转化生长因子β1在大鼠肝再生过程中表达变化的实验研究

本研究旨在通过建立大鼠肝再生模型 ,观察转化生长因子 β1(TGF β1)在整个肝再生过程中表达变化 ,为进一步研究其在肝再生过程中的生物学作用提供实验依据。材料与方法1.大鼠肝再生模型建立 :选取雄性S D大鼠 12 0只 (由第二军医大学实验动物中心提供 ) ,体重 2 0 0～ 2 5 0g ,随机分为两组 :肝切除手术组 (PH)和假手术对照组 (SO) ,每组按照术后 2 ,6 ,12 ,2 4 ,30 ,4 8,72 ,12 0 ,16 8和 2 4 0h不同时间点分为 10个亚组 ,每个亚组 6只大鼠 ,所有大鼠术前 12h禁食 ,6h禁饮 ,1%戊巴比妥钠 (用量 4 0mg/kg)腹腔注入麻醉大鼠 ,按照Pan…     

肝肺综合征大鼠血清对肺微血管内皮细胞Akt表达的影响

目的 探讨肝肺综合征(HPS)大鼠血清对肺微血管内皮细胞(PMVECs)丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)表达的影响.方法 健康3～4月龄SD大鼠30只,雌雄不拘,采用慢性胆管结扎法制备HPS模型.另取正常大鼠,原代培养、纯化及鉴定PMVECs.PMVECs接种于低糖DMEM培养基(10~6/,cm~2)或96孔培养板(200μl/孔),随机分为2组:对照组(C组)和HPS组,每组24皿或90孔,C组不予处理,HPS组加入HPS大鼠血清,血清终浓度为10%.于HPS大鼠血清中孵育24、48和72 h(T_(1～3))时分别采用RT-PCR法和Western blot法检测Akt_1 mRNA、Akt_2 mRNA和Akt_3 mRNA及其蛋白的表达,采用MTr法和~3H-TdR掺人法检测PMVECs增殖情况.结果 与C组比较,HPS组PMVECs增殖增强,Akt 蛋白及其mRNA表达水平上调(P<0.05);与T_1时比较,T_(2,3)时HPS组PMVECs增殖增强,Akt蛋白及其mRNA表达水平上调(P<0.05);与T_2时比较,T_3时HPS组PMVECs增殖增强,Akt蛋白及其mRNA表达水平上调(P<0.05).结论 Akt可能参与了HPS大鼠PMVECs增殖的调节.     

转化生长因子β1、血管内皮细胞生长因子与大肠癌

大肠癌是一种常见消化道肿瘤，随着分子生物学的研究，对大肠癌的发生机理和癌变过程和大肠癌的发生、发展、浸润及预后有更进一步的研究。本文对大肠癌和血管生成中重要的促进因子转化生长因子β1和血管内皮细胞生长因子的研究进展进行综述。     

转化生长因子β1与肝纤维化

肝纤维化是以包括胶原在内的细胞外基质(ECM)的过度积聚,是多种原因引起的慢性肝病.转化生长因子-β1(TGF-β1)是肝纤维化最关键的因子,与肝纤维化发生发展、ECM代谢关系最为密切.大量研究证明TGF-β1在肝纤维化形成、发生及发展中有着重要的作用.就TGF-β1与肝纤维化的关系作—综述.     

反义核酸对大鼠肝纤维化转化性生长因子β受体表达的调节作用

目的探讨反义转化生长因子β（TGF－β）RNA对其受体表达的调节及其防治肝纤维化的机制。方法将反义TGF－β1基因导入CCl_4诱导的大鼠纤维化肝脏,用原位杂交方法观察TGF－β受体的表达。结果纤维化肝脏TGF－β1型受体主要分布于汇管区周围及纤维间隔内和散在分布于肝实质内,Ⅱ型受体则主要分布于肝脏小叶、纤维间隔及汇管区,且均较正常组增加。经转基因处理后大鼠纤维化肝脏Ⅰ、Ⅱ型受体的分布未发生改变,但阳性反应明显减弱,阳性细胞数量明显减少,纤维间隔明显减少。结论反义TGF-1基因能下调其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达,以抑制贮脂细胞的活化和肝细胞的凋亡,从而减缓肝纤维化的发展。     

