性因子的诱导能力。结论溶菌酶能抑制头孢他啶诱导的细菌内毒素释放     

唾液SIgA、溶菌酶含量与慢性支气管炎关系的探讨

目的：探讨了慢性支气管炎患者唾液SIgA和溶菌酶含量的变化及临床意义。方法：应用放射免疫分析检测38例慢性支气管炎患者唾液SIgA含量,免疫扩散法测定溶菌酶含量,并与35名正常人作比较。结果：慢性支气管炎患者唾液SIgA和溶菌酶含量非常显著地高于正常人组（P〈0．01）,经2周治疗后仍有显著性差异（P〈0．05）。结论：检测慢性支气管炎患者唾液SIgA和溶菌酶含量的变化对临床观察预后有重要的临床价值。     

唾液SIgA、溶菌酶含量与牙周病关系的探讨

目的：探讨了牙周病患者唾液SIgA和溶菌酶含量的变化及临床意义。方法：应用放射免疫分析检测32例牙周病患者唾液SIgA含量、免疫扩散法检测溶菌酶含量,并与35名正常健康人作比较。结果：牙周病患者唾液SIgA和溶菌酶含量均非常显著地高于正常人组（P〈0.01）,经治疗1个月后与正常人组比较仍有显著性差异（P〈0.05）。结论：检测牙周病患者唾液SIgA和溶菌酶含量的变化对临床观察预后有重要的临床价值。     

人类溶菌酶基因突变可导致遗传性系统的淀粉样变性

本文对两个遗传性非神经系统淀粉样变性症(Ostertag型)家系患者进行了研究,首次报告引起人类溶菌酶及溶菌酶相关的变异疾病的分子基础。对此两家系所有个体的溶菌酶基因作序列分析发现,患者均为溶菌酶基因突变的杂合子,此突变可引起高度保守的氨基酸残基发生替换:家系1先证者的该基因第二外显子中存在T→C转换,此突变可     

调节酶活性的二硫键

作者报道了通过调节二硫键,只在必需时使酶功能开放,不用则关闭的控制溶菌酶水解活性的新技术。选用野生型T4噬菌体的溶菌酶(具有水解位于细菌细胞表层的肽聚糖,进而使之溶菌的活性)为实验模型,在理论上仔细分析和模型建立之后,借助寡核苷酸定向诱变技术首先产生无半胱氨酸(Cys)的T4溶菌酶,野生型中位于54和97的两个Cys     

寒冷刺激致小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型的研究

目的: 探索建立寒冷刺激致小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型。方法: 将昆明种小鼠置于-20 ℃寒冷环境中,分别给予5 min、10 min、15 min、20 min 4个时段的寒冷刺激,以小鼠唾液分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量和溶菌酶活性作为关键检测指标,评价模型的建立是否成功。结果: 20 min组小鼠出现50%的动物死亡;15 min组小鼠SIgA含量及溶菌酶活性明显降低(P＜0.05,P＜0.01);10 min组小鼠仅出现溶菌酶活性降低(P＜0.05);5 min组小鼠则各项指标均无显著差异(P>0.05)。结论: 将小鼠置于-20 ℃寒冷环境中15 min,能成功建立上呼吸道黏膜免疫功能低下模型。     

用ELISA检测溶菌酶

溶菌酶测定过去常规采用溶菌试验法(比浊法).其原理主要是利用溶菌酶溶解溶壁微球菌的活性,观察其溶菌后混悬液的清浊度来间接表示溶菌的多少.由于溶菌试验缺乏一定的敏感性,加之受样本采集处理及保存时间的限制,因而,准确性不高.首次采用ELISA法检测溶菌酶.本法主要是测定溶菌酶特异性蛋白,而不是测定其溶     

肺心病患者唾液SIgA,溶菌酶含量测定的临床意义

为了探讨肺心病患者唾液SIgA、溶菌酶含量的关系,我们进行了唾液SIgA、溶菌酶含量的测定,现将结果报告如下。 对象和方法 一、对象: (一)正常人:35人。均为本院健康体检合格者,     

老年性慢性气管炎患者唾液SIgA,溶菌酶含量测定的临床意义

为了探讨老年性慢性气管炎患者唾液SIgA、溶菌酶含量的关系。我们进行了唾液SIgA、溶菌酶含量的测定。并就临床意义作初步讨论,现将结果报告如下。     

溶菌酶对下颌骨折病人免疫指标的调节

众所周知,口腔化脓性炎症与条件致病菌的活化和免疫反应抑制以及局部防御因素不足有关.溶菌酶在口腔非特异性防御因素中占重要地位,作者在试管中研究溶菌酶对下颌骨折并发化脓性感染病人免疫指标的调     

秃疮花注射液对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

本文从体内外研究了秃疮花 (DLF )提取物对小鼠腹腔巨噬细胞 (PMΦ )免疫功能的影响。结果显示 ,DLF可诱发PMΦ产生强烈的呼吸爆发作用 ,并能提高PMΦ的吞噬功能和溶菌酶水平 ,且具有剂量效应关系。在体外试验时 ,剂量为 5 0～10 0mg/mlDLF能有效促进PMΦ的活化 ,提高其吞噬能力和溶菌酶活力 (P <0 0 5 ) ,其中 10 0mg/mlDLF诱发PMΦ产生超氧阴离子 (O2 )的效应最为显著 (P <0 0 1) ;体内试验时发现 ,0 5～ 2g/kgDLF对PMΦ的活化作用及其吞噬能力有显著作用 ,其中 1g/kgDLF对诱导PMΦ产生O2 (P <0 0 1)、提高PMΦ吞噬能力 (P <0 0 0 1)和溶菌酶水平 (P <0 0 5 )均有显著性效果。以上结果表明 ,DLF可诱导PMΦ活化并提高其免疫功能 ,从而提示DLF的临床治疗作用可能与此有关     

溶菌、煮沸、亲和层析(LBA)三步法提取SPA

SPA(Staphylococcal Protein A)是金黄色葡萄球菌胞壁上的一种主要成份,能与人及其他一些动物IgG的Fc结合,此特性被广泛应用于免疫学技术中。提取方法常用的有溶葡素法,煮沸法、溶菌酶法。前者产量稍高但试剂不易获得;后二法产量较低且需一定条件和设备。为此,我们建立了LBA三步法,与煮沸法和溶菌酶法比较,其产量可提高一倍且活性较高,用于ELISA试验已获满意结果,现报道如下。     

1981年中美分子生物学联合招生(CUSBEMA)试题答案

44.溶菌酶含有分子内二硫键,失活的溶菌酶的自由能状态不是最低,而有活性的溶菌酶处于最低自由能状态。有活性的糜蛋白酶的自由能状态不是最低,(与此类似的胰岛素是通过前体的蛋白水解作用活化的)。通过扰乱其二硫键,形成自由能状态最低的糜蛋白酶则是无活性的。45.葡萄糖的分子量比乙二醇更大些,极性更强,因而葡萄糖跨膜的自发扩散比乙二醇更慢。所以,葡萄糖曲线起始斜率高和随后出现的平台提示膜上含有特异的葡萄糖载体,从而加快了葡萄糖的