淫羊藿对成骨细胞增殖分化的影响

骨质疏松症是由于衰老或绝经而引起的骨骼退行性病变,属中医“骨痹”范畴。依据“肾主骨”理论,用补肾法治疗骨质疏松取得较好的临床效果。淫羊藿作为传统的补肾壮阳中药,在中医临床治疗骨质巯松症所用的众多有效方药中出现频率较高。其单味药水提液对去睾丸大鼠和复方制剂对去卵巢大鼠有预防骨量丢失的作用。     

淫羊藿苷含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化的影响

目的 研究淫羊藿苷含药血清(Serum of rats administered icariin,SI)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响.方法 以每1 kg体重0.25 g淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清.分别以2.5%,5%和10%3种浓度加入ROB培养基,检测对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙化结节数等的影响.结果 2.5%和5%SI均促进细胞的增殖,尤以5%浓度更为明显,该浓度含药血清提高ROB的ALP活性,增加Ⅰ型胶原表达,并显著提高钙化结节形成数量.结论 淫羊藿经口服后的代谢产物可刺激成骨细胞增殖,促进其分化成熟,是淫羊藿抗骨质疏松的有效成分.     

淫羊蕾含药血清对成骨细胞增殖与分化影响的实验研究进展

近年，含药血清试验已成为研究中药淫羊藿对成骨细胞作用的热点。笔者回顾了淫羊藿含药血清对成骨细胞增值与分化影响的相关实验研究的文献，从淫羊藿含药血清试验、成骨细胞体外培养、淫羊藿含药血清对成骨细胞作用机理等方面进行分析，进一步探讨淫羊藿对成骨细胞功能产生影响的有效部位、活性成分和作用机制，为中药淫羊藿防治骨质疏松奠定基础。     

淫羊藿苷对钛颗粒作用下成骨细胞增殖和分化的影响

[目的]研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对钛(titanium,TI)颗粒作用下成骨细胞增殖和分化的影响。[方法]多次酶消化法体外分离新生大鼠颅骨成骨细胞,进行原代培养。双重荧光染色激光共聚焦显微镜下观察成骨细胞吞噬钛颗粒后的组织形态学改变。CCK-8法检测0.01、0.05、0.1、0.5、1mg/ml钛颗粒对成骨细胞增殖能力的影响,并筛选出半数致死浓度。在此浓度作用下分别加入10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L的淫羊藿苷进行干预,观察淫羊藿苷对钛颗粒作用下成骨细胞增殖能力的影响,找出最佳药物浓度。以最佳药物浓度干预钛颗粒作用下的成骨细胞,于第3、7、14 d ELISA法检测各组细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,观察药物对成骨细胞分化功能的影响。[结果]激光共聚焦显微镜下可见吞噬了钛颗粒的成骨细胞皱缩变形,微丝(F-actin)排列紊乱。不同浓度的钛颗粒均可抑制成骨细胞增殖,呈浓度依赖性,与对照组相比有显著差异(P<0.05),0.5mg/ml为钛颗粒的半数致死浓度。10-10-10-6mol/L的淫羊藿苷均能促进钛颗粒作用下的成骨细胞增殖(P<0.05),与钛颗粒组相比具有显著差异(P<0.05),10-9mol/L为淫羊藿苷的最佳作用浓度。在此浓度下的淫羊藿苷可以显著抑制钛颗粒引起的成骨细胞ALP活性下降(P<0.05)。[结论]淫羊藿苷可以在体外逆转钛颗粒对成骨细胞增殖和分化的抑制作用,有望成为防治人工关节无菌性松动的有效药物。     

淫羊藿干预MSCs成骨分化的研究进展

淫羊藿是治疗OP最常用和有效的中药之一,其对MSCS的作用机制逐渐被证实;MSCS是成骨细胞、破骨细胞的多潜能分化前体细胞,除具有多向分化潜能外,还具有免疫抑制调节特性。其特点是:来源广、取材方便、体外培养扩增迅速、易于诱导成骨,因此认为淫羊藿是MSCS定向分化为成骨细胞的良好促进剂,可为骨组织工程和细胞治疗提供理想的种子细胞。     

