痰脂消汤调控PCOS-IR模型大鼠卵巢PI3K/Akt途径探讨

目的:观察痰脂消汤对来曲唑灌胃联合高脂膳食诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(PCOS-IR)模型大鼠卵巢胰岛素信号转导途径的影响。方法:来曲唑灌胃联合高脂膳食喂养SD大鼠建立PCOS-IR模型,大鼠随机分为模型组、痰脂消汤组(35 g·kg~(-1)·d~(-1))、二甲双胍组(200 mg·kg~(-1)·d~(-1)),连续灌胃20 d;另设正常组。实验结束后,腹主动脉采血,测定血清空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)浓度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠卵巢胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物(IRS)-1,酯酰肌醇-3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织INSR,IRS-1,PI3K,Akt蛋白及其相应磷酸化水平表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠空腹胰岛素(FINS),HOMA-IR水平均显著升高(P0.01),FPG无明显升高;模型组大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平明显降低(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显降低(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显降低(P0.05)。与模型组比较,中药和二甲双胍治疗后大鼠FINS,HOMA-IR均显著降低(P0.01);大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平均明显升高(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显升高(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显升高(P0.05)。结论:PCOS大鼠存在IR,卵巢内PI3K/Akt信号途径转导存在异常。痰脂消汤能够显著改善大鼠胰岛素抵抗,可能与调控胰岛素信号转导通路中关键的蛋白表达有关。     

葛根芩连汤对2型糖尿病ZDF大鼠CRP，TNF-α，IL-6的影响

目的:研究葛根芩连汤(Gegen Qinlian Tang,GQT)对自发型2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)肥胖大鼠(Zucker diabetes fatty,ZDF)中相关细胞因子C反应蛋白(C reactive protein,CRP),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达的影响。方法:8只雄性ZDF(fa/+)大鼠设为正常组,成模的雄性ZDF(fa/fa)大鼠24只随机分为模型组(生理盐水10 m L·kg-1),二甲双胍(300 mg·kg-1)组,葛根芩连汤(生药量13.8 g·kg-1)组。每2周测大鼠体重、空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG),给药8周后取材,全自动生化法检测甘油三酯(triglyceride,TG),总胆固醇(total cholesterol,TC);酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清中CRP,空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)的量;计算胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,IRI),胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TNF-α,IL-6的表达。结果:与模型组比较,葛根芩连汤组体重,FBG,TG,TC,CRP,FINS,IRI,ISI明显改善(P0.05),葛根芩连汤组TNF-α,IL-6相对表达显著降低(P0.05)。结论:葛根芩连汤能有效改善2型糖尿病ZDF大鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与相关低度炎症反应中细胞因子的表达有关。     

葛根芩连汤含药血清对L6肌细胞胰岛素抵抗模型中PI3K、Akt、GLUT4、AMPK蛋白的影响

目的通过观察葛根芩连汤含药血清对L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、葡萄糖转运子4(GLUT4)的影响,探讨葛根芩连汤抗2型糖尿病胰岛素抵抗的信号通路相关机制。方法将诱导分化好的L6肌细胞接种于6孔板内,以1μmol/L DEX诱导L6肌细胞24 h产生胰岛素抵抗,予以不同浓度的葛根芩连汤含药血清(20%、10%和5%),采用western blot法检测L6骨骼肌细胞p-PI3K、Akt、p-Akt、p-AMPK、GLUT4蛋白的表达。另设实验,分组方法如上,采用ELISA法检测膜蛋白GLUT4含量。结果葛根芩连汤含药血清(20%、10%和5%)(高、中和低剂量组)治疗后,p-PI3K、Akt、p-Akt、p-AMPK、GLUT4蛋白的表达明显升高(P0.05);用葛根芩连汤含药血清(20%、10%和5%)(高、中和低剂量组)治疗后,膜GLUT4蛋白的表达明显升高(P0.05)。结论葛根芩连汤抗2型糖尿病胰岛素抵抗作用可能与影响PI3K、Akt、GLUT4、AMPK蛋白相关。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型乳腺癌细胞PI3K/Akt通路HER-2,PI3K,p-Akt表达的机制

