胆汁酸对结肠癌细胞环氧合酶2表达及前列腺素E2合成作用的研究

目的 :探讨脱氧胆酸对结肠癌细胞的作用 ,以及对环氧合酶2表达和前列腺素E2合成的影响。方法 :在结肠癌细胞系HT_29中加入脱氧胆酸 ,分别培养6、12、24、48h。用MTT法测定细胞的生长率 ,用放射免疫法测定前列腺素E2的含量 ,用免疫细胞化学染色法鉴定细胞中环氧合酶2的表达。结果 :24h内 ,200μmol/l脱氧胆酸可促进细胞增殖 ,48h促进细胞增殖作用减低 ;200μmol/l脱氧胆酸可促进环氧合酶2的表达 ,并呈时间依赖性(P<0.05)增加前列腺素E2的合成。结论 :脱氧胆酸可以诱导结肠癌细胞环氧合酶2的表达和促进前列腺素E2的合成 ,但其促进结肠癌细胞增殖作用的机制仍需进一步研究     

环氧合酶-2对鼻息肉炎症形成的作用研究与探讨

目的：检测研究环氧合酶-2在鼻息肉病、一般鼻息肉组织中的表达水平及其分布情况，深入认识鼻息肉炎性发病机制。方法：利用免疫组化染色以及逆转录-聚合链反应(RT-PCR反应)检测13例鼻息肉病、22例一般鼻息肉及23例下鼻甲标本的环氧合酶-2的表达。结果：环氧合酶-2主要分布于鼻息肉粘膜上皮、粘膜下腺体、血管内皮细胞以及炎性细胞的胞浆或胞膜，呈胞浆膜型及包涵体型。鼻息肉病组织中COX-2表达明显高于下鼻甲，又高于一股鼻息肉。结论：鼻息肉病组织中COX-2表达明显增高，鼻息肉以及鼻息肉病的发病过程中有前列腺素参与。     

肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞环氧合酶2表达的影响

目的探讨肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞的作用机制。方法运用WST-8法检测肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞生存率的影响,倒置显微镜观察其形态学改变,Western Blot检测脂多糖(LPS)所诱导的小鼠小胶质细胞环氧合酶2(COX-2)的表达。结果肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞无明显毒性;可抑制谷氨酸对小鼠小胶质BV2细胞的形态学损害;抑制LPS所诱导的小鼠小胶质BV2细胞COX-2的表达。结论肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2小胶质细胞具有保护作用。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用

目的 观察青蒿琥酯对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,观察青蒿琥酯（0.5、1.5、3.5 μmol/L）对细胞的作用.MTT检测细胞活性;Griess试剂法检测一氧化氮（NO）的释放;Western Blot检测核转录因子κB（NF-κB）的蛋白表达.结果 青蒿琥酯减少了活化的BV-2小胶质细胞NO的释放,降低了核内NF-κB的蛋白表达.结论 青蒿琥酯可能通过抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活从而抑制NO的产生,发挥抗炎作用。     

姜黄素对脂多糖激活的小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的:观察姜黄素对脂多糖激活的小胶质细胞NO的产生及iNOS表达的影响.方法:用脂多糖(200 ng/ml)刺激小胶质细胞株BV的同时用不同浓度姜黄素进行干预,应用MTT方法检测细胞活性;硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO的含量;Western-blot及免疫细胞化学染色方法检测iNOS蛋白的表达.结果:姜黄素在2.5～20 μmol/L范围内对细胞活性无影响;脂多糖作用24 h后,NO释放量明显增加,iNOS蛋白表达明显增强;使用姜黄素干预后,浓度在10 μmol/L时可以显著抑制脂多糖激活的小胶质细胞NO的产生和iNOS蛋白的表达.结论:姜黄素能够有效抑制脂多糖激活的小胶质细胞iNOS蛋白的表达以及NO的产生.     

