电刺激迷走神经对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价电刺激迷走神经对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠45只,4～5月龄,体重180～220 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=15):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和电刺激迷走神经组(EVS组).I/R组和EVS组采用结扎左冠状动脉前降支30 min行再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.EVS组于再灌注前10 min至再灌注10 min期间刺激左侧颈迷走神经,刺激参数:电压5V,波宽2 ms,刺激频率1 Hz.于再灌注120 min时处死大鼠,取心肌组织,测定心肌梗死体积、TNF-α、IL-6含量及髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 与S组比较,I/R组和EVS组心肌梗死体积扩大,心肌组织IL-6、TNF-α和MPO水平升高(P＜0.05);与I/R组比较,EVS组心肌梗死体积缩小,心肌组织IL-6、TNF-α和MPO水平降低(P＜0.05).结论 电刺激迷走神经可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与兴奋胆碱能抗炎通路有关.     

不同时机迷走神经电刺激后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价迷走神经电刺激后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的适宜时机.方法 选择SPF级雄性SD大鼠120只,8周龄,体重290～ 320 g,采用随机数字表法,将其分为6组(n=20):假手术组(S组);缺血再灌注组(I/R组)结扎冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min;不同时机迷走神经电刺激后处理组(P1-4组):于心肌缺血15 min(P1组)、再灌注即刻(P2组)、30 min(P3组)、60 min(P4组)时对右侧迷走神经实施电刺激(波宽1 ms、频率10 Hz、电压1～2V),持续时间30 min,其余处理同I/R组.于缺血再灌注期间记录HR和SP,计算二者乘积(RPP).于再灌注120 min时采集颈静脉血样,采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB、TNF-α、高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、IL-1、IL-6和IL-10的浓度;取心肌组织测定心肌梗死范围,采用ELISA法检测缺血区心肌TNF-α、HMGB-1、ICAM-1、IL-1、IL-6和IL-10的含量.于再灌注30 min内记录室性心律失常的发生情况,并评分.结果 与S组比较,I/R组和P1-4组心肌梗死范围增大,血清cTnI、CK-MB浓度升高,I/R组血清TNF-α、HMGB-1、ICAM-1、IL-1和IL-6浓度升高,P2-4组血清HMGB-1、ICAM-1、IL-1和IL-6浓度升高,TNF-α浓度降低,P1组血清IL-10浓度升高,TNF-α浓度降低(P＜0.05),HMGB-1、ICAM-1、IL-1和IL-6浓度差异无统计学意义(P＞0.05).与I/R组比较,P1-4组心肌梗死范围减小、血清cTnI、CK-MB、血清和心肌TNF-α、HMGB-1、ICAM-1、IL-1和IL-6水平降低,P1组心肌IL-10含量升高,RPP、室性心律失常的发生率和评分降低(P＜0.05).与P1组比较,P2-4组RPP、室性心律失常的发生率和评分、血清HMGB-1、ICAM-1浓度升高,心肌ICAM-1含量升高,P3组心肌TNF-α、IL-1含量升高,P4组心肌梗死范围增大,血清cTnI、CK-MB、血清和心肌TNF-α、HMGB-1、ICAM-1、IL-1和IL-6水平升高,IL-10含量降低(P＜0.05).结论 心肌缺血15 min时行迷走神经电刺激是其减轻心肌缺血再灌注损伤的适宜时机.     

迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠100只,8周龄,体重250～350 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=20):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、迷走神经电刺激后处理组(POES组)、肢体远隔缺血后处理组(Rp组)、迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理组(POES-RP组).I/R组、POES组、RP组和POES-RP组采用结扎冠状动脉左前降支30 min和再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.POES组和POES-RP组于心肌缺血15 min时对右侧迷走神经干实施电刺激30min,电刺激参数:波宽2ms,频率1O Hz,电流强度随HR进行调整,以保持HR较刺激前降低10％.RP组和POES-RP组于心肌缺血20 min时采用止血带结扎双后肢10 min后恢复血流灌注.各组随机取10只大鼠,于再灌注120 min时采集颈动脉血样,采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB、TNF-α、高迁移率组蛋白1( HMGB1)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、IL-1、IL-6和IL-10的浓度;颈动脉采血后,采用伊文氏蓝和TTC双重染色法测定心肌梗死体积.再灌注120 min时,各组随机处死10只大鼠,取缺血区和非缺血区心肌组织,采用ELISA法检测TNF-α、HMGB-1、ICAM-1、IL-1、IL-6和IL-10的含量.结果 与S组比较,I/R组心肌梗死体积、血清cTnI、CK-MB、TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的浓度升高,缺血区和非缺血区心肌组织TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1、IL-6和IL-10的含量升高(P＜0.05).与I/R组比较,POES组、RP组POES-RP组心肌梗死体积、血清cTnI、CK-MB、TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的浓度降低,缺血区和非缺血区心肌组织TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的含量降低,POES组和POES-RP组缺血区和非缺血区心肌组织IL-10含量升高(P＜0.05).与POES组比较,POES-RP组心肌梗死体积、血清cTnI、CK-MB、TNF-α和ICAM-1的浓度、缺血区心肌组织ICAM-1和IL-1含量降低,非缺血区心肌组织IL-10含量升高(P＜0.05).与RP组比较,POES-RP组心肌梗死体积、血清cTnI、CK-MB、TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的浓度、缺血区心肌组织TNF-α、ICAM-1、IL-1和IL-6的含量降低,IL-10含量升高,非缺血区心肌组织HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的含量降低,IL-10含量升高(P＜0.05).结论 迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,且联合应用的效果强于单独应用,其机制可能与抑制局部和全身炎性反应有关.     

迷走神经电刺激后处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的 评价迷走神经电刺激后处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠40只,体重250 g～350 g,采用计算机产生的随机数平均分为4组(每组10只):假手术组(S组)、缺血/再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IPC组)和迷走神经电刺激后处理组(POES组).除S组外,其余各组均结扎冠状动脉左前降支30...     

迷走神经电刺激后处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响

Objective To evaluate the effect of postconditioning with electrical stimulation of vagus never on myocardial ischemia reperfusion injury in rats. Methods Forty male Sprague-Dawley rats aged 8 weeks and weighing 250 g-350 g were randomly allocated into four groups (n=10 in each group):sham group (S group), ischemia reperfusion group (IR group), ischemia preconditioning group( IPC group)and postconditioning with electrical stimulation of vagus never group( POES group). The myocardial ischemia reperfusion model was preparated by ligation of left anterior descending coronary artery (LAD) for 30 min followed by 120 min reperfusion. During process of ischemia and reperfusion, HR and MAP were recorded and the rate pressure product (RPP) at each measuring point was calculated as the index of myocardial oxygen consumption. Arrhythmia was recorded during ischemia and initial period of reperfusion. At the end of reperfusion, blood samples were collected to assay serum concentrations of CK-MB, and cTnI. At the end of experiment, the infarct sizes was assessed from excised hearts by Evans blue and triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining. Results The infarct size (IS%) was (72±9)% in IR group, (36±13)% in IPC group and (47±12)% in POES group, respectively, and serum concentration of cTnI was(0.99±0.14) μg/L in IR group, (0.37±0.08) μg/L in IPC group and (0.40±0.08) μg/L in POES group. Serum concentration of CK-MB was(110±13) μg/L in IR group, (38±8) μg/L in IPC group and(42±7)μg/L in POES group. Compared to the IR group, the IS% and serum concentrations of cTnI and CK-MB in IPC and POES groups were significantly reduced, rate of ventricular arrhythmia during initial period of reperfusion in the IPC and POES groups were also significantly reduced. Compared to IPC group, the IS% was significantly increased in the POES group. Conclusion Postconditioning with electrical stimulation of vagus never can attenuate myocardial ischemia reperfusion injury in rats. However, cardioprotection provided by postconditioning with electrical stimulation of vagus never is weaker than that by ischemia preconditioning.     