淫羊藿总黄酮含药血清促进骨髓问充质干细胞增殖与成骨性分化

目的 研究淫羊藿总黄酮(Total tlavonoid extract of Epimedium sagittatum，TFE)对大鼠骨髓间充质干细胞(Mysenchymal stem cells，MSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法 将TFE和含淫羊藿总黄酮大鼠血清(Serum of rats administered TFE，SES)分别以不同浓度加入大鼠MSCs培养液中，进行细胞增殖和成骨性分化的分析。细胞增殖分析采用MTT法，成骨性分化则检测碱性磷酸酶、骨钙素、钙盐沉积量等分化指标。结果 TFE直接加入培养液对MSCs增殖无明显影响，SES则强烈刺激细胞增殖，成倍增加碱性磷酸酶染色阳性的克隆数。TFE不影响MSCs的成骨性分化，但SES显著提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量和钙盐沉积量。结论 淫羊藿总黄酮活性代谢产物强烈刺激MSCs的增殖和成骨性分化，是淫羊藿总黄酮抗骨质疏松症的重要机制。     

氯化锂联合淫羊藿苷对成骨细胞增殖分化的影响

目的研究氯化锂(LiCl)与淫羊藿(ICA)苷联合应用对成骨细胞增殖、分化的影响,为LiCl与ICA联合应用提高成骨细胞矿化能力提供研究基础。方法采用酶消化法和茜素红染色法鉴定并获得大量细胞为成骨细胞,随机分为4组即空白组、ICA组(80 nmol/L), LiCl(5 nmol/L),ICA(80 nmol/L)+LiCl(5 nmol/L)组,诱导21 d后采用茜素红法及碱性磷酸酶活性测定各组成骨细胞矿化能力及活性。采用CCK-8和Western blot法测定各组对体外成骨细胞增殖活性及成骨细胞中p-GSK3β,β-catenin水平。结果倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团,茜素红染色将钙化结节染成橘红色; LiCl及ICA单独作用于成骨细胞时,都可以明显促进成骨细胞的增殖,增加ALP活性及矿化能力,同时明显促进p-GSK3β、β-catenin蛋白的表达;但是LiCl与ICA联合应用能够明显促进成骨细胞的增殖,并且在分子水平能够明显抑制p-GSK3β、β-catenin的表达,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论 LiCl与ICA联合应用可以通过wnt信号通路促进成骨细胞的增殖、分化。     

淫羊藿苷纳米微粒对大鼠成骨细胞成熟与矿化的影响

目的观察淫羊藿苷纳米微粒(ICA-NS)对出生48 h内的大鼠乳鼠颅骨成骨细胞成熟与矿化的作用。方法显微镜观察淫羊藿苷纳米微粒对成骨细胞形态的影响; Hoechst 3342/PI双染色法检测淫羊藿苷纳米微粒对成骨细胞的毒性反应;碱性磷酸酶检测试剂盒检测成骨细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性;茜苏红染料对淫羊藿苷纳米微粒处理过的细胞进行染色,观察钙化结节的数量和面积;检测成骨细胞中与成骨相关的特异性蛋白表达情况。结果与淫羊藿苷组相比,淫羊藿苷纳米微粒组细胞形态无明显变化,且Hoechst 3342/PI双染色法结果进一步显示淫羊藿苷纳米微粒对成骨细胞无明显毒副作用;碱性磷酸酶活性测定结果显示淫羊藿苷纳米微粒显著提高了成骨细胞中碱性磷酸酶水平,而且淫羊藿苷纳米微粒组茜苏红钙化结节染色面积明显增大,颜色显著加深,成骨性相关蛋白的表达量也显著高于对照组。结论淫羊藿苷纳米微粒能显著促进成骨细胞的矿化与成熟,且对成骨细胞无明显毒副作用。     

