脊髓蛋白酶体在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用

目的 评价脊髓蛋白酶体在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用.方法 取鞘内置管成功的健康雄性大鼠24只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=6),生理盐水组(NS组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+蛋白酶体抑制剂MG-132组(M+ MG组)和MG-132组(MG组)于每天8:00和20:00分别鞘内注射生理盐水10 μl、吗啡10μg、吗啡10 μg+ MG-132 2.5μg、MG,-132 2.5 μg,连续7d.于鞘内注射前1 d(基础值)、鞘内注射第1、3、5和7天时测定大鼠甩尾潜伏期,以计算最大抗伤害效应百分比(MPAE).于最后一次鞘内注射结束后取5只大鼠,处死后取L3-5脊髓,采用Western blot法测定谷氨酸-天冬氨酸转运体(GLAST)和兴奋性氨基酸转运体1(EAAC1)的表达水平.结果 M组和M+MG组鞘内注射期间MPAE逐渐降低(P＜0.05);与NS组比较,M组和M+ MG组鞘内注射期间MPAE升高,M组脊髓GLAST和EAAC1表达下调(P＜0.05),M+ MG组脊髓GLAST和EAAC1表达差异无统计学意义,MG组上述指标差异均无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,M+ MG组MPAE升高,脊髓GLAST和EAACI表达上调(P＜0.05或0.01).结论 脊髓蛋白酶体参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成.     

ERK-CREB信号通路在糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶-cAMP反应元件结合蛋白(ERK- CREB)信号通路在糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体重280～320 g,月龄2月,经枕骨大孔行鞘内置管.取36只鞘内置管成功的大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=6):对照组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+地塞米松组(MD组)、吗啡+RU38486组(MR组)、地塞米松组(D组)和RU38486组(R组).分别鞘内注射生理盐水10 μl、吗啡10腭、吗啡10 μg+地塞米松4 μg、吗啡10 μg+ RU38486 2 μg、地塞米松4.μg、RU38486 2 μg,2次、d,连续6d.于给药前1d测定热甩尾潜伏期(TFL)基础值,随后于给药1、3、5d首次给药后30 min及最后1次给药后1 d(T1～4)测定TFL,计算最大镇痛效应百分比(MPE).最后1次测定TEL后取脊髓,采用免疫荧光染色法测定脊髓背角磷酸化ERK(pERK)和磷酸化CREB(pCREB)的表达.结果 与T1时比较,M组和MD组T3.4时MPE降低(P＜0.05).与C组比较,M组MPE升高,脊髓背角pERK和pCREB的表达上调(P＜0.05或0.01),R组和D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与M组比较,MR组MPE升高,脊髓背角pERK和pCREB表达上调,MD组脊髓背角pERK和pCREB表达下调,MPE降低(P＜0.05或0.01).结论 糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受的机制可能与抑制ERK-CREB信号通路有关.     

糖皮质激素受体在慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元凋亡中的作用

目的 评价糖皮质激素受体在慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元凋亡中的作用.方法 鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠20只,体重300～350 g,随机分为4组(n=5):对照组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+糖皮质激素受体拮抗剂组(MR组)和吗啡+糖皮质激素受体激动剂组(MD组)分别于8:00和20:00鞘内注射生理盐水10μl、吗啡10μg、吗啡10μg+RU38486 2μg、吗啡10μg+地塞米松4μg,连续6 d.于每天8:00给药后30 min行甩尾实验,给药第7天处死大鼠,取L3～L5脊髓行TUNEL染色,光镜下观察脊髓背角神经元的凋亡情况,计算凋亡率.结果 地塞米松、RU38486分别对慢性吗啡耐受的形成起促进、抑制作用.与C组比较,M组和MD组脊髓背角神经元凋亡率升高(P＜0.05);与M组比较,MR组脊髓背角神经元凋亡率降低,MD组脊髓背角神经元凋亡率升高(P＜0.05).结论 糖皮质激素受体参与了慢性吗啡耐受形成中大鼠脊髓背角神经元凋亡的过程.     