目的:观察阳和化岩汤与磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂LY294002对乳腺癌细胞株SK-BR-3[人表皮生长因子受体-2(HER-2)高表达型]PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路中HER-2,PI3K,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达的影响,研究阳和化岩汤的干预机制。方法:制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3分为空白组,阳和化岩汤组,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组,阳和化岩汤(125 g·L-1),LY294002 (0. 05 g·L-1),阳和化岩汤+LY294002 (阳和化岩汤125 g·L-1,LY294002 0. 05 g·L-1),用药干预24 h后通过免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HER-2,PI3K,p-Akt蛋白表达,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HER-2,PI3K,p-Akt mRNA表达。结果:与空白组比较,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组均能抑制乳腺癌细胞株HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05);阳和化岩汤组能抑制乳腺癌细胞株HER-2,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05),但对PI3K的抑制作用不明显;联用LY294002较单用LY294002具有进一步抑制PI3K表达的作用(P 0. 05)。与阳和化岩汤组,LY294002组比较,LY294002+阳和化岩汤组能够明显抑制HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05)。结论:阳和化岩汤能够抑制乳腺癌脉管生成和侵袭,主要作用机制为通过干预PI3K/Akt通路,降低通路中HER-2,PI3K,p-Akt表达。     

葛根芩连汤对胰岛素抵抗模型大鼠尿液代谢组影响的~1H NMR代谢组学方法研究

目的采用基于~1H NMR的代谢组学方法,研究葛根芩连汤(Gegen Qinlian Decoction,GQD)对高果糖诱导的胰岛素抵抗大鼠尿液代谢组的影响。方法 32只Wistar大鼠适应1周后,随机分为正常对照组、模型组、阳性药物组和葛根芩连汤组,每组8只。正常对照组给予纯净水喂养,其余3组给予10%的高果糖水喂养4周,制备胰岛素抵抗模型。4周后,阳性药物组和葛根芩连汤组分别给予罗格列酮3. 0 mg/(kg·d)和葛根芩连汤18. 2 g/(kg·d)灌胃,对照组和模型组给予一定体积的纯净水灌胃,整个实验持续8周。在实验第6和8周末收集各组大鼠的尿液,并采集大鼠尿液的~1H NMR谱,应用多成分数据分析方法分析。结果在第8周末,与模型组大鼠相比,葛根芩连汤组大鼠尿液中α-酮戊二酸、柠檬酸、胆碱、磷脂酰胆碱/甘油磷脂酰胆碱(PC/GPC)和牛磺酸含量增加,肌酸/肌酐、氧化三甲胺/甜菜碱和马尿酸含量降低;而与对照组相比,仅肌酸/肌酐相比对照组含量升高,其它无显著性变化。结论葛根芩连汤能够逆转多种代谢物紊乱,初步阐明了葛根芩连汤对胰岛素抵抗状态下大鼠尿液代谢具有调控作用。     

陈皮、半夏对衰老脐静脉内皮细胞中PI3K-Akt和磷酸化p38表达的影响

目的研究陈皮、半夏对衰老脐静脉内皮细胞(HUVEC)中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路和磷酸化p38表达的影响。方法 0.25%胰岛素-柠檬酸盐诱导建立HUVEC衰老模型。采用Western blot方法检测陈皮、半夏干预后衰老HUVEC中PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化p38(p-p38)的表达水平。结果与空白对照组和陈皮半夏对照组比较,诱导衰老组PI3K、p-Akt和p-p38表达显著升高(P0.01);陈皮半夏干预组、PI3K阻滞组PI3K、p-Akt和p-p38表达均较诱导衰老组显著降低(P0.05,P0.01)。结论陈皮、半夏对衰老HUVEC中PI3K-Akt通路和磷酸化p38的表达有抑制作用。     

