AMACR siRNA表达载体对前列腺癌PC 3细胞生物学特性的影响

目的 观察转染α-甲酰辅酶A消旋酶(AMACR)干涉载体后对前列腺癌PC-3细胞系生长状态的影响.方法 用脂质体将pSilencer/AMACR1转染前列腺癌PC-3细胞,通过细胞计数、MTT、软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC检测细胞凋亡.结果 siRNA干涉载体瞬时转染PC-3前列腺癌细胞系后,36 h细胞增殖率开始明显下降,软琼脂集落形成减少,流式细胞分析示细胞周期阻滞在G0/G1期(88.6%),Annexin V-FITC法示早期凋亡细胞率68.3%.结论 利用RNA干涉技术抑制了前列腺癌PC-3细胞系的增生,可能会成为一种有效的前列腺癌基因治疗手段.     

CXCR4基因158沉默对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡及迁移能力的影响

目的 探讨CXCR4基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。 方法 将T24细胞分为3组,即干扰组、阴性对照组和空白对照组。采用阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine 2000将靶向沉默CXCR4基因的小干扰RNA(siRNA)序列转染至膀胱癌T24细胞株中,Western-blot检测转染后T24细胞中CXCR4蛋白的表达水平,MTT比色法检测细胞凋亡,Transwell迁移试验观察T24细胞迁移能力。 结果 转染siRNA后,CXCR4蛋白表达量明显下调(P<0.05),与空白对照组及阴性对照组的T24细胞比较,沉默CXCR4基因后,显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性(均为P<0.05),促进T24细胞凋亡(均为P<0.05); Transwell实验结果提示,RNAi干扰CXCR4表达后能显著抑制膀胱癌T24细胞的迁移能力(P<0.05)。 结论 RNAi干扰CXCR4表达水平能够抑制T24细胞增殖、促进细胞凋亡及降低细胞的迁移能力,推测CXCR4基因可能是膀胱肿瘤细胞增殖及迁移的重要调控因子之一。     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

Bloom解旋酶基因RNA干扰载体对前列腺癌PC3细胞的抑制作用

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制前列腺癌PC3细胞系中Bloom解旋酶基因的表达,探讨Bloom解旋酶基因表达下调后对PC3细胞的抑制作用.方法 使用实验室前期成功构建的两条针对于Bloom解旋酶基因的RNAi载体shRNA-1和shRNA-2转染前列腺癌PC3细胞,以未转染RNAi载体为对照组,分别在转染24、48、72h后通过MTT法检测细胞增殖情况,转染48 h后通过Transwell小室法检验细胞侵袭、迁移能力,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡情况.结果 转染RNAi载体后,与未转染对照组相比,各实验时间点的转染组细胞增殖率降低(P＜0.05),Transwell细胞侵袭和迁移实验中穿过室膜的细胞数与对照组比均减少(侵袭:119±24、118±30 vs 227±38;迁移:122±13、121±47 vs 277±32,P＜0.05),划痕愈合率与划痕迁移距离均降低,48 h时差异有统计学意义(P＜0.05),而且细胞凋亡明显增加.结论 以RNAi载体干扰Bloom解旋酶基因的表达可抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进其凋亡,为前列腺癌的靶向基因治疗提供了依据.     

靶向survivin基因siRNA对喉癌细胞增殖、凋亡的影响

目的观察靶向survivin基因的siRNA对喉癌细胞Hep-2增殖和凋亡的影响,为喉癌的基因治疗提供有效靶点及技术。方法使用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将靶向survivin基因的siRNA转染至喉癌细胞株Hep-2;MTT[3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测对喉癌细胞Hep-2增殖的影响;RT-PCR检测喉癌细胞Hep-2survivin基因mRNA表达的变化;Western Blot检测survivin基因蛋白表达;流式细胞技术检测喉癌细胞Hep-2凋亡情况。结果各浓度survivin-siRNA转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组（〈0.05）,survivinmRNA和蛋白表达有不同程度减弱,并且有明显的浓度依赖性,随着浓度的上升表达率下降。结论利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制喉癌细胞Hep-2细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,不同浓度survivin-siRNA转染能下调survivinmRNA和蛋白表达,靶向survivin基因的RNA干扰技术在喉癌的基因治疗中具有一定价值。     

原花青素对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究原花青素对人雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养的LNCaP细胞株与100、200、300 μg/ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72 h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况.结果 原花青素可引起LNCaP细胞形态较明显改变.不同浓度(100、200、300 μg/ml)原花青素对LNCaP细胞作用的细胞增殖抑制率分别为27.1%、72.1%和86.4%.流式细胞术检测表明原花青素可诱导LNCaP细胞凋亡,300μg/ml原花青素处理72 h引起36.5%的凋亡率.这3种作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强.结论 原花青素可在体外抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,并促进其凋亡.     