心肌缺血/再灌注损伤治疗新策略——迷走神经电刺激

背景 虽然缺血预处理(ischemic precondition,IPC)仍然是目前已知的最强大内源性心肌保护措施,但是因时机选择等原因其临床应用受到了极大的限制.大量动物实验证明,刺激迷走神经能够通过激活“胆碱能抗炎通路”、降低心肌交感神经兴奋性和抑制氧自由基的产生等作用机制,来减轻心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI).另外,也有少数随机对照临床研究证实了迷走神经刺激的心肌保护作用.目的 评价迷走神经刺激对心肌I/RI的保护作用.内容 包括迷走神经刺激的发现、发展,心肌保护作用的机制及其临床应用价值. 趋向 这一现象的发现为降低心肌I/RI提供了一个简单易行且费用低廉的措施.然而,在将迷走神经刺激推荐作为临床工作的常规措施之前,仍需进行更多大规模的临床研究,以评估和优化迷走神经刺激措施的保护作用.     

电刺激迷走神经对肠缺血再灌注大鼠肝损伤的作用

目的 研究电刺激迷走神经对肠缺血再灌注大鼠肝损伤的作用。方法 30只成年雄性Wistar大鼠，行双侧颈部迷走神经切断术后，随机分为3组（n=10），对照组（C组）：仅暴露腹腔；肠缺血再灌注组（Ⅱ／R组）：暴露腹腔后，夹闭肠系膜上动脉（SMA）1h，再灌注2h；迷走神经刺激＋肠缺血再灌注组（VNS组）：在夹闭SMA前及再灌注开始时分别以5V、2ms和1Hz强度的电能持续刺激左颈部迷走神经远端20min；颈动咏插管以监测平均动咏压（MAP）。再灌注2h时处死大鼠，进行肝组织病变程度评价，测定肝组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子-κB（NF-κB）的表达以及血浆TNF-α浓度。结果与C组比较，Ⅱ／R组再灌注期MAP下降，血浆TNF-α及肝组织TNF-α、NF-κB水平升高，肝组织病变程度加重（P〈0．05或0．01）；电刺激迷走神经可减弱上述改变。结论电刺激迷走神经可减轻肠缺血再灌注后肝损伤。     

参麦注射液后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价参麦注射液后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠32只,10～ 12周龄,体重240 ～ 260 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和参麦注射液后处理组(SPO组).I/R组和SPO组采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注模型;S组只穿线不结扎.于缺血30 min时I/R组静脉注射生理盐水9 ml/kg,SPO组静脉注射参麦注射液9 ml/kg.再灌注120 min时,腹主动脉采集血样,测定血清CK活性和cTnI浓度;然后处死大鼠,取心肌组织,观察病理学结果和细胞凋亡情况,计算心肌细胞凋亡指数,采用免疫组化法检测心肌细胞Bcl-2和Bax的蛋白表达.结果 与S组比较,I/R组和SPO组血清CK活性和cTnI浓度升高,I/R组心肌细胞凋亡指数升高,Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,SPO组心肌细胞凋亡指数升高,Bcl-2和Bax的蛋白表达上调(P＜0.01);与I/R组比较,SPO组血清CK活性和cTnI浓度降低,心肌细胞凋亡指数降低,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调(P＜0.01),病理学损伤减轻.结论 参麦注射液后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡有关.     