输精管阻断对大鼠睾丸转化生长因子β1表达的影响

目的　了解大鼠输精管阻断和阻断解除后睾丸内TGFβ1表达状况。　方法　大鼠 90只 ,随机分为输精管阻断 (VG)组 35只 ,输精管阻断解除 (VOG)组 2 0只 ,假手术组 (SOG) 35只 ,采用免疫组织化学染色和原位杂交技术检测TGFβ1的表达。　结果　VG组从实验第 8周起近基底膜的管周细胞和精原细胞TGFβ1表达较SOG组增强 ,其中 8、16、2 0、2 4周与SOG组相比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。表达量在 8周后并不随结扎时间延长而改变 ,而是维持在相对稳定的水平。VOG组TGFβ1表达亦较SOG组显著增高。　结论　输精管阻断后TGFβ1表达升高可能是导致睾丸细胞凋亡的原因 ,而阻断解除后TGFβ1水平无明显下降可能是导致生精功能恢复不完全的原因。     

大鼠移植肝内胆管上皮细胞转化生长因子-β表达的变化

目的探讨肝移植术后肝内胆管上皮细胞(BEC)转化生长因子(TGF)-β的表达。方法建立大鼠原位肝移植模型,根据供肝冷保存时间而分为CP 1 h组(冷保存1 h)、CP 12 h组(冷保存12 h)、SO组(假手术组)。分别于术后1、3、7、14 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP);免疫组织化学法检测BEC增殖、TGF-β表达、肌纤维母细胞(MFB)分布。结果CP12 h组术后各时相点BEC增殖率(7.0%、27.8%、23.1%、17.8%)明显高于CP 1 h组同时相点水平(2.0%、6%、2.6%、2.3%)及SO组(1.2%)水平;血清ALT(>200 IU/L)、ALP (>160 IU/L)、TBIL(>3.6μmlo/L)水平持续高于CP 1 h组(ALP<200 IU/L,ALT<160 IU/L,TBIL<3.6μmol/L);CP 12 h组术后3 d,BEC分泌TGF-β,7、14 d表达显著,伴有大量MFB聚集于BEC周围。结论供肝较长时间的冷保存严重损伤胆道,诱导BEC活跃增殖并分泌TGF-β,促进胆管周围成纤维细胞发生向MFB的表型转化,是肝移植术后胆管周围纤维化、胆道狭窄等并发症的产生的细胞学基础。     

转化生长因子β1对大鼠原代肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨原代培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）对其表达的影响。方法：采用RT-PCR和Westernblot方法检测大鼠原代培养的肾小球系膜细胞VEGF表达及不同浓度、不同时间的TGF-β1刺激对VEGF表达的作用。结果：原代培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF164、120mRNA，TGF-β1呈时间依赖性增加其表达，在12h表达最高，分别为刺激前3．17、2．925倍，有统计学差异（P〈0．001）。在剂量反应曲线上，2ng／ml TGF-β1刺激作用最强，VEGF164、120mRNA表达分别为未刺激组的2．82、2．45倍，有统计学差异（P〈0．001）。与VEGF mRNA表达一致，大鼠原代肾小球系膜细胞仅见VEGF164蛋白表达，2ng／ml TGF-β1呈时间依赖性的增加VEGF 164蛋白表达，24h达高峰，为刺激前的2．37倍。结论：促进肾小球系膜细胞VEGF表达可能是TGF-β1介导肾脏损害发生、发展的机制之一。     

