兰州地区呼吸道感染患儿中人类博卡病毒1～3型检测与临床研究

目的了解兰州地区急性呼吸道感染患儿中人博卡病毒1—3型（HBoV1～3）感染的临床及分子流行病学特征。方法收集兰州大学第一医院2009年12月至2010年11月急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物及咽拭子标本524份,用：巢氏PCR扩增人博卡病毒（HBoV）NS1片段,检测HBoV1～3;同时PCR检测常见呼吸道病毒。结果524份标本中检出HBoV43例,检出率为8．2％,仅次于鼻病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒3型;混合感染率为69．8％。其中人博卡病毒1型（HBoV1）在下呼吸道感染中检出率显著高于上呼吸道感染的检出率;2例人博卡病毒2型（HBoV2）患儿都出现胃肠道症状,与标准株GU048662．1的核苷酸同源性分别为99％和100％;1例人博卡病毒3型（HBoV3）与标准株HM132056．1的核苷酸同源性为99％。结论本地区儿童急性呼吸道感染中博卡病毒感染以HBoV1为主,首次检出HBoV3;人博卡病毒与其他病毒有较高的合并感染。人博卡病毒是本地区儿童急性呼吸道感染的重要病原之一。     

重症急性呼吸道感染儿童中人博卡病毒的分型检测与基因进化分析

目的 了解重症急性呼吸道感染住院儿童中人博卡病毒（HBoV）的感染状况,流行病学特征及其进化特征.方法 采用巢式PCR的方法,对来自北京儿童医院重症急性呼吸道感染住院儿童的259份鼻咽抽吸物,进行人博卡病毒（HBoV）分型检测与测序,同时进行了合并感染检测、流行病学、临床特点及基因多态性分析.结果 共检出56份人博卡病毒感染阳性标本,阳性率为21.6％,[95％ CI（16.0％～27.3％）,P＜0.0001],其中2岁以下儿童感染率较高.与其他呼吸道常见病毒的合并感染率为94.6％.HBoV阳性产物测序分析发现,人博卡病毒1型占96.4％ （54/56）,2、3型各1份.HBoV阳性株分型区（VP1/VP2）序列变异不明显.结论 人博卡病毒是儿童急性呼吸道感染常见的病原体,以I型最为常见,分型区（VP1/VP2）序列较保守.HBoV在重症急性呼吸道感染儿童中是否起到真正的致病作用还需进一步的研究.     

人博卡病毒母婴感染的临床前瞻性研究

目的调查本地区人博卡病毒母婴感染情况。方法用ELISA检测母婴血清人博卡病毒IgG抗体及用荧光定量PCR检测母婴血清人博卡病毒DNA。结果316例母婴配对标本中，孕妇血清人博卡病毒I蜘抗体阳性的有127例，阳性率为40．20％（127／316）；新生儿脐带血人博卡病毒IgG抗体阳性有93例，阳性率为29．43％（93／316）。新生儿人博卡病毒IgG抗体阳性占母亲人博卡病毒IgG抗体阳性的百分比为73．23％（93／127）。母婴同时人博卡病毒IgG抗体阳性为93例。316例母婴配对标本人博卡病毒DNA均为阴性。结论人博卡病毒IgG抗体可从孕妇经胎盘传给新生儿，但是否存在人博卡病毒母婴垂直传播尚有待于进一步研究。     

人博卡病毒研究进展

2005年，瑞典的Allander等人^[1]采用宿主DNA消除、随机PCR扩增、高通量测序和生物信息学知识相结合的方法，在呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物中发现了一种新的细小病毒——人博卡病毒（hu．man bocavirus，HBoV）。随后，世界上许多国家陆续报道了在呼吸道感染患儿中检测出HBoV，     

上海地区人博卡病毒在儿童急性呼吸道感染的研究CSCD

目的了解上海地区人博卡病毒（HBoV）在儿童急性呼吸道感染中的流行情况和临床特点。方法上海地区在2012年1月至2012年12月共收集271例急性呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物,采用巢式聚合酶链反应（Nested PCR）方法检测人博卡病毒NS1基因、并经测序确认,对所获得的基因序列进行同源性和进化分析,博卡病毒阳性样本同时检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道相关病毒。结果271例标本中共检出HBoV阳性31例,检出率11.4%;21例存在混合感染,全年均有检出,阳性患儿中位年龄17个月（4个月-4岁）,诊断包括上呼吸道及下呼吸道感染,临床表现包括发热、阵发性咳嗽、咳痰、腹泻、呕吐、咽充血、湿罗音等,无死亡病例,门诊患者检出率明显高于住院患者;序列分析表明其中29例为HBoV1、2例为HBoV2、与参考株的核苷酸同源性为99%-100%,氨基酸同源性96%-100%。结论HBoV1是上海地区急性呼吸道感染患儿中的重要病原,HBoV2在该地区首次检出,临床症状及诊断无特异性。     

人细小病毒——博卡病毒的研究进展

2005年8月22日瑞典学者Tobias Allander[1]在世界首次报道从呼吸道感染患者病理标本中分离出一种新型的人细小病毒,并命名为人博卡病毒(Human Bocavirus,HSoV).随后在全球相继有该型病毒感染的报道,初步判断人博卡病毒是引起急性呼吸道感染的一种新型重要病原.本文将对该型病毒的临床感染情况和分子生物学研究方面作一综述.     