骨碎补含药血清对成骨细胞增殖、成骨的影响

目的研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨的影响。方法取乳鼠颅骨,利用二型胶原酶反复消化,离心,提取成骨细胞。利用骨碎补含药血清干预,分别测定细胞增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量等,研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨分化及其抗氧化性的影响;结果用含药血清干预,测定增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组。结论骨碎补含药血清可以促进成骨细胞的增殖、成骨分化及其增强其抗氧化性。     

淫羊藿总黄酮含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖与成骨性分化

目的 研究淫羊藿总黄酮(Total flavonoid extract of Eimedium sagittatum,TFE)对大鼠骨髓间充质干细胞(Mysenchymal stem cells,MSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法将TFE和含淫羊藿总黄酮大鼠血清(Serum of rats administered TFE,SES)分别以不同浓度加入大鼠MSCs培养液中,进行细胞增殖和成骨性分化的分析。细胞增殖分析采用MTT法,成骨性分化则检测碱性磷酸酶、骨钙素、钙盐沉积量等分化指标。结果TFE直接加入培养液对:MSCs增殖无明显影响,SES则强烈刺激细胞增殖,成倍增加碱性磷酸酶染色阳性的克隆数。TFE不影响MSCs的成骨性分化,但SES显著提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量和钙盐沉积量。结论 淫羊藿总黄酮活性代谢产物强烈刺激MSCs的增殖和成骨性分化,是淫羊藿总黄酮抗骨质疏松症的重要机制。     

羊胎素对体外成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察羊胎素在体外对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法将提取之羊胎素稀释加入体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞体系中,终浓度分别为0.625％、1.25％、2.5％、5％和10％;加药后24、48和96 h用MTT法检测细胞的增殖并绘制生长曲线:培养5 d时用PNPP法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;培养31 d时用茜素红染色2.5％羊胎素组形成之矿化骨结节,用图像分析仪计算骨结节的面积。结果 所有含羊胎素浓度组,其MTT法测得的A值都显著高于空白对照组(P<0.01),生长曲线表现为含羊胎素组的细胞增殖加快,以2.5％浓度组最为显著;ALP结果显示,羊胎素各浓度组的碱性磷酸酶活性都显著高于空白对照组(P<0.01);茜素红染色后显示,2.5％羊胎素组所形成的骨结节面积显著高于空白对照组(P<0.01)。结论羊胎素对体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞有显著的促进增殖、分化和矿化的作用。     

rhIGF-1对成骨细胞增殖、分化及骨保护素、骨保护素配体基因mRNA表达的影响

目的 观察不同剂量rhIGF-1对成骨细胞增殖，分化及骨保护素，骨保护素配体mRNA基因表达的影响，为明确骨保护素，骨保护素配体在骨质疏松症发病的作用机理及rhIGF-1在临床中应用提供实验依据。方法 取2代培养的大鼠成骨细胞，在rhIGF-1为0ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,50ng/ml的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成，MTT法，碱性磷酸酶（ALP），骨钙素（OCN）测定细胞增殖和分化，RT－PCR测定rhIGF-1对成骨细胞骨保护素，骨保护素配体基因mRNA表达的影响。结果 成骨细胞在7d可铺满瓶壁，30d可形成钙结节，rhIGF-1可促进成骨细胞的增殖，ALP和OGN的分泌，促进骨保护素，骨保护素配体基因的表达，以促进骨保护素表达明显，在rhIGF-1为10ng/ml时作用明显。结论 rhIGF-1可促进大鼠成骨细胞的增殖，分化，及骨保护素，骨保护素配体基因mRNA的表达，骨保护素mRNA表达显。rhIGF-1可能通过影响骨保护素，骨保护素配体而调节成骨细胞破骨细胞的平衡，使骨重建，从而防治骨质疏松症。     

