低温冷冻对人精子染色体的影响

目的 :评价低温冷冻对人精子染色体的影响。　方法 :用人精子与去透明带金黄地鼠卵异种体外授精技术制备精子染色体 ,通过比较冷冻前后及不同冷冻方法间精子染色体畸变率和性染色体比例来评价低温冷冻对人精子染色体的影响。　结果 :精子染色体畸变率在冷冻前为 9.4 0 % (11/ 117) ,经速冻法冷冻后为 7.4 8% (8/ 10 7) ,经缓冻法冷冻后为 8.74 % (9/ 10 3) ,3者差异无显著性 (P >0 .75 )。X精子与Y精子比例在 3者间也差异无显著性 (P >0 .90 )。　结论 :低温冷冻对人精子染色体没有产生影响     

获能时间对人精子染色体制备的影响

获能时间对人精子染色体制备的影响蔡敏，鄢采芹，计垣关键词获能，精子染色体自以色列学者Ｒｕｄａｋ首创制备人精子染色体标本以来［１］，这项技术在国内外不断得到改进，日臻完善。有关人精子染色体制备方法国内、外有很多报道，而获能时间的长短对精子的授精、精子染...     

鸡蛋白蛋白优选人精子

比较不同鸡蛋白蛋白（ Ｃ Ｅ Ａ）柱对 ３０ 份正常生育力精液进行精子优选的效果。分别以 ７５％单层 一步法（ Ｄ Ｃ）、７５％ 和１２５％ 双层一步法（ Ｓ Ｃ）及 ７５％ 预 选（ Ｆ Ｄ）再经 １０％ 、１５５％ 和 １７５％ 三层二步法（ Ｔ Ｃ） Ｃ Ｅ Ａ 柱进行优选。比较优选前后精子活动率、前向运动精子百分率和畸形率等常规指标及优选后各组精子回收率，并以盐酸喹啉染色比较优选前后精子 ｙ 小体阳性率。结果：优选后各组精子常规指标显著提高，以 Ｆ Ｄ 组精子回收率最高（３４７９％ ），高于上游法进行优选的回收率，与用人血清白蛋白进行优选的效果相当，可作为临床精子优选的有效手段。 Ｄ Ｃ、 Ｓ Ｃ 和 Ｔ Ｃ 各组回收率在 ２％ ～９％ 之间，显著低于 Ｆ Ｄ 组，但 ｙ 小体阳性 率均较优选前显著提 高， 在通过 Ｘ、 Ｙ 精子 分离以预防 Ｘ 连锁遗 传病上的可能用途有待进一步研究。     

白念珠菌体外感染对人精子运动和超微结构的影响

目的: 体外研究白念珠菌(Ca)对人精子的运动功能有无直接影响并观察精子超微结构变化,对其影响机制作初步探讨。　方法: 将从念珠菌性阴道炎患者的分泌物中分离纯化的Ca制成活菌悬液,对 10例健康青年男性手淫获得并经上游优化处理的精子进行体外感染。按细菌与精子比例不同分成A组 ( 1∶1 )、B组 ( 1∶10 )、C组(1∶100)、D组(1∶1 000)、E组(1∶10 000)、F组(空白对照)分别孵育,于 0、1、2、4h取样,计算机辅助精子分析系统(CASA)检测人精子运动参数(前向性运动百分率、直线速度、曲线速度、平均路径速度、头部侧摆幅度 )、精子存活率、精子形态及凝集情况。透射电镜观察孵育 4h后的各组精子的超微结构变化。　结果: Ca与精子体外孵育后,前向运动百分率所受影响最大,且与菌体密度及时间密切相关;其他参数与对照组相比也相继出现显著性差异。观察到精子黏附于菌体和凝集现象。精子超微结构产生变化:精子核空泡增多,顶体破裂,质膜破损,线粒体排列紊乱。　结论: Ca体外可显著降低精子存活率和抑制精子运动功能,其机制可能与Ca对人精子的黏附作用和超微结构的损伤有关。     