胞外信号调节激酶信号通路在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用

目的 探讨胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在慢性吗啡耐受形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠30只,体重300～350 g,随机分为3组(n=10).置管后7 d开始给药,对照组(C组)鞘内注射0.4%二甲基亚砜10μl,慢性吗啡耐受组(M组)给予吗啡10μg,ERK上游激酶抑制剂+吗啡组(P组)于给予吗啡前30 min给予丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂PD98059 10μg,2次/d,连续7 d.每天第1次给药后30 min及最后一次给药后1 d时测定甩尾潜伏期,并计算最大镇痛效应百分比.最后一次测定甩尾潜伏期后取脊髓L3-5节段,采用Western blot法和免疫荧光法测定脊髓背角μ受体和磷酸化ERK1/2(p-ERK/1/2)的表达水平.结果 M组和P组随着给药时间的延长,形成了吗啡耐受,而P组吗啡耐受程度轻于M组(P＜0.05).与C组比较,M组脊髓背角μ受体表达下调,p-ERK1/2表达上调(P＜0.01).与M组比较,P组脊髓背角μ受体表达上调,p-ERK1/2表达下调(P＜0.01).结论 ERK信号通路参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成.     

脊髓背角自噬与大鼠吗啡耐受形成的关系

目的 探讨脊髓背角自噬与大鼠吗啡耐受形成的关系.方法 雄性成年SD大鼠,体重250～ 300 g,取鞘内置管成功的大鼠24只,采用随机数字表法,将其分为3组(n=8):对照组(C组)、吗啡耐受组(M组)和吗啡+自噬增强剂雷帕霉素组(MR组).采用鞘内注射吗啡20 μg,2次/d,连续7d的方法制备吗啡耐受模型.C组给予等容量生理盐水.MR组鞘内注射吗啡20 μg,2次/d,连续7d,并于第3天第2次注射吗啡同时鞘内注射雷帕霉素2.3μg,连续3d.于鞘内注射前及第1、3、5、7天第2次鞘内注射后30 min测定机械缩足反应阈(MWT).最后1次MWT测定结束后1h取L4-6段脊髓背角,采用Western blot法测定总哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化mTOR(p-mTOR)及自噬标记蛋白LC3Ⅱ的表达.以p-mTOR占总mTOR表达水平的百分比反映mTOR的活性.结果 随鞘内注射时间延长,M组和MR组MWT逐渐降低(P＜0.05);与C组比较,M组和MR组鞘内注射期间MWT升高,脊髓背角mTOR活性降低,LC3Ⅱ表达上调(P＜0.05);与M组比较,MR组鞘内注射第3、5、7天MWT升高,脊髓背角mTOR活性降低,LC3Ⅱ表达上调(P＜0.05).结论 脊髓背角自噬增强是吗啡耐受形成时机体的适应性调节机制,可延缓吗啡耐受形成.     

电针对大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2活性的影响

目的 探讨电针对大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响.方法 取鞘内置管成功的雄性SD大鼠25只,采用随机数字表法,将其分为5组(n=5):生理盐水组(NS组)鞘内注射生理盐水10μl;吗啡组(M组)鞘内注射吗啡10 μg;错义寡核苷酸组(MO组)鞘内注射吗啡10μg+ ERK1/2错义寡核苷酸10μg;反义寡核苷酸组(AO组)鞘内注射吗啡10 μg+ERK1/2反义寡核苷酸10 μg;电针组(EA组)鞘内注射吗啡10 μg,同时每日首次给药后电针大鼠阳陵泉和足三里(频率2 Hz,波宽1 ms,电流强度3 mA,刺激时间30 min).各组注射药物容量均为10μl,2次/d,连续7d.于鞘内给药前、鞘内给药2、4、6d和鞘内给药结束后1 d(T0-4)测定机械痛阈.于T4时机械痛阈测定结束后,取脊髓背角组织,采用Western blot法测定大鼠ERK1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 M组、MO组和AO组和EA组发生了吗啡耐受,EA组吗啡耐受程度最轻.与NS组比较,M组和MO组p-ERK1/2表达上调,AO组总ERK1/2表达下调(P＜0.05),EA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组和MO组比较,AO组p-ERK1/2和总ERK1/2表达下调,EA组p-ERK1/2表达下调(P＜0.05);与AO组比较,EA组p-ERK1/2和总ERK1/2表达上调(P＜0.05).结论 电针可抑制慢性吗啡给药所导致的脊髓背角ERK1/2活性升高,从而缓解吗啡耐受的形成.     

