右美托咪啶复合舒芬太尼预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨右美托咪啶复合舒芬太尼预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,8～ 10周龄,体重180 ～ 220 g,采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏灌注模型.取离体灌注的心脏40个,采用随机数字表法,将心脏随机分为5组(n=8):正常对照组(C组):用K-H液持续灌注180 min;缺血再灌注组(I/R组):停止灌注K-H液30 min再灌注120 min;右美托咪啶预处理组(DP组):缺血前30 min用含右美托咪啶2.3 ng/ml的K-H液灌注30 min;舒芬太尼预处理组(SP组):缺血前30 min用含舒芬太尼3.77 ng/ml的K-H液灌注30 min;右美托咪啶预处理+舒芬太尼预处理组(DS组):缺血前30 min用含有右美托咪啶2.3 ng/ml和舒芬太尼3.77 ng/ml的K-H液灌注30min.于心脏稳定灌注15 min、缺血前即刻、缺血30 min、再灌注120 min时收集冠状动脉流出液,测定冠状动脉流出量(CF),记录左心室发展压(LVDP)、左心室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)和心率(HR);再灌注120min时测定心肌超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量和心肌梗死面积.结果 与C组比较,其余各组CF、LVDP、±dp/dtmax、HR和心肌SOD活性降低,心肌梗死面积、心肌MDA含量和MPO活性升高(P＜0.05);与I/R组比较,DP组和DS组CF降低,SP组和DS组HR降低,DP组、SP组和DS组LVDP、±dp/dtmax和心肌SOD活性升高,MDA含量和MPO活性降低,心肌梗死面积减小(P＜0.05);与DS组比较,DP组CF降低,HR升高,SP组CF增高、心肌SOD活性降低,MDA含量和MPO活性升高,心肌梗死面积增加(P＜0.05),DP组心肌SOD和MPO活性、MDA含量和心肌梗死面积差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪啶复合舒芬太尼预处理可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,但复合应用效果并未进一步增强.     

细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重220～280g,制备Langendorff离体心脏灌注模型,选取模型制备成功的离体心脏18个,随机分为3组(n=6):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和PEP-1/HO-1处理+缺血再灌注组(HO-1组).IR组K-H液平衡灌注30 min后,采用停灌40 min再灌注50 min的方法制备缺血再灌注模型.HO-1组在停灌前用含50 μmol/L融合蛋白PEP-1/HO-1的K-H液平衡灌注15 min,S组采用K-H液持续灌注120 min.再灌注50 min时,收集冠脉流出液,测定肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;取心肌组织,采用Western blot法测定HO-1蛋白表达水平,采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性.结果 HO-1组心肌组织HO-1蛋白表达水平较IR组升高(P＜0.01).与S组比较,IR组和HO-1组冠脉流出液CK和LDH活性及心肌组织MDA含量升高,心肌组织SOD活性降低(P＜0.01);与IR组比较,HO-1组冠脉流出液CK和LDH活性及心肌组织MDA含量降低,心肌组织SOD活性升高(P＜0.01).结论细胞穿透肽PEP-1可将HO-1蛋白成功导入心肌组织,并减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

右美托咪啶后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注时线粒体损伤的影响

目的 探讨右美托咪啶后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注时线粒体损伤的影响.方法 健康雌性Wistar大鼠,体重220～250 g,成功制备Langendorff离体灌注模型的40个心脏随机分为5组(n=8):缺血再灌注组(A组)、右美托咪啶10 nmol/L组(B组)、右美托咪啶100 nmol/L组(C组)、线粒体通透性转换孔开放剂苍术苷组(D组)及右美托咪啶联合苍术苷组(E组).离体心脏经K-H液平衡灌注20 min后,采用全心停灌40 min再灌注60 min的方法制备离体心脏缺血再灌注模型.于再灌注即刻B组、C组、D组和E组分别灌注含10 nmol/L右美托咪啶、100 nmol/L右美托咪啶、20μmol/L苍术苷、100 nmol/L右美托咪啶和20 μmol/L苍术苷的K-H液10 min.再灌注结束即刻取心尖组织,分离线粒体,测定SOD、Na+ -K+ -ATP酶、Ca2+-ATP酶活性和MDA和Ca2+含量.结果 与A组比较,B组和C组线粒体SOD、Na+ -K+ -ATP酶和Ca2+ -ATP酶活性升高,MDA和Ca2+含量降低(P＜0.05),D组和E组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05);与C组比较,D组和E组线粒体SOD、Na+-K+-ATP酶和Ca2+ -ATP酶活性降低,MDA和Ca2+含量升高(P＜0.05),B组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪啶后处理可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注时的线粒体损伤,其机制可能与抑制线粒体通透性转换孔开放有关.     

