太白楤木总皂苷纯化工艺研究

目的研究大孔吸附树脂吸附提取太白楤木总皂苷的工艺条件及参数。方法以总皂苷为考察指标,研究树脂吸附容量、上样浓度、洗脱溶媒及其用量等工艺条件。结果通过HPD300型大孔树脂吸附后,先用4BV的去离子水水洗除杂,然后用2BV的70％的乙醇以1BV／h的速度洗脱,总皂苷纯度可达60．08％。结论此法能较好地分离纯化太白楤木总皂苷,是简便、可行的纯化方法。     

太白楤木总皂苷对小鼠急性酒精性肝损伤的干预作用

目的 探讨太白楤木总皂苷对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用及其机制。方法 将健康昆明小鼠60只随机分为空白组（生理盐水）、模型组（生理盐水）、阳性对照组（联苯双酯,125mg/kg）、太白楤木总皂苷高、中、低剂量组（400、200、100mg/kg）,每组10只,雌雄分开饲养,灌胃给药。除空白组外,其余各组每日上午给予56°北京二锅头（10mg/kg）灌胃,下午给予干预治疗,连续7天。末次给药8h后,检测小鼠肝脏指数,血清及肝组织中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）含量,肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量,HE染色观察肝组织病理改变。结果 与模型组比较,太白楤木总皂苷不同浓度治疗组均能够降低酒精性肝损伤小鼠血清及肝组织中ALT、AST水平（P<0.01）,升高肝组织SOD活性（P<0.01）,降低MDA含量（P<0.05）;肝组织HE染色显示,太白楤木总皂苷可明显减轻小鼠肝损伤的病变程度。结论 太白楤木总皂苷对急性酒精性肝损伤小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与对抗自由基生成,抑制氧化应激来实现抑制抗氧化应激有关。     

太白楤木总皂苷体外对乙肝病毒HBsAg、HBeAg的影响

目的 观察太白楤木总皂苷体外对乙肝病毒HBsAg和HBeAg的影响.方法 以HepG 2215细胞为靶细胞,分别用不同浓度的太白楤木总皂苷和拉米夫定培养液培养,采用ELISA法测定细胞培养上清HBsAg、HBeAg 含量,评价太白楤木总皂苷对体外HBV的抑制作用.结果 太白楤木总皂苷对体外培养HepG 2215细胞分泌的HBsAg、HBeAg的50％抑制浓度(IC50)分别为0.1、0.09 g/L,治疗指数(therapeutic index TI)分别为6.12、7.51.0.25g/L拉米夫定组和0.4 g/L太白楤木组在第3、6天对体外培养HepG 2215细胞分泌的HBsAg、HBeAg抑制作用差异无统计学意义(P＞0.05).结论 太白楤木总皂苷具有一定的体外抗HBV作用.     

人参总皂苷诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：研究人参总皂苷诱导白血病细胞凋亡及其机制，为进一步开发人参总皂苷提供实验依据。方法：采用细胞体外培养，图像分析技术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法，研究人参总皂苷诱导K562细胞凋亡。结果：人参总皂苷对K562细胞有增殖抑制作用，并可诱导K562细胞凋亡明显增加，同时K562细胞癌基因产物C－MYC，BCL－2表达明显降低。结论：人参总皂苷能诱导K562细胞凋亡，其机制可能与调控癌基因产物的表达有关。     

分光光度法测定楤芝片中楤木总皂苷的含量

楤芝片是由灵芝、楤木、五加皮等六味中药材制成的中成药,功能补气安神,用于气虚所致的失眠、心悸、气短、乏力等症.原药品标准未对木楤芝片中主药木楤木的有效成分进行含量控制.为更好控制该品种的质量,笔者采用分光光度法测定楤芝片中楤木总皂苷的含量,建立了该品种质量标准中含量控制的方法.     

三七总皂苷抑制K562细胞mTOR信号通路活性的实验研究

目的 探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对体外培养K562细胞mTOR信号通路相关分子表达及活性的影响.方法 不同浓度的PNS(50～800 μ,g/mL)干预体外培养K562细胞24 ～ 72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO/EB双荧光染色法观察细胞死亡及凋亡状况;RT-PCR检测mTOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达变化;Western blot检测mTOR、p70S6K、4E-BP1及p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白表达量的变化.结果 与对照组相比,浓度为100～ 800 μg/mL的PNS能够抑制K562细胞增殖(P＜0.05),促进K562细胞凋亡及死亡(P＜0.05),PNS对K562细胞72 h的IC50为(229.07±2.36) μg/mL;100、200、400 μg/mL PNS作用于K562细胞72 h后mTOR蛋白表达量及mRNA表达量降低(P＜0.05),且磷酸化蛋白p-mTOR (Ser2448)、p-p70S6K (Thr229/389)及p-4E-BP1(Thr37/46)表达水平也随着药物浓度的增加而降低(P＜0.05).结论 PNS能够抑制K562细胞mTOR信号通路的活性,这可能是PNS抑制K562细胞增殖的机制之一.     

太白楤木药材质量标准研究

目的 建立太白楤木药材中齐墩果酸的薄层色谱鉴别与含量测定方法.方法 采用TLC法对太白楤木进行薄层鉴别;采用HPLC对太白楤木中齐墩果酸进行含量测定.结果 该鉴别方法专属性强、重复性好,可作为该药材的薄层鉴别方法;含量测定的色谱条件为:色谱柱Kromosil ODS C18(5μm,4.6mm×250mm),甲醇-水(90: 10)为流动相,检测波长210nm,流速1.0ml/min,柱温为室温.齐墩果酸在44.8～224.0μg的范围内线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为97.69%,RSD为1 23%.结论 所建方法简便快捷,结果可靠,能够为控制太白楤木药材的质量提供参考.     