脊髓谷氨酸转运体、孤啡肽和脑源性神经营养因子在炎性痛大鼠吗啡耐受形成中的作用

目的 探讨脊髓谷氨酸转运体(GT)、孤啡肽(OFQ)和脑源性神经营养因子(BDNF)在炎性痛大鼠吗啡耐受形成中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,8～ 10周龄,体重300 ～ 350 g,取鞘内置管成功的雄性SD大鼠20只,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=5):生理盐水组(NS组)、炎性痛组(IP组)、吗啡组(M组)和GT激动剂riluzole组(R组).NS组于左后足踝关节腔注射生理盐水50μl,其余3组注射完全弗氏佐剂50 μl.3d后,NS组和IP组鞘内注射生理盐水10 μl;M组鞘内注射吗啡10 μg;R组鞘内注射riluzole 10 μg,30 min后注射吗啡10 μg.注射药物容量均为10μl,2次/d,连续7d.于鞘内给药前、鞘内给药2、4、6d和鞘内给药结束后1 d(T0-4)时测定机械痛阈.于T4时痛阈测定后取左侧脊髓背角,采用RT-PCR法测定OFQ mRNA和BDNF mRNA的表达.结果 与NS组比较,IP组机械痛阈降低,脊髓背角OFQ mRNA及BDNF mRNA表达上调(P＜0.05或0.01);与IP组比较,M组T1,2时机械痛阈升高,脊髓背角OFQ mRNA及BDNF mRNA表达上调(P＜0.05或0.01),T3,4时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,R组机械痛阈升高,脊髓背角OFQ mRNA及BDNF mRNA表达下调(P＜0.05或0.01).结论 炎性痛大鼠长期注射吗啡时脊髓GT功能降低,导致谷氨酸水平升高和OFQ、BDNF表达上调之间的失衡,可能在吗啡耐受形成中起到一定作用.     

巴氯芬与吗啡联合应用对脊髓背角GABAB受体表达的影响

目的探讨巴氯芬与吗啡联合应用对脊髓背角GABAB受体表达的影响。方法成年雄性SD大鼠48只鞘内置管成功后,随机均分为四组,分别鞘内注射生理盐水10μl(NS组),吗啡10μg(M组),巴氯芬0.5μg(B组)和巴氯芬0.5μg+吗啡10μg(BM组)。每天9:00和16:00鞘内注射,在9:30行热水浴甩尾潜伏期(TFL)测定,连测3次,间隔5min,取其均值,将第1天注药后的TFL均值作为基础值,以TFL恢复到基础值作为出现吗啡耐受的标准。第11天晨,取大鼠腰段脊髓行免疫组织化学染色观察脊髓背角GABAB受体的表达。结果注药后第10天M组大鼠TFL恢复至基础值,出现吗啡耐受现象,B组和BM组未出现吗啡耐受现象(P<0.01)。M组GABABR1及GABABR2表达明显低于其它三组(P<0.01)。结论巴氯芬与吗啡联合应用可以减轻吗啡对脊髓背角GABAB受体表达的下调作用。     

慢性吗啡耐受大鼠脊髓神经元兴奋性氨基酸转运体3表达的变化

目的 观察慢性吗啡耐受大鼠脊髓神经元兴奋性氨基酸转运体3(EAAT3)表达的变化.方法 成年雄性SD大鼠45只,随机分为5组(n=9),除假手术组(S组)外,生理盐水组(NS组)、吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和吗啡+氯胺酮组(M+K组)均进行鞘内置管,鞘内置管后3 d进行鞘内给药,Ns组鞘内注射生理盐水40 μl,M组给予吗啡20μg,K组给予氯胺酮30μg,M+K组给予吗啡20μg+氯胺酮30μg,2次/d,连续7 d.分别在给药前、给药1、3、5、7 d及停药后1 d时测定50%缩爪阈值(PWT)与辐射热缩爪潜伏期(PWL),最后一次测定痛阈后处死大鼠,分别采用免疫印迹分析和免疫组化法检测脊髓EAAT3的表达水平.结果 与S组比较,M组给药1、3 d时PWT升高,给药7 d及停药后1 d时PWT降低,给药1、3、5 d时PWL延长,停药后1 d时PWL缩短;M+K组给药1、3、5、7 d及停药后1 d时PWT升高,PWL延长,M组和M+K组脊髓EAAT3表达下调(P<0.05);与M组比较,M+K组给药3、5、7 d及停药后1 d时PWT升高,给药5、7 d时及停药后1 d时PWL延长.脊髓EAAT3表达上调(P<0.05).EAAT3主要分布于脊髓背角Ⅰ-Ⅱ层的感觉神经元.结论 脊髓背角神经元EAAT3表达下调参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成,吗啡下调EAAT3表达的部分机制与激活N-甲基-D天冬氨酸受体有关.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节辣椒素受体磷酸化水平的变化