P物质促进脑膜炎奈瑟菌诱导小胶质细胞表达COX-2

目的观察P物质(substance P,SP)对脑膜炎奈瑟菌抗原诱导小胶质细胞表达环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和产生前列腺素E2(PGE2)的影响。方法原代培养小胶质细胞,根据不同的实验目的分为3组:(1)空白对照组:仅加入培养基;(2)脑膜炎奈瑟菌抗原组:加入10μg/mL抗原作用8 h;(3)SP组:在抗原刺激的同时加入1 nM SP作用8 h。采用RT-PCR检测小胶质细胞中COX-2的表达情况,ELISA检测培养上清中PGE2的产生。结果小胶质细胞未经任何处理情况下,COX-2表达量极少。当用10μg/mL脑膜炎奈瑟菌抗原处理8 h后,COX-2明显增高。而同时加用1 nM SP作用后,COX-2表达进一步增多。10μg/mL抗原作用8 h即可诱导一定水平的PGE2表达。而加用1 nM SP后,PGE2水平明显高于抗原组。此外,小胶质细胞经SP受体拮抗剂L-703606处理后,SP对COX-2的协同作用消失。结论 P物质能促进脑膜炎奈瑟菌诱导小胶质细胞表达COX-2及产生PGE2,从而可能加重中枢神经系统的炎症反应。     

COX-2抑制剂NS398通过抑制前列腺素E2诱导肾癌细胞的凋亡

目的:揭示环氧合酶2(COX-2)在肾癌细胞中的表达情况,通过COX-2抑制剂NS398作用肾癌细胞探讨非甾体抗炎药(NSAID)对肾癌细胞增殖作用的影响及其可能的作用机制。方法:采用标准的细胞培养方法对人肾癌786-0细胞进行培养,将NS398分别以25,50,100,150及200μmol/L的剂量加入细胞中作用24及48h后,MTT法检测NS398对肾癌细胞增殖的影响;作用24h后,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,EIA法测定细胞中前列腺素E(2PGE2)含量的变化,Western blotting测定COX-2蛋白表达的情况。结果:NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大,呈浓度依赖关系(P<0.05);NS398作用肾癌786-0细胞24h后,在细胞周期G0/G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,随着浓度升高,凋亡峰亦越来越增高(P<0.05);NS398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降。结论:NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786-0细胞的增殖;NS398诱导肾癌786-0细胞的凋亡作用机制可能是通过抑制COX-2的表达,降低肾癌786-0细胞PGE2的合成,减少前列腺素对肿瘤细胞增殖的刺激作用来抑制增殖和促进凋亡的。     

尼古丁对脂多糖诱导的大鼠小胶质细胞激活和白细胞介素6表达的影响

目的:观察尼古丁对脂多糖(LPS)诱导的原代大鼠脑皮层小胶质细胞激活的影响及对细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的影响,探讨尼古丁在PD中的可能作用机制.方法:培养原代大鼠脑皮质胶质细胞,纯化小胶质细胞,用尼古丁预处理30 min,再加入LPS,采用ELISA检测小胶质细胞不同时间点分泌IL-6的水平及免疫细胞化学检...     

脊髓水平环氧合酶和前列腺素E2在术后痛觉超敏中的作用

目的 探讨脊髓水平环氧合酶两种亚型（COX-1和COX-2）以及主要致痛物质前列腺素E2（PGE2）在术后痛觉超敏中的作用。方法 采用大鼠术后疼痛模型,分别通过Western blot和ELISA的方法,观察大鼠术后疼痛形成和发展的过程中COX-1和COX-2蛋白和PGE2表达的变化。同时,通过检测大鼠机械缩足发射阈值来测定痛觉超敏情况。结果 ①行为学观察 ： 与术前和非手术侧相比,大鼠术后2 h术侧后足机械缩足反射阈值（MWT）明显下降（P < 0.01）,此后逐渐升高,5 d以后恢复正常。②Western blot分析： 与术前相比,术后2 h脊髓中COX-1和COX-2蛋白表达明显增加,4 h达到高峰（P < 0.01）,COX-1蛋白表达增加一直持续到24 h,而COX-2仅持续到术后6 h。 ③ELISA检测 ： 术后大鼠腰段脊髓中PGE2含量迅速增高,4 h达高峰（P < 0.01）,术后24 h虽有所降低,但和术前相比仍有统计学差异（P < 0.05）。结论 脊髓水平COX主要是COX-1和PGE2参与切口痛大鼠术后痛觉超敏的形成和早期维持过程。 【关键词】 术后疼痛 痛觉超敏 环氧合酶 前列腺素 脊髓     