RNAi沉默Galectin-1基因对HePG2 肝癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 建立小干扰RNA(siRNA)抑制Galectin-1 基因表达的实验条件,观察利用siRNA选择性抑制Galectin-1基因表达对人肝癌细胞系HePG₂生长、凋亡及迁移能力的影响。方法 用RT-PCR技术检测siRNA对HePG₂细胞Galectin-1基因沉默的效率; 用流式细胞术检测HePG₂ Galectin-1基因沉默前后细胞凋亡率; 以四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测Galectin-1基因沉默对HePG₂细胞增殖的影响;用Millecell小室检测Galectin-1基因沉默对HePG₂细胞侵袭人工基底膜能力的影响。结果 与siRNA转染前比较,转染后人肝癌细胞系HePG₂细胞中Galectin-1 基因表达率明显下降(100.0% vs 10.3%,P<0.01),HePG₂细胞凋亡率明显上升(0 vs 22.5%,P<0.01),HePG₂细胞增殖率显著下降(100.0% vs 54.0%,P<0.01), HePG₂细胞的迁移能力明显受抑(100.0% vs 52.3%,P<0.01)。结论 基于mRNA的siRNA干扰技术可以有效抑制Galectin-1 基因在人肝癌细胞系HePG₂中的表达;Galectin-1基因沉默对人肝癌细胞系HePG₂的生物学行为具有明显的阻遏效应。由此推测,Galectin-1基因表达在肝细胞癌的发生、发展中起重要作用。     

UbcH10基因沉默联合紫杉醇干预对NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响

目的观察小干扰RNA(siRNA)介导的UbcH10基因沉默联合紫杉醇处理对人肺鳞癌细胞株NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响。方法化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞(siRNA转染组),转染后24 h,采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测UbcH10 mRNA和蛋白的表达水平,以未予任何转染细胞作为空白对照,以阴性序列转染细胞作为阴性对照。以紫杉醇(1μmol/L)处理siRNA转染及未转染NCI-H226细胞(siRNA+紫杉醇组和紫杉醇组),分别于转染后24、48 h收集细胞,MTT比色法检测细胞增殖;转染后24 h收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;以未经紫杉醇处理的siRNA转染、阴性序列转染和未予转染的NCI-H226细胞作为siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组。结果Real-Time PCR和Western blotting检测结果显示:转染后24 h,siRNA转染组UbcH10 mRNA和蛋白的表达较空白对照组和阴性对照组显著下调(P0.01)。MTT比色法检测结果显示,siRNA转染组细胞增殖抑制率显著高于紫杉醇组和对照组(P0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞增殖抑制率显著高于siRNA转染组(P0.05)。siRNA转染组细胞凋亡率显著高于紫杉醇组和对照组(P0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞凋亡率显著高于siRNA转染组(P0.05),紫杉醇组与对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 UbcH10基因沉默可显著增强NCI-H226细胞对于化疗药物紫杉醇的敏感性。     

