TGF-β1促进人舌鳞状细胞癌侵袭迁移的研究

目的：研究转化生长因子β1(TGF-β1)能否促进人舌鳞状细胞癌的侵袭转移。方法细胞增殖与活性实验试剂盒(CCK8)检测比较不同浓度TGF-β1刺激或不刺激舌鳞状细胞癌细胞株SCC9、CAL27之间生长速度的差异;划痕实验检测比较TGF-β1刺激或不刺激舌鳞状细胞癌SCC9、CAL27之间的迁移差异;Transwell实验进一步比较TGF-β1刺激或不刺激舌鳞状细胞癌SCC9、CAL27侵袭迁移能力的差异。结果 CCK8实验表明低浓度TGF-β1刺激后SCC9、CAL27细胞与空白对照组相比活细胞数量降低,但高浓度组未明显影响舌鳞癌细胞增殖,差异具有统计学意义(P<0.05)。划痕实验和Transwell实验均显示,TGF-β1刺激后SCC9、CAL27细胞与空白对照组相比较具有更强的侵袭能力,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度TGF-β1可以抑制舌鳞癌细胞的增殖,但可以显著促进舌鳞状细胞癌侵袭转移。     

LncRNA CCAT1通过TGF-β/Smad信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的：探讨长链非编码核糖核酸（LncRNA）CCAT1对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移及转化生长因子β（TGF-β）/Smad信号通路的影响,阐明LncRNA CCAT1在子宫内膜癌发生发展中的作用及可能机制。方法：将人子宫内膜癌Ishiwaka细胞分为空白对照组、阴性对照组、CCAT1-siRNA组和CCAT1-siRNA+LY364947组,阴性对照组细胞转染阴性对照siRNA,CCAT1-siRNA组转染CCAT1-siRNA,CCAT1-siRNA+LY364947组细胞转染CCAT1-siRNA同时加入TGF-β/Smad抑制剂LY364947（3 μL）,空白对照组细胞不转染。采用RT-PCR法检测各组细胞中CCAT1 mRNA表达水平,CCK8法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blotting法检测各组Ishiwaka细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、锌指转录因子（snail）、凋亡抑制蛋白（Twist）、白细胞抑制因子2/3（Smad2/3）、磷酸化Smad（p-Smad2/3）和转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达水平。结果：Ishiwaka细胞中CCAT1 mRNA表达水平明显高于人子宫内膜基质T-HESC细胞（t=12.929,P<0.01）;与空白对照组和阴性对照组比较,CCAT1-siRNA组和CCAT1-siRNA+LY364947组Ishiwaka细胞中CCAT1 mRNA表达水平、细胞增殖能力、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低（P<0.05）,PCNA、vimentin、snail、Twist、p-Smad2/3和TGF-β1蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与CCAT1-siRNA组比较,CCAT1-siRNA+LY364947组Ishiwaka细胞增殖能力、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低（P<0.05）,PCNA、vimentin、snail、Twist、p-Smad2/3和TGF-β1蛋白表达水平降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组Ishiwaka细胞中各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默LncRNA CCAT1可通过抑制TGF-β/Smad信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移。     

黄连素对TGF-β1诱导的肺癌A549细胞侵袭和迁移的影响

目的观察黄连素对转化生长因子（TGF）-β1诱导的肺癌A549细胞侵袭、迁移的影响。方法以肺腺癌A549细胞为研究对象,观察1.25、2.5、5、10 ng/mL TGF-β1分别在24、48 h对A549细胞形态的影响,采用划痕实验和Transwell法检测浓度下TGF-β1作用于A549细胞48 h后迁移和侵袭能力的变化,通过SRB法评价0~160 μmol/L黄连素体外对A549细胞毒活性以筛选出黄连素的安全浓度,观察安全浓度内的黄连素对TGF-β1诱导的肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果在5 ng/mL TGF-β1刺激48 h后,A549细胞株表现出明显的上皮-间充质转化形态学变化和更强的侵袭、迁移能力。10 μmol/L浓度范围内的黄连素对A549细胞无细胞毒性。与TGF-β1组相比,2.5、5、10 μmol/L黄连素可以显著抑制A549细胞的侵袭,10 μmol/L黄连素可以显著抑制A549细胞的迁移。结论黄连素对TGF-β1诱导的肺癌A549细胞的侵袭和迁移具有抑制作用。     

