中性粒细胞在肺再灌注损伤中的作用机制

动物实验及临床研究均证实中性粒细胞对肺再灌注损伤的发展起着重要作用。共作用机制主要国为产生毒性氧代谢产物，分泌多种蛋白水解酶，阻塞肺微血管和释放炎性介质，致使更多中性粒细胞向损伤部位转移。     

中性粒细胞在肺缺血再灌注损伤中的作用

中性粒细胞对肺缺血再灌注损伤的发展具有重要的作用,其作用机制与粘附分子、细胞因子、氧自由基和蛋白酶等释放有关。进一步阐明其确切机制对肺缺血再灌注损伤的防治具有重要的临床意义。     

脂多糖对大鼠体外培养中性粒细胞p38MAPK和MMP-8 mRNA表达的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)对大鼠体外培养中性粒细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和中性粒细胞胶原酶(MMP-8)mRNA表达的影响.方法 抽取SD大鼠外周静脉血,分离培养中性粒细胞,制备细胞悬液,72孔细胞培养板中每孑L加入1 ml细胞悬液,共60孔,随机分为2组:LPS组(n=48)加入LPS 1 μg/ml进行培养,对照组(C组,n=12)加入等体积PBS液(不做培养,直接检测).LPS组于培养30 min(T1)、60 min(T2)、90 min(T3)和120 min(T4)时取出培养板,吸取细胞悬液应用免疫组化法测定p38MAPK表达,RT-PCR法测定MMP-8 mRNA表达.结果 与C组比较,LPS组各时点p38MAPK与MMP-8 mRNA表达均升高(P＜0.05或0.01).p38MAPK表达水平与MMP-8 mRNA表达水平呈正相关(r=0.793 6,P＜0.05).结论 LPS可上调大鼠体外培养中性粒细胞p38MAPK和MMP-8 mRNA的表达.     

中性粒细胞在肺缺血再灌注损伤中的作用

中性粒细胞对肺缺血再灌注损伤的发展具有重要的作用，其作用机制与粘附分子、细胞因子、氧自由基和蛋白酶等释放有关。进一步阐明其确切机制对肺缺血再灌注损伤的防治具有重要的临床意义。     

血小板激活中性粒细胞的细菌诱捕功能在脓毒症发生发展中的作用

背景 脓毒症是血液循环中爆发性感染引起的危重病,是多种细胞和介质参与的复杂反应.全球每天约有1400人死于该病,我国每年患者超过300万.越来越多的研究证明中性粒细胞和血小板积极参与脓毒症炎症反应并在其过程中协同作用.目的 现就血小板在脓毒症发生发展中作用的研究进展尤其是其与中性粒细胞间的相互作用作一综述.内容 描述脓...     

脂多糖对小鼠肺成纤维细胞活化的影响

目的 评价脂多糖(LPS)对小鼠肺成纤维细胞活化的影响.方法 原代培养的小鼠肺成纤维细胞,接种于96孔培养板,采用随机数字表法,将其随机分为2组,正常对照组(C组,外=6)不作任何处理,LPS组(n=24)加入LPS 1μg/ml,分别于LPS孵育3、6、24、72 h时取6孔(C组于培养72 h时),收集细胞,采用实时PCR法测定Ⅰ型前胶原mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA、Toll样受体4(TLR4)mRNA和整合素β1 mRNA的表达水平.结果 与C组比较,LPS组LPS孵育3、6和24 h时Ⅰ型前胶原mRNA、α-SMA mRNA、TLR4 mRNA和整合素β1 mRNA的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),LPS孵育72 h时上述指标表达水平上调(P＜0.05).结论 在急性肺损伤的早期LPS一方面可直接活化小鼠肺成纤维细胞,导致肺纤维化;另一方面可上调TLR4和整合素β1的表达,增加细胞对LPS的反应性,从而加速小鼠肺成纤维细胞的活化,促进肺纤维化.