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节辣椒素受体(VR1)磷酸化水平的变化.方法 鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠20只,体重230～250 g,2～3月龄,采用左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂(CFA)50μl的方法制备炎性痛模型.大鼠随机分为4组(n=5),炎性痛+生理盐水组(NS组):注射剂CFA后3 d鞘内注射生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;单纯吗啡组(M0组):不建立炎性痛模型,鞘内注射吗啡10μl/kg,2次/d,连续7 d;炎性痛+单次吗啡组(M1组):注射CFA后3 d鞘内注射吗啡10μl/kg;炎性痛+连续吗啡组(M2组):注射CFA后3 d鞘内注射吗啡10 μg/kg,2次/d,连续7 d.于鞘内置管后、注射CFA后3 d鞘内给药前、给药1～7 d测定机械缩足反射阈值和缩足潜伏期,最后一次测定痛阈后处死大鼠,采用Western blot法测定背根神经节磷酸化VR1(p-VR1)的表达水平.结果 NS组和M1组未发生吗啡耐受,M0组和M2组发生吗啡耐受.4组中,M2组背根神经节p-VR1表达水平最高(P＜0.05).结论炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节VR1磷酸化水平升高,该变化可能是吗啡耐受形成的机制.     

脊髓蛋白激酶C表达在代谢型谷氨酸受体5参与大鼠吗啡耐受形成中的作用

目的 评价脊髓蛋白激酶C(PKC)表达在代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)参与大鼠吗啡耐受形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠32只,体重180～240 g,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡耐受组(M组)、反义链组(ANT组)和错义链组(MIS组).M组鞘内注射0.9%生理盐水5μl、ANT组和MIC组分别鞘内注射30 nmol反义、错义寡聚脱氧核苷酸(溶于5μl0.9%生理盐水),2次/d,连续8 d,于第6～8天鞘内注射吗啡15μg,2次/d,C组注射等容量生理盐水.于鞘内注射寡聚脱氧核苷酸6、7、8 d(T1～3)时测定大鼠的热痛阈和机械痛阈,第9天(T4)时处死大鼠取L4.5脊髓,采用RT-PCR法测定mGluR5、PKCα、PKCγ的mRNA表达,采用Western blot法测定PKCα、PKCγ的表达.结果 与C组比较,M组和MIS组T1.2时、ANT组T1～3时大鼠热痛阈和机械痛阈升高,T4时M组和MIS组脊髓mGluR5 mRNA、PKCα、PKCγ的表达上调,ANT组脊髓mGluR5 mRNA表达下调(P＜0.05);与M组比较,ANT组T2.3时大鼠热痛阈和机械痛阈升高,脊髓mGluR5 mRNA、PKCα、PKCγ的表达下调(P＜0.05),MIS组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓PKC表达在mGluR5参与大鼠吗啡耐受形成中起重要作用.     

炎性痛-慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角谷氨酸-天冬氨酸转运体表达的变化

目的 探讨炎性痛-慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角谷氨酸-天冬氨酸转运体(GLAST)表达的变化.方法 取鞘内置管成功的雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=10):生理盐水组(NS组)、关节炎组(A组)和关节炎+吗啡组(AM组).NS组于左后足踝关节腔注射生理盐水50μl,其余组注射完全弗氏佐剂50μl.3 d后分别经鞘内注射生理盐水10μl(NS组和A组)、吗啡10μg(AM组),药物容量10μl,2次/d,连续7 d.于鞘内给药前、鞘内开始给药后2、4、6、8 d(T0～4)时测定机械痛阈,于T4时痛阈测定后取脊髓,测定脊髓背角GLAST表达.结果 与NS组比较,其余两组机械痛阈降低,AM组脊髓背角GLAST表达下调(P＜0.05).与A组比较,AM组T3.4时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05),GLAST表达下调(P＜0.05).结论 炎性痛大鼠慢性吗啡耐受的形成与脊髓背角GLAST功能降低有关.