异丙酚对大鼠离体心脏缺血再灌注时NF-κB及iNOS的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠离体心脏缺血再灌注时核因子κB(NF-κB)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响.方法 成年SD大鼠24只,体重200～300 g,雌雄不拘,随机分为3组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和异丙酚组(P组).建立Langendorff离体心脏灌注模型,K-H液平衡20 min后开始实验.C组灌注K-H液110 min;I/R组灌注K-H液20 min后,全心停灌30 min,再灌注60 min;P组用含50 μmol/L异丙酚的K-H液灌注20 min,全心停灌30 min,再用含50 μmol/L异丙酚的K-H液灌注60 min.于平衡末、再灌注10 min和60 min时测定冠状动脉流出液心肌肌钙蛋白(cTnI)浓度;于再灌注60 min时测定心肌SOD活性、MDA含量、iNOS活性及NF-κB、IκB的表达水平.结果 与C组比较,I/R组再灌注期间冠状动脉流出液cTnI浓度升高,P组再灌注期间60 min时升高(P＜0.05或0.01),I/R组心肌SOD活性降低,MDA含量增多,iNOS活性升高(P＜0.01),I/R组和P组心肌NF-κB表达升高,kB表达降低(P＜0.05或0.01).与I/R组比较,P组再灌注期间冠状动脉流出液cTnI浓度、心肌MDA含量、NF-κB表达、iNOS活性均降低,心肌SOD活性和IκB表达升高(P＜0.01).结论 异丙酚可抑制心肌NF-κB的激活,降低iNOS的活性,从而减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

缺血后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用

目的探讨缺血后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用。方法24只Wistar大鼠,随机分为3组(n=8):正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPC组)。采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,C组用K-H液灌注160min;I/R组全心缺血40 min,再灌注120 min; IPC组全心缺血40 min后,再灌注10 s,缺血10 s,反复6次,然后持续再灌注118 min。测定再灌注15、30、120 min时冠脉流量(CF)及冠脉流出液心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度,再灌注120 min时,取心肌组织,测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,电镜下观察心肌细胞超微结构。结果缺血再灌注可导致CF降低,冠脉流出液cTnI浓度升高,心肌SOD活性下降,MDA含量升高,心肌细胞超微结构产生病理学改变,缺血后处理可减弱上述改变。结论缺血后处理减轻脂质过氧化反应,对大鼠离体缺血再灌注心脏产生保护作用。     

含左西孟旦的STH-2心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价含左西孟旦的STH-2心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性Wistar大鼠32只,制备离体Langendorff灌注模型,随机分为4组(n=8),采用K-H液平衡灌注30 min时,C组采用STH-2心脏停搏液进行灌注,L1组、L2组和L2+G分别用含0.03μmol/L左西孟旦、0.3 μmol/L左西孟旦和0.3 μmol/L左西孟旦+10μmol/L格列苯脲(ATP敏感性钾通道阻断剂)的STH-2心脏停搏液进行灌注,灌注2 h时采用K-H液再灌注30 min.分别于灌注心脏停搏液前即刻(基础状态)、再灌注10 min、20 min、30 min时收集冠脉流出液,测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性.再灌注30 min时,取心肌组织,测定ATP、MDA、SOD水平及含水量.结果 与C组比较,L1组CK、LDH的活性和MDA含量降低,SOD活性升高,L2组CK、LDH的活性和MDA含量降低,ATP含量和SOD活性升高(P＜0.05或0.01);与L1组比较,L2组CK和IDH的活性和MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05或0.01);与L2组比较,L2+G组MDA含量、CK和LDH的活性升高,ATP含量和SOD活性降低(P＜0.05或0.01).结论 含左西孟旦的STH-2心脏停搏液可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,且与浓度有关,其机制与开放ATP敏感性K+通道有关.     