人博卡病毒感染支气管上皮细胞生物学特征的研究

目的 研究人博卡病毒(HBoV)在呼吸道感染中的致病性及机制.方法采用人博卡病毒阳性标本感染健康人支气管上皮细胞,观察HBoV感染支气管上皮细胞后的生物学特征,并进行病毒空蚀斑、红细胞吸附抑制及免疫荧光测定.结果 75%感染细胞变圆并堆积成葡萄状,伴随有坏死、破碎、脱落.病毒蚀斑测定出典型"猫头鹰眼"现象.红细胞吸附实验观察到90%以上红细胞附着感染支气管上皮细胞.荧光检测出在细胞核内具有典型荧光块.结论支气管上皮细胞可用于分离HBoV,HBoV感染支气管上皮细胞后能够在该细胞内增殖,并导致特征性生物学改变.本研究为今后人博卡病毒致病机制研究奠定基础.     

儿童博卡病毒感染的临床特点

目的了解儿童博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)感染的临床特征,探讨博卡病毒感染的疾病相关性。方法收集从2005年10月至2006年2月因急性呼吸道感染住院儿童鼻咽抽吸物(nasopharyngeal aspirates,NPA)148份,并采集了2份博卡病毒呼吸道样本阳性患者的血清。采用聚合酶链式反应(PCR)扩增的方法,对鼻咽抽吸物及血清标本进行了检测,并进行序列测定。结果从148份急性呼吸道鼻咽抽吸物中检出11份博卡病毒感染阳性,阳性检出率为7.4%,所获得的2例博卡感染血清核酸扩增也呈阳性。该11例博卡病毒阳性患者临床主要表现为支气管炎,支气管肺炎或肺炎症状,部分患者伴随有腹泻症状。结论博卡病毒感染患者均有下呼吸道感染表现,博卡病毒可能是引起下呼吸道感染的一个重要病原;博卡病毒血清阳性提示,博卡病毒有可能引起病毒血症;博卡病毒感染除表现下呼吸道症状外,有可能引起肠道等其他相关症状。     

舟山群岛地区蝙蝠博卡病毒的初步鉴定与分析

为进一步了解我国蝙蝠携带博卡病毒(Bocavirus)的分布状况和遗传多样性特征,本研究采集舟山群岛地区4种蝙蝠的肠组织样本,使用套式PCR方法进行蝙蝠博卡病毒检测,分析该地区蝙蝠携带博卡病毒的遗传多样性。结果显示,从141只蝙蝠(菲菊头蝠、马铁菊头蝠、大卫鼠耳蝠和渡濑式鼠耳蝠)体内共检测出7份博卡病毒的DNA目的条带,经测序后获得5条博卡病毒序列,系统进化分析表明蝙蝠源博卡病毒同已发现的其他博卡病毒属于不同的进化分支。序列遗传进化分析显示,5条序列的同源性介于98.9%～100%之间,与其他博卡病毒的同源性介于50.8%～77.2%之间;根据ICTV关于博卡病毒属新种的判定标准,该地区检测出蝙蝠源博卡病毒为新的博卡病毒种类。     

从蜱类样本中检出博卡样病毒及其系统发育分析

为了解我国蜱类博卡病毒的感染情况,本研究于2011—2015年,分别从辽宁大连丹东、内蒙古额尔古纳和西藏樟木境内采游离蜱样本,采用巢氏PCR方法扩增博卡病毒NS1片段。结果显示,分别从长角血蜱、长须血蜱、全沟硬蜱和草原革蜱体内检测出博卡病毒36份,系统进化分析表明蜱源博卡病毒同已发现的其他博卡病毒属于不同的进化分支,通过对36个NS1蛋白序列分析发现,其中2个进化支氨基酸一致性小于85%,由此推论我国可能存在2个不同的蜱博卡病毒种类,揭示了在蜱虫中博卡病毒有较高的多样性。     

