宫颈癌及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性的研究

目的：探讨Hela及HHUC细胞系中hTERT启动子的活性及其与hTERT mRNA表达和端粒酶活性之间的关系。方法：将hTERT核心启动子基因转入Hela、HHUC细胞系、人正常皮肤表皮细胞及子宫内膜上皮细胞中，检测细胞系hTERT启动子的活性、hTERT mRNA表达水平及端粒酶活性。分别以HEK293细胞系作为阳性对照，HELF细胞系作为阴性对照。结果：细胞系Hela、HHUC、人正常皮肤表皮细胞及正常子宫内膜上皮细胞中的hTERT启动子活性分别为20．1％、14．9％、0．3％和0．5％；hTERT mRNA相对表达水平分别为0．63、0．51、0和0；端粒酶活性分别为0．393、0．387、0．144和0．152。结论：宫颈癌细胞系及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性、hTERT mRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高，而在正常角化细胞及子宫内膜上皮细胞中则被抑制或不表达。hTERT启动子活性水平与hTERT mRNA表达水平和端粒酶活性之间有显著相关性。     

食管鳞癌组织端粒酶亚基的表达及端粒酶活性的关系

目的　探讨食管鳞癌组织中端粒酶活性、端粒酶逆转录酶 (h TERT)及端粒酶相关蛋白 - 1(TP- 1)的表达及其关系。方法　应用 TRAP-银染法对 45例食管鳞癌组织端粒酶活性的检测 ,同时应用原位杂交对癌组织切片进行 h TERT、TP- 1的 m RNA表达的检测。结果　癌组织端粒酶活性阳性率为 82 .2 %。癌组织中不同分化程度的端粒酶活性差异无显著性 (P>0 .0 5 )。有淋巴结转移者癌组织端粒酶活性明显高于无淋巴结转移者 ,差异有显著性(P<0 .0 5 )。癌组织中 h TERTm RNA表达的阳性率为 6 4.4%,TP- 1的阳性率为 6 2 .2 %。 h TERT的 m RNA表达与端粒酶活性密切相关 ,而 TP- 1的 m RNA表达与端粒酶活性无相关。结论　食管鳞癌组织中端粒酶活性及h TERT、TP- 1的 m RNA表达均较高。端粒酶活性与淋巴结转移有关。 h TERT与端粒酶活性有密切关系。     

荧光定量PCR检测外周血CK20 mRNA对子宫内膜癌微转移的诊断意义

目的:研究子宫内膜癌患者外周血中角蛋白20(CK20)mRNA的表达情况,并探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)检测子宫内膜癌微转移的可行性及临床价值。方法:采用FQ-PCR方法对64例子宫内膜癌患者外周血、42例良性子宫病变患者及20位健康女献血员外周血中的CK20 mRNA表达水平进行检测;并同法检测20例术中切除的肿瘤组织的CK20 mRNA。结果:子宫良性病变患者及健康女性外周血中CK20 mRNA表达均<103copies/μL的检测下限;子宫内膜癌组织CK20 mRNA表达水平为(2.08±0.84)×106copies/μL,阳性率为100%。而64例子宫内膜癌患者外周血中CK20 mR-NA表达水平为(5.52±1.14)×104copies/μL,高表达率(阳性率)为40.6%(26/64)。CK20 mRNA表达水平与临床分期差异有统计学意义,P<0.05,与病理分级无关,P>0.05。结论:FQ-PCR可快速、灵敏地定量子宫内膜癌外周血CK20 mRNA的表达,对预测子宫内膜癌微转移以及判断患者预后具有一定指导意义。     