白介素4对脂多糖刺激后小胶质细胞表型改变及其机制

目的 研究IL-4对LPS刺激后小胶质细胞表型改变作用及其机制。方法 以原代小胶质细胞研究对象,在脂多糖(LPS)和白介素4(IL-4)的刺激下,通过免疫荧光、蛋白印记技术、实时定量PCR检测细胞的表型改变、炎性因子表达和信号通路活化情况。结果 在LPS作用后,小胶质细胞形态由静息状态下的长分支状变为具有短分支的阿米巴样,M1型小胶质细胞标记iNOS以及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达上调,细胞向M1型转化。加入IL-4后,iNOS以及NF-κB的磷酸化水平下降,M2型标记蛋白Arg1以及STAT6磷酸化表达显著上调,细胞从M1 型向M2转化。抑制IL-4及其下游信号通路 STAT6后,IL-4对小胶质细胞TLR4及其下游信号通路的抑制作用及M2表型转化功能均被抑制。结论 IL-4可以通过上调STAT6磷酸化水平抑制LPS介导的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路活化,从而抑制下游的炎性因子表达,促进细胞表型由M1向M2型转变。     

环氧化酶-2在肺癌组织中表达的研究

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)在肺癌组织中的表达水平及其与病理分型、分化、TNM分期及预后的关系.方法:选择125例肺癌组织石蜡切片,应用抗人COX-2抗体进行免疫组织化学染色,用COX-2阳性表达血管内皮细胞作阳性对照.结果:鳞癌COX-2表达阳性率59.18%,腺癌85.71%,大细胞癌41.18%,小细胞癌20.83%.肺腺癌COX-2阳性表达率明显高于其它三类肺癌;鳞癌COX-2阳性表达率明显高于小细胞癌.COX-2的表达与腺癌的分化程度、TNM分期有密切相关,与鳞癌分化程度无明显关系.与年龄、性别、是否吸烟无关.COX-2阳性患者5年生存率19.57%,中位生存期39个月,阴性患者5年生存率40.54%,中位生存期为55个月,两组差异有显著性意义.结论:COX-2在肺癌尤其是腺癌和鳞癌中具有较高的表达,在腺癌患者,COX-2表达与肿瘤分化程度密切相关,鳞癌患者与肿瘤的分化程度无关.肺癌患者的肺内COX-2表达与年龄、性别、是否吸烟无关.COX-2高表达的肺癌患者预后较差.     

选择性及非选择性COX-2抑制剂对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨选择性及非选择性环氧合酶-2（cylooxygenase-2,COX-2）抑制剂对体外培养的结肠癌细胞生长的影响及凋亡的诱导作用。方法体外培养HT-29、SW480及LS174-T三种结肠癌细胞,分别加入不同浓度的非选择性COX-2抑制剂阿司匹林（aspirin）、选择性COX-2抑制剂塞来昔布（celecoxib）及美洛昔康（meloxicam）作用于HT-29及SW480细胞。采用MTT法检测结肠癌细胞增殖;用免疫细胞化学法及免疫印迹技术分别检测结肠癌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）及细胞COX-2的表达;流式细胞技术分析对结肠癌细胞周期的影响;用Annexin V／PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果aspirin、celecoxib及meloxicam均能有效抑制体外培养的HT-29、SW480结肠癌细胞生长,并具有良好的量-效关系。Western blot表明,HT-29细胞表达COX-2,而SW480细胞不表达COX-2。Aspirin及celecoxib处理组细胞PCNA表达较对照组明显下调。10mmol／L的aspirin及50μmol／L的celecoxib能诱导HT-29及SW480细胞凋亡,凋亡率分别为4．8％,17．7％;5．1％,20．4％。结论选择性及非选择性COX-2抑制剂均能有效抑制结肠癌细胞生长,这种作用亦存在于COX-2阴性表达的结肠癌细胞。     