RNAi干扰食管癌EC9706细胞MTA1基因表达对侵袭和迁移的影响

目的 采用RNAi抑制食管癌EC9706细胞株MTA1基因的表达,观察对食管癌细胞侵袭和迁移的影响.方法 用脂质体包裹转染沉默MTA1表达的siRNA表达载体人食管癌细胞EC9706.定量RT-PCR和免疫印迹分别检测MTAl mRNA和蛋白表达情况;划痕损伤实验和细胞体外侵袭实验分别测定迁移和侵袭的影响.结果 定量RT-PCR检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低;转染沉默MTA1的siRNA表达载体组的食管癌细胞划痕未愈合,穿透Matrigel的细胞数量明显减少,与未转染组、转染空载体组和转染无关序列siRNA载体组比较差异有显著性(P<0.05).结论 RNA干扰介导的MTA1基因表达沉寂可有效降低食管癌细胞侵袭和迁移;MTA1基因可能成为肿瘤治疗上有前途的分子靶点.     

TGFβRII-siRNA对肝星状细胞TGFβR/Smad信号通路的影响

目的：研究转化生长因子βⅡ型受体小干扰RNA（TGFβRⅡ-siRNA）对肝星状细胞TGFβR/Smad信号通路的影响。方法：构建TGFβRⅡ-siRNA的表达质粒,将TGFβRⅡ-siRNA质粒采用脂质体转染HSC-T6细胞。转染72 h后,采用半定量RT-PCR检测TGFβRⅡ、Samd2、Smad3、Smad7的mRNA的表达变化,放射免疫法测上清液Ⅲ型前胶原、IV型胶原和透明质酸含量变化。结果：与无关siRNA比较,TGFβRⅡ、Smad2和Smad3 mRNA表达差异有显著性（P〈0.01）,但Smad7表达差异无显著性,上清液Ⅲ型前胶原、IV型胶原和透明质酸含量明显减少（P〈0.01）。结论：TGFβRⅡ-siRNA下调TGFβRⅡ、Samd2、Smad3 mRNA表达,减少肝星状细胞胶原合成,但对Smad7 mRNA无明显下调。     

小干扰RNA抑制HMGB1表达对子宫内膜癌细胞侵袭与迁移的影响

目的:探讨靶向HMGB1的shRNA对HMGB1表达改变的影响及其与子宫内膜癌细胞侵袭与迁移力改变的关系.方法:运用RNA干扰技术,构建HMGB1短发夹RNA(pshRNA-1 /HMGB1,pshRNA-2/HMGB1,pshRNA-3/HMGB1),同时设置转染非特异性质粒的阴性对照组(HMGB1/p-NC)和脂质体转染组(Lipo组),用脂质体法转染人子宫内膜癌细胞(HEC-1A),利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测转染后48 h各组细胞HMGB1在mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的侵袭情况,细胞划痕实验观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的迁移情况.结果:RT-PCR显示:3组重组质粒HMGB 1-pshRNAs转染后,HMGB1 mRNA相对表达水平分别是0.192±0.006,0.055±0.002和0.123±0.086,较Lipo组(0.268±0.008)和HMGB1/p-NC组(0.270±0.004)明显减少(P＜0.05),最大抑制率分别达28.4％,79.5％和54.1％.Western印迹显示:HMGB1蛋白相对表达水平分别是0.259±0.129.0.032±0.002和0.104±0.007,较Lipo组(0.347±0.007)和HMGB1/p-NC组(0.349±0.007)明显减少(P＜0.05),最大抑制率分别达25.4％,90.8％和70.0％.实验组在接种后48 h,穿过Transwell小室膜的细胞数显著少于HMGB1/p-NC组和Lipo组(P＜0.05).划痕愈合实验亦显示实验组划痕愈合率明显低于HMGB1/p-NC组和Lipo组(P＜0.05).结论:靶向干扰HMGB1的shRNA可以抑制HMGB1的表达,转染后的子宫内膜癌细胞侵袭与迁移能力明显下降.     