丙酮酸乙酯预先给药对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯预先给药对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠24只,体重250～320 g,3月龄,制备Langendorff主动脉逆行灌注模型.随机分为3组(n=8),对照组(C组):改良的K-H缓冲液持续灌流120 min;缺血再灌注组(IR组)改良的K-H缓冲液平衡灌注30 min后,全心停灌30 min,再灌注60 min;丙酮酸乙酯组(EP组)改良的K-H缓冲液平衡灌注15 min后,再用含2 mmol/L丙酮酸乙酯的改良K-H缓冲液平衡灌注15 min,全心停灌30 min,最后用含2 mmol/L丙酮酸乙酯的改良K-H缓冲液再灌注60 min.记录各组平衡灌注15 min(基础值)、再灌注10、30、60 min的左室收缩峰压(LVSP)、左心室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax )、冠脉流量(CF),再灌注60 min时测定心肌ATP含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌酸激酶(CK)的活性.结果 与C组比较,IR组CF、LVSP、±dp/dtmax、SOD活性、ATP含量降低,MDA含量、CK活性、LDH活性升高(P＜0.05),EP组差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,EP组CF、LVSP、±dp/dtmax、SOD活性、ATP含量升高,MDA含量、CK活性、LDH活性降低(P＜0.05).结论 丙酮酸乙酯2 mmol/L预先给药通过提高心肌ATP含量,降低氧化应激反应,可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

右美托咪定及其联合舒芬太尼预先给药对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨右美托咪定及其联合舒芬太尼预先给药对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 健康清洁级雄性SD大鼠50只,体重250～300 g,采用阻断左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注模型.采用随机数字表法,将大鼠分为5组(n=10):假手术组(S组)只穿线,不结扎左冠状动脉前降支；缺血再灌注损伤组(IR组)；右美托咪定预先给药组(DP组)腹腔注射右美托咪定5 μg/kg,30 min后制备模型；舒芬太尼预先给药组(SP组)腹腔注射舒芬太尼10μg/kg,30 min后制备模型；右美托咪定+舒芬太尼预先给药组(DS组)腹腔注射右美托咪定5 μg/kg和舒芬太尼10 tμg/kg,30 min后制备模型.再灌注120 min时,取血样,测定血清CK、LDH浓度；处死大鼠,观察心肌组织病理学结果,计算心肌梗死体积,测定心肌组织MDA含量及SOD活性.结果 与S组相比,其余各组血清CK、LDH浓度升高,心肌梗死体积增加,心肌SOD活性降低,IR组、DP组和SP组心肌MDA含量升高(P＜0.05或0.01),DS组心肌MDA含量差异无统计学意义(P＞0.05)；与IR组相比,DP组、SP组和DS组血清CK和LDH浓度、心肌MDA含量降低,心肌梗死体积减少,心肌SOD活性升高(P＜0.05)；与DS组相比,DP组和SP组血清CK浓度升高,心肌梗死体积增加,心肌MDA含量升高(P＜0.05),DP组血清LDH浓度升高和心肌SOD活性降低(P＜0.05).DS组心肌病理学损伤较DP组和SP组减轻.结论 右美托咪定预先给药可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其联合舒芬太尼预先给药时该效应强于两者单独应用,机制与增强抗氧化能力、抑制脂质过氧化反应有关.     

