福辛普利对自发性高血压大鼠心室重塑时左室心肌细胞凋亡和Bcl2及BaX基因表达的影响

目的研究福辛普利对自发性高血压大鼠(SHR)左室心肌细胞凋亡和Bcl2、Bax基因表达的影响.方法①使用左室重量指数作为大鼠左室重构的指标;②使用末端脱氧核苷酸转移酶标记技术和DNA电泳技术,研究心肌细胞凋亡的发生情况;③使用核酸原位杂交技术研究左室心肌细胞Bcl2、Bax基因表达的变化.结果①福辛普利使SHR左室重量指数显著降低,由3.31±0.17下降至2.56±0.25,P＜0.05;②福辛普利能显著减少左室心肌细胞凋亡的发生[(214±28)下降至(54±11)个凋亡细胞/105细胞,P＜0.01];③福辛普利能显著增加细胞Bc12基因的表达,同时减少Bax的基因表达.福辛普利使切片的Bcl2与Bax基因表达阳性面积百分数之比恢复正常(均P＜0.01).结论血管紧张素转换酶抑制剂能有效地抑制心室重塑的发生以及此过程中的心肌细胞凋亡;福辛普利使心肌细胞Bcl2及Bax基因表达阳性面积百分数之比恢复正常是其抗细胞凋亡作用的一个机制.     

培哚普利和依那普利对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响

目的 探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变进程的影响,特别是对斑块成分的影响,并比较培哚普利与依那普利的疗效.方法 ApoE基因敲除小鼠随机分为培哚普利组、依那普利组及对照组3组.对主动脉根部斑块进行定量分析,并评估斑块胶原含量及脂核面积.以冰冻切片进行免疫荧光检查,观察斑块内单核细胞/巨噬细胞-2(MOMA-2)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 各实验组之间的血压、血脂差异无统计学意义.与对照组比较,培哚普利组与依那普利组的斑块面积分别少了25.33%和22.86%(P均＜0.01),但是两组ACEI的斑块面积差异无统计学意义.培哚普利组与依那普利组减小脂核面积(分别为52.98%及38.98%,P均＜0.01)及MOMA-2(分别为88.38%及52.16%,P均＜0.01)、ICAM-1(分别为80.87%及49.59%,P均＜0.01)、VCAM-1(分别为77.56%及56.44%,P均＜0.01)、MMP-9(分别为86.93%及55.56%,P均＜0.01)的表达,并增加斑块胶原含量(分别为298.36%及168.14%,P均＜0.01),而且培哚普利组在这些方面均显著优于依那普利组(P均＜0.05).结论 ACEI在不影响血脂和血压的情况下可以抑制ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的炎症并延缓动脉粥样硬化的进展.尽管培哚普利和依那普利在减少斑块面积方面差异无统计学意义,但是培哚普利在稳定斑块方面优于依那普利.     

脂质体介导姜黄素抑制Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡的作用

目的:研究提高姜黄素治疗肝癌生物学效应的新技术和新方法.方法:对比观察脂质体-姜黄素水溶制剂对人肝癌细胞(Bel-7402)凋亡及凋亡相关调控基因Bax、Bcl-2的影响.MTT(四甲基偶氮唑蓝)法观察脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制作用.原位末端标记法(TUNEL技术)观察脂质体-姜黄素诱导Bel-7402细胞凋亡的作用.免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体-姜黄素对Bax和Bcl-2基因表达的影响.结果:10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖有显著抑制作用,P＜0.01,其抑制率分别为38.67%、26.67%和17.33%,与同浓度的姜黄素的抑制率(29.33%、20.00%、5.33%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05);增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性意义(P＜0.05).10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素处理组Bel-7402细胞凋亡率分别为68.9%、43.4%、26.9%,与同浓度姜黄素组的Bel-7402细胞凋亡率(53.3%、30.2%、14.9%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).脂质体-姜黄素对细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响,与对照组比较差异无显著性意义.结论:脂质体能显著提高姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制和诱导其凋亡的作用.脂质体-姜黄素对Bax、Bcl-2的表达无显著影响.     

IGF-1对MC3T3-E1细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax、Bc1-2表达的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠前成骨样MC3T3*E1细胞凋亡基因相关蛋白Bax/BEl-2表达的影响.方法 MC3T3-E1细胞分组培养,应用4个浓度的IGF-1(1 ng/mL、10 ng/mL、30 ng/mL、50 ng/mL)干预24 h.观察MC3T3-E1细胞动态生长状况;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测凋亡蛋白Bax/Bc1-2的表达水平.结果 与正常血清对照组相比,无血清对照组MC3T3-E1细胞凋亡率增加(P<0.05);与无血清组相比,IGF-1组MC3T3一E1细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax表达减弱(P<0.05),Bc1-2表达增强(P<0.05);各浓度组间比较,(1-50)ng/mL浓度范围内MC3T3-E1细胞凋亡率随IGF-1浓度加大而逐渐降低(P<0.05),Bax表达逐渐减弱(P<0.05),50ng/mL浓度组Bc1-2表达明显增强(P<0.01),Bc1-2/Bax灰度比与细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.917,P<0.01).结论 一定浓度的IGF-1同时调节Bax和Bc1-2表达,抑制无血清培养诱导的细胞凋亡:并存在刺量依赖性效应.     