miR-106b靶向调控TGF-β/Smad通路对结肠癌细胞侵袭和迁移的促进作用

目的:探讨miR-106b靶向转化生长因子β受体1(TGF-βR1)对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响,阐明miR-106b与TGF-βR1基因的靶向关系及其可能作用机制.方法:选取30例结肠癌患者癌组织和癌旁正常结肠组织、结肠癌SW-480细胞及正常结肠上皮NCM460细胞为研究对象;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR...     

小干扰RNA抑制HMGB1表达对子宫内膜癌细胞侵袭与迁移的影响

目的：探讨靶向HMGB1的shRNA对HMGB1表达改变的影响及其与子宫内膜癌细胞侵袭与迁移力改变的关系。方法：运用RNA干扰技术,构建HMGB1短发夹RNA(pshRNA-1 /HMGB1,pshRNA-2 /HMGB1,pshRNA-3/HMGB1),同时设置转染非特异性质粒的阴性对照组 (HMGB1/p-NC) 和脂质体转染组 (Lipo组) ,用脂质体法转染人子宫内膜癌细胞(HEC-1A),利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测转染后48 h各组细胞HMGB1在 mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的侵袭情况,细胞划痕实验观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的迁移情况。结果：RT-PCR显示：3组重组质粒HMGB1-pshRNAs转染后,HMGB1 mRNA相对表达水平分别是0.192±0.006,0.055±0.002和0.123±0.086,较Lipo组(0.268±0.008)和HMGB1/p-NC组(0.270±0.004)明显减少(P<0.05),最大抑制率分别达28.4%,79.5%和54.1%。Western印迹显示：HMGB1蛋白相对表达水平分别是0.259±0.129,0.032±0.002和0.104±0.007,较Lipo组(0.347±0.007)和HMGB1/p-NC组(0.349±0.007)明显减少(P<0.05),最大抑制率分别达25.4%,90.8%和70.0%。实验组在接种后48 h,穿过Transwell小室膜的细胞数显著少于HMGB1/p-NC组和Lipo组(P<0.05)。划痕愈合实验亦显示实验组划痕愈合率明显低于HMGB1/p-NC组和Lipo组(P<0.05)。结论：靶向干扰HMGB1的shRNA可以抑制HMGB1的表达,转染后的子宫内膜癌细胞侵袭与迁移能力明显
下降。     

TGF-β/Smads信号通路与滋养细胞的恶性侵袭

在人类胚胎植入过程中,滋养细胞对子宫内膜组织的有限侵袭是受严格精细调控的,其过度的侵入与绒癌的形成有关[1].研究表明,体内多种细胞因子对滋养细胞的侵入具有调节作用.如自分泌和旁分泌的TGF、TNF-α、IGF、EGF以及丝裂原等均能通过细胞内某些信号通路调控滋养细胞MMP、uPA等侵袭相关蛋白酶的表达,从而调节滋养细胞的侵袭作用[2-4].转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是目前研究最多的参与滋养细胞侵入调节的细胞因子.研究发现,胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及绒毛的间质滋养细胞、蜕膜腺体细胞和间质细胞有TGF-β1表达,说明TGF-β1可能主要由以上几种细胞合成并分泌[5,6].     

五味子乙素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制膀胱癌增殖、迁移和侵袭

目的：探讨五味子乙素（schisandra B,SchB）对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法：采用不同浓度的五味子乙素溶液（0、20、40、80μmol/L）处理膀胱癌细胞,CCK-8法检测五味子乙素对膀胱癌细胞增殖的影响;Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测五味子乙素对膀胱癌细胞迁移的影响;Transwell侵袭实验检测五味子乙素对膀胱癌细胞侵袭能力的影响;Western blot检测细胞内β-catenin、c-myc蛋白表达水平的变化。结果：五味子乙素呈时间和剂量依赖性抑制T24和UM-UC-3细胞的增殖能力（P<0.05）。细胞划痕愈合率、迁移和侵袭细胞数随着五味子乙素浓度增加而降低（P<0.05）。五味子乙素能够下调膀胱癌细胞内β-catenin和c-myc蛋白的表达（P<0.05）。结论：五味子乙素可抑制人膀胱癌T24和UM-UC-3细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活可能是其发挥抑癌作用的主要机制。     