胚胎干细胞在转化生长因子-β1诱导下表达vWF、CD34的研究

目的　探讨胚胎干 (ES)细胞在转化生长因子 β1(TGF β1)诱导条件下的分化表现 ,为组织工程种子细胞来源提供诱导方法。方法　小鼠ES细胞 ,以 1× 10 - 9mol L维甲酸 (RA)和 3μg LTGF β1进行诱导分化。应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫组织化学验证细胞性质。结果　证实ES细胞经RA和TGF β1的诱导 ,3～ 4d出现圆形前体细胞 ,6d形成管状血管样结构。分化细胞可表达内皮细胞的标志vWF、CD34。结论　ES细胞在特定的条件下可分化为血管内皮细胞 ,有可能为构建组织工程化血管及其他人工血管的内皮化提供种子细胞来源。     

慢性卡压周围神经损伤后感觉神经元内转化生长因子β1的表达

目的：观察大鼠坐骨神经慢性卡压伤后背根神经节内TGF－β1表达的变化，了解TGF－β1在周围神经损伤修复过程的作用。方法：30只雄性SD大鼠，造成右侧坐骨神经慢性卡压伤，分别于正常时及术后1，2，4，6，8周取L5背根神经节，行组织学和免疫组织化学观察。结果：术后TGF－β1表达逐渐升高，4周时达到高峰，以后TGF－β1表达的量有所减少，结论：TGF－β1参与周围神经挤压伤后的病理生理改变，在损伤神经修复过程中具有一定的作用。     

肝肺综合征大鼠肺组织膜联蛋白A2表达的变化

目的 评价肝肺综合征(HPS)大鼠肺组织膜联蛋白A2(ANXA2)表达的变化.方法 健康SD大鼠40只,雌雄不拘,3～4月龄,体重220～250 g.采用随机数字表法,将其分为3组:对照组(C组,n=10)、假手术组(S组,n=10)和肝肺综合征组(HPS组,n=20).HPS组采用胆总管结扎法建立肝肺综合征模型;C组不做任何处理;S组仅开腹暴露胆总管,但不结扎.术后5周时,处死大鼠,取肺组织,采用RT-PCR法检测ANXA2和平滑肌肌动蛋白α(SM-α-acdn)的mRNA表达,采用Western blot法检测ANXA2和SM-α-actin的蛋白表达.结果 与C组比较,S组肺组织ANXA2和SM-α-actin的mRNA及其蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与S组比较,HPS组肺组织ANXA2和SM-α-actin的mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05).结论 大鼠肝肺综合征时肺组织ANXA2表达上调.     

Laminin and transforming growth factor beta-1 in children with vesicoureteric reflux

High-grade vesicoureteric reflux (VUR) promotes the development of renal nephropathy (RN) due to scar formation. This process involves transforming growth factor beta-1 (TGF beta₁), which stimulates production of the extracellular matrix proteins, including laminin (LN). The aim of the study was to assess LN and TGF beta₁ concentration according to VUR grade. The study group (1) consisted of 54 patients aged 6.23 ± 4.15 years with VUR, including: A, 19 with grade II; B, 19 with grade III; and C, 16 with grades IV or V reflux. The control group (2) contained 27 healthy patients aged 6.76 ± 4.02 years. LN and total TGF beta₁ concentrations in serum and urine were determined by the immunoenzymatic (EIA) method. To assess total serum TGF beta₁ levels, we used a solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Both serum and urinary levels of LN and TGF beta₁ in VUR patients were higher compared with controls (p < 0.05). The highest urinary concentration of LN and TGF beta₁ was found in subgroup C. A positive correlation was noted between urinary TGF beta₁ and LN. Increased TGF-beta₁ and LN levels in urine of high-grade VUR children suggests a potential role in fibrogenesis. Further trials are needed to investigate the role of serum and urinary LN level in VUR children.     