荧光定量PCR检测外周血CK20 mRNA对子宫内膜癌微转移的诊断意义

目的：研究子宫内膜癌患者外周血中角蛋白20（CK20）mRNA的表达情况，并探讨荧光定量PCR（FQ-PCR）检测子宫内膜癌微转移的可行性及临床价值。方法：采用FQPCR方法对64例子宫内膜癌患者外周血、42例良性子宫病变患者及20位健康女献血员外周血中的CK20mRNA表达水平进行检测；并同法检测20例术中切除的肿瘤组织的CK20mRNA。结果：子宫良性病变患者及健康女性外周血中CK20mRNA表达均〈10^3 copiesuL的检测下限；子宫内膜癌组织CK20 mRNA表达水平为（2．08&#177;0．84）&#215;10^4 copies／uL，阳性率为100％。而64例子宫内膜癌患者外周血中CK20 mRNA表达水平为（5．52&#177;1．14）&#215;10^4 copies／uL，高表达率（阳性率）为40．6％（26／64）。CK20 mRNA表达水平与临床分期差异有统计学意义，P〈0．05，与病理分级无关，P〉0．05。结论：FQPCR可快速、灵敏地定量子宫内膜癌外周血CK20 mRNA的表达，对预测子宫内膜癌微转移以及判断患者预后具有一定指导意义。     

子宫内膜癌及癌周组织VEGF mRNA表达及其临床意义初步研究

目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜癌组织及癌周组织中的表达情况,分析其在肿瘤生长和转移中的可能作用.方法:采用荧光定量PCR方法检测51倒不同临床分期的子宫内膜癌组织和癌旁组织及40例正常子宫内膜标本中VEGF mRNA的表达情况,分析其与各临床病理参教之问的关系.结果:子宫内膜癌组织中的VEGF mRNA表达水平显著高于癌旁组织及正常子宫内膜组织,F=10.24,P<0.05;子宫内膜癌组织中VEGF mRNA的表达与肿瘤病理类型及患者是否绝经无相关性,F值分别为2.98和3.10,P值均0.05,但与临床分期、组织学分级、淋巴结转移和肌层漫润深度显著相关,F值分别为4.72、5.01、5.30和5.23,P值均<0.05.结论:VEGF在子宫内膜癌的发生、侵袭、转移和预后过程中可能起着十分重要的作用,VEGF有可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点.     

子宫内膜癌及癌周组织VEGF mRNA表达及其临床意义的初步研究

目的：检测血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜癌组织及癌周组织中的表达情况，分析其在肿瘤生长和转移中的可能作用。方法：采用荧光定量PCR方法检测51例不同临床分期的子宫内膜癌组织和癌旁组织及40例正常子宫内膜标本中VEGF mRNA的表达情况，分析其与各临床病理参数之间的关系。结果：子宫内膜癌组织中的VEGF mRNA表达水平显著高于癌旁组织及正常子宫内膜组织，F=10．24，P〈0．05；子宫内膜癌组织中VEGF mRNA的表达与肿瘤病理类型及患者是否绝经无相关性，F值分别为2．98和3．10，P值均〉0．05；但与临床分期、组织学分级、淋巴结转移和肌层浸润深度显著相关，F值分别为4．72、5．01、5．30和5、23，P值均〈0．05。结论：VEGF在子宫内膜癌的发生、侵袭、转移和预后过程中可能起着十分重要的作用，VEGF有可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。     

宫颈癌脱落细胞人端粒酶逆转录酶mRNA表达临床意义的探讨

目的:探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在宫颈癌(CC)脱落细胞中的表达及其与临床病理参数之间的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR技术,检测人宫颈癌HeLa细胞株(细胞组)、40例宫颈癌(宫颈癌组)和21例正常或慢性宫颈炎(对照组)患者宫颈脱落细胞中hTERT mRNA的表达,以细胞组hTERTmRNA的表达作为定性、定量参照。结果:宫颈癌组和对照组中hTERT mRNA阳性表达率分别为82.5%和9.5%,差异有统计学意义,P=0.000;两组hTERTmRNA的相对定量水平NhTERT分别为0.327 6~13.782 3和0.009 3~0.081 6,差异均有统计学意义,P=0.019;hTERTmRNA阳性表达与宫颈癌的分化程度具有负相关性(r=-0.308,P=0.016),与年龄、临床分期、间质浸润深度和组织学分类无相关性。结论:宫颈癌患者宫颈脱落细胞hTERT mRNA阳性表达率及相对定量水平均异常增高,检测宫颈脱落细胞hTERT mRNA的表达有助于宫颈癌的诊断及预后评估。     