siRNA沉默PC3细胞中KDR基因的表达

目的:构建针对血管内皮生长因子受体Ⅱ(KDR)基因的shRNA表达载体,研究KDR基因沉默后对PC3细胞的增殖、生长的影响.方法:将合成的三对DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencerTM3.1-H1 neo线性质粒用T4 DNA连接酶连接,构建pSilencer3.1-KDR1,psi-lencer3.1-KDR2和Psilencer3.1-KDR3三个siRNA表达载体.经酶切及DNA测序鉴定后,采用脂质体介导的基因法转染PC3细胞,通过RT-PCR、免疫印迹和免疫细胞化学染色实验,检测KDR的表达变化,MTT法检测细胞牛长速度的变化,流式细胞仪检测细胞周期的变化,以未转染和转染阴性对照质粒pSileneer3.1-NC的PC3细胞为对照.结果:酶切及测序证实设计合成的DNA已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹和免疫细胞化学染色实验表明,pSilencer3.1-KDR3有效地降解了PC3细胞中KDR基因的mRNA,下调蛋白表达;转染pSilenc-er3.1-KDR3后PC3细胞生长速度明显变慢.结果表明,pSi-leneer3.1-KDR3组PC3细胞的G0/G1期百分率明显增高,而S期和G2M期的细胞减少,与其余组相比差异具有统计学意义(P<0.01).而pSilencer3.1-KDR1和pSilencer3.1-KDR2无效.结论:成功构建针对KDR基因的siRNA表达载体,只有pSileneer3.1-KDR3可有效地沉默KDR在前列腺癌细胞系PC3细胞中的表达,抑制PC3细胞的增殖.     

Survivin和Bcl-2基因靶向siRNA对舌癌Tca-8113细胞生长抑制及诱导凋亡作用的影响

目的:探讨Survivin联合Bcl-2siRNA对舌癌细胞的诱导凋亡作用。方法:实验分空白组、脂质体组、阴性干扰组、Survivin干扰组、bcl-2干扰组、Survivin/bcl-2干扰组,以舌癌细胞系Tca-8113为研究对象,应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)分别和同时沉默下调Survivin和Bcl-2两种基因的表达,采用MTT检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜检测细胞超微结构变化,比较各组对肿瘤细胞生长的抑制及诱导凋亡作用。结果:转染24h后可见Survivin/bcl-2干扰组的细胞形态发生明显改变,体积缩小变圆,染色质浓集于核膜内侧,核碎裂,电镜下呈典型的细胞凋亡形态学改变,并有凋亡小体出现,MTT显示细胞生长明显抑制,MCF检测凋亡率分别为空白组0.85%、脂质体组2.46%、阴性干扰组3.06%、Survivin干扰组15.48%、bcl-2干扰组11.02%、Survivin/bcl-2干扰组29.18%,与空白组相比差异有统计学显著性意义(P<0.01),转染阴性siRNA及脂质体组无抑制和诱导凋亡作用,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向特异性Survivin联合Bcl-2siRNA双基因沉默下调较单基因沉默下调作用显著增强,并且能有效抑制舌癌细胞的增殖及诱导其发生凋亡。     

siRNA沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响

目的：观察沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡和周期及增值的影响．方法：采用siRNA-3转染人恶性黑素瘤LiBr细胞后分别应用TUNEL法和AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用免疫荧光细胞化学技术检测siRNA对凋亡效应蛋白Caspase-3表达的影响及应用MTY法检测siRNA对细胞增殖的作用．结果：siRNA．3转染LiBr细胞72h可诱导细胞凋亡（P〈0．05）和引起细胞G0／G1期阻滞（P〈0．05）;可下调Caspase-3蛋白表达（P〈0．05）及抑制细胞增殖（P〈0．05）．结论：Livin可做为应用RNA干扰技术探索恶性黑素瘤基因治疗的潜在靶基因．     

siRNA抑制RASSF1A表达对Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨RASSF1A基因的特异性小干扰RNA(siRNA)对宫颈癌Hela细胞系生长增殖及凋亡的影响。方法采用LipofectamineTM2000介导的脂质体法将特异性siRNA瞬时转染进Hela细胞,半定量RT-PCR检测转染前后RASSF1A mR-NA表达变化,免疫细胞化学法检测RASSF1A蛋白表达水平变化,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 RT-PCR与免疫细胞化学检测结果显示,转染siRNA后RASSF1A基因的表达下降,细胞增殖加快,而细胞凋亡率则显著降低。结论靶向RASSF1A基因的siRNA可有效降低宫颈癌Hela细胞中该基因的表达,用于RASSF1A基因功能研究;RASSF1A基因表达下调促进细胞增殖,同时导致细胞凋亡减少。     