Peritoneal transforming growth factor beta-1 expression during laparoscopic surgery: a clinical trial

Background Transforming growth factor-beta 1 (TGF-β1) is a growth factor involved in various biologic processes, including peritoneal wound healing and dissemination of malignancies. Laparoscopic surgery is evolving rapidly, and indications are increasing. The peritoneal TGF-β1 expression during laparoscopic surgery is unknown. Methods For this study, 50 patients scheduled for laparoscopic cholecystectomy were randomized into five groups, then surgically treated with various pressures, light intensities, and dissection devices. Peritoneal biopsies were taken at the beginning and end of surgery. Tissue concentrations of total and active TGF-β1 were measured using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) techniques. Results There was no significant difference in either total or active TGF-β1 concentration between peritoneal biopsies taken at the start of surgery and samples taken at the end of the procedure. Patients who underwent surgery with the ultrasonic scalpel had significant lower levels of both active (p < 0.005) and total (p < 0.01) TGF-β1 at the end of surgery than patients treated with electrocautery. Patients who had surgery with a high light intensity had significantly lower levels of total TGF-β1 levels (p < 0.005) with an unchanged active part than patients who had surgery with low light intensity. Conclusion The choice of dissection device and the light intensity used in laparoscopic surgery affect peritoneal TGF-β1 concentrations, indicating that peritoneal biology can be affected by laparoscopic surgery. Because TGF-β1 is involved in various biologic processes in the peritoneal cavity, this observation may have important clinical consequences. An erratum to this article can be found at     

转化生长因子β1诱导肌纤维母细胞分化机制的研究

目的 探讨肺移植后闭塞性细支气管炎中转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肌纤维母细胞分化的机制。方法 闭塞性细支气管炎动物模型采用Smad3野生型和基因敲除小鼠进行的同种异体异位气管移植,并采用原代培养的气管纤维母细胞,通过免疫组化、免疫荧光、Western Blotting、逆转录聚合酶链反应和DNA凝胶电泳迁移率检测等手段,检测肌纤维母细胞分化的标志物α平滑肌肌动蛋白（αSMA）的表达,以及Smad3、p38和ERK1／2的激活。结果 在闭塞性细支气管炎的受累气道中,发现有αSMA的大量表达。对纤维母细胞进行的离体研究,发现TGF-β1诱导Smad3激活,表现为蛋白磷酸化、细胞核转位和DNA结合。TGF-β1引起肌纤维母细胞分化增加,表现为αSMA在转录和蛋白水平的表达增加;而在缺乏Smad3的纤维母细胞中,TGF-β1诱导的肌纤维母细胞分化明显减少（t=2,080,P=0．027;t=1．982,P=0．032）,但未完全消除。TGF-β1可通过激活p38和ERK1／2来促进少量肌纤维母细胞的分化。结论 TGF-β1可通过激活Smad3依赖性和非依赖性信号传导途径,主要是Smad3依赖性途径,来促使纤维母细胞向肌纤维母细胞的转化,最终导致闭塞性细支气管炎的发展。     

酸性成纤维细胞生长因子对人脐血内皮祖细胞的影响

目的 观察酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对体外培养内皮祖细胞(EPCs)数量、功能及凋亡的影响.方法 密度梯度离心法获取人脐血单个核细胞(MNCs),培养6 d后,收集贴壁细胞流式细胞仪和激光共聚焦显微镜鉴定EPCs.并向贴壁细胞分别加入aFGF 2、5、10μg/L干预培养24 h,同时对作用效果最为显著的组(aFGF 5μg/L组)分别培养6、12、24、48 h,分别观察EPCs数量、增生、迁移、黏膜及凋亡状况,从而对其时效关系进行观察.结果 与对照组比较,不同浓度的aFGF可以显著提高EPCs的数量、生物学功能并抑制其凋亡(P<0.05);本研究5μg/L aFGF作用24 h时对EPCs数量、生物学功能及凋亡抑制的影响最为显著(P<0.05).结论 aFGF增加体外培养条件下EPCs的数目、改善其生物学功能并抑制其凋亡.     