烟碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨烟碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠74只,体重200～250 g,随机分为5组:假手术组(S组,n=10)、缺血再灌注组(IR组,n=16)、烟碱400 μg/kg组(N1组,n=16)、烟碱40 μg/kg组(N2组,n=16)和α-银环蛇毒素组(α-BGT组,n=16).S组只穿线,不结扎左冠状动脉前降支;余各组采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min的方法 制备大鼠心肌缺血再灌注模型.缺血前30 min时,N1组和N2组经右颈静脉分别注射烟碱400和40 μg/kg,α-BGT组右颈静脉注射N型胆碱能受体α-7亚单位特异性阻断剂α-银环蛇毒素1.0 μg/kg+烟碱400 μg/kg,S组和IR组右颈静脉注射等量生理盐水.再灌注60 min时,IR组、N1组、N2组和α-BGT组各取6只大鼠,测定左心室面积(LVA)、缺血危险区面积(AAR)和梗死区面积(IA),计算AAR/LVA和IA/LVA.再灌注60 min时,各组取10只大鼠,采集右颈动脉血样,测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的浓度和肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性;然后处死动物,取心肌组织,观察心肌超微结构,测定心肌髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 与S组比较,IR组、N1组、N2组、α-BGT组血浆 TNF-α、IL-1β的浓度和CK-MB、LDH的活性升高,心肌MFO活性升高(P<0.05);与IR组比较,N1组IA/LVA、血浆TNF-α、IL-1β的浓度和CK-MB、LDH的活性、心肌MPO活性降低(P<0.05),心肌细胞超微结构损伤减轻,N2组和α-BGT组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与N1组比较,N2组和α-BGT组IA/LVA、血浆TNF-α、IL-1β的浓度和CK-MB、LDH的活性、心肌MPO活性升高(P<0.05),心肌细胞超微结构损伤加重.结论 烟碱可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与激活胆碱能抗炎通路,抑制炎性反应有关.     

迷走神经预调对心肌缺血再灌注损伤预防作用的实验研究

目的：探讨心脏迷走神经预调对心脏缺血再灌注损伤的预防作用及其机制,以建立一种新的围手术期心肌保护方法。方法：实验用健康杂种犬１６只,随机均分为对照且（Ｃ组）和迷走神经预调组（Ｐ组）。常规建立体外循环,分别于主动脉阻断前以３０Ｈｚ,０．５ｍｓ,１０Ｖ方波刺激心脏迷走神经３ｍｉｎ,间隔３ｍｉｎ,重复２次。转流前、主动脉阻断前、复跳即刻,再灌注３０ｍｉｎ,６０ｍｉｎ时测心输出量（ＣＯ）,射血分数（ＥＦ）     

依达拉奉联合肢体远隔缺血后处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响

目的评价依达拉奉后处理联合肢体远隔缺血后处理(RIP)对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响。方法健康雄性SD大鼠60只,8周龄,体重250~300g,采用随机数字表法将其分为四组:缺血-再灌注组(C组)、依达拉奉后处理组(E组)、肢体RIP组(R组)、联合处理组(ER组),每组15只。采用结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min、再灌注180min制备心肌缺血-再灌注模型。在再灌注前15min,E组和ER组静脉注射依达拉奉5mg/kg,C组和R组静脉注射生理盐水0.5ml;R组和ER组在结扎LAD 20min后用止血带结扎大鼠双后肢,持续10min实施RIP。再灌注后180min采集颈静脉血样,测定血浆肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)活性、丙二醛(MDA)含量及血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度,采用伊文蓝+1%氯化三苯基四氮唑双重染色法分离坏死区与缺血区心肌评估心肌梗死面积(IS)。结果与C组比较,E组、R组及ER组各时点ST段抬高程度明显降低,IS、血清CK-MB活性、MDA含量及cTnI浓度明显降低(P<0.05)。与E组和R组比较,ER组各时点ST段抬高程度明显降低,IS、血清CK-MB活性、MDA含量及cTnI浓度明显降低(P<0.05)。结论依达拉奉后处理或肢体远隔缺血后处理对缺血-再灌注后心肌损伤有一定的保护作用,且联合应用的保护效果优于两者单独应用。     