Skp2基因沉默对 SPC-A-1肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨 S 期激酶相关蛋白2（Skp2）基因沉默对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将 Skp2 RNA 干扰表达载体转染至 SPC-A-1肺癌细胞中,G418筛选获得阳性克隆细胞。通过实时荧光定量（RT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺癌细胞中 Skp2的表达。采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐（M TT ）法检测各组肺癌细胞生长、凋亡情况。结果转染 Skp2 shRNA 表达载体的肺癌细胞中 Skp2蛋白表达量明显减少,抑制效率分别可达75．3±5．1,70．4±3．2;转染 Skp2 shRNA 表达载体的肺癌细胞生长减慢,阻滞于 G1期的增多,S 期细胞减少。 Skp2 shRNA 转染质粒组凋亡率较阴性对照组明显增加,细胞凋亡率分别为（17．5±2．8）％、（15．6±3．1）％。结论通过特异性沉默 Skp2基因的表达,可有效降低肺癌细胞中 Skp2蛋白表达水平,抑制肺癌细胞生长及增加细胞凋亡。     

靶向Notch1基因的siRNA对裸鼠人肝细胞癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Notch1基因在人肝细胞癌HepG2细胞裸鼠移植瘤中的作用。方法于裸鼠腋下接种0.2×108/mL的HepG2细胞悬液,建立人肝细胞癌裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:未处理组(接种PBS悬浮的未转染细胞)、空载体转染组(接种空载体转染的细胞)和Notch1转染组(接种靶向Notch1基因的siRNA转染的细胞)。连续2周观察转染荷瘤裸鼠的生长情况,采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)研究肿瘤组织中的细胞凋亡,利用R T-PCR和蛋白质印迹技术检测肿瘤组织中Notch1、bcl-2和bax mR NA和蛋白的表达。结果 Notch1 siRNA转染组中肿瘤的生长明显受到抑制,其肿瘤的重量为(0.685±0.138)g,显著低于未处理组(2.896±0.513)g和空载体转染组(2.776±0.623)g(F=29.672,均P<0.01)。TUNEL结果表明,Notch1 siR NA转染组每500个细胞中凋亡的细胞数为(91±3),明显高于未处理组(10±3)和空载体转染组(11±2)中细胞凋亡的数目(P<0.05);此外,RT-PCR和Western印迹结果表明Notch1 siRNA转染组中裸鼠肿瘤组织Notch1和bcl-2 mRNA和蛋白表达均显著下降,而bax的表达显著上升,3组间比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论降低Notch1基因的表达能抑制人肝细胞癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导HepG2细胞凋亡,后者可能与bax表达的上升和bcl-2表达的下调相关。     

小干扰RNA沉默β-catenin基因对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)沉默人结肠癌SW480细胞β-catenin基因表达对SW480细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法合成靶向β-catenin的双链siRNA(β-catenin-siRNA),转染SW480细胞,RTPCR及Western blotting检测SW480细胞中β-catenin mRNA及蛋白的表达,MTT实验和流式细胞术分别检测SW480细胞的增殖和凋亡。结果:RT-PCR及Western blotting检测结果显示β-catenin-siRNA转染后,与空白组、阴性对照组及实验组相比,β-catenin-siRNA转染组SW480细胞中β-catenin mRNA水平明显下降,其蛋白表达也明显下调。β-catenin-siRNA转染后,SW480细胞的凋亡率明显高于阴性对照组及实验组,细胞增殖能力明显下降。结论:siRNA沉默β-catenin的表达可诱导SW480细胞凋亡,抑制细胞的增殖,为结肠癌的临床治疗提出新的思路,可以作为结肠癌治疗的一个新靶点。     

siRNA沉默Pim-3对T24细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究小干扰RNA(siRNA)沉默Pim-3对膀胱癌细胞增殖和周期的影响。方法:膀胱癌T24细胞分为3组:未处理组(不作任何处理)、对照siRNA组(采用50nmol/L对照siRNA转染)和Pim-3siRNA组(采用50nmol/LPim-3siRNA转染)。采用Westernblot检测转染48hPim-3、CyclinD1、Cdk2、P21蛋白表达的变化,CCK-8试剂检测转染24、48、72、96h细胞的增殖速率,流式细胞术检测转染48h细胞周期的变化。结果:3组膀胱癌T24细胞Pim-3、CyclinD1、Cdk2、P21蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=32.506、49.573、23.079、44.758,P<0.05),与未处理组和对照siRNA组相比,Pim-3siRNA组Pim-3、CyclinD1和Cdk-2蛋白的表达下降,P21蛋白表达升高(P<0.05)。转染Pim-3siRNA48、72和96h后,膀胱癌T24细胞的增殖速率均明显受到抑制(F=50.067、132.504、277.389,P<0.001)。3组G0/G1、S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例比较,差异有统计学意义(F=107.970、20.039和66.872,P<0.05),Pim-3siRNA组G0/G1期膀胱癌T24细胞比例高于未处理组和对照siRNA组(P<0.05),而S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例低于未处理组和对照siRNA组(P<0.05)。结论:Pim-3有望成为治疗膀胱癌潜在的分子靶点。     