RNA干扰Ezrin体外对胃癌AGS细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对胃癌细胞株AGS侵袭和迁移能力的影响.方法 针对人Villin2基因(Ezrin编码基因)设计发夹式RNA(shRNA).合成后克隆入载体pGCsileneer,扩增并中量提取质粒,应用脂质体Lipofectamine 2000转染进AGS细胞.采用RT-PCR和Western印迹检测Ezrin的表达.shRNA转染AGS细胞并行G418筛选,传代扩增.结果 shRNA-Ezrin对Ezrin表达抑制作用明显,稳定转染细胞Ezrin下调率达93%.侵袭实验AGSEzrin 细胞的跨膜数为(27.67±4.50),与对照组(125.50±8.33)比较差异具有统计学意义(P<0.01).结论 Ezrin在人胃癌细胞侵袭迁移过程中发挥重要作用,可能成为胃癌基因治疗的一个新靶点.     

薏苡仁提取物经PDGFB/PDGFRβ信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 观察薏苡仁提取物(ESC)经血小板源性生长因子B(PDGFB)/血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 2020年6—8月于甘肃省人民医院实验室进行实验.体外培养人口腔鳞癌CAL27细胞,设对照组(不予处理)、ESC低剂量组(10μmol/L)、ESC高剂量组(...     

Cullin1基因对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的研究Cullin1(Cul1)基因对乳腺癌细胞迁移及侵袭的影响,并探讨其具体分子作用机制.方法体外化学合成Cul1 siRNA和Control siRNA(si-Ctrl)序列,转染乳腺癌MDA-MB-231和BT-549细胞,细胞迁移和侵袭实验观察抑制Cul1的表达对2种乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;明胶酶谱实验检测Cul1对2种乳腺癌细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响;Western blot实验观察Cul1对2种乳腺癌细胞中金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)及MMPs蛋白表达的影响.结果抑制Cul1的表达可以明显降低2种乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力;Cul1的表达降低可以抑制2种乳腺癌细胞分泌MMP-2;抑制Cul1的表达可以通过上调TIMP-2的蛋白表达而抑制MMP-2的蛋白表达.结论抑制Cul1的表达可以通过上调TIMP-2的表达从而抑制MMP-2的表达,打破了TIMP-2/MMP-2的平衡,最终抑制了乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力.     

TGF-β1调控ERK/MAPK信号通路对人牙髓细胞增殖和分化能力的影响

目的 探究转化生长因子β1(TGF-β1)调控胞外信号调节激酶/分裂原激活蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路对人牙髓细胞增殖和分化能力的影响.方法 采用蛋白质印迹法(Western blot)对各组牙髓组织中的TGF-β1表达进行检测,利用不同浓度TGF-β1对牙髓细胞进行7d的处理,Western blot检测ER...     

siRNA干扰整合素β4的表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的采用RNA干扰（Small interference RNA,siRNA）技术抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞中整合素β4（integrinβ4）基因表达,观察其对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法选用MDA-MB-231乳腺癌细胞为研究对象,应用siRNA技术沉默癌细胞Integrinβ4 mRNA的表达,Real-time PCR和Western blotting方法分别检测未转染Integrinβ4 siRNA的乳腺癌细胞组（简称空白对照组）及转染Integrinβ4 siRNA的乳腺癌细胞组（简称Integrinβ4 RNA干扰组）的Integrinβ4 mRNA和蛋白表达水平;Transwell实验检测两组细胞的侵袭及迁移能力。结果与空白对照组相比,Integrinβ4 RNA干扰组Integrinβ4的mRNA及蛋白表达水平分别降低了86%（P〈0.01）和89%（P〈0.01）,细胞侵袭和迁移能力下降（P〈0.05）。结论应用siRNA干扰技术抑制Integrinβ4表达可使MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力降低,提示Integrinβ4在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。     