二氮嗪后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价二氮嗪后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重250～300 g,成功建立Langendorff再灌注模型的64个心脏随机分为4组(n=16):正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、二氮嗪后处理组(D组)和线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-羟葵酸+二氮嗪后处理组(5-HD+D组).采用K-H液平衡灌注20 min时,C组继续灌注K-H液70 min;I/R组、D组和5-HD+D组进行心肌缺血40 min,I/R组缺血前灌注4 ℃ ST.Thomas停跳液10 ml/kg;D组再灌注5 min时灌注含50μmol/L二氮嗪的K-H液5 min,然后再灌注20 min;5-HD+D组灌注二氮嗪前灌注含100 μmol/L 5-羟葵酸的K-H液5 min,再灌注20 min.分别于平衡灌注末与再灌注末时取8个心脏,记录心功能指标,然后提取线粒体,测定心肌细胞线粒体膜电位(MMP)、氧自由基(ROS)生成量和呼吸功能指标.结果 各组平衡灌注末时各指标差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,再灌注末时其余3组心功能和线粒体呼吸功能减退,MMP降低,ROS生成量增加(P＜0.05或0.01);与I/R组和5-HD+D组比较,D组心功能和线粒体呼吸功能改善,MMP升高,ROS水平降低(P＜0.01).结论二氮嗪后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与开放线粒体ATP敏感性钾通道而改善线粒体功能有关.     

缺血后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用

目的探讨缺血后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用。方法24只Wistar大鼠,随机分为3组(n=8):正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPC组)。采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,C组用K-H液灌注160min;I/R组全心缺血40 min,再灌注120 min; IPC组全心缺血40 min后,再灌注10 s,缺血10 s,反复6次,然后持续再灌注118 min。测定再灌注15、30、120 min时冠脉流量(CF)及冠脉流出液心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度,再灌注120 min时,取心肌组织,测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,电镜下观察心肌细胞超微结构。结果缺血再灌注可导致CF降低,冠脉流出液cTnI浓度升高,心肌SOD活性下降,MDA含量升高,心肌细胞超微结构产生病理学改变,缺血后处理可减弱上述改变。结论缺血后处理减轻脂质过氧化反应,对大鼠离体缺血再灌注心脏产生保护作用。     

舒芬太尼预先给药对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价舒芬太尼预先给药对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠36只,体重250～350 g,采用结扎左冠状动脉前降支法制备心肌缺血再灌注模型.随机分为6组(n=6),假手术组(S组)只穿线,不结扎左冠状动脉前降支;缺血再灌注组(I/R组)缺血30 min,再灌注120 min;缺血预处理组(IPC组)缺血5 min,再灌注5 min,重复3次后缺血30 min,再灌注120 min;LS组、MS组和HS组分别静脉输注舒芬太尼0.05、0.2、1.0μg·kg-1·min-1,持续5 rain,停5 min,重复3次后缺血30 min,再灌注120 min.于缺血前即刻(T0)、缺血30 min(T1)、再灌注30 min(T2)、60 min(T3)和120 min(T4)时记录心率(HR)、左心室收缩峰压(LVSP)、左心室舒张末期压力(LVEDP)和左心室内压上升,下降最大速率(±dp/dtmax),计算左心室发展压(LVDP).于T2时行心律失常严重程度评分;于L时处死大鼠,取股动脉血样3 ml,采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定血清丙二醛(MDA)浓度,黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,计算心肌梗塞区(IS)面积与缺血危险区(AAR)面积的比值(IS/AAR),以IS/AAR表示心肌损伤程度.结果 与S组比较,其余5组SOD活性降低,I/R组MDA浓度升高,IPC组及HS组MDA浓度降低(P<0.05或0.01);与I/R组比较,IPC组、LS组、MS组和HS组心律失常严重程度评分、IS/AAR及MDA浓度降低,IPC组SOD活性升高(P<0.05或0.01);与IPC组比较,LS组心律失常严重程度评分及IS/AAR升高(P<0.05或0.01).结论 舒芬太尼预先给药可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,与剂量有关.