Abstract：

Objective To investigate the effect of lipopolysaccharide (LPS) on the activation of mouse lung fibroblasts. Methods Primary cultured mouse lung fibroblasts were incubated in 96 well plates and randomly divided into 2 groups: control group ( group C, n = 6) and LPS group ( n = 24). The fibroblasts were cultured for 72 h in group C. LPS 1 μg/ml was added and then the fibroblasts were incubated for 72 h in group LPS. The expression of type Ⅰ procollagen mRNA, α-smooth muscle actin (α-SMA) mRNA, Toll-like receptor 4 (TLR4)mRNA and integrin β1 mRNA was determined using real-time PCR at 3, 6, 24 and 72 h of incubation (6 wells at each time point). Results Compared with group C, there was no significant change in the expression of type Ⅰ procollagen mRNA, α-SMA mRNA, TLR4 mRNA and integrin β1 mRNA at 3, 6 and 24 h of incubation ( P ＞0.05), but the parameters mentioned above were significantly up-regulated at 72 h of incubation in group LPS ( P ＜ 0.05). Conclusion In the early acute lung injury, LPS leads to pulmonary fibrosis through activating lung fibroblasts directly, and also accelerates the activation of lung fibroblasts and promotes the process of pulmonary fibrosis through up-regulating the expression of TLR4 and integrin β1 in mice.     

利多卡因对中性粒细胞致体外培养内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨利多卡因（Ｌｉｄｏ）对内毒素（ＥＴ）激活的中性粒细胞（ＰＭＮ）致内皮细胞损伤的保护作用。方法 利用体外培养的内皮细胞,建立ＥＴ－ＰＭＮ－血清（ＨＳ）致内皮细胞损伤的模型,选用原代培养的小牛主动脉内皮细胞,纯化后４－９代的细胞制成悬液,接种于培养板,随机分为三组：对照组（ＥＣ＋ＰＭＮ＋ＰＢＳ）,损伤组（ＥＣ＋ＰＭＮ＋ＨＳ＋１０μｇ／ｍｌＥＴ）和Ｌｉｄｏ组（ＥＣ＋ＰＭＮ＋ＨＳ＋１０μｇ／ｍｌ     

肌球蛋白轻链激酶在机械牵拉诱发人肺微血管内皮细胞通透性增加中的作用

目的 评价肌球蛋白轻链激酶在机械牵拉诱发人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)通透性增加中的作用.方法 体外培养HPMVECs,随机分为3组(n=4),机械牵拉组(S组):单层细胞与RGD肽包被磁珠,在无血清MCDB131培养基中孵育2 h,经无血清培养基洗涤去除未结合磁珠后,给予磁扭力刺激(刺激频率3 Hz,刺激强度4.2 mT,刺激时间2 h);ML9处理组(M组):单层细胞与RGD肽包被磁珠,在无血清MCDB131培养基中孵育2 h,同时加入肌球蛋白轻链激酶抑制剂--ML9(50 μmol/L),其余处理同S组;对照组(C组):不给予磁扭力刺激,而将与S组相同的洗涤细胞放人细胞培养箱继续培养2 h.用transwell模型及荧光素标记的右旋糖苷检测HPMVECs通透性,免疫荧光法检测整合素αVβ3和肌动蛋白的分布.结果 与C组比较,S组HPMVECs通透性增加(P＜0.05),而M组差异无统计学意义(P ＞ 0.05);与S组比较,M组HPMVECs通透性降低(P＜0.05).S组HPM-VECs膜周边肌动蛋白逐渐消失,肌动蛋白聚集形成应力纤维,且整合素αVβ3明显簇积,C组和M组肌动蛋白多分布在HPMVECs膜周边,整合素αVβ3均匀分布在细胞表面.结论 机械牵拉诱发HPM-VECs通透性增加的机制与肌球蛋白轻链激酶活化介导的应力纤维形成及整合素αVβ3簇积有关.     

血管内皮细胞在脓毒血症中的作用

近年来脓毒血症发病机制的研究有了新的进展,但脓毒血症的死亡率仍居高不下.自从多中心临床试验证实活化蛋白C治疗脓毒血症有效报道以后,炎症时内皮细胞受损引起关注,本文就内皮细胞在脓毒血症中的作用作一综述.     