AK000953基因沉默联合达那唑对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨AK000953基因沉默联合达那唑对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法:利用小干扰RNA(RNAi)技术合成AK000953 siRNA,脂质体法转染子宫肌瘤细胞,分别用MTT法、流式细胞术检测AK000953 siRNA联合达那唑对子宫肌瘤细胞的增殖、凋亡的影响。结果:MTT法结果表明达那唑组对子宫肌瘤细胞的抑制率为(17±4.5)%,而AK000953 siRNA+达那唑组对子宫肌瘤细胞的抑制率升高为(56±8.7)%(P<0.01);流式细胞术检测细胞凋亡结果显示AK000953siRNA+达那唑组凋亡率显著高于对照组[(43.2±2.3)%与(5±0.4)%,P<0.01]和达那唑组[(43.2±4.3)%与(16.0±2.1)%P<0.01]。结论:AK00095 3siRNA可显著增强达那唑对子宫肌瘤细胞的增殖抑制和促进细胞凋亡的效应。     

纳米基因载体介导RNA干扰沉默Survivin基因对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨纳米基因载体介导RNA干扰沉默Survivin基因对大肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响.方法 用壳聚糖-聚乙二醇纳米粒介导的Survivin shRNA(基因纳米复合物)转染结肠癌细胞株HT-29,并以携带相同shRNA的脂质体载体,以及阴性对照shRNA为对照,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后的HT-29细胞中Survivin mRNA的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞凋亡率.结果 和脂质体载体比较,转染基因纳米复合物后,HT-29细胞中Survivin mRNA拷贝数及蛋白表达显著降低,其细胞死亡率和凋亡率显著提高(P<0.05).结论 壳聚糖-聚乙二醇纳米粒里介导的Survivin shRNA较之脂质体载体具有更高的干扰效率,且能长期、高效地诱导结肠癌细胞凋亡并抑制其增殖.     

Smo siRNA对LoVO细胞Smo基因表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究Smoothened (Smo)小干扰RNA(siRNA)对结直肠癌LoVo细胞Smo基因表达,以及LoVo细胞增殖与凋亡的影响.方法 设计针对目标基因的siRNA.阳性脂质体介导转染LoVo细胞,半定量RT-PCR检测转染后LoVo细胞的Smo mRNA水平,MTT法和流式细胞术检测转染后LoVo细胞的增殖水平及细胞凋亡率.结果 siRNA-1、siRNA-2均能抑制LoVo细胞Smo基因的表达,siRNA-1抑制作用最明显,达63.56%,siRNA-2抑制作用为46.54%,两组与隐性对照组相比.差异均具有显著性.siRNA-1转染LoVo细胞后,细胞增殖水平较隐性对照组显著降低(P＜0.05);转染48 h后,细胞凋亡率较隐性对照组显著升高(P＜0.05).结论 Smo siRNA能有效地抑制结直肠癌LoVo细胞Smo基因表达,可以降低LoVo细胞的增殖水平,诱导细胞的凋亡.     

RNA干扰沉默EZH2基因对人膀胱癌EJ细胞增殖的影响

目的:研究RNA干扰沉默EZH2基因对人膀胱癌EJ细胞周期和增殖的影响.方法:体外构建EZH2基因的shRNA的表达载体,Lipofectamin 2000介导转染膀胱癌EJ细胞,采用RT-PCR和Western Blot方法检测特异性shRNA对EZH2基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shRNA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变.结果:EZH2基因的shRNA表达载体有效下调EZH2基因的表达(P<0.05).与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞增加[(84.0±8.7)% vs (52.0±6.8)%, P<0.05],S期细胞减少[(11.0±1.1)% vs (43.0±4.9)%, P<0.05].结论:EZH2基因有望成为应用RNAi技术探索膀胱癌基因治疗的潜在靶基因.