胎儿卵巢冷冻保存及复苏

目的 :探讨胎儿卵巢的体外保存方法。方法 :将 16例 2 0～ 2 8周的胎儿卵巢置于含 1.41mol/L的二甲基亚砜 (DMSO)培养液中 ,采用三步降温法投入液氮保存 ,复苏时采用 40℃水浴快速复温和室温下慢复温 ,然后进行组织培养并观察卵泡发育和雌二醇 (E2 )分泌情况。结果 :胎儿卵巢冻存后复苏培养 ,其卵泡仍能继续发育并产生E2 ;快速复温组卵泡组织形态良好 ,并能维持良好的内分泌功能 ;慢复温组卵巢上皮破裂 ,E2 分泌量明显减少。结论 :“三步降温法”冻存胎儿卵巢效果好 ,快速复温能更好地维持卵泡形态发育和内分泌功能     

胎儿卵巢冷冻保存及复苏

目的：探讨胎儿卵巢的体外保存方法。方法：１６例２０－１８周的胎儿卵巢置于含１．４１ｍｏｌ／Ｌ的二甲基亚砚（ＤＭＳＯ）培养液中，采用胡步降温法投入液氮保存，复苏时采用４０℃水浴快速复温和室温下慢复温，然后进行组织培养并观察卵泡和雌二醇（Ｅ２）分泌情况。结果：胎儿卵巢冻存后复苏培养，其卵铴仍能继续发育并产生Ｅ２；快速复温组卵泡组织形态良好，并能维持良好的内分泌功能；慢复温组卵巢上皮破裂，Ｅ２分泌量明显     

N乙L-半胱氨酸对胎儿卵巢组织体外培养的影响

目的：探讨硫醇类抗氧化剂 N 乙酰 L 半胱氨酸(n acetyl l cysteine,NAC)对胎儿卵巢组织体外培养效果的影响。方法：取中期引产的20～28周死亡女胎的卵巢,分别在含NAC 25、50、100?mmol/L(实验组)和不含NAC(对照组)的培养液内培养0～9?d,采用液相平衡竞争放射免疫分析法检测各组卵巢组织在不同的培养时间雌二醇（estrogen,E2）分泌量;观察培养后各组卵巢卵泡的形态学变化。结果：培养后卵泡可进一步发育,各期卵泡构成比实验组与未培养组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),而3个不同剂量实验组两两之间在卵泡构成比上差异无统计学意义（P>0.05）;胎儿卵巢组织经体外培养后能够分泌E2,E2分泌量实验组和对照组之间差异有统计学意义(P<0.05),随着培养时间的延长E2分泌量显著增加(P<0.05);而在添加不同剂量NAC的3个实验组,两两比较差异则无统计学意义(P>0.05)。结论：在培养液中添加NAC后,E2分泌量增加,各期卵泡的形态得以维持并能进一步发育,为人胎儿卵巢培养后移植提供了实验依据。     

胎儿卵巢组织玻璃化冻存效果的研究

目的探讨玻璃化冻存法对胎儿卵巢组织形态和功能的保存效果。方法采用改良EG5.5/30玻璃化液冻存胎儿卵巢皮质片,解冻后观察卵巢组织学变化,卵巢皮质片异种异位移植后,观察受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况。结果实验组与新鲜培养后移植组、添加抗氧化剂培养后移植组相比动情周期恢复率差异无统计学意义(P>0.05),但高于新鲜移植组(P<0.005);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于两种培养组(P<0.05);在卵泡计数上,实验组每高倍视野的卵泡计数明显高于新鲜移植组(P<0.005),与培养后移植组间的差异无统计学意义(P>0.05)。移植后18周,组织学观察见大量窦卵泡,而培养组仅偶见窦卵泡。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织,且不影响卵泡继续发育的潜能。     

超速冷冻法冷冻保存大鼠卵巢组织的实验研究

目的探讨超速冷冻法对SD大鼠卵巢组织的冷冻保存功效。方法采用液氮直投法冷冻大鼠卵巢组织。计数冻融后卵巢组织内形态正常始基卵泡数量。将卵巢组织自体移植，术后35天处死动物，测定血清雌二醇（E2）水平。结果新鲜和冻融后的大鼠卵巢组织中形态正常始基卵泡数量无统计学差异（P〉0.05）。移植术后35天，两移植组血清E2水平无统计学差异（P〉0.05）。结论液氮直投超速冷冻法可以有效的保存卵巢组织，对大鼠卵巢组织学和功能的影响较小。     