3-硝基丙酸化学预处理对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤的影响

目的研究3-硝基丙酸(3-NPA)化学预处理对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制。方法16只Wistar大鼠随机分为2组,每组8只。实验组(3-NPA组):腹腔注射3-NPAmg·kg-1预处理24h;对照组(C组):腹腔注射等体积生理盐水。采用Langendorff离体心脏灌流模型,两组行常温缺血30min-再灌注60min模拟心肌缺血-再灌注损伤。观察各组缺血前(基础值)和再灌注后30、60min时心率(HR)、左心室发展压(LVDP)、左心室压力上升和下降最大变化速率(±dp/dtmax),测定再灌注后15min时冠脉流出液肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢(LDH)活性,测定再灌注后60min时心肌丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性。结果与C组比较,3-NPA组LVDP、 dp/dtmax再灌注后30、60min、-dp/dtmax再灌注后60min时升高(P<0.01或0.05),HR组间比较差异无统计学意义(P>0.05),灌注后15min时冠脉流出液CK和LDH活性降低,再灌注后60min时心肌SOD活性明显升高,心肌MDA含量降低。结论4mg·kg-13-NPA预处理对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能是减少氧自由基的产生和提高SOD活性。     

PI3K/AKT信号通路在异丙酚减轻离体大鼠心脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨PI3K／AKT信号传导通路在异丙酚减轻离体大鼠心脏缺血再灌注损伤中的作用。方法 成年SD大鼠32只，随机分为4组：缺血再灌注组（I／R组）、异丙酚组（P组）、渥曼青霉素组（W组）和异丙酚＋渥曼青霉素组（PW组），每组8只。建立Langendorff离体心脏灌注模型，灌注压10kPa,灌注速率7．10ml／min，I／R组用K-H液灌注，P组用含50μmol／L异丙酚的K-H液灌注，W组用含100nmol／L渥曼青霉素的K-H液灌注；PW组用含50μmol／L异丙酚＋100nmol／L渥曼青霉素的K-H液灌注，灌注15min，全心缺血30min，再灌注60min。测定再灌注10、40min时冠脉流出液中心肌肌钙蛋白（cTnI）浓度，再灌注60min时测定心肌组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性，电镜下观察心肌细胞超微结构。结果 与I／R组比较，P组再灌注期间cTnI浓度明显降低，心肌组织SOD活性升高，MDA含量降低（P〈0．05），其余2组上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）；与缺血前比较，P组再灌注40min时cTnI浓度升高，其余各组再灌注期间cTnI浓度均升高（P〈0．05或0．01）。P组电镜下心肌超微结构改变减轻。结论 异丙酚减轻离体大鼠心脏缺血再灌注损伤可能通过PI3K／AKT信号传导通路介导。     

吡那地尔预处理对兔心脏缺血再灌注时心肌炎性反应的影响

目的 评价吡那地尔预处理对兔心脏缺血再灌注时心肌炎性反应的影响.方法 日本大耳白兔56只,随机分为4组:正常对照组(C组,n=8)、缺血再灌注组(I/R组,n=16)、吡那地尔预处理组(P组,n=16)和格列本脲组(G组,n=16).建立离体心脏Langendorff再灌注模型,灌注充氧K-H液,待心率平稳10 min时,C组取心肌组织,测定丙二醛(MDA)、补体C3a、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和细胞核NF-κBp65表达;I/R组继续灌注充氧K-H液40 min;P组灌注充氧K-H液10 min后,灌注10 μmol/L充氧吡那地尔30 min;G组灌注10 μmol/L充氧格列本脲10 min后,再灌注10 μmol/L充氧吡那地尔30min.随后I/R组、P组和G组行全心缺血40 min,再灌注充氧K-H液.I/R组、P组和G组分别于心率平稳10 min、再灌注30、60 min时取8个心脏,测定冠状静脉流出液中肌酸激酶(CK)活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度;再灌注60或120 min时测定心肌组织MDA、补体C3a、ICAM-1及细胞核NF-κBp65表达.结果 P组再灌注期间CK、TNF-α、MDA、补体C3a、ICAM-1和NF-κBp65水平均明显低于其他各组(P＜0.05).结论 吡那地尔预处理可减轻兔心脏缺血再灌注时心肌炎性反应,可能与ATP敏感性钾通道开放有关,从而对心肌产生保护作用.     