不同微环境对人骨髓间充质干细胞体外增殖和分化的影响

目的评价不同微环境对人骨髓间充质干细胞（hBMSC）体外增殖和分化的影响。方法采用全骨髓贴壁分离法培养hBMSC,传至第3代后分别在4种微环境下培养：10％FBS组、10％CS组、1g／L植物源重组人血清白蛋白（OsrHSA）组、单纯DMEM组。采用CCK-8比色法测定细胞一周增殖率。以不加成骨诱导液为对照组,实验组添加成骨诱导液后第1周和第2周行碱性磷酸酶染色,第3周和第4周行茜素红染色,评估不同时段各组细胞成骨分化程度。结果采用单纯DMEM组培养hBMsC,细胞增殖率基本不变,后期下降;10％FBS组、10％CS组和1g／LOsrHSA组均能显著提高hBMSC增殖率（P〈O．05）,以10％FBS组效果最好。碱性磷酸酶染色和茜素红染色显示,单纯DMEM组和对照组均未发现钙沉积阳性细胞;10％FBS组、10VooCS组和1g／LOsrHSA组在各阶段均出现阳性染色,随着诱导时间延长颜色明显加深;10％CS组和1g／LOsrHSA组各时间段阳性染色程度明显较10％FBS组弱,10％CS组其次,1g／LOsrHSA组最差。结论细胞外基质微环境对hBMsC生长分化至关重要,含血清的微环境能更好地促进hBMSC增殖及维持hBMSC分化特性。     

含药血清对体外培养成骨细胞的影响

目的 研究中药骨康吸收后不同浓度血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌IL-6的影响。方法 采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞，然后以中药骨康吸收后血清，加入体外培养成骨细胞中进行培养，MTT法测成骨细胞增殖，ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果 发现中药吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化，各种浓度中以正常剂量药物灌胃后5h取血清含10％药物浓度最佳。同时，新生大鼠体外培养成骨细胞能够分泌IL-6，体外培养成骨细胞在培养后9d左右，IL-6的分泌达到高峰值，随后分泌IL-6的能力逐步下降，中药骨康含药血清可作用于成骨细胞，使其分泌IL-6的能力下降。结论 中药骨康含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化，从而促进骨形成同时可抑制成骨细胞分泌IL-6，这可能是中药骨康抑理骨吸收的机制之一。     

重楼含药血清对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨重楼治疗肾小球疾病的作用机制。 方法 以脂多糖诱导MC增殖。提取大鼠的含药血清作用于体外培养的大鼠系膜细胞(MC)，观察重楼对MC增殖、凋亡的影响。用活细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖。以Hoechst染色及流式细胞仪检测细胞凋亡。用RT-PCR检测bcl-2 mRNA水平。 结果 重楼含药血清可抑制MC异常增殖、诱导MC凋亡，呈剂量依赖性。重楼各剂量组MC凋亡率[低、中、高剂量组分别为（11.72±0.32）％、（19.76±0.35）％、（18.71±0.41）％]较脂多糖组[（4.68±0.25）%]均显著增高(P均< 0.01)，重楼中剂量组与低剂量组间差异有统计学意义(P < 0.01)。重楼各剂量组MC bcl-2 mRNA表达[低、中、高剂量组分别为（51.06±0.77）％、（44.06±0.66）%、（35.68±0.67）％]较脂多糖组[（59.62±1.12）％]显著减少(P < 0.01)。重楼呈剂量依赖性降低MC bcl-2 mRNA表达水平(P < 0.01)。 结论 重楼含药血清可抑制MC增生和诱导MC凋亡，其机制可能与抑制抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达有关。     

Protective effect of Pumpkin seed extract on sperm characteristics,biochemical parameters and epididymal histology in adult male rats treated with Cyclophosphamide

Cancer treatment with cyclophosphamide (CP) may result in reproductive toxicity as one of its side effects. The pumpkin seed is a rich natural source of antioxidant. We have assessed the possible protective efficacy of pumpkin seed extract on sperm characteristics, biochemical parameters and epididymal histology of CP‐treated rats. Male adult Wistar rats were categorised into four groups. Group 1 served as control and received intraperitoneal (IP) injection of isotonic saline solution. Group 2 rats were treated with CP by IP injection in a single dose of 100 mg/kg body weight, only once. Group 3 and 4 received CP plus 300 and 600 mg/kg pumpkin seed extract respectively. Six weeks after treatment, sperm characteristics, biochemical parameters and histopathological changes were examined. Results showed that, sperm characteristics in CP‐treated rats were significantly decreased. Biochemical analysis results showed that the co‐administration of 300 mg pumpkin seed extract could increase the total antioxidant capacity (TAC) level significantly. In CP‐treated rats, histopathological changes such as vacuolisation, disorganisation and separation of epididymal epithelium were observed as well. Interestingly, pumpkin seed extract could improve the above‐mentioned parameters remarkably in CP‐treated rats. Our findings indicated that pumpkin seed extract might be used as protective agent against CP‐induced reproductive toxicity.     