零下非结冰抑制线粒体途径相关的细胞凋亡成功保存生物人工肝用L02细胞

目的 比较常规低温(4℃及0℃)及零下非结冰温度(-0.8℃)保存L-02肝细胞时Bcl-2/Bax基因和蛋白表达的差异及与低温保存引起细胞凋亡的关系.方法 L-02细胞分为3组:-0.8C组(零下非结冰组),0°C组(0℃非结冰组),4℃组(对照组).低温保存72 h后,分别测定细胞存活率及凋亡率(流式细胞术),检测LDH、ALT释放及凋亡基因Bcl-2与Bax的mRNA及蛋白定量表达并计算Bcl-2/Bax比值.结果 零下非结冰组较0℃组及4℃组显著提高了低温保存72 h的L-02细胞存活率[(70.95％±3.33％)vs(65.9％±3.22％)、(61.02％±3.37％),均P＜0.05];降低了细胞凋亡率[(5.82％±1.68％)vs(8.53％±1.67％)、(9.40％±2.57％),均P＜0.05];抑制了LDH[(101.50±6.58) U/L vs(127.67±12.09)U/L、(150.13±11.38) U/L,均P＜0.05]与ALT释放[(6.07±0.63) U/L vs (7.00 ±0.60) U/L、(8.63±1.25) U/L,P ＜0.05];提高了L-02细胞Bcl-2基因mRNA及蛋白表达(均P＜0.05),降低了Bax基因mRNA及蛋白表达(均P＜0.05),Bcl-2/Bax指数上升(均P＜0.05).结论 同常规低温保存相比,零下非结冰可显著提高肝细胞低温保存后细胞存活率,降低低温损伤引起的细胞凋亡.零下非结冰降低了低温源性细胞凋亡的机制可能同Bcl-2基因表达增加、Bax基因表达降低即Bcl-2/Bax比值上升有关.     

银杏叶提取物对兔动脉粥样斑块Bcl-2和Bax表达的影响

目的 观察银杏叶提取物对家兔动脉粥样斑块Bcl-2和Bax表达的影响.方法 将40只家兔随机分为正常对照组、模型组、立普妥组和银杏叶提取物组,对比观察各组家兔斑块面积大小及斑块Bax和Bcl-2的表达.结果 银杏叶提取物组和立普妥组动脉粥样斑块面积低于模型组(P<0.01);免疫组织化学染色显示,模型组平滑肌细胞内Bcl-2和Bax的阳性细胞表达与正常对照组相比增高(P<0.05),立普妥组和银杏叶提取物组平滑肌细胞、泡沫细胞Bax的阳性细胞表达下调,Bcl-2的阳性细胞表达轻度上调,银杏叶提取物组Bax/Bcl-2降低.结论 银杏叶提取物可通过下调Bax/Bcl-2表达而抑制细胞凋亡,减少内皮细胞受损,从而抑制动脉粥样硬化的发生.     

中药联合褪黑激素对帕金森模型大鼠前脑纹状体细胞凋亡和行为学的影响

目的 观察中药(平颤方)联合褪黑激素(MT)对帕金森病(PD)模型大鼠行为学和前脑纹状体细胞凋亡的影响,探讨中药联合MT治疗PD的作用及其机制. 方法 SD大鼠60只,分5个组:空白对照组、模型对照组、MT组、中药组、中药+MT组.模型对照组和各治疗组大鼠腹腔注射N-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立PD模型,用爬杆法和迷宫试验测量大鼠行为学改变和智力状况,Bax/Bcl-2免疫组织化学染色和Tunel法检测前脑纹状体凋亡细胞. 结果 PD大鼠出现不同程度爬杆能力下降和智力减退;与病理对照组相比,用药实验组尤其是中药+MT组大鼠行为学异常可部分或全部改善(P＜0.05),前脑纹状体神经元和胶质细胞Bcl-2蛋白表达明显增强(P＜0.01),Bax基因表达受抑制(P＜0.01),同时前脑黑质纹状体通路细胞凋亡减少(P＜0.01).结论 中药平颤方联合MT通过抗氧化应激途径,激活Bax/Bcl-2系统,调节前脑黑质纹状体通路多巴胺(DA)神经活性,抑制细胞凋亡和改善PD症状.     