血小板内皮细胞粘附分子-1在机械通气致肺损伤中的作用

目的：探讨血小板内皮细胞粘附分子－1（PECAM－1）在机械通气致肺损伤中的作用。方法：24只普通健康小猪，随机等分为对照组，低潮气量（A组），正常潮气量组（B组）及大潮气量组（C组），持续给予不同潮气量通气，利用免疫组织细胞化学技术，髓过氧化物酶（MPO）测定法及病理组织切片技术，分别检测不同潮气量组通气1d,3d,7d后肺血管内皮细胞表面PECAM－1表达量，血清和肺组织匀浆中MPO活性的变化及肺血管内皮细胞结构及连接的改变。结果：A，B，C组血清，肺组织匀浆MPO活笥较对照组升高（P＜0．05或0．01），A，B，C组肺血管内皮组织表面PECAM－1对照组表达下调（P＜0．05或0．01），内皮细胞及基膜肿胀，内皮细胞间间隙增大，均以7d后明显，尤以A，C组显著。结论：PECAM－1在机械通气致肺损伤中可能发挥重要作用。     

吗啡对小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白表达的影响

目的 评价吗啡对小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法 小鼠脑微血管内皮细胞b.End3,培养于RPMI 1640无血清高糖培养基中,接种于10 cm培养皿中,分为3组,每组9皿,每皿2 ml,M组加入1 μg/ml吗啡,P+M组在加人吗啡前1 h加入5 μnol/L NF-κB抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯,药物浓度均为终浓度,C组不作药物处理.加入吗啡后24 h时收集细胞,测定P-gp和NF-κB p65-abcb1b DNA复合体的表达水平.结果 与C组比较,M组P-gp和NF-κB p65-abcb1bDNA复合体的表达水平上调(P＜0.01);与M组比较,P+M组P-gp和NF-κB p65-abcb1b DNA复合体的表达水平下调(P＜0.05或0.01).结论 吗啡可上调小鼠脑微血管内皮细胞P-gp表达,其机制与NF-κB介导的P-gp基因abcb1b激活有关.     

体外循环对大鼠脑血管内皮细胞功能的影响

目的 探讨不同体外循环转流模式中大鼠脑血管内皮细胞功能变化及其发生机制.方法 构建大鼠闭胸体外循环模型常温转流120 min、深低温低流量60 min、深低温停循环60 min和空白对照4组.颈内静脉采血测定血浆一氧化氮和炎症因子浓度变化.取右大脑中动脉观察不同浓度乙酰胆碱对内皮细胞相关的血管舒张反应强度.Werstern免疫印迹技术测定脑血管eNOS蛋白表达.结果 体外循环后各组一氧化氮浓度均低于对照组,各组乙酰胆碱诱导血管舒张反应亦明显受损.体外循环后脑血管eNOS蛋白表达明显降低,停循环组降低最为明显.各组体外循环后炎症因子水平均明显高于术前.结论 体外循环可以引起脑血管内皮细胞损伤,主要表现为血管舒张功能受损,且在深低温转流后更为严重;损伤的主要原因是全身炎症反应.     

蛋白激酶对内毒素休克后内皮细胞骨架的作用

目的　探讨内毒素休克发病机制中蛋白激酶G(PKG)的作用。　方法　用脂多糖 (LPS)刺激培养的内皮细胞 ,通过细胞裂解和离心获得细胞裂解液 ,用放射性同位素法标记法检测PKG的活性。同时采用特异性荧光染色法检测LPS刺激后细胞内肌动蛋白微丝 (F actin)的结构和分布变化。用PKG特异性抑制剂KT5 82 3预处理细胞后 ,再检测LPS介导的细胞内PKG活性和F actin的变化。以空白组为阴性对照 ,以PKG激动剂 8 Br cGMP刺激细胞作为阳性对照组。　结果　LPS分别刺激 5、10、30和 6 0min后细胞内PKG活力呈时间依赖性的增高 (与空白组相比P <0 .0 1) ,细胞内的F actin出现极性分布 ;而KT5 82 3预刺激 2 0min后再用LPS刺激没有出现上述变化。PKG的激动剂 8 Br cGMP刺激细胞后的变化与LPS的刺激相似。　结论　LPS可以介导血管内皮细胞PKG的激活和F actin的应力性变化 ;内毒素休克后内皮细胞通透性增高与cGMP PKG通路的激活有关。     