儿童急性呼吸道博卡病毒感染的病毒载量与临床特征相关性研究

目的 研究急性呼吸道感染患儿人博卡病毒（ human bocavirus,H BoY）病毒载量与临床特征的相关性。方法 对2009年l1月至2010年12月间956例呼吸道感染的患儿及251例健康对照组儿童鼻咽部抽吸物、咽拭子采用PCR法进行HBoV检测,进而对阳性样本进行实时荧光定量PCR法测定博卡病毒DNA载量,并结合患儿的临床检查进行综合分析。结果 实验组与对照组HBoV阳性率存在显著差异,下呼吸道感染病例HBoV的病毒载量水平与上呼吸道感染病例及对照组儿童差异均有统计学意义,上呼吸道感染病例与对照组儿童病毒载量无统计学意义,重症下呼吸道感染患儿与普通下呼吸道感染患儿HBoV的病毒载量无统计学差异,HBoV混合感染与独立感染患儿病毒载量亦无统计学差异。结论 博卡病毒常年均可引起发病,是儿童呼吸道感染的重要病原体之一,但可能不是儿童急性呼吸道感染的唯一因素。HBoV病毒载量并不能独立反映临床疾病感染的严重程度。     

应用不依赖序列的单引物扩增技术获得人博卡病毒全基因序列

目的 研究通过不依赖序列的单引物扩增（Sequence independent single primeramplification,SISPA）技术获得腹泻标本中人博卡病毒的全基因序列.方法 筛检仅含有人博卡病毒的标本,经过滤、超速离心富集和核酸酶处理后提取病毒核酸,采用SISPA-PCR技术扩增病毒序列,克隆后测序,经比对分析获得人博卡病毒基因序列,再用DNAstar拼接成全基因序列.结果 获得了人博卡病毒4834bp的序列,仅两端少部分序列未得到.结论 SISPA-PCR技术是一种可直接从样品中获得病毒全基因序列的方法.     

新近发现的细小病毒与多瘤病毒感染

2005年以来,研究人员又相继发现了新的与人类疾病相关的DNA病毒,包括属于细小病毒科的人博卡病毒（humanbocavirus,HBoV,2005年）、人细小病毒4（humanparvovirus4,PARV4,2005年）与人细小病毒5（humanparvovirus5,PARV5,2006年[33）;属于多瘤病毒科的KI多瘤病毒（KIpolyomavirus,KIPyV,2007年）、wu多瘤病毒（wupolyomavirus,WUPyV,2007年）及MC多瘤病毒（MCPolyomavirus,MCPyV,2008年）等。     

HIV-1 黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析

目的 分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒（human irnmunodeficiency virus type 1，HIV-1）原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA，采用保守引物进行HIV包膜直接克隆，进行序列分析及系统树分析。构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验，观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征。结果共获得2个有功能全长env克隆，分别命名为CHNHIJ03009c34（GenBank序列号为AY905493）和CHNHIA03009c33。用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现，与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性最高的病毒为云南的HIV-1 B’亚型分离株RIA2，同源性为91．52％。系统发育分析结果表明，该株为泰国B’亚型，与云南分离株RIA2的遗传距离最近。对包膜蛋白结构分析结果显示，分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RIA2没有明显差别。感染性检测结果显示该病毒只能感染U87．CD4．CCR5细胞，不能感染U87．CD4．CX-CR4细胞。结论本研究从黑龙江省一名HIV-1阳性者克隆到HIV-1CHNHLJ03009病毒的包膜基因，该病毒属于B’亚型（泰国亚型），为R5亲嗜性毒株。该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株。     

南京95例肝病患者中3种人细小病毒感染的检测与分析

目的 建立人细小病毒B19、人博卡病毒(HBoV)及人细小病毒4(PARV4)分子检测方法,并应用于南京95例肝病患者血浆中三种人细小病毒的感染情况分析.方法 分别建立人细小病毒B19、HBoV及PARV4感染的巢式PCR方法,确定其灵敏度与特异性;并对南京市某医院95例住院肝病患者血浆中三种人细小病毒的感染情况进行检测,并对检测结果进行统计学分析.结果 建立的三种巢式PCR方法特异性好,检测灵敏度均可达10个拷贝.95例肝病患者血浆中检出B19感染2例(2.1％),HBoV感染9例(9.5％),且发现在5例药物性肝炎患者中检出HBoV阳性3例,但未检出PARV4.结论 人细小病毒B19、人博卡病毒(HBoV)及人细小病毒4(PARV4)巢式PCR检测方法灵敏特异.从肝病患者血浆中检出了B19及HBoV.     