人胎儿卵巢组织异种移植后卵母细胞的发育及成熟能力

目的探讨人胎儿卵巢组织冷冻复苏、体外培养和异种移植后卵母细胞的发育和成熟情况。方法取5例胎龄20周引产的胎儿卵巢,采用丙二醇慢速冷冻保存,复苏后在组织培养条件下进行体外培养,6d后移植到免疫缺陷小鼠的肾被膜下,应用卵泡刺激激素作用23周后取出卵巢组织,机械法取出窦卵泡内的卵母细胞,结合体外成熟培养,观察卵子成熟情况,并通过移植前后组织学和增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化观察卵泡发育情况。结果冷冻复苏组织和新鲜卵巢组织中各期卵泡的构成比之间差异无显著性(P>0.05);培养组织与新鲜组织和冻融组织相比,增殖期卵泡的比例显著增加(P<0.05);移植组织与新鲜组织、冻融组织和培养组织相比,增殖期卵泡比例亦显著增加(P<0.05)。各组织中原始卵泡均未见PCNA阳性表达,其表达最早出现于初级卵泡,新鲜组织和冻融组织中偶可见PCNA阳性表达,而培养组织和移植组织中可见明显的PCNA阳性表达。从移植卵巢的窦卵泡中获得未成熟卵子42个,经体外成熟培养有21.43%的卵子可发育到MII期。结论人胎儿卵巢组织能耐受冻融、组织培养和移植过程,其卵泡能够重新生长发育,恢复内分泌功能,且不影响卵母细胞的发育及成熟能力。     

组织培养下胎儿卵巢卵泡的发育

目的 :观察组织培养条件下胎儿卵巢能否发育以及胎儿胰腺条件培养液对其发育的影响。方法 :取 16例 2 0～ 2 8周和 11例 >2 8周中期妊娠水囊引产的胎儿卵巢 ,经直接培养及加胎儿胰腺条件培养液组织培养后 ,观察培养前后的组织学变化。结果 :胎儿卵巢经组织培养后 ,较成熟卵泡比例增加 ,P <0 .0 0 5 ;加胎儿胰腺条件培养液组与未加胎儿胰腺条件培养液组相比 ,较成熟卵泡比例增加更为明显 (P <0 .0 0 5 )。结论 :胎儿卵巢在组织培养条件下能继续发育 ,胎儿胰腺条件培养液有促进卵泡发育的作用。     

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/骨形态发生蛋白-15通路与哺乳动物卵巢卵泡发育

哺乳动物卵巢卵泡是由卵母细胞与其周围的颗粒细胞和卵泡膜细胞共同组成的,其生长发育过程是一个高度协调的程序化过程,确保了正常卵母细胞成熟并使其具有受精能力。卵母细胞和颗粒细胞之间的旁分泌和自分泌功能在卵巢卵泡发育过程中具有重要作用,可以为卵泡的发育提供适宜的微环境。磷脂酰肌醇-3激酶/骨形态发生蛋白-15信号通路是其中一个重要的调控通路。骨形态发生蛋白-15是卵巢卵母细胞特异性分泌的信号分子,可以通过旁分泌作用调节卵巢卵泡的发育过程。本文主要概述磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在卵巢卵泡发育过程中的作用及骨形态发生蛋白-15作为蛋白激酶B/叉头转录因子家族-3a下游信号分子对这一过程的调控,有助于进一步理解卵巢卵泡发育的分子调控以及治疗不孕不育等卵巢疾病。     

胚胎卵巢移植的研究进展

卵巢自体或异体移植可以恢复卵巢功能缺如或早衰患者的内分泌功能并有望获得生育能力。人类胚胎卵巢免疫原性低,其内含有数百万的始基卵泡,这些始基卵泡离体后可生长发育并分泌激素。来源于引产胎儿的卵巢是卵巢功能缺如或早衰患者异体卵巢移植的理想供体,胚胎卵巢来源的不随意性使其冷冻保存至关重要。本文就胚胎卵巢移植的一些相关研究和冷冻进行综述。     