基于蛋白质组学技术筛选葛根芩连汤防治胰岛素抵抗作用的血清差异表达蛋白

目的采用蛋白质组学技术筛选鉴定2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠模型组、葛根芩连汤组血清差异表达蛋白,推测葛根芩连汤防治胰岛素抵抗的机制。方法葛根芩连汤组和模型组通过体内高脂饲料联合链脲佐菌素建立大鼠胰岛素抵抗动物模型,连续灌胃给药3个月,于末次给药后1h,取血清,去除高丰度蛋白后,进行蛋白变性、还原、烷基化、酶解及脱盐后,利用液相Thermo EASY-nlc1000和质谱仪LTQ orbitrap Elite分析鉴定,利用Xcalibur软件和Thermo Proteome discoverer1,4进行数据处理,采用SIEVE v2.1×64进行无标定量分析寻找相关差异蛋白,筛选并鉴定差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果通过质谱鉴定分析,葛根芩连汤组与模型组差异表达蛋白76个,其中上调49个,下调27个。分析显示差异蛋白主要涉及细胞周期调控、炎症反应、信号通路调节等生物过程。其中上调蛋白磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)(Q63788)、胰岛素受体底物蛋白(IRS)(P35570)等以及下调蛋白载脂蛋白C-Ⅲ(APOC-Ⅲ)(P06759)、肝型脂肪酸结合蛋白(FABP1)(P02692)等差异蛋白可能参与了胰岛素信号转导等通路。结论通过有效的比较分析,得到了一些参与胰岛素信号转导等通路的差异表达蛋白,为研究葛根芩连汤防治胰岛素抵抗的分子机制提供了新靶点。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠骨骼肌糖代谢的影响

目的:基于PI3K/Akt信号通路中胰岛素(Ins)、胰岛素受体(InsR)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt2)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)以及葡萄糖转运体-4(GLUT-4)的变化,探讨黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠骨骼肌糖代谢的影响。方法:66只大鼠随机分为6组,除正常组外,其余各组均腹腔注射链脲佐菌素溶液诱导为糖尿病模型。检测大鼠随机血糖,并应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测骨骼肌Ins、InsR及GLUT-4水平,以及应用实时荧光定量PCR技术检测骨骼肌IRS-2、PI3K、Akt2、GSK-3β、GLUT-4mRNA的表达。结果:黄芪组、葛根组及黄芪葛根配伍组随机血糖均降低,且配伍组血糖下降最明显。黄芪葛根配伍组InsR、GLUT-4、IRS-2mRNA、PI3KmRNA、Akt2mRNA、GLUT-4mRNA表达升高,GSK-3βmRNA表达减低。在调节骨骼肌Ins、InsR及PI3KmRNA方面,黄芪与葛根有交互作用。结论:黄芪、葛根均具有降低血糖之效,其降糖机制可能与Ins、InsR、IRS-2、PI3K、Akt2、GSK-3β、GLUT-4的表达变化相关。     

敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其作用机制。方法 40只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、单次给药组、两次给药组,每组10只。各给药组每日予大补脾汤灌胃,空白对照组和模型组予等量生理盐水灌胃。2周后,模型组、单次给药组、两次给药组大鼠右肺予8 Gy X射线单次照射,空白对照组不予照射。照射后,两次给药组继续每日予大补脾汤灌胃,其余各组灌胃等量生理盐水。2周后处死所有大鼠,ELISA检测大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量,Western blot及免疫组化检测大鼠右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达,qPCR检测大鼠右肺组织PI3K、Akt mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显增加(P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Aktm RNA表达明显升高(P0.01);与模型组比较,单次给药组和两次给药组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显减少(P0.05,P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论大补脾汤对放射性肺损伤大鼠具有保护作用,其机制与抑制PI3K、Akt磷酸化,调控PI3K/Akt信号通路相关。     

