盐酸小檗碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的研究

目的：探讨小檗碱诱导人胃癌细胞株MGC－803的细胞凋亡。方法：用4μg/ml盐酸小檗碱在体外作用于人胃癌MGC－803细胞48小时后进行吖橙染色、荧光照相,同时用原位末端标记,检测给药48小时后MGC－803细胞的凋亡情况。结果：荧光照相发现MGC－803细胞呈典型的凋亡细胞形态,细胞核和细胞质内可见致密浓染的黄绿色染色,甚至可见黄绿色碎片;而原位末端标记法（in situ end-labelling ,ISEL)检测结果显示盐酸小檗碱组细胞凋亡指数显高于空白对照组（P＜0．05）。结论：盐酸小檗碱诱导了人胃癌MGC－803细胞的凋亡。     

小檗碱对人胃癌细胞株BGC-823诱导凋亡的研究

目的:研究小檗碱对人胃癌BGC-823细胞诱导凋亡的作用.方法:应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪和TUNEL染色研究小檗碱对人胃癌BGC-823细胞诱导凋亡的作用.结果:小檗碱作用人胃癌BGC-823细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩、染色质凝集成新月状紧贴于核膜周边,核碎裂、染色质片断化、凋亡小体形成等.流式细胞仪上出现典型的亚二倍体凋亡峰.TUNEL染色显示,随小檗碱浓度增加和作用时间延长,细胞凋亡率增加.结论:小檗碱对人胃癌BGC-823细胞有诱导凋亡作用.     

小檗碱对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响

用MTT法、克隆分析、流式细胞仪及免疫组织化学法 ,观察了小檗碱对人胃癌细胞株BGC 82 3增殖的影响 ,结果发现小檗碱对人胃癌细胞株BGC 82 3有抑制增殖作用 ,且与药物浓度呈正相关。其机理主要为使突变型 p5 3和 p2 1蛋白的表达下调 ,阻滞胃癌细胞进入细胞周期 ,使人胃癌细胞BGC 82 3的细胞周期阻滞于G0 /G1期。     

左金方及其主要成分小檗碱对人胃癌细胞SGC7901上皮间质转化的影响

目的:研究左金方及其主要成分小檗碱对人胃癌细胞SGC7901上皮间质转化的影响。方法:制备左金方冻干粉,采用高效液相色谱法(HPLC),对比小檗碱对照品,明确左金方冻干粉的纯度和小檗碱含量;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测左金方及小檗碱对SGC7901细胞生长影响,并确定后续实验给药浓度;划痕实验检测左金方及小檗碱对SGC7901细胞迁移能力的影响;细胞侵袭实验(transwell小室)检测左金方及小檗碱对SGC7901细胞侵袭能力的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测左金方及小檗碱作用SGC7901细胞24 h后对上皮间质转化(EMT)标志性蛋白上皮型钙黏蛋白(Ecadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达的影响。结果:制备的左金方冻干粉含9.85%的小檗碱;左金方、小檗碱对SGC7901细胞作用24 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为165,51.8 mg·L~(-1),选用165 mg·L~(-1)左金方(含小檗碱16.3 mg·L~(-1))与16.3 mg·L~(-1)小檗碱进行后续实验;左金方及小檗碱均能抑制SGC7901细胞划痕愈合及侵袭能力;Western blot结果显示,与空白组比较,左金方及小檗碱能明显上调E-cadherin表达,下调N-cadherin表达(P0.05)。结论:左金方及其主要成分小檗碱能抑制人胃癌细胞SGC7901的生长、侵袭及迁移,能抑制SGC7901细胞上皮间质转化,且小檗碱在复方中为其主要药效成分。     