子宫内膜癌端粒酶活性研究

目的探索端粒酶活性与子宫内膜癌发生发展的关系。方法采用ＰＣＲ－ＴＲＡＰ方法检测３４例子宫内膜癌和６例正常子宫内膜组织的端粒酶活性。结果在３４例子宫内膜癌中,２８例端粒酶活性阳性;６例正常子宫内膜组织中,有１例端粒酶活性阳性。结论端粒酶激活与子宫内膜癌的发生发展有密切关系,并有可能成为子宫内膜癌的临床肿瘤标记物     

临床早期宫颈癌外周血CK19 mRNA的表达

目的：探讨RT-PCR法检测早期宫颈癌外周血CK19 mRNA的表达水平及临床意义。方法：应用RT-PCR法检测291例O～ⅡA期宫颈癌和162例妇科良性肿瘤术前外周血CK19 mRNA的表达情况，另取30名健康人作对照。结果：291例肿瘤患者CK19阳性率为19．93％(58／291)，妇科良性肿瘤和健康人阳性率均为O。结合临床病理资料分析，宫颈癌患者外周血CK19 mRNA阳性与临床分期、淋巴结转移、淋巴血管间隙受侵和深肌层浸润间存在明显相关性，P＜O．05；而与年龄、病理类型、分化程度和宫旁转移不相关．P＞O．05。结论：CK19 mRNA可作为检测宫颈癌外周血微转移的指标之一。     

食管鳞癌端粒酶活性、端粒酶逆转录酶及bcl-X/L表达的研究

目的：探讨食管鳞癌组织中端粒酶活性、端粒酶逆转录酶（hTERT)及bcl-X/L的表达及其它们之间的关系。方法：应用TRAP－银染法检测45例食管鳞癌组织的端粒酶活性，采用原位杂交及免疫组织化学方法对癌组织进行了hTERT及bcl-X/L表达的检测。结果：癌组织端粒酶活性阳性率为82．2％，hTERT及bcl-X/L的表达阳性率分别为64．4％及71．1％，bcl-X/L的蛋白表达及hTERT的mRNA表达与端粒酶活性均有相关性。结论：食管鳞癌组织中端粒酶活性、hTERT及bcl-X/L的表达阳性率均较高。hTERT及bcl-X/L的表达对端粒酶活性有一定调节作用。     

端粒酶催化亚单位和c-myc在骨肉瘤中的表达

目的:探讨端粒酶催化亚单位和c-myc在骨肉瘤发生中的作用。方法:应用免疫组织化学方法检测60例骨肉瘤、12例骨软骨瘤中端粒酶催化亚单位和c-myc的表达,采用显微图像分析系统进行平均灰度值测定。结果:骨肉瘤中端粒酶催化亚单位和c-myc蛋白的平均灰度值均低于骨软骨瘤中两者的平均灰度值,且有统计学意义(P<0.01)。骨肉瘤中端粒酶催化亚单位与c-myc蛋白平均灰度值间无相关性(P>0.05)。结论:端粒酶催化亚单位、c-myc蛋白分别与骨肉瘤的发生有关。     

胃癌组织及相关淋巴结中端粒酶逆转录酶基因启动子区域甲基化检测的临床意义

[目的]检测胃癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织和淋巴结组织中端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子区域甲基化状态,并探讨其甲基化状态的改变与临床病理特征的关系.[方法]运用甲基化特异性PCR(MSP)方法,检测52例手术切除胃癌组织、癌旁组织及相关淋巴结中hTERT基因启动子区域甲基化状念、以同一标本正常组织作为阴性对照.[结果]正常胃黏膜组织未检测出hTERT表达、胃癌组织及癌旁组织、转移淋巴结中均检测出hTERT表达.转移淋巴结、胃癌组织中hTERT基因的甲基化阳性率分别为81.6％(31/38)、71.1％(37/52),明显高于癌旁组织的29.5％(13/52)(P＜0.01).胃癌组织hTERT基因甲基化阳性率与胃癌的临床分期、组织分化程度、肿瘤大小有相关性(P＜0.05).癌旁组织hTERT基因甲基化阳性率和胃癌的临床分期、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移具有相关性(P＜0.05).转移淋巴结hTERT基因 甲基化阳性率则与临床及病理特征无关.[结论]胃癌组织及转移淋巴结中存在hTERT基因启动子区域的异常甲基化调控、可能参与了胃癌的发生与发展.     

