应用套式PCR技术检测我国西南部分疟区疟原虫的感染状况

目的　建立鉴别人体四种疟原虫的套式 PCR技术 ,检测我国西南部分疟区疟原虫的感染情况。方法　选用两组疟原虫引物 ,扩增 SSU r DNA特定片段 ,经琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色 ,紫外检测凝胶分析仪观察并摄像。结果　采用上述方法扩增出间日疟、恶性疟和三日疟分别为 10 4bp、10 2 bp和 115 bp特异片段。所检测的 138份疟疾患者血样中 ,四川名山县 95份均为间日疟单纯感染 ,筠连县 37份中 10份为与间日疟和 /或恶性疟呈混合感染的三日疟 ,云南金平县的 6份均为合并恶性疟的两种或两种以上疟原虫混合感染。结论　所建立的套式PCR检测系统具有敏感性高、特异性好和稳定可靠等优点 ,在疟疾诊断、虫种鉴别、混合感染的判定、大规模流行病学研究和疫情监控预测等方面具有实际应用价值。     

套式/多重PCR检测疟疾感染的应用研究

目的了解标签引物-套式/多重PCR技术在检测疟疾感染中的现场应用价值。方法随机采取我省疟疾流行区有发热症状的居民及家庭成员的耳垂血79份,同时制作厚血片和滤纸血样本各1份,用标签引物-套式/多重PCR检测所采集滤纸血样本中的疟原虫,并与镜检法进行比较。结果79份样本中,用标签引物-套式/多重PCR技术检出间日疟原虫阳性6例,镜检初检出10例间日疟原虫阳性,经复查血片后有4例排除了疟疾感染。镜检复核阳性的6例样本PCR均为阳性。以镜检复核为标准,两法阳性和阴性符合率为100%。结论标签引物-套式/多重PCR检测疟疾感染具高度敏感性和特异性,对疟疾鉴别诊断和明确诊断具有重要价值。     

用套式PCR诊断肺炎支原体感染

应用套式PCR检测患儿咽部分泌物中的肺炎支原体（MP），阳性率为44．4％（28／63），比单式明显增高，由于两次扩增，增强信息量，增除生殖道支原体的假阳性，排除了其他干扰，提高检测的特异性、敏感性。     

用套式PCR诊断肺炎支原体感染

应用套式ＰＣＲ检测和咽部分泌物中的肺炎支原体，阳性率为４４．４％，比单式明显增高，由于两次扩增，增强信息量，清除生殖道支原体的假阳性，排除了其他干扰，提高检测的特异性，敏感性。     

套式PCR与血清学方法用于检测肺炎支原体感染的对比研究

目的 比较基于16SrRNA的套式PCR与血清学方法 对肺炎支原体(Mp)的检出情况.方法 获取医院呼吸内科96例呼吸道标本,设计针16SrRNA特异性引物,用套式PCR法扩增.同时获取双份血清标本检测Mp抗体,比较两种方法 的阳性率.结果 套式PCR对Mp的检出率为22.9%,双份血清检出率为18.75%,差异无统计...     

半套式直接原位PCR技术在乙型肝炎HBVcccDNA检测中的临床应用价值研究

目的 探讨丰套式直接原位PCR方法在乙型肝炎HBVcccDNA检测中的临床应用价值.方法 根据HBVcccDNA序列特点,设计跨缺口引物,选取10例乙肝慢性感染、肝硬化及肝癌患者的石蜡包埋肝组织,采用半套式直接原位PCR技术进行HBVcccDNA的检测,并与传统方法进行比较.结果 HBVcccDNA在乙肝慢性感染者和肝癌患者肝细胞中阳性表达以核型为主,呈蓝色、蓝紫色、紫色颗粒状或团块状,10例检出7例,检出阳性率为70%,肝细胞阳性表达(+)～(++++)之间不等,组织切片总阳性表达率为30%～80%,阴性对照组均为阴性.结论 半套式直接原位PCR方法敏感性及特异性均高于传统原位PCR方法,可用于肝组织HBVcccDNA的原位检测.     

套式PCR在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值

目的采用套式PCR（二次扩增）替代传统PCR（一次扩增）扩增痰中结核分枝杆菌embB基因。探讨其在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值。方法选取本院已确诊的活动性肺结核住院病人68例和非结核肺部感染病人16例，嘱其留取晨痰，分别进行套式PCR扩增和传统PCR扩增，再行产物分析。结果68例活动性肺结核病人传统PCR扩增embB基因阳性结果为29例，阳性率为42．6％。套式PCR扩增embB基因阳性结果为47例。阳性率为69．1％，两者比较差异有显著性（X^2=9．66，P〈0．05）；16例非结核病人传统PCR和套式PCR和检测结果均为阴性，两者特异度均为100％。结论检测结核分枝杆菌embB基因突变，套式PCR灵敏度高于传统PCR．两者特异度相同，套式PCR能快速、敏感、特异地扩增结核分枝杆菌embB基因片段。     

