顺铂等化疗药物对胃癌细胞端粒酶活性的影响

目的：探讨端粒酶作为化疗敏感性指标的可行性。方法：选择IC50剂量的顺铂，丝裂霉素C，阿霉素及5－氟脲嘧啶和甲酰四氢叶酸处理胃癌细胞，采用半定量TRAP－银染法检测药物处理前后胃癌细胞端粒酶活性。并应用流式细胞学检测细胞周期和细胞凋亡率。结果：顺铂，丝裂霉素C和阿霉素在诱导两细胞凋亡的同时，下调端粒酶活性，且其抑制作用呈时间依赖关系；5－氟脲嘧啶和甲酰四氢叶酸对胃癌细胞端粒酶活性无明显抑制作用，结论：化疗前后细胞端粒酶活性的变化，可作为化疗敏感性指标。     

多种药物对肝癌细胞端粒酶活性的影响

目的：观察几种在肝部职常用的药物对肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１端粒酶活性的影响,进一步探讨它们的抗癌作用机制。方法：利用化疗药物顺铂,丝裂霉素Ｃ、阿霉素、５－氟尿嘧啶、干扰素、全反式维甲酸、叠氮胸苷处理肝癌细胞,然后使用ＴＲＡＰ方法观察处理的前后端粒酶活性的变化,同时利用流式细胞术观察细胞周期和凋广。结果：化疗药物顺铂和丝裂霉素Ｃ对肝癌细胞端粒酶活性有抑制作用,流式细胞术检测表明当端粒酶活性受到抑制     

还原型辅酶Ⅰ对抗肿瘤药物抑制人胃癌细胞的影响

[目的]研究还原型辅酶Ⅰ(NADH)对抗肿瘤药物抑制人胃癌SGC-7901细胞活性的影响.[方法]用MTT法观察NADH和抗肿瘤药物氟尿嘧啶、鬼臼乙叉甙、顺铂、表阿霉素、丝裂霉素对人胃癌SGC-7901细胞活性的抑制率.[结果]NADH可明显降低氟尿嘧啶、鬼臼乙叉甙、顺铂、表阿霉素的肿瘤细胞抑制率(P＜0.05).并且可显著提高人胃癌细胞对丝裂霉素的化疗敏感性(P＜0.01).[结论]NADH可能是肿瘤化疗过程中的重要调节剂.     

顺铂对人鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性和细胞周期及凋亡的影响

目的研究顺铂对人鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性、细胞周期及凋亡的影响,以探讨顺铂诱导CNE-2Z细胞凋亡与端粒酶活性水平的关系以及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制。方法分别以不同的药物浓度作用于体外培养的CNE-2Z细胞不同的时间,用TRAP-ELISA的方法定量检测CNE-2Z细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平,同步进行细胞形态观察,流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果CNE-2Z细胞端粒酶呈阳性。用不同浓度的顺铂不同的时间作用于CNE-2Z细胞,结果细胞周期被阻滞在G1期,出现细胞凋亡,下调端粒酶活性,且呈时间依赖性及剂量依赖性。结论化疗药物顺铂可能是通过改变细胞周期分布(G1期阻滞)并同时诱导细胞凋亡、下调其端粒酶活性而发挥抗癌作用的,故可将化疗前后细胞端粒酶活性的变化作为鼻咽癌化疗敏感性指标之一。     

几种化疗药物对肝癌耐药细胞BEL7404/ADM端粒酶活性的影响

目的:研究顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、多柔比星(ADM)和长春新碱(VCR)4种化疗药物对人肝癌细胞株BEL-7404、耐阿霉素肝癌细胞株BEL-7404/ADM的细胞毒作用及其对端粒酶活性影响的关系。方法:采用MTT法测定常用4种(DDP、MMC、ADM和VCR)化疗药物对人肝癌细胞株BEL-7404、BEL-7404/ADM的体外抑制作用;以TRAP-PCR-ELISA法检测化疗药物作用后两种细胞端粒酶的活性。结果:DDP、MMC、ADM、VCR对BEL-7404均敏感,各种化疗药物IC50大小比较,DDP和ADM比VCR和MMC均小;而对BEL-7404/ADM这几种化疗药物敏感性均不同程度下降,其中以ADM及VCR尤其明显,耐药倍数分别为100·0倍、60·14倍。未加药前,肝癌亲本细胞BEL-7404和耐药细胞BEL-7404/ADM端粒酶活性均表达,加入化疗药物后,亲本细胞端粒酶活性下降明显,并呈现时间-剂量关系,而对于耐药细胞,只有高浓度的化疗药物才能抑制其端粒酶活性。结论:端粒酶活性的抑制与耐药细胞对药物敏感性存在一定关系,端粒酶可作为化疗敏感的潜在标志。     