肺动脉灌注低温保护液对肺血管内皮损伤的保护作用

目的　研究肺动脉灌注低温保护液 ,对体外循环中肺血管内皮损伤的保护作用。方法　 6 4例行法洛四联症 (TOF)根治术病儿随机分为肺保护组 34例 ,对照组 30例。肺保护组体外循环期间肺动脉灌注低温保护液 ,对照组常规行TOF根治术。围手术期检测血浆内皮素 (ET)和冯维尔布兰德因子 (vonwillebrandfactor,vWF)水平。术后取右下肺组织活检标本 ,观察肺血管内皮组织形态学改变 ,冰冻切片免疫组化法检测肺血管内皮细胞粘附因子 (ICAM) 1的表达。术后监测血流动力学和呼吸功能 (呼吸指数 )等临床指标。结果　进ICU的 0h肺保护组ET和vWF水平明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,肺保护组肺血管内皮细胞ICAM 1表达明显弱于对照组 (P <0 0 5 )。肺组织活检对照组可见肺间质炎性细胞浸润 ,内皮细胞不完整 ,细胞结构退化 ,气血屏障加宽。肺保护组无明显病理改变。肺保护组呼吸机辅助通气时间和ICU监护时间均短于对照组 (P <0 0 5 )。术后 12h和 2 4h呼吸指数肺保护组低于对照组 (P <0 0 5 )。结论　肺动脉灌注低温保护液对体外循环中肺血管内皮损伤有保护作用 ,改善术后肺功能。     

Changes in pulmonary vascular endothelial cells after acute lung injury induced by bone marrow extract injection in rabbits

Objective:To investigate the changes of the markers of pulmonary vascular endothelial cells (PVECs) after acute lung injury (ALI) induced by bone marrow extract(BME) injection in rabbits.Methods:Thirty-one rabbits were randomized into control(CG,n=10) and experimental groups(EG,n=21).The rabbits in EG were injected with homogeneous bome marrow extrace(0.35 ml/kg,2ml/h) at a slow and continuous rate through the jugular vein to establish the model of ALI.At 6h after the injection,the number of circulating endothelial cells(CECs) in the blood,contents of granule membrane protein-140 (GMP-140),angiotensin converting enzyme(ACE) and endothelin-1(ET-1) in the plasma and the content of GMP-140 in the pulmonary tissue were determined at various time intervals.Then the animals were killed and routine pathological examination and electron microscopy were performed to observe the changes in the pulmonary tissue.Results:The levels of plasma GMP-140,ACE,ET-1 and CECs were significantly increased in the early stage (0.5h) and remained higher for 6h.The marked increase of plasma GMP-140 (3.25 times) in the early stage was negatively correlated to PaO2,but positively to other parameters.IHC-staining showed that the GMP-140 on the surface of PVECs became weak.Conclusions:BME injection at slow and continuous rate can establish an acceptable model of ALI.Determination of plasma GMP-140 might be an important measure for the early surveillance and the evaluation of prognosis of ALI in clinical management of serious traffic accidents.     

高原缺氧对血管内皮细胞止血功能的影响

目的：研究移居拉萨地区的居民在对高原缺氧的习服过程中其血管内皮细胞止血功能的变化。方法：选择世居高原的献血员和移居拉萨的健康居民８３例，分为四组：Ⅰ组为献血员２３例，Ⅱ组为移居２～６月居民１９人，Ⅲ组为移居７月至１０年居民２０例，Ⅳ组为移居１１～３５年居民２１例。采取外周静脉血检测循环内皮细胞（ＣＥＣ）计数、血管性假血友病因子（ｖＷＦ）活度、组织纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）活性以及纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ）活性。各组检测值均与平原居民正常值相比较。结果：各组的ＣＥＣ比平原居民增多（Ｐ＜０．０１），且Ⅲ组与世居（Ⅰ组）和初到（Ⅱ组）高原者比较相差也非常显著。ｖＷＦ以Ⅱ组增高明显，与平原居民比较相差非常显著（Ｐ＜０．０１）。ｔＰＡ与平原居民比较各组均降低（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），尤以Ⅲ组明显，与初到高原者（Ⅱ组）比较相差非常显著（Ｐ＜０．０１）。各组的ＰＡＩ均高于平原居民。结论：移居高原居民和世居高原居民因缺氧使内皮细胞易衰老和脱落，从而引起血液高凝低纤溶状态，此情况下发生创伤或进行手术更会加重血液凝固而致各种合并症，在处理上要慎重使用促凝药和抑制纤溶药物。     