半套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Q热立克次体的16S和23S rRNA基因及其间区的序列。设计3条引物,建立了扩增16S－23S mRNA基因间区的半套式PCR方法,并将扩增片段制成探针,建立了斑点杂交技术。结果 10株Q热立克次体分离株均可扩增出572bp的PCR条带,而对照菌都为阴性,此半套式PCR方法的灵敏度高达1pg;用九里株扩增片段标记后制成的探针,与10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交,对照菌为阴性,此杂交方法的灵敏度为0．5ng。结论 基于Q热立克次体16S－23S rRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度,可联合应用于Q热的病原学诊断。     

间日疟原虫重组蛋白用于检测间日疟患者抗体水平的观察

目的观察间日疟原虫重组蛋白PvMSP1-19用于检测间日疟患者抗体水平的效果。方法采用His-tag亲和层析柱对间日疟原虫PvMSP1-19重组蛋白初步分离,再经快速蛋白液相色谱仪（FPLC）XK16/70 Superdex75预装柱进一步纯化和Western blot分析。用纯化后的PvMSP1-19重组蛋白包被ELISA板,检测间日疟现症患者、既往感染者和正常人血浆IgG1、IgG4、IgM、IgD、IgE抗体水平。结果间日疟现症患者血浆中抗PvMSP1-19 IgG1抗体水平明显高于间日疟既往感染者和正常人（t=5.535,P〈0.05）。结论间日疟现症患者血浆中含有高水平的抗PvMSP1-19抗体IgG1。     

甲型副伤寒沙门菌套式PCR检测方法的研究

目的 探讨套式聚合酶链反应(Nested polymerase chain reaction,Nested-PCR)快速检测伤寒杆菌的实验方法。方法 根据副甲伤寒杆菌鞭毛抗原基因DNA核苷酸序列设计特异寡核苷酸引物，建立套式PCR技术，对1株伤寒杆菌及5株非伤寒杆菌进行扩增。结果 除副甲伤寒杆菌出现343bp的特异性扩增区带外，其他5株非伤寒杆菌均为阴性。结论 Nested-PCR是一种快速、敏感、特异检测伤寒杆菌的方法，为伤寒的临床早期诊断和及时治疗提供客观依据。     

布鲁菌病半套式PCR检测方法的建立

目的 建立布鲁菌属半套式PCR检测方法。方法根据布鲁菌BCSP-31蛋白基因设计三条引物，扩增目的片段长223bP，通过条件优化，建立了布鲁菌属半套式PCR检测方法。利用所建立的PCR方法对六个种布鲁菌和Y．CenterO：9，S．TyPhi，E．Coli O：157进行检测验证其特异性，通过对活菌计数检测验证其敏感性。结果检测结果表明六个种布鲁菌均可扩出223bP的目的片段，而Y．Center O：9，S．TyPhi和E．Coli O：157不能扩出目的片段。通过对活菌计数最低可检测到20个细菌。结论本研究建立了敏感、特异的布鲁菌病半套式PCR快速检测方法，为布鲁菌的检测和试剂盒的研制奠定了基础。     

套式PCR检测肝癌,肝硬化患者血清丙型肝炎病毒感染的分析

作者应用套式聚合酶链反应技术检测了４６例肝癌，５２例肝硬化和３０例对照组病人血清丙型肝炎病毒ＲＮＡ，并与乙型肝炎病毒ＤＮＡ和ＥＬＩＳＡ法检测的免疫学标志物进行对比。发现ＰＣＲ检测肝癌，肝硬化和对照组ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率分别为３０．４％，２８．８％和６．７％；ＥＬＩＳＡ法检测ＨＣＶ血清标志物阳性率分别为２６．１％，２６．９％和６．７％，肝癌，肝硬化两组两指标均显著高于对照组。     

空肠弯曲菌套式PCR快速检测方法的建立与初步应用

目的建立套式PCR快速检测实验动物空肠弯曲菌的方法。方法根据GenBank数据库的空肠弯曲菌flaA基因设计2对引物，对空肠弯曲菌抽提DNA作PCR扩增及克隆测序。同时，对其他病原菌抽提核酸扩增，并对120份临床样品进行检测。结果空肠弯曲菌经2对引物分别扩增出1719bp和640bp片段，与预期大小一致。套式PCR检测的最低限度为10CFU。整个检测过程可在8h内完成。而其他病原菌未出现特异性扩增条带。采用套式PCR对121份临床样品进行检测，检出31份阳性，与传统的细菌分离方法完全一致。结论本研究建立的套式PCR方法具有很好的特异性和敏感性，可用于实验动物空肠弯曲菌的快速检测。     