肠三叶因子和黏蛋白对烧伤血清所致肠上皮细胞增殖移行能力变化的影响

目的 观察烧伤血清所致肠上皮细胞增殖、移行能力的变化,以及联合应用肠三叶因子(ITF)和黏蛋白对其的影响.方法 将大鼠小肠上皮细胞株IEC-6传代培养,按照随机数字袁法分为正常对照组、烧伤血清组、ITF+烧伤血清组、黏蛋白+烧伤血清组和ITF+黏蛋白+烧伤血清组,均采用DMEM培养液培养,其内分别添加体积分数10％小牛血清、体积分数10％烧伤大鼠血清、25 μg/mL ITF和体积分数10％烧伤大鼠血清、250 μg/mL黏蛋白和体积分数10％烧伤大鼠血清以及联合使用上述剂量ITF、黏蛋白和烧伤大鼠血清.处理后0～4d观察细胞增殖能力;划痕实验后12、24、36、48、72 h观察细胞移行情况;Transwell法(细胞置于上室、培养液加入下室)培养4、6、8、10、12 h,观察细胞变形能力,以下室内细胞计数表示.对数据进行t检验.结果 (1)细胞增殖能力.处理后1～4d烧伤血清组细胞数量明显低于正常对照组(t值为-16.569 ～ - 2.613.P＜0.05或P＜0.01).ITF+烧伤血清组和黏蛋白+烧伤血清组细胞数量与烧伤血清组接近(t值分别为0.037～0 740、0.116～0.429,P值均大于0 05);处理后2d,ITF+黏蛋白+烧伤血清组细胞数量明显高于烧伤血清组(t =6.484,P＜0.01)、ITF+烧伤血清组(t =3.838,P＜0.01).(2)细胞移行能力.烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离均远远短于正常对照组(t值为-37.594～ -6.727,P值均小于0.0I).与烧伤血清组比较,黏蛋白+烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离无明显变化(t值为0.055 ～0.589,P值均大于0 05).ITF+烧伤血清组划痕后12、24、36 h细胞移行距离分别为(47±6)、(126±13)、(170±11) μm,明显长于烧伤血清组[(42±7)、(98±14)、(154±22) μm,t值为2.230～4.817,P＜0.05或P＜0.01].ITF+黏蛋白+烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离明显长于烧伤血清组(t值为2.982 ～7.390,P＜0.05或P＜0.01),划痕后12 ～48 h明显长于ITF+烧伤血清组(t值为2.707 ～2.918,P＜0.05或P＜0.01).(3)细胞变形能力.与正常对照组比较,烧伤血清组穿孔细胞数大幅减少(t值为- 23.965 ～ -6.436,P值均小于0.01).与烧伤血清组比较,黏蛋白+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数改变不明显(t值为0.199～ 0.797,P值均大于0 05);ITF+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数均明显增加(t值为3.650 ～10.028,P值均小于0.01).ITF+黏蛋白+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数明显多于烧伤血清组(t值为4.313～15.100,P值均小于0.01),培养10、12 h时穿孔细胞数分别为(328±47)、(465±37)个,明显多于ITF+烧伤血清组[(277±25)、(353±34)个,t值分别为3.051、6 945,P值均小于0.01].结论 ITF对肠上皮细胞增殖影响有限,但能明显改善细胞变形能力,促进细胞移行;单独使用黏蛋白对细胞无明显作用,与ITF联合应用能增强ITF的作用.ITF维护肠黏膜屏障的主要机制为促进细胞移行.