Abstract：

Objective To investigate the changes in the expression of glutamate-aspartste transporter in spinal dorsal horn in rats with inflammatory pain and chronic morphine tolerance. Methods Thirty healthy male SD rats in which intrathecal (IT) catheters were successfully placed without complications were randomized into 3 groups ( n = 10 each): normal saline group ( group NS), arthritis group ( group A), and arthritis + morphine group (group AM). NS 50 μl was injected into the ankle joint of the left hindlimb in group NS, while complete Freund's adjuvant was injected in the other two groups instead. After 3 days, group NS and A received IT NS 10 μl twice a day for 7 consecutive days, group AM IT morphine 10 μg (10 μl) twice a day for 7 consecutive days. Mechanical pain threshold (MPT) was measured before IT administration and at day 2, 4, 6 and 8 after IT administration (T0-4). The animals were sacrificed after the last MPT measurement. The spinal cords were isolated for determination of GLAST expression in spinal dorsal horn. Results Compared with group NS, MPT was significantly decreased in the other groups and GLAST expression was down-regulated in group AM (P ＜ 0.05). Compared with group A, no significant change was found in MPT at T3,4 (P ＞ 0.05), while GLAST expression was down-regulated in group AM ( P ＜ 0.05). Conclusion The development of chronic morphine tolerance is related to the decrease in the function of GLAST in spinal dorsal horn in rats with inflammatory pain.     

慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元磷酸化突触素Ⅰ表达的变化

目的 观察慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元磷酸化突触素Ⅰ(p-Synapsin Ⅰ)表达的变化.方法 雄性SD大鼠45只,体重150～180 g,月龄1～2月,随机分为5组(n=9):假手术组(S组)、生理盐水组(NS组)、吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和吗啡+氯胺酮组(M+K组).除S组外,所有大鼠均行鞘内置管,恢复3 d后鞘内给药,NS组给予生理盐水40 μl,M组给予吗啡20 μg,K组给予氯胺酮30μg,M+K组分别给予吗啡20μg及氯胺酮30 μg,2次/d,连续7 d.于给药前(T_0,基础状态)、给药后1、3、5、7 d及停药后1d(T_(1～5))时测定机械缩爪阈值(PWT)与热缩爪潜伏期(PWL),最后一次测定痛阈后处死大鼠,取L3～6脊髓背角,测定p-Synapsin Ⅰ(Ser603)的表达.结果 与基础值比较,M组T_(1,2)时PWT升高,T_(4,5)时PWT降低,T1～3时PWL延长,T_5时PWL缩短,M+K组T_(1～5),时PWT升高,PWL延长(P＜0.05).与S组和NS组比较,M组T_(1,2)时PWT升高,T_(4,5)时PWT降低,T1～3时PWL延长,T_5时PWL缩短,M+K组T_(1～5),时PWT升高,PWL延长(P＜0.05),K组PWT和PWL差异无统计学意义(P＞0.05).与M组比较,M+K组T_(2～5)时PWT升高,T_(3～5)时PWL延长(P＜0.05).与S组和NS组比较,M组和M+K组p-Synapsin Ⅰ(Ser603)表达上调(P＜0.05),K组p-Synapsin Ⅰ(Ser603)表达差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,M+K组p-Synapsin Ⅰ(Ser603)表达下调(P＜0.05).结论 脊髓背角神经元Synapsin Ⅰ的磷酸化参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成,吗啡促进Synapsin Ⅰ磷酸化的部分机制与激活N-甲基-D-天冬氨酸受体有关.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节CGRP、SP、BDNF表达的变化及电针对吗啡耐受的影响

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化及电针对吗啡耐受的影响.方法 取鞘内置管成功的25只大鼠,于左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂50μl致炎,致炎后第4天开始鞘内给药.随机分为5组(n=5):A组鞘内给予生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;B组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,仅给药1 d;C组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,连续7 d;D组鞘内给药方法同C组,同时每日首次给药后用电针刺激仪电针大鼠阳陵泉穴和足三里穴,刺激强度2 mA,刺激频率2 Hz,波宽0.6ms,刺激时间30 min;E组电针刺激频率15Hz,波宽0.4 m,余同D组.于致炎前、鞘内给药前1 d、给药后1、2、3、4、5、6、7 d(T0-8)时测定大鼠后肢热缩足潜伏期(PWL).给药7 d后取L4～L6背根神经节,采用RT-PCR法测定CGRP、SP、BDNF的mRNA表达.结果 与T0时比较,各组T1时PWL缩短(P＜0.05);与T1时比较,B组～E组T2时PWL延长(P＜0.05);与T2时比较,B组～E组T3-8时PWL缩短(P＜0.05).与A组比较,B组～E组PWL延长,C组CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05);与B组比较,C组～E组PWL延长(P＜0.05);与C组比较,D组和E组PWL延长,CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达下调(P＜0.05);与D组比较,E组PWL缩短,CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05).结论 大鼠背根神经节内CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调参与了吗啡镇痛耐受的形成;电针治疗可抑制吗啡镇痛耐受的形成,机制可能与抑制背根神经节内CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达有关.     