小檗碱对体外HepG2细胞IR模型抗IR的效应及机制

目的:探讨小檗碱对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的改善作用及机制。方法:HepG2细胞采用高糖(25 mmol·L~(-1))和高胰岛素(1×10~(-6)mol·L~(-1))联合诱导24 h,建立体外IR模型。模型培养液中分别加入1×10~(-5),1×10~(-6)mol·L~(-1)小檗碱,设1×10-3mol·L~(-1)二甲双胍作为阳性药,孵育24 h。葡萄糖氧化酶法检测培养液葡萄糖含量,计算细胞葡萄糖消耗量,细胞增殖活性检测(CCK-8)测定细胞增殖活性;生化法检测细胞丙酮酸激酶(PK)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞葡萄糖激酶(GCK)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞胰岛素受体(InsR),磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)和GLUT2 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1),磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞葡萄糖消耗量显著降低(P0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著降低(P0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA表达水平显著降低(P0.01),IRS-1,p-PI3K,p-Akt蛋白表达水平显著降低(P0.01)。与模型组比较,小檗碱组和二甲双胍组的细胞葡萄糖消耗量明显增加(P0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著升高(P0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA和IRS-1,p-PI3K,p-Akt1蛋白表达水平均明显升高(P0.05,P0.01)。结论:小檗碱体外对HepG2细胞IR模型有显著的改善作用,其机制可能通过调节IRS-1/PI3K/Akt信号通路促进肝脏葡萄糖转运和改善葡萄糖代谢。     

黄地安消胶囊对GK大鼠肝脏胰岛素抵抗及信号通路的影响

目的:观察黄地安消胶囊对2型糖尿病(T2DM)模型GK(Goto-Kakizaki,GK)大鼠肝脏胰岛素信号通路的影响,探讨其可能存在的分子机制。方法:选取符合T2DM模型的GK大鼠纳入实验,以黄地安消胶囊(12、6、3 g/kg)进行灌胃给药,连续给药6周,测定各组大鼠给药前和给药6周后的空腹血糖(FBG),随机血糖(RBG),给药6周后进行糖耐量试验(OGTT)。对肝脏组织进行HE染色,观察病理形态的改变。RT-q PCR技术检测肝脏组织IRS-1、PI3K、Akt、GSK-3β的mRNA表达水平,Western bolt检测IRS-1、PI3K、Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组FBG、RBG、AUC明显增加,IRS-1、PI3K、Akt mRNA和蛋白以及p-Akt表达下降,GSK-3β,p-GSK-3β表达增加;与模型组比较,黄地安消胶囊组(12、6、3 g/kg)FBG、RBG、AUC显著降低,IRS-1、PI3K、Akt mRNA和蛋白以及p-Akt表达显著增加,GSK-3β,p-GSK-3β表达明显降低,肝脏组织病理结构改变明显减轻。结论:黄地安消胶囊作用机制可能是通过IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β途径,调控通路蛋白活性,促进糖原合成,抑制糖异生,降低血糖,改善胰岛素抵抗,治疗T2DM。     

黄地安消胶囊改善自发性T2DM大鼠胰岛素抵抗机制研究

目的:观察黄地安消胶囊对2型糖尿病(T2DM)模型GK(Goto-Kakizaki,GK)大鼠肝脏组织中IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β/GS信号通路关键基因表达的影响,探讨其改善胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的可能机制。方法:选取符合T2DM模型的GK大鼠纳入实验,随机分为模型组,黄地安消胶囊(12、6、3 g/kg)组,参芪降糖颗粒组(1.08 g/kg),以及正常Wistar大鼠为对照组。每组10只,每天1次灌胃给药,连续6周。试验结束后取肝脏组织进行PAS染色,观察其对糖原合成的影响。RT-q PCR技术检测肝脏组织INSR、IRS-1、PI3K、GS mRNA表达水平,Western bolt检测INSR、IRS-1、PI3K、p-PI3K、GS、p-GS蛋白的表达水平。免疫荧光组织化学染色法检测肝脏组织IRS-1、p-PI3K、p-Akt、GSK-3β蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄地安消胶囊组(12、6、3 g/kg)可以显著增加肝脏糖原合成,同时增加INSR、IRS-1、PI3K、p-PI3K、GS、p-GS的表达水平。结论:黄地安消胶囊可通过IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β/GS信号通路,调控蛋白活性,促进糖原合成,降低血糖,改善胰岛素抵抗,治疗T2DM。     