β-榄香烯与阿霉素及顺铂对人胃腺癌细胞株细胞毒作用的协同效应

 本文以体外培养的低分化人胃腺癌细胞株SGC－7901为实验模型，采用MTT比色法，观察了β-榄香烯单独及与阿霉素、顺铂联合应用时的细胞毒作用。结果表明，β-榄香烯单独应用对SGC－7901细胞具有一定的抑制作用，其细胞毒指数与药物浓度呈正相关；β-榄香烯与阿霉素或顺铂联合应用则呈现明显的协同效应。上述结果对于临床联合应用β-榄香烯与其它化疗药物治疗胃腺癌具有一定指导意义。     

MTT法研究化疗药对人胃癌细胞株（SGC-7901）的抑制作用

[目的]研究化疗药物顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、吉西他滨（GEM）、奈达铂（NDP）、奥沙利铂（L-OHP）、氟尿嘧啶（5-Fu）、丝裂霉素（MMC）对人胃癌细胞株（SGC．7901）抑制率及化疗药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响。[方法]采用M1Tr测定法观察DDP、VCR、GEM、NDP、L-OHP、5-Fu和MMC不同浓度及作用时间对SGC-7901细胞株的抑制作用。化疗药物浓度参照其在人体血浆峰值浓度（plasma peak concentration，PPC）的0．001～1倍范围，作用时间选择24h、48h、72h。[结果]SGC．7901细胞株对不同化疗药物的敏感性存在差异，对DDP、L-OHP、MMC、NDP、5-Fu敏感，最大抑制率分别为99．5％、100％、100％、100％和97．5％；对GEM次之，最大抑制率为67．6％；对VCR不敏感。DDP、L-OHP、NDP和MMC的药物浓度与抑制率密切相关，GEM、5-Fu和MMC的药物作用时间与抑制率密切相关。[结论]不同化疗药物对人胃癌细胞株（SGC-7901）的抑制作用及量效、时效关系，为临床胃癌化疗方案的制定提供实验依据。     

MicroRNA let - 7f 对胃癌细胞株 SGC7901 / ADR 耐药性的影响

目的：通过检测胃癌细胞株SGC7901及其阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中microRNA let-7f的表达差异,探讨let-7f表达与胃癌细胞对ADR耐药的关系.方法：通过实时荧光定量PCR比较SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞中 let-7f表达水平的差异;MTT法检测SGC7901,SGC7901/ADR及转染let-7f mimic后SGC7901/ADR的药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况.结果：qRT-PCR结果显示,let-7f在SGC7901/ADR细胞中的表达较在SGC7901中的表达显著降低（ P＜0.05）.MTT法结果显示SGC7901与SGC7901/ADR两种细胞阿霉素的半数抑制浓度（IC50）分别为（0.95 ±0.08）g/L和（5.40 ±0.28）g/L.SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后,let-7f表达显著上调,并且对阿霉素的IC50明显降低（ P＜0.05）.凋亡检测结果显示,转染let-7f mimic后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加（ P＜0.05）.Western Blot结果表明相较于转染let-7f negative control（NC）组,转染let-7f mimic组cleaved-Caspase-3表达显著降低（P＜0.05）,而两组中的Bcl-2表达水平无差异.结论：let-7f在胃癌阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中的表达显著降低,逆转let-7f表达可增加其对阿霉素敏感性,并诱导其凋亡.     