β-巯基乙醇对胎儿卵巢组织体外培养的影响

目的探讨低分子量的硫醇类化合物-β-巯基乙醇(β-ME)对胎儿卵巢组织体外培养效果的影响。方法取中期引产的20～22周死亡女胎的卵巢,分别在含β-ME50μM、100μMβ-ME(实验组)和不含β-ME(对照组)的培养液内培养3～9d,观察培养后各组卵巢卵泡的形态学变化。结果胎儿卵巢组织经体外培养后可进一步发育,培养后各期卵泡构成比实验组与未培养组、对照组比较差异均有统计学意义(P<005),而在添加β-巯基乙醇的两个实验组(50μM和100μMβ-ME)之间在卵泡构成比上差异则无统计学意义(P>005)。结论在培养液中添加β-巯基乙醇后,可以更好地维持卵泡的形态,促进卵泡发育。     

大鼠胚胎卵巢移植的实验研究

目的探讨大鼠胚胎卵巢异体异位移植后的生长发育及功能。方法将大鼠胚胎的卵巢移植入去势成年雌性大鼠的肾被膜下,移植40d后取材进行组织学研究,观察移植效果;同时测定血清雌、孕激素等水平。结果移植后第40天,组织学观察,移植物内可见大量发育卵泡及黄体与间质腺,移植卵巢中有丰富的血管。血清雌、孕激素与正常成年大鼠间无显著性差异(P>0.05)。结论大鼠胚胎卵巢移植后能继续生长发育并具有内分泌功能。     

胎儿与成人卵巢免疫原性的比较

目的 :比较胎儿卵巢、成人卵巢免疫原性的差异 ,并观察培养前后胎儿卵巢免疫原性的变化。方法 :对培养前后胎儿卵巢及成人卵巢的冰冻切片用人白细胞抗原 (HLA DR)单克隆抗体进行免疫组织化学染色 ,观察其阳性细胞形态及分布并计数。结果 :胎儿卵巢内HLA DR抗原含量显著少于成人卵巢 (P <0 .0 0 1) ,且培养后胎儿卵巢HLA DR抗原含量显著低于培养前 (P <0 .0 1) ,随培养天数的增加HLA DR抗原含量逐渐减少 (P <0 .0 1)。结论 :胎儿卵巢的免疫原性低于成人卵巢 ,且培养后进一步降低。以培养一段时间的胎儿卵巢作为移植供体 ,可能提高临床卵巢移植的成功率。     

大鼠胚胎卵巢异体异位移植的探讨

为了研究胚胎卵巢移植后的存活和生长发育情况 ,以及不同移植部位对胚胎卵巢的影响 ,将大鼠胚胎卵巢分别移入去势雌鼠的颈部皮下及肾被膜下 ,HE观察颈部移植物移植后 5d处于坏死状态 ,含有大量红细胞 ;1 0d周围有结缔组织包裹 ,内有原始卵泡 ;2 5d及以后移植物内存在大量发育卵泡并可见间质腺及黄体。肾被膜移植物移植后 5d呈结缔组织样 ;1 0d出现大量原始卵泡结构 ;2 5d及以后可见发育卵泡、间质腺和黄体。细胞化学显示发育卵泡的 3 β羟甾脱氢酶呈阳性反应。移植后 2 5d左右阴道涂片出现动情周期。结果说明胚胎卵巢能在异体异位存活并可发育成具有内分泌功能的腺体。     

微波复温对人胚胎卵巢细胞团形态与E2分泌功能的影响

本研究用８对超速冷冻保存的人胚胎卵巢进行配对复温方法对比。在每对卵巢中，１只用３７℃微波复温，另１只用３７Ｃ水浴复温。通过检测复温后卵巢的超微形态及Ｅ２分泌功能，发现微波复温组胚胎卵巢细胞的超微形态及Ｒ分泌功能均优于水浴复温组，提示超速冷冻保存的胚胎卵进来用微波复温效果较好。     