小檗碱对AGS细胞增殖和IL-8含量的影响

目的:观察小檗碱对胃癌AGS细胞增殖的影响及其对IL-8含量的影响。方法:采用MTT法测定小檗碱及信号通路抑制剂对AGS细胞生长的影响;ELISA法测定小檗碱及抑制剂对AGS细胞IL-8含量的影响。结果:小檗碱对AGS细胞的生长具有良好的抑制作用,该作用呈剂量和时间依赖性,作用AGS细胞48h的IC50值为83μM。进一步研究发现,SB203580、JAK inhibitor和LY2940002能显著抑制AGS细胞的增殖,经SB203580、JAK inhibitor和LY2940002预处理AGS细胞能显著增加小檗碱抑制AGS细胞的增殖作用,而醋竹桃霉素及预处理后加小檗碱干预对AGS细胞的增殖无明显影响。ELISA结果表明,小檗碱(60μM)能够显著降低AGS细胞IL-8含量,而SB203580、JAK inhibitor、姜黄素对AGS细胞IL-8的表达无明显影响;而LY294002能显著降低AGS细胞IL-8含量,经LY294002预孵育0.5 h后小檗碱干预96 h后,AGS细胞中IL-8的含量较两药单用低。结论:小檗碱(60μM)能显著抑制AGS细胞的增殖和IL-8的表达,其作用机制可能与PI3K信号通路的抑制密切相关,而p38 MAPK和JAK信号通路在小檗碱抑制AGS细胞增殖和IL-8表达的作用机制中担当的作用尚待进一步研究和证实。此外,AGS细胞中IL-8的表达与AGS细胞的增殖之间无直接必然的联系。     

吴茱萸碱、小檗碱对SGC-7901/DDP耐药性及耐药相关蛋白的影响

目的：探讨吴茱萸碱、小檗碱及其联合使用对顺铂（Cisplatin, DDP）耐药胃癌细胞SGC7901/DDP敏感性的作用。方法：体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP,实验分为对照组、DDP组、吴茱萸碱+DDP 组、小檗碱+DDP 组及吴茱萸碱+小檗碱+DDP 组,CCK8 检测各组SGC-7901/DDP 细胞增殖能力;Western Blot 分析耐药及凋亡相关蛋白P-gp、MRP、caspase-3、caspase-9的表达。结果：CCK8实验表明吴茱萸碱、小檗碱在不影响SGC-7901/DDP 细胞活力的情况下可显著增强DDP抑制细胞增殖的作用,且小檗碱（8 μM）与吴茱萸碱（3.2 μM）联合给药增强SGC-7901/DDP化疗敏感性的作用明显强于二者单独给药（P <0.001）;Western Blot结果表明,SGC-7901/DDP细胞经吴茱萸碱、小檗碱处理后,caspase-3、caspase-9表达上调,P-gp、MRP表达下调。结论：吴茱萸碱、小檗碱单用及其联用可在体外显著增强SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性,其效应与凋亡蛋白caspase-3、caspase-9表达升高,耐药相关蛋白P-gp、MRP表达下调相关。     

重楼醇提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察重楼醇提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测重楼醇提取物对胃癌细胞增殖影响的情况;采用流式细胞术考察不同浓度重楼醇提取物作用胃癌SGC-7901细胞后,细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:不同浓度的重楼醇提取物作用于胃癌SGC-7901细胞后,细胞克隆率显著降低,且与剂量呈依赖关系。细胞周期分析显示:重楼醇提取物能够导致S期阻滞,G2/M期细胞比例显著下降,Alinenv-FITC法检测发现7μg·m L-1的重楼醇提取物作用胃癌SGC-7901细胞24h后的凋亡细胞比例为23.28%,明显高于正常对照组,且存在剂量依赖性。结论:重楼醇提取物对胃癌SGC-7901细胞生长有明显抑制作用,并可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

小檗碱对K562细胞分化及凋亡的影响

目的:研究小檗碱对K562细胞是否具有抑制增殖、促进分化、诱导凋亡的作用,为临床应用黄连治疗慢性粒细胞白血病提供理论依据.方法:MTT比色法、克隆形成实验检测小檗碱对K562细胞增殖的影响;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞凋亡的形态改变;DNA琼脂糖凝胶电泳检测晚期细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期分布,细胞表面分化抗原表型检测分析细胞分化.结果:小檗碱对K562细胞的生长有抑制作用;小檗碱与Ara-C联用存在一定的协同效应;小檗碱处理K562细胞48 h后能明显促进其向红系、粒系、巨核系分化,随着作用时间的延长小檗碱诱导K562细胞发生凋亡的百分比逐渐增加.结论:小檗碱能有效地抑制K562细胞的增殖,其作用可能是通过诱导K562细胞发生G0/G1期和(或)G2期阻滞并进一步诱导其凋亡和分化实现的.     