抗癌药物对宫颈癌细胞HeLa端粒酶活性的影响

目的：观察阿霉素、丝裂霉素、紫杉醇、顺铂和环磷酰胺五种抗癌药对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法：运用MTT法测定24小时的药物IC50在此基础上，运用端粒重复序列扩增—酶联免疫吸附法测定细胞经过不同浓度的抗癌药作用不同时间后端粒酶活性的变化。结果：细胞对不同药物有不同敏感性。五种药物均能下调端粒酶活性，但只有阿霉素、紫杉醇和顺铂在作用24小时后迅速而明显地影响端粒酶活性。IC50／3浓度处理72小时的效果与IC50。浓度处理24小时的效果相当。结论：五种药物都能通过直接或间接的方式下调端粒酶活性，其机制可能与药物浓度及时间依赖有关。     

Survivin基因反义寡核苷酸增强胃癌细胞对顺铂的敏感性研究

目的探讨survivin基因的反义寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对胃癌细胞系(SGC7901)下调化疗药物的耐药性的研究.方法采用survivin基因反义ODN及其对照序列(空白对照和错配ODN)通过脂质体途径分别转染SGC7901细胞.经转染的各组SGC7901细胞分别采用蛋白印迹法观察survivin基因的表达、通过MTT法检测顺铂对癌细胞的毒性作用以及流式细胞仪(FCM)观察顺铂(CDDP)诱导各组SGC7901细胞的凋亡.结果经转染反义ODN之胃癌细胞出现survivin蛋白表达明显下降,反义ODN伴CDDP联合作用的细胞抑制率达49.9±2.1%,而单独应用CDDP或错配ODN联合CDDP的细胞抑制率分别为30.7±2.9%及34.8±3.4%,两者间呈明显差异(P＜0.01).细胞流式仪分析显示对照组、survivin反义ODN组、survivin错配ODN组的细胞凋亡率分别为8.1±0.9%、15.2±0.7%、8.5±0.8%,反义ODN组细胞凋亡率明显高于对照组、错配ODN组(P＜0.01).结论Survivin基因反义ODN能增强胃癌细胞株SGC7901对顺铂的敏感性,为临床提供一种增强化疗敏感性研究的途径.     

Inhibition of the mTOR/S6K signal is necessary to enhance fluorouracil-induced apoptosis in gastric cancer cells with HER2 amplification

The purpose of this study was to explore the effect of trastuzumab in enhancing the activity of chemotherapeutic agents and the molecular basis of this effect. Two gastric cancer cell types with HER2 amplification, one sensitive (NCI?N87) and one insensitive (MKN-7) to trastuzumab, were tested for the effects of trastuzumab on cell growth and cell signaling using MTS assay and western blotting, respectively. Interaction between trastuzumab and chemotherapeutic agents (fluorouracil, doxorubicin, cisplatin and paclitaxel) was evaluated by the combination index (CI). Fluorouracil-induced apoptosis was evaluated using western blot for poly (ADP-ribose) polymerase (PARP). Trastuzumab decreased phosphorylation of S6K, showed synergistic effect with fluorouracil or doxorubicin, and increased fluorouracil-induced apoptosis in NCI-N87 cells, but not in MKN-7 cells. While the mTOR inhibitor everolimus enhanced fluorouracil-induced apoptosis in both HER2-amplified cell lines, this was not the case in the gastric cancer cell lines without HER2 amplification. Consistently, while the EGFR/HER2 inhibitor Cl-387,785 inhibited cell growth of MKN-7, this growth inhibition did not accompany decrease in phosphorylation of S6K, and the compound did not enhance fluorouracil-induced apoptosis. In summary, inhibition of the mTOR/S6K signal may be a key molecular event in enhancing fluorouracil-induced apoptosis specifically in gastric cancer cells with HER2 amplification. mTOR inhibitors may therefore be attractive alternative drugs in gastric cancers with HER2 amplification regardless of their sensitivity to trastuzumab.     

Telomerase as a Possible Candidate Targeting Therapy in Different Breast Cancer Cell Lines

Background: Telomerase activity is up regulated in most breast cancer subtypes but not in the adjacent normal tissues. Thus, it is a promising target for anticancer therapy. The present work investigated the effects of telomerase inhibition by siRNA on breast cancer cell lines and studied the feasibility of whether the combined effect of doxorubicin with siRNA treatment on breast cancer cells potentiates a rapid cellular response to the cytotoxic effect of chemotherapy.  Methods: This study was performed on Luminal A (MCF-7), triple negative (MDA-MB-468), and HER-2/neu (SKBR-3) human breast cancer cell lines, wherein telomerase activity inhibition by hTERT siRNA and doxorubicin was detected by measuring telomerase activity using Telomeric Repeat Amplification Protocol (TRAP assay), assessing cell viability through MTT assay, and evaluating apoptosis through scanning electron microscopy (SEM) and through estimating caspase-3 and -8 activities using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results: In the present study, hTERT siRNA effectively reduced telomerase activity and cell viability to more than 90% and 60%, respectively, in most breast cancer cell lines within 72 hours after transfection. The combination of hTERT siRNA and doxorubicin showed a cumulative effect compared with either treatment alone (P < 0.05). Meanwhile, SEM demonstrated apoptotic morphologic cell changes. Conclusion: Telomerase inhibition is a promising strategy for the effective treatment of breast cancer. When used in combination with doxorubicin, it could potentiate the cytotoxic effect of the drug on breast cancer cells.     