腹腔镜手术中温热生理盐水腹腔冲洗对腹膜组织TGFβ1表达的影响

目的 探讨腹腔冲洗生理盐水温度对腹膜组织TGFβ1表达的影响.方法 收集需行腹腔镜胃十二指肠良性溃疡穿孔修补术患者60例,按抽签法随机分为2组:一组术中冷生理盐水腹腔冲洗,温度约8℃;另一组用温热生理盐水腹腔冲洗,温度约42℃.手术开始和结束分别做腹膜穿刺取标本,用酶联免疫吸附试验法测定腹膜组织中总和与活化TGFβ1的含量.结果 手术开始时,两组之间总和(309.5±126.4) pg,./mL、( 266.7±88.3) pg/mL和活化TGFβ1含量(174.4±41.2)pg/mL、(156.7±93.5) pg/mL,差异均无统计学意义(P＞0.05).手术结束时,温热生理盐水腹腔冲洗组患者腹膜组织活化TGFβ1含量为(136.5 ±33.0) pg/mL,总和TGFβ1含量为(135.8±52.8) pg/mL,TGFβ1的含量显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);而冷生理盐水腹腔冲洗组患者总和TGFβ1含量为(361.3 ±178.9) pg/mL及活化(198.3±87.5) pg/mL,TGFβ1含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 腹腔镜手术温热生理盐水腹腔冲洗能减少腹膜组织TGFβ1的表达,进而影响腹膜愈合和肿瘤发展过程等广泛生物学效应.     

丝裂原活化蛋白激酶类和蛋白激酶C在转化生长因子β1诱导肾小管细胞结缔组织生长因子表达中的作用

目的了解转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肾小管细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的机制，特别是蛋白激酶C（PKC）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在CTGF基因表达中的作用及其对Smad磷酸化的影响。方法分别应用PKC抑制剂G06850以及MAPK的3个组成成分ERK、JNK和p38MAPK的抑制剂PD98059、U0126、SP600125和SB203580阻断相应通路，观察其对TGF．131诱导的CTGF表达以及Smad2／Smad3磷酸化的影响。结果TGF-β1（5μg／L）以时间依赖方式诱导HK-2细胞中Smad2／Smad3的磷酸化，从基础值0．87±0．09上升至2h时高峰2．350±0.11。PKC抑制剂G06850（5μmol／L）和ERK抑制剂PD98059（10μmol／L）、U0126（10μmol／L）可部分抑制TGF-β1诱导的CTGF表达，而p38MAPK抑制剂SB203580（20μmol／L）和JNK抑制剂SP600125（10μmol／L）对TGF-β1诱导的CTGF的表达无影响。PKC抑制剂G06850（5μmol／L）可减少TGF-β1诱导的Smad2／Smad3磷酸化，而ERK抑制剂PD98059（10μmol／L）和U0126（10μmol／L）对Smad2／Smad3的磷酸化没有影响。结论在肾小管上皮细胞中，TGF-β1诱导CTGF的表达需要PKC和Ras／MEK／ERK的参与。PKC以Smad依赖的方式参与肾小管上皮细胞中TGF-β1诱导的CTGF的表达，而Ras／MEK／ERK对CTGF表达的调节不依赖于Smads。     

PRS-CTGF-siRNA对TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞细胞外基质及VEGF表达的影响