咪唑安定预处理对缺血-再灌注离体心脏的保护作用

目的探讨咪唑安定预处理对缺血-再灌注离体心脏的保护作用。方法采用Wistar大鼠离体心脏langendofff灌注模型。实验动物随机分为四组,每组8只：正常对照组（C组）,缺血-再灌注组（I-R组）,缺血预处理组（IPC组）,咪唑安定预处理组（MPC组）。观察咪唑安定预处理对心肌缺血-再灌注后不同时间点冠脉流出液中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）,心肌组织中超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）以及再灌注性心律失常、心功能的变化。结果咪唑安定预处理可以减少心肌缺血-再灌注损伤的心肌冠脉流出液中CK、LDH的含量,提高SOD活性,降低MPO、MDA水平,并且抑制再灌注心律失常的发生,保护心功能。结论咪唑安定预处理对缺血-再灌注离体心脏具有一定的保护作用。     

线粒体ATP敏感性钾通道在利多卡因预先给药减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价线粒体ATP敏感性钾通道在利多卡因预先给药减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 雌性成年Wistar大鼠,体重220～250 g,采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型.取模型制备成功的大鼠心脏24个,随机分为3组(n=8):缺血再灌注组(IR组)、利多卡因组(L组)和利多卡因+格列苯脲组(LG组).K-H液平衡灌注10 min后,C组、L组和LG组分别灌注K-H液、含2.5 mg/L利多卡因的K-H液、含2.5 mg/L利多卡因+10μmol/L格列苯脲(线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂)的K-H液20 min,然后缺血30 min,再灌注60 min.分别于平衡灌注末(T0)、再灌注15 min(T1)、30 min(T2)、45 min(T3)和60 min(T4)时,记录HR、左心室发展压(LVDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax).于T0和T4时,收集冠状动脉流出液,测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性.于T4时取心尖周围心肌组织,测定Na+-K+-ATP酶和SOD的活性、MDA和Ca2+的含量.结果 与IR组比较,L组HR、LVDP、+dp/dtmax和-dp/dtmax升高,CK和LDH的活性降低,心肌Na+-K+-ATP酶和SOD的活性升高,Ca2+和MDA的含量降低(P＜0.05),LG组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05).与L组比较,LG组HR、LVDP、+dp/dtmax和-dp/dmax.降低,CK和LDH的活性升高,心肌Na+-K+-ATP酶和SOD的活性降低,Ca2+和MDA的含量升高(P＜0.05).结论 利多卡因预先给药减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤与促进线粒体ATP敏感性钾通道的开放有关.     

cAMP-PKA信号转导通路在缺血预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨cAMP-PKA信号转导通路在缺血预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年SD大鼠50只,体重300-350g,采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型后随机分为5组(n=10):缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IPC组)、H89组、脯氨酸二硫氨基甲酸组(PDTC组)和双丁酰环磷酸腺苷组(db-cAMP组).K-H液平衡灌注10 min后,R组K-H液继续灌注30 min后停灌1 h,再灌注30 min;IPC组停灌5 min,再灌注5 min.反复3次,停灌1 h再灌注30 min;PDTC和H89组停灌5 min,分别用含有PDTC 100μmol/L和含有H89 10 μmol/L的K-H液再灌注5 min,反复3次,余同IPC组;db-cAMP组用含db-cAMP 200 μmollL的K-H液灌注30 min,停灌1 h再灌注30 min.于平衡灌注10 min、再灌注10、20和30 min时记录左心室压力最大变化速率(±dp/dtmax)和左心室发展压(LVDP).于平衡灌注10 min和再灌注30 min时记录冠脉流出量(CF);测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)和磷酸肌酸激酶(CK)活性.于再灌注30 min时取心肌组织,采用EMSA法检测NF-κB-DNA结合活性,采用RT-PCR法检测TNF-α mRNA表达,采用Western blot法检测磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(p-CREB)(Serl33)表达.结果 与IR组比较,IPC组和db-cAMP组NF-κB-DNA结合活性和TNF-α-mRNA表达降低,±dp/dt和CF升高,CK和LDH活性降低,WC组、PDTC组和db-cAMP组p-CREB(Ser133)表达升高(P<0.05或0.01);与IPC组比较,H89组和PDTC组NF-κB-DNA结合活性和TNF-αmRNA表达升高,±dp/dt、LVDP和CF降低,CK和LDH活性升高.H89组p-CREB(Serl33)表达降低(P<0.05或0.01).结论 缺血预处理通过激活cAMP-PKA信号转导通路抑制NF-κB-DNA结合活性,减少炎性因子的基因转录.从而减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