二氟甲基鸟氨酸对K562细胞生长特性的影响及其与端粒酶活性的相关性

目的研究二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对K562细胞生长特性、凋亡及端粒酶活性的影响。方法采用细胞计数、形态观察、FCM分析及DNA电泳分别检测DFMO处理的细胞生长速率、周期分布及细胞凋亡。按TRAP法对细胞端粒酶活性进行检测。结果DFMO处理的细胞生长速率明显减慢;G1期细胞增多而S期细胞减少;细胞表现凋亡诱导,且其端粒酶活性受到抑制。结论DFMO引起的K562细胞生长抑制及凋亡诱导与端粒酶活性抑制有关。端粒酶的失活是抑制多胺生物合成的抗癌分子机制重要事件之一。     

Survivin和Bcl-2蛋白在胃癌细胞中的表达及其与化疗药物耐药性关系的研究

目的:检测Survivin和Bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达,探讨Survivin和Bcl-2基因与胃癌化疗药物耐药性的关系。方法:取新鲜胃癌手术标本98例,免疫组化检测Survivin和Bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达。同时进行原代胃癌细胞培养,MTT比色法检测原代培养细胞对化疗药物HCPT、CDDP、5－FU、ADM和MMC的敏感性。结果:胃癌组织中Survivin和Bcl-2蛋白的阳性率分别为74.5%和70.4%。Survivin阳性表达者对5－FU和ADM的耐药性显著高于阴性者,差异有统计学意义（P<0.05）。5-FU、ADM和MMC三种药物对Bcl-2阳性表达者的抑制率显著低于Bcl-2阴性表达者（P<0.05）,其阳性表达与5-FU、ADM及MMC的体外耐药相关。结论:Survivin和Bcl-2基因与胃癌对化疗药物敏感性相关,Survivin与胃癌细胞原发性化疗耐受有关,检测其表达对选择化疗药物有实用价值。Bcl-2可能参与介导胃癌细胞的耐药,其高表达可能是胃癌多药耐药产生的原因之一。     

冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的调节

目的：探讨冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的影响．方法：应用噻喳蓝(MTT)还原法检测细胞生长抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2基因的表达水平；应用端粒重复扩增(TRAP)法检测端粒酶活性。结果：5nmol／L～25nmol／L的冬凌草甲素可诱导细胞凋亡．抑制细胞增生。在细胞生长受抑制过程中．端粒酶活性及bcl-2表达水平显著下降。结论：冬凌草甲素可诱导急性白血病HL-60细胞凋亡、抑制细胞增生；其作用机制与端粒酶活性下降及bcl-2的表迭水平下调有关．其中bcl-2的表达水平可能起重要的调节作用。     

尼美舒利抑制胃癌细胞蛋白激酶B活性的研究

目的 观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对胃癌细胞株SGL-7901增殖、端粒酶活性和蛋白激酶(PKB)的影响,以探讨其抗肿瘤作用机制。方法 尼美舒利作用胃癌细胞株SGC7901不同时间后,采用噻唑蓝(MTT)比色法和PCR-ELISA半定量法检测细胞的生存率和端粒酶活性,PKB活性的检测采用非放射性蛋白激酶活性分析法。结果 尼美舒利抑制SGC7901细胞的生长呈时间,剂量依赖性,同时它也显著抑制SGC7901细胞的端粒酶和PKB活性,且端粒酶活性的降低与PKB活性的抑制有关。结论 选择性COX-2抑制剂能抑制胃癌细胞株的端粒酶活性,其作用机制可能与阻碍PKB的活性有关,这可能是选择性COX-2抑制剂抗肿瘤的又一新的机制。