目的 观察pRetro-Super(PRS)反转录病毒载体介导的表达人结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(siRNA)对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC) 细胞外基质和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。 方法 根据siRNA靶序列要求及PRS反转录病毒载体特点分别设计4 对寡核苷酸，构建表达人CTGF基因siRNA 的PRS-CTGF-siRNA1～4重组反转录病毒载体。以脂质体2000将重组反转录病毒载体转染PT67包装细胞，继而感染HPMC。采用RT-PCR法检测mRNA表达及Western印迹法检测蛋白质表达。 结果 5 μg/L外源性转化生长因子β1（TGF-β1）刺激可诱导HPMC表达CTGF、纤连蛋白（FN）、I型胶原（Col I）、层粘连蛋白（LN）和VEGF明显增高； 而PRS-CTGF-siRNA 1～4组与TGF-β1刺激组比较，HPMC细胞内CTGF、FN、Col I、LN mRNA和蛋白表达和VEGF mRNA表达明显较低（P < 0.01），各干扰组对CTGF mRNA抑制率分别为 69.3％、22.2%、27.4%和38.8%，其中以PRS-CTGF-siRNA 1组最为明显；同时PRS-CTGF-siRNA 1组相对于TGF-β1刺激组，VEGF蛋白表达也明显较低（P < 0.01）；而PRS空载体组与TGF-β1刺激组比较，差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论 PRS-CTGF-siRNA重组反转录病毒载体可明显抑制TGF-β1诱导的细胞外基质及VEGF表达的增加。     

大黄酸对转化生长因子诱导内皮细胞纤溶酶原激活物抑制物1表达的影响

目的 探讨大黄酸对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）mRNA表达和蛋白合成的影响。以阐明大黄酸对内皮细胞的保护作用。方法 以人脐静脉细胞系ECV-304为研究对象，Northern blot检测PAI-1mRNA的表达。流式细胞仪法检测PAI-1蛋白的合成。免疫沉淀法和Western blot检测p44/p42丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）活性。结果 大黄酸可以快速抑制TGF-β1诱导的内皮细胞PAI-1mRNA的表达，且呈明显的剂量依赖效应。如果作用时间延长，则对蛋白的合成同样具有明显抑制作用。进一步的研究还发现，大黄酸对TGF-β1激活的p44/p42MAPK活性具有明显下调作用。结论 大黄酸对TGF-β1诱导的PAI-1高表达的抑制作用可能是其保护内皮细胞功能从而防治糖尿病及其血管并发症的作用机制之一。     

Effect of fluvastatin on transforming growth factor beta 1 expression in peritoneal dialysis rats model

ObjectiveTo investigate the effect of fluvastatin on TGF-β1 expression in a rat model of peritoneal dialysis(PD). MethodsA rat model of PD was built by intraperitoneal injection of 2.5% or 4.25% peritoneal dialysate. SD rats were randomly divided into 7 groups: (1) Normal control group; (2)Saline control group: saline 100 ml/kg intraperitoneal injection(IP) each day; (3) Fluvastatin treatment group: fluvastatin intragastrically administration 10 mg/kg each day; (4) 2.5% PD group: 2.5% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg everyday; (5)4.25% PD group: 4.25% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg everyday; (6)2.5% PD plus fluvastatin treatment group: 2.5% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg plus fluvastatin 10 mg/kg everyday; (7)4.25% PD plus fluvastatin treatment group: 4.25% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg plus fluvastatin 10 mg/kg everyday. The rats were sacrificed at 6 weeks and peritoneal tissues were dissected. The expressions of TGF-β1 and FN were examined by RT-PCR and immunohistochemical analysis. Masson staining was used for histological examination. ResultsMasson staining showed that the peritoneum thickened in 2.5% and 4.25% PD group than in normal control group and saline control group. The fluvastatin treatment ameliorated the thickening of peritoneum induced by PD. RT-PCR and immunohistochemical analysis showed that the mRNA and protein expression of TGF- β1 and FN increased in 2.5% and 4.25% PD group than in normal and saline control group (all P＜0.05). The fluvastatin treatment ameliorated the increased expression of TGF-β1 and FN induced by PD. There was no statistically significant difference among normal control group, saline control group and fluvastatin treatment group in both peritoneal thickness and the expression of TGF-β1 and FN. ConclusionFluvastatin can reduce the increased expressions of TGF -β1 and FN in rat peritoneum and ameliorate the thickening of peritoneum induced by PD.