米诺环素对骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3C趋化因子受体1mRNA表达的影响

目的 探讨米诺环素对骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)mRNA表达的影响.方法 清洁级雌性SD大鼠,体重180～200 g,月龄3月,经L3,4间隙行鞘内置管,取鞘内置管成功的大鼠60只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组:正常对照组(C组,n=10)、米诺环素对照组(M组,n=10)、骨癌痛-吗啡耐受组(BM组,n=20)和米诺环素治疗组(BM+M组,n=20).C组不作任何处理;BM组和BM+M组右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker256细胞10 μl(400个/μl)制备骨癌痛模型,术后第10天开始鞘内注射吗啡20 μg/kg(100 μl),2次/d,连续7 d,制备骨癌痛-吗啡耐受模型,注射吗啡第8天分别经鞘内注射20μl生理盐水或米诺环素0.25 mg/kg(20 μl),1次/d,连续3 d;M组不行手术,于BM组注射吗啡第8天时鞘内注射米诺环素0.25 mg/kg,1次/d,连续3 d.于术前、术后3、6、9 d、鞘内注射吗啡4、7、10、12 d(T0～7)时测定机械缩足阈值(MWT)和机械缩足持续时间(MWD).C组和M组于T7时,BM组和BM+M组于T6,7时取L4～6脊髓节段,采用免疫组化法检测小胶质细胞标记物——OX-42表达,采用实时PCR法检测CX3CR1 mRNA表达水平.结果 与C组和M组比较,BM组T2,3.5～7时、BM+M组T2,3,5,时MWT降低,MWD延长,CX3CR1 mRNA和OX-42表达上调(P＜0.01).与BM组比较,BM+M组L6,7时MWT升高,MWD缩短,CX3CR1 mRNA和OX-42表达下调(P＜0.01).C组和M组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 米诺环素可抑制骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓CX3CR1 mRNA的表达,可能是其拮抗吗啡耐受的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effect of minocycline on spinal CX3 C chemokine receptor 1(CX3 CR1)mRNA expression in morphine-tolerant rats with bone cancer pain.Methods Sixty female SD rats weighing 180-200 g in which intrathecal(IT)catheter was successfully placed at L3,4 interspace without complications were randomly divided into 4 groups:control group(group C,n=10);minocycline group(group M,n=10);bone cancer pain + morphine tolerance group(group BM,n=20)and bone cancer pain+morphine tolerance+ minocycline group(group BM+M,n=20).Bone cancer pain was induced by injection of breast cancer cells(Walker256)10μl(400/μl)into upper segment of bone marrow of right tibia.Morphine tolerance was induced by IT injection of morphine 20 μg/kg twice a day for 7 consecutive days starting from the 10th day after intratibia injection in BM and BM + M groups. Minocycline 0.25 mg/kg was injected IT once a day for 3 consecutive days in group M and after the model of bone cancer pain and morphine tolerance was established in group BM + M. Mechanical withdrawal threshold (MWT) and mechanical withdrawal duration (MWD) were determined before (T0, baseline) and at3, 6 and 9 days after operation (T1-3) and at 4, 7, 10 and 12 days after IT morphine injection was started (T4-7).The animals were sacrificed at T6 and T7 respectively in BM and BM + M groups and at T7 in C and M groups.The lumbar segment of the spinal cord (L4-6) was removed for determination of CX3 CR1 mRNA (by RT-PCR) and OX-42 expression (by immuno-histochemistry) .Results There was no significant difference in MWT and MWD at all time points between group C and group M. MWT was significantly decreased while MWD prolonged in morphine tolerant rats with cancer pain in group BM as compared with C and M groups. The hyperalgesia was significantly attenuated by IT minocycline in group BM + M. Spinal CX3 CR1 mRNA and OX-42 expression was significantly increased in group BM than in C and M groups. IT minocycline attenuated the increase in spinal CX3 CR, mRNA and OX-42 expression induced by bone cancer. Conclusion IT minocycline can inhibit spinal CX3CR1 mRNA expression, thereby antagonizing morphine tolerance in morphine-tolerant rats with bone cancer pain.