RNAi抑制NEK293细胞TGF-β1表达的研究

目的:探讨针对转化生长因子β1(TGF-β1)的小干扰RNA(siRNA)对大鼠肾间质细胞系(NEK293)TGF-β1的表达、细胞周期的抑制及细胞凋亡的诱导作用.方法: 利用RNA干扰(RNAi)效应设计针对TGF-β1的不同siRNA,构建表达载体质粒并转染NEK293细胞系.RT-PCR和WesternBlot分别检测TGF-β1 mRNA及蛋白的表达,细胞生长试验和流式细胞观察转染前后细胞周期及细胞凋亡的变化.另设一无意义RNA载体质粒为阴性对照.结果: siRNA转染效率70%,特异性siRNA对TGF-β1 mRNA及蛋白的表达具有抑制作用(P>0.05),实验组细胞生长受到抑制、凋亡增加(P>0.05).结论: 应用RNAi技术可明显抑制TGF-β1的表达,并高效的抑制NEK293的生长、诱导其凋亡.     

龙血竭对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β/Smads信号通路分子mRNA表达的影响

目的 观察龙血竭对肺纤维化大鼠肺组织 TGF-β信号通路分子TGFβRⅡ及Smad4 mRNA表达的影响,探讨其防治肺纤维化的作用及机制. 方法将30只SD大鼠随机分为3组:肺纤维化模型组,龙血竭治疗组和正常对照组,每组10只,雌雄各半.模型组和治疗组大鼠均以博来霉素(5 mg/kg)气管内滴入诱导肺纤维化;对照组以等量生理盐水气管内滴入.从第2 d起,治疗组大鼠给予龙血竭(180 mg/kg,溶于2 mL生理盐水中)灌胃,对照组和模型组大鼠则以等量生理盐水灌胃.所有大鼠于第29 d早晨处死.HE染色检测肺组织病理改变;原位杂交检测肺组织TGFβRⅡ及Smad4 mRNA表达;免疫组化法(S-P法)检测Ⅰ型胶原纤维. 结果模型组肺组织内炎性细胞计数为22243.60±5011.55,治疗组为12913.78±5640.12,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).经龙血竭治疗后大鼠肺内TGFβRⅡ mRNA表达较模型组降低(P＜0.01).治疗组Smad4 mRNA表达与模型组比较差异无统计学意义.治疗组和模型组比较,Ⅰ型胶原纤维表达减弱(P＜0.01). 结论龙血竭能有效地减轻肺纤维化大鼠的纤维化程度,其机制可能与抑制肺内TGFβRⅡ mRNA的表达,从而阻止Ⅰ型胶原过度沉积有关.     

特异性ILK-siRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响

目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测EJ细胞中ILK mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILK mRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与3个对照组比较,转染pGenSil-1 siRNA1与pGensil-1 siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP-2及MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。     

大黄素调节Wnt1/β-catenin信号通路对垂体腺瘤HP75细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨大黄素调节Wnt1/β-catenin信号通路对垂体腺瘤HP75细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 以CCK-8法测定0、10、20、40、80、120μmol/L浓度大黄素处理24 h后的人垂体腺瘤细胞HP75的存活率,筛选出最佳药物作用浓度。体外培养HP75细胞并随机分为对照组、大黄素组、大黄素+氯化锂(Wnt1/β-catenin信号激活剂)组,以80μmol/L的大黄素和20 mmol/L的氯化锂分组处理后以免疫印记法检测各组细胞Wnt1/β-catenin通路相关蛋白表达;以Edu和TUNEL染色法分别检测各组细胞增殖、凋亡;以细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞迁移、侵袭;以免疫印记法检测各组HP75细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、MMP-9、Vimentin)表达。构建垂体腺瘤裸鼠移植瘤模型并随机分为对照组、大黄素组、大黄素+氯化锂组,以10 mg/kg的大黄素和1 mg/kg的氯化锂分组处理后检测各组肿瘤体积。结果 与对照组比较,大黄素组细胞凋亡率、Bax与E-cadherin...