不同浓度硝酸甘油对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨不同浓度硝酸甘油对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康成年雌性SD大鼠,体重220～330 g,周龄7周,建立Langendorff离体心脏灌注模型,取模型制备成功的心脏30个,随机分为3组(n=10):缺血再灌注组(IR组)K-H液灌注15 min,停灌20 min,再灌注60 min;低浓度硝酸甘油组(LN组)采用含有2.5 μg/L硝酸甘油的K-H液灌注15 min,停灌20 min,再灌注60 min;高浓度硝酸甘油组(HN组)采用含有25μg/L硝酸甘油的K-H液灌注15 min,停灌20 min,再灌注60 min.于再灌注10、20、30、40、50、60 min时记录心率(HR)、冠状动脉流量(CF)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室发展压(LVDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压最大下降速率(-dp/dt_(max)).于平衡灌注末、再灌注5、30和60 min时收集冠状动脉流出液1.5 ml,测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性;于再灌注60 min时取心脏,测定心肌梗死面积,计数心肌凋亡细胞.结果 与IR组比较,LN组HR、CF、LVDP,+dp/dt_(max)和-dp/dt_(max)升高,LVEDP、CK活性、LDH活性、心肌梗死面积和细胞凋亡率降低(P<0.05),HN组HR、CF、LVDP、+dp/dt_(max)和-dp/dt_(max)降低,LVEDP、CK活性、LDH活性、心肌梗死面积和细胞凋亡率升高(P<0.05).与LN组比较,HN组HR、CF、LVDP、+dp/dt_(max)和-dp/dt_(max)降低,LVEDP、CK活性、LDH活性、心肌梗死面积和细胞凋亡率升高(P<0.05).结论 低浓度硝酸甘油(2.5μg/L)可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,而高浓度硝酸甘油(25 μg/L)则可加重心脏缺血再灌注损伤.     

丙泊酚预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤中自噬潮的影响

目的 研究丙泊酚预处理对大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)期间自噬潮的影响及其机制. 方法 采用大鼠在体心肌I/R损伤模型,将90只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为5组(每组18只):①假手术组(Sham组),只穿线不结扎;②I/R组;③丙泊酚预处理组(P+I/R组);④Ⅰ型磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂A66预处理组(A+I/R组);⑤丙泊酚+A66预处理组(P+A+I/R组).采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心肌I/R模型.除Sham组外,其余各组均缺血30 min,再灌注120 min.缺血前15 min,P+I/R组通过股静脉输注丙泊酚15 mg·kg1·h1;A+I/R组缺血前1h腹腔注射A66溶液10 mg/kg;P+A+I/R组在缺血前1h腹腔注射A66溶液10 mg/kg,缺血前15 min再通过股静脉输注丙泊酚15 mg·kg1·h-1.模型制备后取心肌,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyhetrazolium chloride,TTC)法染色并计算梗死面积百分比,酶标法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydwgenase,LDH)活性,Western bolt法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ、P62蛋白的表达量,电子显微镜定性观察自噬体、自噬溶酶体的数量.结果 与I/R组比较,P+I/R组与P+A+I/R组梗死面积[(50.1±-3.9)％比(26.5±1.3)％、(42.6±1.9)％]显著减小(P＜0.05),血清LDH活性降低,LC3-Ⅱ表达水平降低,P62表达水平升高(P＜0.05),自噬体、自噬溶酶体明显减少.与P+I/R组比较,P+A+I/R组梗死面积[(26.5±1.3)％比(42.6±1.9)％]显著增加(P＜0.05),血清LDH活性升高,LC3-Ⅱ表达水平升高,P62表达水平降低(P＜0.05),自噬体、自噬溶酶体增加. 结论 丙泊酚预处理激活PI3K/蛋白激酶B(pmtein kinase B,Akt)通路,抑制I/R心肌中自噬潮进行,对大鼠心肌I/R损伤产生保护作用.