葛根芩连汤治疗糖尿病骨质疏松大鼠的效果及机制

目的:研究葛根芩连汤治疗糖尿病性骨质疏松大鼠的效果及机制。方法:雌性SD大鼠60只,随机均分为3组。对照组20只无处理,余40只腹腔注射链脲佐菌素35 mg/kg,建立大鼠糖尿病模型。葛根芩连汤组:按生药量10 g/kg葛根芩连汤灌胃,模型组同法以0.9% NaCl灌胃,持续灌胃12周。行大鼠空腹胰岛素水平(Fins)、空腹血糖(FBG)、胰岛素敏感指数(ISI)及素抵抗指数(HOMA-IR)检测。RT-PCR、Western Blot检测椎体BMP-2/Smad表达变化,进一步行骨密度、骨钙含量及生物力学性能测定及HE染色。结果:模型组素HOMA-IR,FBG水平较对照组均升高,Fins及ISI降低(P<0.05)。葛根芩连汤组大鼠HOMA-IR,FBG水平与模型组比较降低,Fins及ISI均升高(P<0.05)。模型组大鼠椎体BMP-2、Smad1、Smad4基因和蛋白的表达较对照组降低(P<0.05)。葛根芩连汤组大鼠椎体BMP-2、Smad1、Smad4基因和蛋白较模型组升高(P<0.05)。模型组大鼠骨密度、骨钙含量、极限载荷、极限应力和弹性模量较对照组降低(P<0.05);葛根芩连汤组大鼠骨密度、骨钙含量、极限载荷、极限应力和弹性模量与模型组比较升高(P<0.05),HE染色示葛根芩连汤治疗后大鼠骨质疏松减轻。结论:葛根芩连汤在降低DOP大鼠血糖水平,减轻胰岛素抵抗,通过调高BMP-2/Smad通路发挥治疗大鼠DOP的作用。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:健康SD大鼠120只,随机取20只作为正常组,另100只大鼠用于制备慢性不可预见性温和应激(CUMS)抑郁模型。再将CUMS抑郁大鼠随机分为模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组,氟西汀组,每组20只。柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组分别灌胃3.25,6.5,13 g·kg~(-1);氟西汀组灌胃盐酸氟西汀10 mg·kg~(-1);正常组和模型组灌胃等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。应用糖水偏好和强迫游泳实验评估抑郁行为,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠大脑海马组织中PI3K,Akt,GSK3β以及β-catenin蛋白水平及其磷酸化水平。结果:给药21 d后,与正常组比较,模型组糖水偏好显著下降(P0.01);强迫游泳不动时间显著延长(P0.01);PI3K,p-PI3K p110,p-PI3K p85蛋白水平均显著降低(P0.01);Akt,p-Akt Thr308,p-Akt Ser473,p-GSK3βSer9,β-catenin水平均显著降低(P0.01);GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高组大鼠糖水偏好显著增加(P0.01);强迫游泳不动时间显著缩短(P0.01);PI3K总蛋白,PI3K p110和PI3K p85亚基蛋白磷酸化水平均显著增高(P0.01);p-Akt Thr308和p-Akt Ser473水平均显著升高(P0.01);p-GSK3β Ser9,β-catenin水平显著增高(P0.01),而GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平却明显降低(P0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤通过提高大鼠海马组织PI3K蛋白水平及活性,激活Akt,抑制GSK3β活性,阻止β-catenin降解,即提高大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,保护海马神经元。     