不同处理方法优选精子效果的比较

目的 比较上游法、三种密度梯度离心法和洗涤离心法优选精子的效果. 方法 门诊收集浓度与活力正常的精液标本44份,每份精液各取0.5 ml×5,分别采用上游法、密度梯度离心法和洗涤离心法进行处理,比较各组的精子浓度、活力、畸形率、精子畸形指数（SDI）和DNA碎片指数（DFI）,再按试剂来源将密度梯度离心法分为Sperm Grad梯度离心组（A组）、Pure Sperm梯度离心组（B组）和Pure Ception梯度离心组（C组）,进行上述参数比较. 结果与上游法和梯度离心法相比,洗涤离心法精子浓度、DFI值、畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均显著增高（P＜0.05）,活力显著降低（P＜0.05）;与梯度离心法相比,上游法精子浓度、DFI值均显著降低（P＜0.05）,活力显著升高（P＜0.05）,两组间总畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均无显著性差异（P＞0.05）.A、B、C组间精子浓度、活力、畸形率、SDI及DFI等参数均无显著性差异（P＞0.05）,但C组中段畸形率显著高于A组和B组（P＜0.05）,B组尾部畸形率显著高于A组和C组（P＜0.05）; 结论对于精子浓度和活力正常的精液标本,上游法精子活力最高、畸形率和DFI值最低,且精子浓度能够满足临床需要,是较为理想的精子优选技术;三种不同梯度离心法优选精子效果无显著性差异,适用于严重少精子症精液标本的处理.     

微流控技术在精子优选及体外受精中的应用

由于传统辅助生殖技术(ART)成功率低,人们在不断追求探索新的技术。大量研究表明微流控技术具有革新传统体外受精(IVF)操作流程的潜能。与传统方法相比,微流控技术应用于精子优选及体外受精具有效率高、时间短、无离心损伤、实时观察筛选效果、微环境相似及自动化等显著优点,为ART提供了新平台。笔者综述了近年来微流控技术在精子活力评价与筛选、精子化学趋向性筛选、体外受精、精子浓度检测、精子分离富集等方面的应用。同时,本文简要讨论了微流控平台原理﹑结构设计及操作流程,聚焦各种方法的优缺点以及临床应用的可能性。可见微流控技术应用于ART仍有一些问题亟待解决,有理由相信其未来发展方向是通过制作高度集成化的平台即体外受精-芯片实验室(IVF-lab-on-a-chip)来实现。     

微波辐射对雷达操作人员精子头部及尾部超微结构的影响

目的 研究微波辐射对精子超微结构的影响.方法 利用透射电镜对10例从事微波辐射工作2年以上男性新鲜精液样本中的精子头部及尾部超微结构进行观察.结果 在电镜下微波辐射后男性精子存在多种形态超微结构异常,有以下几种类型:(1)头部异常精子,包括尖头精子、头部含空泡精子.(2)顶体异常精子,包括顶体发育不良、缺失,顶体内形成包涵体精子.(3)尾部异常精子包括尾部形态异常精子(无尾精子、短尾精子)和尾部结构异常精子(线粒体缺失精子、尾部线粒体多种形态和结构异常).结论 微波辐射可导致男性精子项体、头部、尾部线粒体结构异常.     

辅助生殖中的精子优选研究进展

精子优选是辅助生殖技术中的重要环节。精子活力和形态等常规参数是评估精子的重要内容,近年来精子超微结构、DNA完整性、凋亡和膜成熟度等特征逐渐受到关注,针对这些特征筛选精子成为精子优选技术发展的方向。本文介绍了近年来发展起来的电泳法、电动电位法、透明质酸结合法、膜联蛋白V选择法、形态选择性单精子注射技术(IMSI)和微流控芯片法的技术原理,除微流控芯片法外其它技术均已应用于IVF或ICSI治疗中,同时对各种技术的优缺点和应用效果等方面做一综述。     

Extraction and Estimation of ATP from Human Spermatozoa

Summary:  This study attempts to provide guidelines for the extraction and estimation of ATP from spermatozoa. The conditions of extraction of ATP from spermatozoa using trichloroacetic acid were optimized. The efficiency of this extraction procedure was compared to that using boiling Tris buffer. Three commercially available kits which use the firefly luciferase assay for ATP and two luminometers were evaluated for the measurement of the spermatozoa extracts. Elevated levels of Mg²⁺ and/or Ca²⁺ did not interfere with the extration of ATP by trichloroacetic acid or with the subsequent estimation of the nu-cleotide.
Extraktion und Bestimmung von ATP in menschlichen Spermatozoen
Zusammenfassung:  Die vorliegende Untersuchung versucht Richtlinien aufzustellen für die Extraktion und Bestimmung von ATP in menschlichen Spermatozoen. Die Extrak-tionsbedingungen für ATP wurden unter Verwendung von Trichloressigsäure optimiert. Die Effizienz des Extraktionsverfahrens wurde mit einem Verfahren verglichen, bei wel-chem siedender Tris-Puffer Verwendung fand. Es wurden drei handelsübliche Kits, welche den Leuchtkäfer-Luciferase-Assay für ATP und zwei Luminometer benutzen, für die Mes-sung der Spermatozoenextrakte bewertet. Die erhöhten Werte von Mg²⁺ und/oder Ca²⁺ interferiersen nicht mit der Extraktion von ATP mittels Trichloressigsäure oder mit der nachträglichen Bestimmung des Nukleotids.     