高浓度葡萄糖对牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡调节基因表达的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖培养条件对牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡调节基因Bel-2、Bax表达的影响,探讨Bcl-2、Bax对周细胞凋亡的调控.方法 在体外培养第3代近融合的视网膜血管周细胞中加入不同浓度的葡萄糖(5.5 mmol/L、15.0 mmol/L、25.0 mmol/L和35.0mmol/L)孵育6 d后,应用MTT方法检测高糖下牛视网膜周细胞增殖情况,TUNEL法特异性标记凋亡细胞,免疫组化染色法和RT-PCR测定Bcl-2、Bax基因的表达. 结果 周细胞在高浓度葡萄糖培养下,细胞增殖受抑制,呈现出典型的细胞凋亡特征,凋亡率分别为(28.4±0.8)%、(40.4±0.9)%与(50.2±0.6)%.高浓度葡萄糖培养呈剂量依赖性促周细胞凋亡(r=0.959,P＜0.01)和凋亡调节基因Bax的表达(蛋白水平r=0.966,P＜0.01;mNRA水平r=0.874,P＜0.01)及抑制凋亡调节基因Bcl-2的表达(蛋白水平r=-0.964,P＜0.01;mNRA水平r=-0.912,P＜0.01);周细胞的凋亡率与Bax/Bcl-2比率呈正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 高浓度葡萄糖培养以剂量依赖的方式促进周细胞凋亡,Bcl-2、Bax基因表达的改变参与了细胞凋亡的调控.     

斑蝥素诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨斑蝥素(Cantharidin)对人胰腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察斑蝥素对人胰腺癌细胞株SW1990细胞增殖的抑制作用.采用Hoechst 33258染色、TUNNEL染色、流式细胞术检测细胞凋亡改变,并以RT-PCR和Western blot检测凋亡调节基因p53和Bcl-2、Bax的表达.结果 5μmol/L斑蝥素能明显抑制人胰腺癌SW1990细胞的生长,呈现凋亡特征.RT-PCR和Western blot检测可见Bax、p53基因表达显著增加,而Bc1-2基因表达减少.结论 斑蝥素能诱导人胰腺癌细胞凋亡,其作用可能与上调p53、Bax基因和下调Bcl-2基因有关.     

犬输精管结扎术后前列腺细胞凋亡与Bcl-2 Bax基因表达

目的 观察输精管及其静脉结扎(以下简称"结扎")对老年犬前列腺增生模型组织学、细胞凋亡及Bcl-2、Bax基因表达的影响.方法 12只雄性杂交5～6岁犬用添加甲基睾丸素的犬饲料喂养2年制成前列腺增生动物模型,造模成功后,随机分为结扎组(施行输精管及其静脉结扎术)和假手术组,继续饲养2年后处死犬.取前列腺测量体积并称重,标本分别行HE染色、免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡抑制基因(Bcl-2)、促凋亡基因(Bax)蛋白表达. 结果 结扎后结扎组增生的前列腺体积变小、重量减轻,腺体出现萎缩性变,而假手术组前列腺仍呈增生性改变(P＜0.01);结扎组前列腺腺上皮面积比(0.16±0.05)和腺上皮平均高度[(55.67±8.34)μm]均呈下降趋势,而假手术组上述检测指标分别为(0.24±0.07)、[(108.81±1 5.26)μm],均高于结扎组(P＜0.01),间质面积比结扎组(0.65±0.12)高于假手术组(0.46±0.09)(P＜0.05),结扎后前列腺萎缩主要以腺体和腺上皮为主;免疫组化结果显示,PCNA在结扎组前列腺腺上皮细胞核中表达较弱,在假手术组中表达较强;Bcl-2基因蛋白在结扎组前列腺上皮胞浆中表达较弱,在假手术组中表达较强;Bax基因蛋白在结扎组前列腺上皮胞浆中表达较强,在假手术组中表达较弱;结扎组PCNA和Bcl-2阳性信号的面密度值下调[分别为(0.29±0.05)、(0.18±0.07)],低于假手术组[分别为(0.67±0.12)、(0.27±0.1)],而Bax阳性信号面密度值(0.29±0.07)上调,高于假手术组(0.12±0.02),两组差异有统计学意义(P＜0.01);结扎组增殖指数(0.12±0.01)和假手术组(0.24±0.13)相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 前列腺细胞凋亡与Bcl-2、Bax基因调控密切相关,输精管结扎术后局部激素的阻断使老年犬前列腺组织细胞出现萎缩、细胞增殖下降、细胞凋亡增加,通过改变腺体细胞中Bcl-2与Bax基因的表达而实现对增殖与凋亡的调控是输精管结扎后发生凋亡的可能机制之一.