套式PCR检测供血者血清人巨细胞病毒DNA的评价

输血是传播人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）的重要途径。为预防输血传播ＨＣＭＶ,有人主张对供血者检测ＨＣＭＶＩｇＭ抗体［１］或ＨＣＭＶＩｇＧ抗体［２］。Ｔｏｋｉｍａｔｓｕ发现血清ＨＣＭＶＤＮＡ含量与ＨＣＭＶ感染的活动性相关［３］。为探讨供血者体检的有效筛选试验,应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）检测了１２８例供血者的血清ＨＣＭＶＤＮＡ、ＨＣＭＶＩｇＭ抗体、ＨＣＭＶＩｇＧ抗体及２１例白细胞ＨＣＭＶＤＮＡ。１　材料与方法１９９７年５月我院输血科供血者１２…     

一例输入性恶性疟和间日疟混合感染重症病例的救治报告

<正>2013年1月,随县发现1例输入性恶性疟和间日疟混合感染重症病例,由于救治及时得当,患者痊愈出院。现将病例救治情况报告如下:1病例资料1.1基本情况患者周某,男,45岁,随县某镇人。2012年6月经县级中介公司介绍赴安哥拉务工,从事房屋建筑。2013年1月2日从安哥拉回到家中,境外务工半年。1.2发病及就诊患者2013年1月19日发病,自感身体不适,继之发冷、发热、出汗。20~22日,首诊村医务室,以感冒治疗无效,反复高热,体温最高达40.2℃22     

云南省1例输入性三日疟实验室检测分析

目的对云南省1例输入性疟疾患者的血样进行实验室检测分析。方法采用疟原虫属特异性引物和种特异性引物对该样本进行巢式PCR检测,将PCR扩增结果进行序列测定,并对获得的序列进行Blast比对,分析其分子性状。结果使用疟原虫属特异性引物r PLU5和r PLU6对血样进行PCR检测,第一轮未扩增出预期条带;使用疟原虫种特异性引物对血样进行PCR检测,扩增出预期大小约141bp的三日疟条带,无对应大小的恶性疟、间日疟和卵形疟扩增条带产生。序列分析表明,扩增片段长度为115bp,进行Blast比对发现,与Genbank中注册编号为gb|KJ934253.1的三日疟对应部分的基因序列同源性为96%。结论通过使用巢式PCR、序列测定分析等方法,基本证实该病例为三日疟原虫感染。     

应用多重套式PCR同时检测病毒性肝炎患者血清中HBV DNA和HCV RN …

目前国内外虽已有对ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ用ＰＣＲ方法一次性同时检测技术,但由于广泛昨杂,易污染,费用高,在基层医院难以开展,笔者根据ＨＢＶＤＮＡ在血清中含量较多,易于提取的特点,将ＨＢＶ的引物用量由两次扩增减为一次扩增,并将蛋白酶Ｋ改为异硫氰酸胍一饱和酚抽提,使反应时间有所缩短,又使成本费减少近３０％,经对９２例患者血清的检测,结果发现与同份血清单一ＰＣＲ方法检测ＨＢＶ和ＨＣＶ感染阳性的总符合     

巢氏PCR检测血片中低密度间日疟原虫的研究

【摘要】目的 探讨巢式PCR应用于检测低密度疟原虫血片DNA的方法。 方法 以健康人抗凝血为稀释液提取不同浓度梯度间日疟原虫血片DNA,测定其最低检出限,将一份含有高密度间日疟原虫的抗凝血样按照1：10、1：100、1：1000、1：2000、1：4000、1：8000、1：16000、1：32000比例进行稀释,制成9个浓度梯度血样。每个浓度血样按照厚血膜5ul、薄血膜2ul同时制作2张血片,连续稀释（9个稀释度）一份含有高密度间日疟原虫的EDTA抗凝血样本,制作标准血片,同时进行所制得的血片中厚、薄血膜通过显微镜计数后,分别用以提取DNA,进行和巢式PCR检测。 结果 间日疟原虫血片厚血膜的检出限为1：16000（08个虫/μl血）,薄血膜检出限为1：100,与镜下计数水平一致。 结论 巢式PCR适用于低密度血片中间日疟原虫DNA的检测,具有较高的检测意义。     

解脲脲原体、人体支原体套式PCR检测及临床意义

目的 探讨解脲脲原体（Uu)、人型支原体（Mh）套式PCR（nPCR)检测的应用价值。方法 收集195例生殖道炎症、79例原发性不孕、24例继发性不孕宫颈拭子标本进行Uu与Mh nPCR检测。结果 1.Un与Mh nPCR特异性考核试验示特异好；2.生殖道炎症，原发性不孕和继发性孕妇女宫颈拭子中Uu与Mh2种支原体总检出率分别高达62.6%、46.8%和50.0%。结论 盐城地区生殖道炎症、原发性和继发性不孕妇女中Un与Mh感染率较高，应引起妇产科医师的关注。