Percoll优选对形态正常精子百分率和顶体酶活性的影响

目的 :了解形态正常精子百分率和顶体酶活性在Percoll优选前后的变化。　方法 :30例不育男性精液标本 ,应用计算机精液分析仪进行精子形态分析 ,分光光度比色法检测顶体酶活性。　结果 :Percoll优选后形态正常精子百分率和精子顶体酶活性均明显高于Percoll优选前 (P均 <0 .0 0 1)。　结论 :Percoll法优选精子后形态正常精子百分率和顶体酶活性增加。     

Observations on the Motility, infrastructure and Elemental Composition of Human Spermatozoa Incubated with Caffeine

Beobachtungen über die Motilität, Ultrastruktur und Elementarzusammensetzung der menschlichen Spermatozoen bei Inkubation mit Koffein
In einer gegenüber Placebo kontrollierten Studie wurde der Einfluß von Koffein (bis zu einer Konzentration von 6 mM) bei zwei fertilen Männern und bei zwei infertilen Männern mit Asthenozoospermie auf die Motilität, Ultrastruktur und Elementarzusammensetzung der Spermatozoen untersucht. Mittels der Lichtmikroskopie wurde die Motilität geprüft; mittels Raster-Elektronenmikroskopie wurde die Morphologie und mittels Raster-Transmissions-Elektronenmikroskopie wurde eine Mikroanalyse der intrazellulären Elementarzusammensetzung der einzelnen Spermatozoenköpfe bestimmt. Koffein und die Inkubation stimulierte deutlich die Motilität der Asthenozoospermie-Proben. Nach Inkubation mit Koffein schien eine größere Anzahl von Spermatozoen (speziell in der Infertilitätsgruppe) eine Zerreißung der normalen Architektur-Muster des Spermatozoenkopfes zu haben. Die Mittelwerte für die Elementarzusammensetzung in der Koffeingruppe übertrafen die der Placebogruppe in 9 von 12 Experimenten; die Werte der Inkubationsgruppe übertrafen die der nichtinkubierten Gruppe in 11 von 12 Experimenten. Die Mittelwerte der fertilen Gruppe übertrafen jene der infertilen Gruppe in alien 12 Experimenten; eine statistische Signifikanz war erreicht in der Konzentration für Calcium und Chlor. Diese Ergebnisse zeigen, daß die Inkubation mit Koffein einen schädlichen Einfluß auf menschliche Spermatozoen haben könnte und daß eine direkte Bestimmung der Elementarzusammensetzung von augenscheinlich normalen Spermatozoenköpfen ein meßbarer Indikator des normalen Samens beweisen könnte.     

Morphological Selection of Human Spermatozoa in Cervical Mucus "In Vivo"

Spermatozoa morphology at two levels in the cervical canal was compared, at the external and internal uterine orifices, in samples taken "in vivo" during 21 postcoital tests (P.C.T.s). P.C.T.s with cervical mucus, with Moghissi scores lower than 10 and exo- and endocervical pH less than 7 were excluded. At the upper level of the cervical canal, 12 of the 21 P.C.T. showed more than 5% more normal spermatozoa than at the lower level of the canal (in 5 of these P.C.T. the increase was greater than 10%). Selection for normal heads was seen in 2 and for normal tails in 4. The P.C.T. that selected for normal tails all had greater than 10% abnormal tails at the external orifice. These results confirm that there is some selection of spermatozoa during passage through the cervical canal. Above all, the selection appears to exclude those spermatozoa with defective locomotive mechanisms (abnormal tails), which indicates that the mucus acts as a "passive filter" with selection depending on the spermatozoa themselves in relation to motility.     