桑叶提取物调控IRS-1/PI3K/GLUT4通路影响2型糖尿病胰岛素抵抗机制研究

目的:提取桑叶中的黄酮类及多酚类物质,观察其对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠降血糖及改善胰岛素抵抗(IR的作用,并探讨其分子机制。方法:取雄性SD大鼠,分为正常组、模型组、二甲双胍组、桑叶提取物组,除正常组以外建立T2DM模型,灌胃干预4周,观察药物对模型大鼠一般情况、生化指标、骨骼肌病理等的影响。测定胰岛素受体底物-1 (IRS-1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)中的p85α、葡萄糖转运体-4 (GLUT4)在骨骼肌组织中的信使核糖核酸(mRNA)及蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组空腹血糖(FBG)、IR稳态模型指数(HOMA-IR)、血清胰岛素、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高(P<0.05);IRS-1、PI3K p85α、GLUT4的mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05)。与模型组比较,桑叶提取物组FBG、HOMA-IR、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平下降(P<0.05);IRS-1、PI3K p85α、GLUT4的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05);二甲双胍组FBG有所下降,但差异无统计学意义,血清胰岛素及HOMA-...     

归芪益元膏对辐射旁效应损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的调节作用

目的：探讨归芪益元膏对辐射旁效应损伤大鼠肾组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法：将32只SPF级SD大鼠随机分为正常组、单纯辐射组、辐射+中药组、单纯中药组，每组8只。辐射+中药组、单纯中药组预先灌胃归芪益元膏3.28g/(kg·d),正常组和单纯辐射组分别灌胃等量生理盐水，连续灌胃2周。2周后单纯辐射组、辐射+中药组大鼠右肺予8 Gy X射线单次照射，铅皮屏蔽身体其余部位。正常组、单纯中药组不予照射。照射后处死所有大鼠。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中PI3K、Akt、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)水平，免疫组化检测肾组织中PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾组织中PI3K、Akt mRNA表达。结果：与正常组对比，单纯辐射组大鼠肾组织中PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达上调，差异有统计学意义(P<0.01);与单纯辐射组对比，辐射+中药组和单纯中药组大鼠肾组织中上述指标表达下调(P<...     

陈皮半夏通过PI3K-Akt通路对衰老脐静脉内皮细胞中p53和p21表达的影响

目的探讨陈皮半夏是否能通过衰老脐静脉内皮细胞(HUVEC)中磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路对p53和p21的表达进行干预。方法半夏、陈皮按照1∶1的比例配伍,常法煎煮制备陈皮半夏汤剂。对5只SD大鼠使用陈皮半夏汤剂灌胃,分离血清。使用0.25%胰岛素-柠檬酸盐诱导HUVEC衰老,使用流式细胞仪检测细胞周期,建立细胞衰老模型后,通过Western blot法检测陈皮半夏干预衰老HUVEC中PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)、p53和p21的表达。结果 0.25%胰岛素-柠檬酸盐诱导可以有效建立细胞衰老模型。与空白对照组和陈皮半夏对照组比较,模型组中PI3K、p-Akt、p53和p21表达显著升高(P0.01);陈皮半夏和PI3K特异性阻滞剂LY294002干预后,PI3K、p-Akt、p53和p21表达较模型组均显著降低(P0.05)。结论陈皮半夏有可能通过衰老HUVEC中PI3K-Akt通路调控p53和p21的表达。     

葛根芩连汤对高脂饲养小鼠代谢的影响

目的探讨葛根芩连汤对高脂饲养(HFD)小鼠代谢的影响。方法以高脂饲料喂养C57/BL小鼠构建HFD模型;造模成功后按体质量随机分为模型组(HFD组)、葛根芩连汤组,另设立正常饲料喂养的C57/BL小鼠为正常对照组。葛根芩连汤组按等效剂量15 g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃给药,HFD组和正常对照组以等量的0.9%NaCl溶液灌胃干预4周。检测各组体质量、空腹血糖、腹腔胰岛素耐量实验(IPITT)、口服葡萄糖耐量实验(OGTT)、HOMA-IR、血清胰岛素、血脂水平等指标评估各组代谢表型的差异。结果与正常对照组比较,HFD组小鼠体质量显著升高(P0.05),IPITT、OGTT、血清胰岛素、TG、TC、HDL-C、LDL-C及HOMA-IR均明显升高(P0.05,P0.01);葛根芩连汤组小鼠体质量、IPITT、OGTT、血清胰岛素、HOMA-IR、TG、TC均明显降低(P0.05)。结论葛根芩连汤能改善HFD小鼠代谢表型。     