小檗碱对胰岛素抵抗大鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的 探讨小檗碱对胰岛素抵抗大鼠胰岛β细胞凋亡的影响。     

虎杖提取物白藜芦醇对人胃癌7901细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨虎杖提取物白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人胃癌SGC 7901细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 给予人胃癌SGC 7901细胞Res(10.0,25.0,50.0和100.0μmol/L)处理不同时间后,分别采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞仪检测SGC 7901细胞的增殖和凋亡情况;同时采用免疫印记法检测促凋亡基因(Bax和Caspase-3)、抑制凋亡基因(Bcl-2)、Akt及其磷酸化形式(p-Akt)的蛋白水平.结果 Res可抑制SGC 7901胃癌细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖.4种浓度的Res处理SGC 7901细胞24h后的凋亡率随着浓度的升高增加,分别为(17.53±2.24)％、(26.37±4.58)％、(45.74±9.52)％和(71.83±12.95)％,均高于溶剂对照组(P＜0.05).Res可呈浓度依赖的方式上调Bax和Caspase-3的蛋白水平,降低Bcl-2和p-Akt蛋白水平.结论 虎杖提取物白藜芦醇可抑制人胃癌SGC 7901细胞的增殖并促进其凋亡,可能的机制是通过抑制PI3K/Akt信号通路来实现的.     

黄芪多糖对胃癌细胞的生长抑制和促凋亡作用

目的研究黄芪多糖对胃癌细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法用RPMI1640培养液对低分化人胃腺癌细胞株MKN45、高分化人胃腺癌细胞株MKN28进行传代培养,取对数生长期细胞培养24h后分别予不同浓度的塞来昔布和黄芪多糖,空白阴性对照组只加培养液不加细胞。用噻唑蓝（MTT）法观察黄芪多糖及塞来昔布对胃癌细胞株MKN45和MKN28增殖的影响;用流式细胞术方法测药物作用后细胞凋亡和细胞周期变化。结果黄芪多糖和塞来昔布均可抑制胃癌细胞株MKN45和MKN28的增殖,效应呈浓度和时间依赖性,塞来昔布各浓度组加药24、48 h后,MKN45、MKN28均明显低于空白阴性对照组（P〈0.05,P〈0.01）;而黄芪多糖5～20 mg/mL范围内加药24、48 h后MKN45、MKN28均明显低于空白阴性对照组（P〈0.01）,而黄芪多糖2～2.5 mg/mL浓度组加药48 h MKN28低于空白阴性对照组（P〈0.05）。黄芪多糖可诱导MKN45细胞凋亡,阻滞MKN45细胞周期于G1期,但对MKN28细胞凋亡和细胞周期无明显影响;塞来昔布可诱导MKN45细胞凋亡,但对MKN28细胞凋亡及2种细胞的细胞周期均无明显影响。结论黄芪多糖能抑制胃癌细胞增殖,其机制之一是影响细胞周期使之阻滞于G1期,诱导细胞凋亡。     

松萝烟酰胺对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移的影响

目的探讨松萝烟酰胺对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制。方法体外培养SGC-7901细胞,分为对照组和不同浓度的松萝烟酰胺实验组,显微镜观察各组细胞形态;MTT法测定SGC-7901细胞增殖;AnnexinV/PI双染和DAPI荧光染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;细胞划痕实验检测细胞的迁移。结果松萝烟酰胺处理SGC-7901细胞后,细胞发生皱缩、变形,贴壁细胞脱落;MTT结果显示,松萝烟酰胺对SGC-7901增殖抑制作用呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;AnnexinV/PI双染结果显示,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞的晚期凋亡率增加,且DAPI染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂;流式结果显示,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞周期停滞在S期;划痕实验显示,随着时间的延长、浓度的增加,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞迁移率下降越明显。结论松萝烟酰胺对SGC-7901细胞具有增殖抑制作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞于S期,从而抑制细胞的迁移。     