Barrier stabilizing mediators in regulation of microvascular endothelial permeability

Increase of microvascular permeability is one of the most important pathological events in the pathogenesis of trauma and bum injury.Massive leakage of fluid from vascular space leads to lose of blood ...     

p38MAPK信号通路在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用.方法 培养人脐静脉内皮细胞,以1×104/ml密度接种于96孔培养板(100μl/孔)或24孔培养板(3 ml/孔),以1×106/ml密度接种于培养瓶(5 ml/瓶),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=23):正常对照组(C组)、脂多糖(LPS)组(L组)、盐酸戊乙奎醚组(P组)和盐酸戊乙奎醚+LPS组(PL组),P组和PL组加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,L组和PL组加入终浓度为1 μg∥ml的LPS,PL组于加入盐酸戊乙奎醚后1h加入LPS.加入LPS后24h时,收集细胞,测定磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和p38 MAPK的表达水平,以二者比值反映p38 MAPK激活程度,并测定细胞活力、NO含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达.结果 与C组比较,L组细胞活力降低,NO、p-p38 MAPK和p38 MAPK激活程度升高,iNOS表达上调(P＜0.01),P组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与L组比较,PL组细胞活力升高,NO、p-p38 MAPK和p38 MAPK激活程度降低,iNOS表达下调(P＜0.05或0.01).结论 p38 MAPK信号通路参与了盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肺微血管内皮细胞APJ mRNA和Apelin mRNA表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肺微血管内皮细胞APJ mRNA和Apelin mRNA表达的影响.方法 培养并鉴定24 h新生SD大鼠肺微血管内皮细胞,取2～4代培养细胞,细胞密度5×105个/ml,培养至80%融合后,进行药物干预.第一部分实验分为5组(n=4):加入AngⅡ至终浓度分别为10-9 mol/L(Ⅱ组)、10-1 mol/L(Ⅲ组)、10-7mol/L(Ⅳ组)、10-6 mol/L(Ⅴ组),Ⅰ组不加入AngⅡ,24 h后采用RT-PCR技术测定Apelin mRNA和APJ mRNA的表达水平.第二部分实验分为6组(n=4):加入AngⅡ至终浓度为10-7mol/L,分别在孵育即刻(Ⅰ组)、1 h(Ⅱ组)、6 h(Ⅲ组)、12 h(Ⅳ组)、24 h(Ⅴ组)、48 h(Ⅵ组)时,采用RT-PCR技术测定Apelin mRNA和APJ mRNA的表达水平.结果 第一部分实验结果:与Ⅰ组比较,Ⅱ组Apelin mRNA表达上调,APJ mRNA表达下调,Ⅲ组～V组Apelin mRNA和APJ mRNA表达下调(P<0.05或0.01),与Ⅱ组比较,Ⅲ组～Ⅴ组Apelin mRNA和APJ mRNA表达下调,呈浓度依赖性(P<0.01).第二部分实验结果:Apelin mRNA在10-7mol/L AngⅡ孵育6 h内表达上调,孵育1 h时达高峰(P<0.05或0.01),孵育6 h后Apelin mRNA表达下调,且呈时间依赖性(P<0.01);而APJ mRNA在孵育12 h后呈时间依赖性持续下调(P<0.01).结论 AngⅡ呈浓度和时间依赖性地下调Apelin mRNA和APJ mRNA的表达,可能是其参与肺微血管内皮细胞损伤的发生机制.     

内皮细胞凋亡在脓毒症小鼠肺微血管通透性改变中的作用

目的 探讨肺微血管内皮细胞凋亡在脓毒症小鼠肺微血管通透性改变中的作用。方法 ２４只雄性昆明小鼠随机分为２组,盲肠结扎穿孔组（ＣＬＰ组）和假手术组（ＳＯ组）;每组再分３ｈ和１２ｈ２个时间点。以流式细胞仪和原位凋亡检测试剂盒检测肺微血管内皮细胞的凋亡。用ＲＴ－ ＰＣＲ的方法检测肺微血管内皮细胞中ｂｃｌ－２基因的表达善况。同时还用尾静脉注射伊文蓝的方法检测了肺微血管通透性的改变。结果 在ＣＬＰ组１２ｈ点