2012年云南省边境地区蚊虫及蚊传虫媒病毒调查CSCD

目的 了解云南省南部边境地区蚊虫中虫媒病毒的分布特点,为虫媒病毒病防治提供科学依据.方法 2012年7-8月在云南省西双版纳傣族自治州勐海县打洛镇和普洱市江城县整董镇采集蚊虫标本,用组织培养法分离病毒,使用蚊媒病毒种属特异性引物对阳性病毒分离物进行鉴定.结果 共采集蚊虫标本6属17种18714只.三带喙库蚊为当地优势蚊种,占蚊虫采集总数的59.74％（11 179/18 714只）.从采集的蚊虫标本中分离到23株病毒分离物,其中2株坦布苏病毒（Tembusu virus,TMUV）、3株乙脑病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）、2株盖塔病毒（Getah virus,GETV）、4株版纳病毒（Banna virus,BAV）、9株浓核病毒（Densovirus,DNV）和3株套式病毒（Nam Dinh virus,NDiV）.结论 云南省边境地区不仅蚊虫种类丰富,而且蚊虫携带多种虫媒病毒.     

副流感病毒兰州株的分离与鉴定

目的 副流感病毒兰州株的分离与鉴定。方法 应用鸡胚和人胚肺成纤维突变细胞株分离病毒;应用血凝和血抑以及近年来多株流感国际和国际和国家株（Ｈ１Ｎ１亚型６株,Ｈ３Ｎ２亚型２株,Ｂ型４株）作抗原抗体交互试验,还用４类主要呼吸道病毒单克隆间接免疫荧光法与２株兰州株的病毒抗原基质片作特异性交叉反应。结果 ２株兰州株在鸡胚中培养血凝效价滴度高达１：５１２（＋＋）,它们与流感毒甲型（Ｈ１Ｎ１和Ｈ３Ｎ２）以及乙型     

云南省蚊媒病毒分离物的初步鉴定

本研究对前期从云南蚊虫获得的病毒分离物作进一步鉴定,以明确其分类地位。采用甲病毒通用引物进行RT－PCR检测,在5株病毒分离物扩增出目的基因片段。新分离株4株来自三带喙库蚊,1株来自中华按蚊。它们可使白蚊伊蚊细胞（C6／36）、猴肾细胞（Vero）及金黄地鼠肾细胞（BHK－21）发生规律性细胞病变。核苷酸序列分析显示5株病毒与盖塔病毒（ Getah virus, GETV）同源性最高,与GETV中国云南YN0540株、河北株 HB0234、海南株 M1及南韩株、 LEIV MPR 株、鹭山病毒的同源性为96．4％～99．2％,5株病毒之间的同源性为98．4％～100％。系统进化分析结果显示,新分离株与上述GETV处于同一进化分支。以上结果证实5株病毒分离物为盖塔病毒。     

呼吸道合胞病毒诱导人上皮细胞趋化因子差异表达

本研究采用分离野生型（wt）和标准株RSV感染上皮细胞，对宿主细胞mRNA差异表达进行检测，研究病毒复制与细胞趣化因子表达关系。     

2009甲型H1N1流感流行期间北京急性呼吸道感染儿童常见呼吸道病毒的研究

目的了解2009至2010年甲型H1N1流感大流行期间北京地区急性呼吸道感染患儿中,除流感病毒外的其他几种常见呼吸道病毒感染的流行情况。方法设计并建立检测包括呼吸道合胞病毒（RSV）A/B亚型,副流感病毒（PIV）1、2、3型,腺病毒（ADV）和人博卡病毒（HBoV）在内的多重实时荧光PCR方法,并应用该方法对2009年6月至2010年2月甲型H1N1流感大流行期间,对首都儿科研究所附属儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿中甲型H1N1流感病毒检测阴性的咽拭子标本进行上述呼吸道病毒的核酸检测。结果新建立的多重RT-PCR方法最低可检测的目标基因含量为10～300拷贝数,未见与其他非目标病毒的交叉反应。本研究共检测标本849份,病毒检测总阳性率为39.0%（331份）,5岁以下占87.6%（290/331份）。各病毒的检测阳性率分别为RSV-A亚型1.4%（12份）,RSV-B亚型8.4%（71份）,PIV-1型8.2%（70份）,PIV-2型0.5%（4份）,PIV-3型3.9%（33份）,ADV13.9%（118份）,HBoV2.7%（23份）。RSV检出以B亚型为主（85.5%）,流行高峰在2009年11月至2010年2月。PIV检出以PIV-1型及PIV-3型为主,PIV-1型的流行高峰在2009年7月至2009年10月,PIV-2型及PIV-3型的流行高峰在2009年6～9月。ADV病毒在研究期间均有较高检出率（平均为13.9%）,HBoV的流行高峰在2009年9～12月。结论除流感病毒外,ADV、RSV-B及PIV可能也是2009甲型H1N1流感流行期间引起儿童急性呼吸道感染的重要病原。比较以往的资料可见各病原在2009甲型H1N1流感流行期间的流行季节性及检出率基本未受到新型流感病毒的影响。