粉防己碱对人胃癌耐药细胞锌指蛋白139、多药耐药基因表达的影响

目的探讨粉防己碱（tetrandrine,TET）对胃癌细胞及耐药细胞中锌指蛋白139（zincfingerprotein139,ZNFl39）及多药耐药（multidrugresistance,MDR）基因的影响。方法MTT法检测不同浓度（0．5、1．0、1．5、2．0、2．5闪,mL）TET对胃癌细胞SGC7901、SGC7901／ADR细胞株的抑制作用;通过RT-PCR法检测TET作用前后SGC7901／ADR细胞内ZNFl39、MRP-1、MDR1、GST-π表达情况,以Spearman相关分析检验ZNF139与各多药耐药因子之间关系并计算相关系数。结果MTT结果显示,2．0μg／mL及以下浓度TET对SGC7901、SGC7901／ADR两种细胞的抑制率均〈10％;在SGC7901／ADR细胞中ZNF139、MRP-1、MDRl、GST-πmRNA表达高于SGC7901细胞（均P〈0．05）;TET能抑制SGC7901／ADR细胞中ZNF139、MRP-1、MDR1、GST-πmRNA的水平（均P〈0．05）;TET作用前SGC7901／ADR细胞中ZNF139与MRP．1、MDR1存在相关关系,作用后这种相关性仍存在（均P〈0．05）。结论TET可能通过抑制ZNF139下调、MDR1、MRP1的表达从而逆转胃癌耐药细胞MDR表型。     

黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡影响的研究

目的:探讨黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法:MTS法检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对胃癌细胞的抑制作用,Hoechst 33258染色检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对细胞凋亡的影响;Real Time Q-PCR检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达;Western blot检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:不同浓度的黄连素能显著降低人胃癌细胞SGC701活性(P<0.05,P<0.01),促进其凋亡,升高Cleaved Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:不同浓度的黄连素可诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与升高Cleaved Caspase-3、Bax的表达,降低Bcl-2的表达有关。     

二氢丹参酮抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭迁移作用及机制研究

目的研究二氢丹参酮(DHT)对人胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其作用的分子机制。方法利用不同浓度的DHT处理细胞后,MTT法检测DHT对细胞生长活力的影响,划痕实验观察DHT对细胞运动能力的影响,Transwell小室模型研究DHT对细胞迁移和侵袭的影响,q RT-PCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和Hedgehog通路调控基因Gli1和HHIP的m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,DHT可显著抑制SGC7901细胞的体外增殖及迁移能力,Transwell实验表明药物处理后穿膜细胞数明显低于对照组,并且呈剂量依赖性。Western blotting和q RT-PCR实验结果表明,DHT可显著抑制SGC7901细胞中MMP9的表达,降低Gli1基因的m RNA和蛋白表达,并提高HHIP基因的表达水平。结论 DHT能够抑制SGC7901细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与MMP9蛋白的表达降低和Hedgehog通路活性抑制有关。     

重楼复方对人胃癌细胞MKN-45增殖抑制作用及分子机制研究

目的 研究重楼复方对人胃癌细胞株MKN-45增殖抑制作用,及其对细胞周期、细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制.方法 不同浓度的重楼复方作用于MKN-45细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR法检测凋亡相关基因Survivin、c-IAP1、c-IAP2、Bcl一2 mRNA的表达.结果 重楼复方以剂量依赖方式抑制人胃癌细胞株MKN-45的细胞增殖,其半数抑制浓度(IC50值)为0.67 mg·mL-1.重楼复方0.2,0.4,0.8 mg·mL-1作用于MKN-45细胞48h后,其早期凋亡率分别为7.0%、13.8%、36.3%,而对照组为3.4%,其诱导凋亡作用呈现剂量依赖性.重楼复方0.8 mg·mL-1作用于MKN-45细胞24 h后,细胞积聚在G0/G1期(对照组63.30%,重楼复方73.16%),同时S期细胞比例减少(对照组32.48%,重楼复方22.52%).重楼复方0.8 mg·mL-1作用MKN-45细胞48 h后,Survivin、c-IAP1、c-IAP2、Bcl-2的mRNA水平均下调.结论 重楼复方具有抑制人胃癌细胞株MKN-45增殖及诱导细胞凋亡作用,并能阻滞细胞于G0/G1期,下调Survivin、c-IAP1、c-IAP2、Bcl-2 mRNA的表达可能为其诱导细胞凋亡的主要机制之一.     