携带人端粒酶反转录酶启动子的溶瘤腺病毒RCA-TERT-Ad35对乳腺癌干细胞的靶向作用

目的 探讨携带人端粒酶反转录酶启动子的溶瘤腺病毒RCA-TERT-Ad35在靶向乳腺癌干细胞中的作用。方法 乳腺癌细胞系MCF-7以球体形式在加入生长因子的无血清培养基中生长。同时构建携带TERT启动子的溶瘤腺病毒RCA-TERT-Ad35,并通过溶瘤、MTT及体内抗肿瘤实验观察RCA-TERT-Ad35对干细胞样癌细胞的杀伤效果。结果 与亲代细胞相比,MCF-7球体细胞显示出干细胞特性,且MCF-7球体细胞中hTERT基因过表达,其对细胞毒性剂紫杉醇具有耐药性。溶瘤腺病毒RCA-TERT-Ad35在TERT过表达的细胞中进行复制并抑制细胞生长。在裸鼠移植瘤模型中,与RCA-Ad35相比,RCA-TERT-Ad35显著抑制肿瘤生长并改善小鼠的存活状态。结论 溶瘤腺病毒RCA-TERT-Ad35可优先杀伤TERT过表达的乳腺癌干细胞。     

临床早期宫颈癌外周血CK19mRNA的表达

目的:探讨RT PCR法检测早期宫 颈癌外周血CK19mRNA的表达水平及临床 意义。方法:应用RT PCR法检测291例0～Ⅱ A期宫颈癌和162例妇科良性肿瘤术前外周 血CK19mRNA的表达情况,另取30名健康 人作对照。结果:291例肿瘤患者CK19阳性 率为19.93%(58/291),妇科良性肿瘤和健康 人阳性率均为0。结合临床病理资料分析,宫 颈癌患者外周血CK19mRNA阳性与临床分 期、淋巴结转移、淋巴血管间隙受侵和深肌层 浸润间存在明显相关性,P<0.05;而与年龄、 病理类型、分化程度和宫旁转移不相关,P> 0.05。结论:CK19mRNA可作为检测宫颈癌 外周血微转移的指标之一。     

抑制端粒酶活性对人肾癌细胞生长的抑制作用

目的 :探讨抗端粒酶在肾细胞癌治疗中的意义。方法 :采用脂质体介导法将pBBS2 12 hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体 )导入人肾癌GRC 1细胞系中 ,采用TRAP法测定端粒酶活性 ,通过MTT法检测细胞动力学 ,观察细胞的增殖 ,电镜下观察其对细胞凋亡的影响。结果 :端粒酶反义RNA能显著抑制细胞的端粒酶活性 ,抑制细胞增殖并促进其凋亡。结论 :以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗肾癌的潜在途径     

乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的表达及其临床意义

目的 :检测乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的表达并分析其临床意义。方法 :用RT PCR方法检测 6 7例乳腺癌患者、2 9例乳腺良性疾病患者 ,35例正常健康人外周血中组织特异性mRNA的表达。结果 :6 7例乳腺癌患者中有 18例外周血中组织特异性mRNA表达阳性 ,阳性率为 2 6 9% ,与健康对照人群和乳腺良性疾病患者相比差异有显著意义 ,P <0 0 5 ;Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者外周血中组织特异性mR NA的表达高于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者 ,P <0 0 5 ,在不同病理类型乳腺癌患者外周血中的表达差异无显著意义 ,P >0 0 5 ,手术后比手术前的阳性表达率低 ,但差异无显著意义 ,P >0 0 5。结论 :乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的阳性表达同肿瘤的分期有关 ,可作为乳腺癌微转移的一个监测指标