海人酸活化的小胶质细胞H_2O_2、NO的分泌对海马神经元谷氨酸含量的影响

目的:初步探讨海人酸(KA)活化培养的新生SD大鼠小胶质细胞(MG)及其分泌的一氧化氮/过氧化氢(NO/H2O2)、海马神经元、谷氨酸(Glu)之间的相互关系。方法:以KA作为MG的激活剂,以一氧化氮合成酶(NOS)的抑制剂氨基胍(AG)或过氧化氢的水解酶(CAT)作为工具药,先检测原代分离纯化培养的MG在KA激活后及工具药作用后各组条件培养液中NO和H2O2含量的变化,再用各组小胶质细胞条件培养液孵育离体海马神经元,观察其对神经元内Glu表达的影响。结果:KA作用后各组条件培养液中NO和H2O2含量明显升高,经AG或CAT处理后各组条件培养液中NO和H2O2含量显著降低;海马神经元的Glu免疫反应性KA组较对照组明显增强,在AG+KA组和CAT+KA组较KA组明显减弱。结论:活化的MG可能通过氧化损伤机制作为参与癫痫发作一个重要环节,提示采取抑制小胶质细胞活化、减少氧化损伤也可能是癫痫防治研究的一个重要方向。     

16,16二甲基前列腺素E2对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用

目的 :探讨 1 6 ,1 6二甲基前列腺素E2 (dmPGE2 )在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化进程中对结缔组织生长因子 (CTGF)表达水平的影响。方法 :通过苏木素伊红 (HE)染色及Ⅰ型胶原 (Col Ⅰ )、Ⅲ型胶原 (Col Ⅲ )免疫组化染色评价纤维化程度 ,用原位杂交方法检测结缔组织生长因子 (CTGF)的mRNA在肺内的表达情况 ,用免疫组化法检测转化生长因子 β1 (TGF β1 )及cAMP依赖性磷脂酶A(PKA)的表达。结果 :①模型组中TGF β1 、CTGFmR NA、Col Ⅰ、Col Ⅲ表达水平较空白组明显增高 ;②实验组中CTGFmRNA和Col Ⅰ、Col Ⅲ水平与模型组比明显下降 ,较正常组稍高。结论 :PGE2 可减轻博莱霉素所诱导的肺间质纤维化程度 ,这种作用可能部分通过抑制CTGFmRNA转录实现     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞COX-2/PGE2、iNOS/NO表达的影响

本实验旨在观察粉防己碱（Tet）对脂多糖（LPS）诱导下RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用。采用 LPS 1 μg/mL刺激生长良好的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型。在不同浓度Tet（1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6mol/L）作用下,用Western blotting检测各组细胞中环加氧酶-2（COX-2）和诱导性一氧化氮激酶（iNOS）的表达,用NO检测试剂盒检测细胞培养液中NO的含量,酶免疫分析法检测培养液中前列腺素E₂（PGE₂）含量。结果显示Tet剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE₂、NO的表达,同时抑制其合成酶COX-2和iNOS的表达。表明Tet具有抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的作用,其抗炎机制可能通过抑制COX-2、iNOS的表达,从而抑制其下游炎性介质NO、PGE₂的表达有关。     

EP2受体介导的前列腺素E2影响胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1表达和侵袭的研究

目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP2受体影响人胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及癌细胞的侵袭能力?方法:用PGE2?EP1~4四种受体激动剂(17-phenyltrinor Prostaglandin E2?Butaprost?Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)?EP2受体抑制剂AH6809?腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理HuCCT1细胞,通过Western blot?划痕试验等方法检测ICAM-1的蛋白表达水平以及HuCCT1细胞侵袭能力的变化?结果:PGE2明显提高HuCCT1细胞ICAM-1蛋白的表达水平,5 μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白表达水平与对照组相比上升了66.17%(P < 0.05),并呈浓度依赖性和时间依赖性;5 μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了43.29%(P < 0.01)?10 μmol/L EP1~4受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂上升了257.88%(P < 0.05),10 μmol/L EP2受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了56.99%(P < 0.01);10 μmol/L EP2受体抑制剂AH6809处理后ICAM-1蛋白的表达水平与PGE2组相比下降了49.14%(P < 0.05),细胞侵袭能力下降了52.06%(P < 0.01)?25 μmol/L AC抑制剂SQ22536?10 μmol/L PKA抑制剂H89处理HuCCT1细胞后,ICAM-1蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了72.87%(P < 0.05)和80.78%(P < 0.05)?结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调HuCCT1细胞ICAM-1的表达,从而促进HuCCT1细胞的侵袭转移?     