人参皂苷Rg5调控lncRNA-PCAT12抑制胃癌细胞生长实验研究

目的:探讨人参皂苷Rg5通过抑制长链非编码RNA-PCAT12(lncRNA-PCAT12)抑制胃癌(GC)细胞增殖与迁移的价值。方法:对数生长期的人胃癌SNU-1细胞分为四组,A组,B组与C组加入0.03,0.06,0.09μmol/L Rg5处理,对照组加入5%DMSO进行处理。MTT法检测细胞增殖、双染法检测细胞凋亡、划痕实验检测细胞迁移、实时定量PCR检测lncRNA-PCAT12表达。结果:处理后24、48、72 h,对照组中lncRNA-PCAT12表达水平和癌细胞增殖指数高于各实验组(P<0.05),C组均低于B组与A组(P<0.05)。实验各组细胞凋亡率均比对照组高(P<0.05),C组比B组与A组高(P<0.05)。转染48 h后,实验各组细胞迁移距离都小于对照组(P<0.05),而C组小于其他两个实验组(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg5能通过抑制lncRNA-PCAT12的表达,且高浓度的效果更显著,可通过抑制GC细胞增殖与迁移,促进其凋亡,从而发挥抑癌作用。     

重楼皂苷D对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

重楼皂苷D(polyphyllin D)是重楼中的一种甾体皂苷单体,具有抗菌、镇痛、镇静、抗肿瘤等多种药理作用,但在胰腺癌中少有报道。该研究通过检测凋亡相关指标,探讨polyphyllin D对人胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。采用CCK-8法检测不同浓度的(0,1,2,3,4,5μg·μL-1)polyphyllin D分别处理胰腺癌Panc-1细胞24,48,72 h后,观察对细胞增殖的影响。采用流式细胞术对细胞周期、细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane protential,MMP)进行检测,Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞色素C (cytochrome C,Cyto C),Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3,cleaved caspase-9的蛋白表达情况。结果表明,与对照组相比,polyphyllin D能够时间和浓度依赖性地抑制Panc-1细胞的增殖活性。流式细胞术检测显示polyphyllin D能浓度依赖性使细胞阻滞于S期和G2/M期,MMP明显降低,细胞凋亡率随polyphyllin D作用浓度增加而增加。Western blot结果显示,polyphyllin D能浓度依赖性地上调Bax,Cyto C,cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达水平,下调Bcl-2的蛋白表达水平。以上研究结果提示,polyphyllin D能抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖,其机制可能与阻滞细胞的生长周期以及通过线粒体途径诱导细胞的凋亡相关。     

健脾解毒方诱导裸鼠人胃癌细胞凋亡相关基因表达的研究

目的:研究健脾解毒方对裸鼠人胃癌皮下移植瘤的抑制作用,利用基因芯片筛选其诱导裸鼠人胃癌细胞凋亡相关基因表达,分析其可能的作用靶点。方法:建立人胃癌MKN-45细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组:生理盐水对照组、替加氟化疗组100mg·kg-1·2d-1、中药健脾解毒方组(40g/kg)、健脾解毒方联合化疗药组(健脾解毒方40g/kg联合替加氟100mg·kg-1·2d-1,每组12只。给药14d后观察各组瘤体质量量和动物生存期,并利用Affymetrix Genechip U133 Plus2.0基因芯片筛选健脾解毒方诱导凋亡相关基因表达。结果:与对照组相比,健脾解毒方组瘤体质量量明显降低(P<0.01),生存期显著延长(P<0.01)。且健脾解毒方联合化疗药组对肿瘤的生长抑制作用明显优于单纯化疗组和单纯健脾解毒方组(P<0.05)。基因芯片分析结果显示,健脾解毒方治疗后表达丰度相差在2倍以上基因的有879个,其中与细胞凋亡相关的基因有358个。结论:健脾解毒方抗裸鼠人胃癌作用,联合化疗药可提高疗效,其抗癌机制与诱导胃癌细胞凋亡有关。