激活素A和卵泡抑素对冻融人胎儿卵巢雌二醇分泌的影响

目的：研究组织培养条件下冻融人胎儿卵巢雌二醇（E2）的分泌及激活素A（Act A）和卵泡抑素（FS）对E2分泌的影响。方法：冻融人胎儿卵巢组织体外培养，分别加入基础培养液（对照组，即MEM组）、基础培养液＋100ng／ml Act A（Act A组）、基础培养液＋100ng／ml FS（FS组）和基础培养液＋100ng／ml Act A＋100ng／ml FS（A＋F组），每组4块组织，培养8d。收集培养2d、4d、6d、8d各组培养液，测定比较其E2值。结果：培养4d、6d、8d卵巢组织分泌的E2值均高于2d的E2值（均P〈0．05），随培养时间延长，E2分泌量先增加后减少，在培养后6d可达较高分泌水平；Act A组E2分泌量明显高于对照组、FS组和A＋F组（均P〈0．01）。结论：冻融人胎儿卵巢在组织培养条件下能分泌E2，Act A能促进体外培养胎儿卵巢E2的分泌，其作用可能受到FS的调节。     

小鼠卵巢组织的深低温保存和移植研究

①目的 采用深低温保存方法冷冻保存小鼠的卵巢组织，观察移植后卵巢功能和组织学的恢复情况。②方法 36只昆明种小鼠随机分为3组：假手术组、对照组(新鲜移植组)和深低温保存组。假手术组不切除卵巢，对照组切除卵巢后即行自体原位移植，深低温保存组则将双侧卵巢完全摘除后，行二期手术自体原位移植深低温保存的卵巢。观察所有小鼠的动情周期的变化，并对卵巢的卵泡发育情况进行组织学检查。③结果 假手术组小鼠的动情周期没有任何变化，对照组小鼠的动情周期也在手术后的不同时间内恢复正常，深低温保存组小鼠在完全切除卵巢后，完全失去了动情周期的变化；冷冻复温卵巢自体移植后，多数小鼠的动情周期恢复正常。组织学分析显示，深低温保存卵巢在自体移植后，卵巢可以存活，并有各级卵泡发育。④结论 采用深低温保存方法保存后的小鼠卵巢复温后保持组织活性，自体移植后小鼠的动情周期恢复，卵巢中有正常卵泡发育。     

FSH对胎儿卵巢组织玻璃化冻存及冻融后短时培养的影响

目的通过对FSH干预下的胎儿卵巢玻璃化冷冻及解冻后短暂培养,观察FSH对卵泡储备的影响。方法将20周流产胎儿卵巢皮质切割成体积为5mm×4mm×2mm和10mm×4mm×2mm的皮质片,在玻璃化液、解冻液和培养液中添加10μg FSH.mL-1,通过两步渗透平衡法,将卵巢皮质进行玻璃化冻存。解冻后培养4.5h,通过卵泡形态学观察、不同发育期卵泡构成比和卵泡直径观察评价玻璃化冻存和解冻后的FSH干预下的培养效果。结果①不同发育阶段卵泡构成比及卵泡直径在冻融组之间及冻融组与新鲜组之间相比差异无统计学意义;②冻融组和冻融-培养组之间相比较,培养组卵泡直径增大,差别有统计学意义(P<0.05)。结论冻融过程的FSH添加不影响人胎儿卵巢大皮质片的玻璃化冻存及早期卵泡的构成比,但是体外添加FSH培养4.5h可使一定量的原始卵泡发育至早期初级卵泡阶段。     

非病性卵巢、卵巢良、恶性肿瘤的性激素受体水平及血清激素水平的测定

对110例卵巢组织新鲜标本进行胞浆、胞核性激素受体及外周血FHS、LH、E2、P、T水平的测定．结果表明：非病性卵巢组的ERc（+）／PRc（+）为50％，卵巢良性肿瘤组ERc（+）／PRc（+）为42％及ERc（-）／PRc（-）为46％，卵巢恶性肿瘤组ERc（+）／PRc（+）为59％，三组的ERc、PRc含量主要分布在ERc（+）／PRc（+）和ERc(-)范围内．非病性卵巢、卵巢良性肿瘤的ERc、与ERa、PRc与PRa之间存在一定的比例关系，卵巢恶性肿瘤则失去比例．卵巢肿瘤的E2、T、FSH和LH与ER、PR和AR存在正相关关系，提示卵巢肿瘤可能是性激素依赖性肿瘤和促性腺激素依赖性肿瘤．