醒脑益智汤对AD模型小鼠tau蛋白及Aβ表达的影响

目的观察醒脑益智汤对AD模型小鼠tau蛋白及Aβ表达的影响。方法小鼠右侧海马注射3μL老化的Aβ_25-35(3 nmol/L)构建AD模型,将114只ICR小鼠随机分成假手术组、模型组、醒脑益智汤组(18 g生药/kg)、醒脑益智汤组(9 g生药/kg)、醒脑益智汤组(4.5 g生药/kg)、多奈哌齐组(1.3 mg/kg)。造模后第2天,小鼠分别灌胃给予不同剂量的醒脑益智汤及盐酸多奈哌齐,灌胃28 d。第23天进行Morris水迷宫训练;第28天,ELISA及硫黄素S染色测定Aβ表达;Western blot测定tau蛋白磷酸化位点(Ser 202,Thr 231)、PI3K/Akt及NEP、IDE蛋白表达。结果醒脑益智汤可降低AD模型小鼠的游泳潜伏期,降低Aβ表达,抑制tau蛋白化点(Ser 202,Thr 231)发生磷酸化,增加p-PI3K、p-Akt、NEP及IDE的表达(P<0.05)。结论醒脑益智汤可能是通过PI3K/Akt信号通路,抑制tau蛋白位点的异常磷酸化,通过增加NEP、IDE的表达,抑制AD模型小鼠脑内的Aβ表达,进而改善其学习记忆...     

基于p38-PKD1信号通路探讨葛根芩连汤对妊娠糖尿病小鼠作用及机制

目的 探讨葛根芩连汤对妊娠糖尿病（GDM）小鼠模型的作用及其机制。方法 以C57BLKsJdb/+（db/+）怀孕小鼠建立遗传性GDM小鼠模型,空白组采用C57BL/KsJ+/+（野生型）怀孕小鼠作为对照,将模型小鼠随机分为模型组,葛根芩连汤低（15 g/kg）、高剂量组（45 g/kg）和阳性药物组（二甲双胍,200 mg/kg）,每组10只。给药处理组小鼠自妊娠日开始给药,空白组和模型组给予等量生理盐水。检测葛根芩连汤对GDM小鼠及其子代的安全性的影响,检测GDM小鼠糖耐量和胰岛素耐量、血清和胰腺组织中胰岛素水平,采用组织切片观察胰岛病理学变化,RT-PCR检测胰腺组织中胰岛素生成和分泌相关因子的转录水平;检测Min6细胞的增殖、Min6细胞在高糖刺激下的胰岛素分泌量。结果 与模型小鼠比较,葛根芩连汤组及阳性药物组小鼠肝脏和肾脏的病理学形态得以改善;与模型组小鼠比较,GDM给药葛根芩连汤小鼠的糖耐量和胰岛素耐量显著改善（P<0.05）、胰岛形态显著改善、血清和胰腺组织中胰岛素水平升高、胰岛素生成和分泌相关因子的转录水平显著上调（P<0.01,P<0.05）;进一步机制研究发现葛根芩连汤可下调p38蛋白的磷酸化水平,上调多囊肾病1型致病基因（PKD1）蛋白的磷酸化水平（P<0.01,P<0.05）。在Min6细胞模型中,葛根芩连汤可促进Min6细胞的增殖,促进Min6细胞在高糖刺激下的胰岛素分泌量（P<0.01）。采用工具药阻断发现抑制了PKD1之后,减弱了葛根芩连汤对胰岛素的升高作用（P<0.01）。结论 葛根芩连汤对GDM小鼠及其子代的安全性良好,可通过调控p38-PKD1信号通路而促进胰岛素分泌,对妊娠糖尿病具有一定的干预作用。