ERK1／2信号通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2，PGE2表达的影响

目的：研究ERK1/2信号通路对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）所致帕金森病（PD）小鼠模型中脑黑质环氧合酶-2（COX-2）和前列腺素E2（PGE2）的表达调控作用,探讨多巴胺（DA）能神经元变性失活的可能机制.方法：采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,应用免疫组织化学和免疫蛋白印记法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）,COX-2,PGE2以及磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达变化;并观察给予ERK特异性抑制剂U0126对上述因子变化的影响.结果：模型组小鼠出现典型PD样症状,在MPTP第3次注射后1h,黑质区p-ERK1/2阳性细胞数明显增加,在MPTP第5次注射后24h,黑质区出现大量COX-2,PGE2阳性细胞,伴有约50%的TH阳性神经元丢失;给予ERK特异性抑制剂U0126后小鼠PD样症状减轻,p-ERK1/2,COX-2,PGE2阳性细胞数明显减少,MPTP第5次注射后24h,TH阳性细胞数较对照组仅下降25%.结论：ERK1/2通路可能参与调控COX-2及PGE2的表达而在PD发病过程中发挥重要作用,抑制ERK信号通路对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用.     

常用苦寒药过量使用对胃黏膜屏障功能影响的实验研究

目的：研究过量服用传统认为有伤胃作用的九味苦寒药对大鼠胃黏膜屏障功能的影响，探讨“苦寒药伤胃”之说的实质。方法：分别给正常大鼠与脾胃虚寒模型大鼠大量服用9味苦寒药（黄连、山豆根、黄芩、栀子、苦参、黄柏、大黄、防己龙胆草）连续十天。取血、胃黏膜组织分别检测前列腺素E2（PGE2）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的含量。结果：动物血中和胃黏膜中PGE2含量不同程度下降；SOD均有不同程度的提高，同时脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量也明显增加，尤其是脾胃虚寒者胃中MDA含量增加较为突出。结论：传统认为有伤胃作用的几味苦寒药在一定程度上可造成胃黏膜屏障功能的损害，表现为胃黏膜PGE2水平下降、氧自由基体系代谢活跃，胃黏膜脂质过氧化产物堆积。     

EP1受体介导PGE2对胆管细胞癌HuCCT1细胞MMP2表达和活性的影响

目的:探讨前列腺素E2(PGE2)对人胆管细胞癌HuCCT1细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达与酶活性的影响及与EP1受体的关系。方法:分别用PGE2、EP1受体激动剂或抑制剂、蛋白激酶C(PKC)抑制剂和钙离子螯合剂处理HuCCT1细胞,通过RT-PCR、明胶酶谱法检测MMP2的mRNA水平以及MMP2酶活性。结果:5μmol/L PGE2和5μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理组MMP2 mRNA的表达水平与对照组相比分别上升了89.14%(P<0.01)和163.89%(P<0.01);MMP2酶活性与对照组相比分别增强了69.11%(P<0.05)和117.65%(P<0.01);10μmol/L EP1受体抑制剂sc-51322处理后,MMP2 mRNA水平以及MMP2酶活性较PGE2处理组分别下降了47.74%(P<0.05)、84.58%(P<0.01);5μmol/L PGE2或5μmol/L 17-PT-PGE2处理稳定转染EP1R-pcDNA3的人胚肾细胞株HEK293细胞,MMP2的酶活性较对照组分别增强了36.07%(P<0.05)、61.59%(P<0.05)。...     

PGE2通过cAMP-PKA信号转导通路促进肝癌细胞VEGF表达

目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化。结果:10μmol/L PGE2处理HuH7细胞24h后,VEGFmRNA的表达水平上升了264%(P<0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平上升了24%(P<0.01);10μmol/L PGE2处理HuH7细胞6、12、24h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别上升了13.6%、25.7%、39.6%(P<0.01);10μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞24h后,胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别上升了32.3%、20.1%(P<0.01),而10μmol/L EP1、EP3、EP4受体激动剂处理HuH7细胞24h后,VEGF的表达水平无明显改变;30μmol/L PKA抑制剂(H89)、500μmol/L腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)处理HuH7细胞24h后,胞浆VE...