Proportions of Y and YY Spermatozoa in Normal and Abnormal Semen Samples

The frequency of spermatozoa bearing one or two fluorescent bodies (FB) has been studied in two series of semen, normal and abnormal (asthenozoospermic). The percentage of spermatozoa with one FB is lower in abnormal semen (41.19% vs 45.82%). On the other hand, there is no significant difference when spermatozoa bearing two FB are compared (1.95% vs 1.90%). Various correlations among semen characteristics were studied, including sperm count, mobility, vitality, percentage of normal forms. Two correlations were found to be significant: positive correlation between the frequency of one FB spermatozoa and mobility and a positive correlation between the frequency of normal forms and the frequency of one FB spermatozoa. The differences between normal and abnormal semen involve only one FB spermatozoa and not those with two FB.     

Influence of Seminal Plasma on the Chromatin Stability of Ejaculated Human Spermatozoa

Nuclear chromatin decondensation (NCD) of human ejaculated spermatozoa exposed to sodium dodecyl sulphate (SDS) has been studied. A high proportion of NCD reacting spermatozoa was only found in semen samples with a relatively low activity of some prostatic factor(s) (i.e. zinc/fructose ratio below 0.18) in the seminal plasma. Exposure to SDS for one h was found sufficient to reveal the main proportion of spermatozoa undergoing NCD in such a solution.
Addition of seminal plasma with an apparently normal composition to a sperm population with a high NCD reactivity restored the sperm SDS resistance to normal, i.e. blocked the NCD-response. Other results indicated that NCD reactivity was decreased or abolished upon prolonged storage of the spermatozoa in the seminal plasma.
The various results indicated that some factor(s) in the seminal plasma can preserve the nuclear chromatin stability of human spermatozoa and that this factor most likely is of prostatic origin.,     

Lipid Peroxidation Products in Human Spermatozoa: Detection and Pathogenic Significance

Lipid-Peroxidations-Endprodukte in menschlichen Spermatozoen
Endprodukte der Lipidperoxydation in menschlichen Spermatozoen: Nachweis und pathogene Bedeutung
Produkte der Lipidperoxydation (Schiffsche Basen) wurden in normalen menschlichen Spermatozoen nachgewiesen. Nach Inkubation der Spermatozoen mit einer prooxidativ wirkenden Substanz (FeSO₄) waren diese Produkte vermehrt vorhanden. Als Folge der Zunahme resultierte eine Verminderung der Spermatozoenmotilität. Somit könnten prooxidativ wirkende Substanzen (z.B. Fe bei Hämachromatose, Porphyrine bei Porphyrien, phenolische Prooxidantien) bei bestimmten Formen der Infertilität von Bedeutung sein. In Übereinstimmung damit wäre der therapeutische Effekt von Vitamin E durch dessen antioxidative Wirkung (Hemmung von Lipidperoxidationsreaktionen) zu erklären.     

Effect of Cooling, Freezing and Thawing Rates and Storage Conditions on Preservation of Human Spermatozoa

Human spermatozoa was relatively resistant to cooling shock. However, when diluted semen was cooled faster than 10 degrees C per minute from room temperature (RT) to 5 degrees C and rewarmed to RT, percentage motility and percentage alive of spermatozoa decreased when compared to the slower cooling rates (less than 5 degrees C/min). The optimum cooling rate from RT to 5 degrees C resulting in maximum survival of human spermatozoa was found to be 0.5 to 1 degree per minute when cooled from RT to 5 degrees C and subsequently frozen-thawed in liquid nitrogen (LN2). The optimal freezing rate of 10 degrees C per minute, from 5 degrees to -80 degrees C, resulted in higher survival of human spermatozoa than slower (1.1 degrees C/min) or faster (87.1 degrees C/min) freezing rates. Slow thawing in 20 or 35 degrees C air, on a dry bench, resulted in better survival than the other slower or faster thawing methods used. The temperature at which human semen samples were transferred to LN2 significantly influenced spermatozoa survival. Survival was higher when transferred at -30 degrees C or lower when compared with samples transferred at -15 degrees C or higher. However, maximal spermatozoa survival was obtained when the samples were transferred at -80 degrees C or lower. Transfer of human semen from LN2 to -25 to -30 degrees C and storage for 24 hours significantly reduced spermatozoa viability when compared with storage at 196 degrees C or -80 to -85 degrees C. No significant differences were found between storage temperatures of -80 to -85 degrees C and -196 degrees C in the maintenance of spermatozoa viability for up to 90 days.