太白楤木抗肝损伤作用药效物质基础的初步研究

目的初步确定太白楤木抗肝损伤作用的药效物质基础。方法采用经典的系统溶剂法(极性由小到大:石油醚-氯仿-乙酸乙酯-正丁醇)依次对太白楤木提取液进行萃取,将各提取液分别灌胃给予四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤模型小鼠,检测血清及肝组织中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平,比较各部位的抗肝损伤作用;将筛选出的活性部位用大孔吸附树脂进行分离纯化,不同浓度乙醇进行梯度洗脱,洗脱液分别灌胃给予肝损伤模型小鼠,检测血清及肝组织中ALT、AST、SOD的活性和MDA、GSH-Px的水平,比较各洗脱部位的抗肝损伤作用。结果与模型对照组比较,正丁醇部位可明显降低CCl4引起的ALT、AST、MDA升高,增加肝组织中SOD的活性和GSH-Px的水平;70%乙醇洗脱的正丁醇提取物可明显降低CCl4引起的ALT、AST、MDA升高,增加肝组织中SOD的活性和GSH-Px的水平,且洗脱液剂量与保肝作用有明显的正相关性。结论太白楤木保肝作用的药效活性物质大多存在于70%乙醇洗脱的正丁醇部位,其抗肝损伤作用的活性成分可能与该部位主要成分皂苷类有关。     

三七总皂苷联合阿糖胞苷对K562细胞的影响

[目的]考察三七总皂苷联合应用阿糖胞苷对白血病细胞K562细胞活力、增殖抑制、诱导凋亡的协同作用.[方法]处于对救生长期的白血病K562细胞,给予三七总皂苷、阿糖胞苷以及两药的联合,采用MTT试验、集落形成实验、Annexin V-PI双染流式细胞检测等实验手段进行分析检测.[结果]单用三七总皂苷对K562白血病细胞有一定的增殖抑制作用,对抑制集落形成和诱导凋亡作用不明显;相同剂量的三七总皂苷联用阿糖胞苷后,对K562细胞的增殖抑制、集落形成和凋亡有明显的增强.[结论]三七总皂苷联用阿糖胞苷对白血病细胞K562有明显的抗肿瘤作用,提示三七总皂苷可提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,为临床用三七总皂苷抗白血病的辅助治疗提供依据.     

白花蛇舌草提取物体外抑制K562细胞增殖实验研究

目的：观察白花蛇舌草提取物（HDE）体外对人白血病细胞株K562增殖的影响,探讨HDE 用于治疗白血病的作用机制。方法：以白血病K562细胞株为靶细胞,观察不同浓度的HDE对 K562细胞增殖的影响,及胞内线粒体跨膜电位（ΔΨm）的水平;检测低浓度HDE处理前后胞内Sur? vivin、Bcl-2基因表达。结果：HDE（6.4mL/L）能明显抑制K562细胞增殖,且与浓度呈正相关（P< 0.05或P<0.01）。通过流式细胞术对碳氰化合物类亲脂性荧光染料（JC-1）检测发现,HDE能使靶 细胞内ΔΨm降低,且与HDE处理浓度呈负相关;K562细胞经低浓度HDE（3.2mL/L）处理3周后, Survivin、Bcl-2基因表达均低于未经处理细胞的2.7倍和1.6倍。结论：HDE可能通过降低线粒体 跨膜电位,抑制抗凋亡基因的表达,抑制K562白血病细胞增殖。     

红芪总黄酮对慢性粒细胞系K562细胞周期及凋亡影响研究

目的观察中药红芪总黄酮对K562细胞周期及凋亡的影响。方法以不同剂量的药物处理K562细胞，MTT法检测红芪总黄酮对细胞的抑制作用，流式细胞仪检测其周期及凋亡的改变。结果与对照组比较，不同浓度红芪总黄酮作用K562细胞24h、48h和72h，K562细胞增殖表现为明显抑制；有一定的时间剂量依赖关系。IC50分别为263．757μg,／ml、120．502μg／ml、117．075μg／ml。药物作用48小时，各药物组与对照组相比吸光度值（A值）均明显降低，有统计学意义（P〈0．01），但无明显凋亡现象，表现为K562细胞阻滞于G0／G1、G2／M期时相。结论红芪总黄酮对K562细胞生长有抑制作用，但其抑制机制不是通过诱导细胞凋亡，而是通过诱导K562细胞的G0／G1、G2／M期阻滞。     

红白血病K562细胞基因表达谱芯片制作研究

以人红白血病K562细胞为材料，应用限制性显示PCR（RD-PCR）技术分离到K562细胞在诱导分化药物羟基脲诱导分化前后不同时期的cDNA片段3256条，并用DNA芯片仪制作了K562细胞基因表达谱芯片。对芯片制作中不同点样液及处理条件对玻片上DNA固定效率的影响，样品DNA最优浓度等进行了初步研究，结果认为用DMSO作点样液、样品DNA浓度为0.3μg/μL、点样后经紫外交联（150mJ）、80℃干烤2h,DNA探针在玻片上的固定效率可达95%。用此法制作的K562基因表达谱芯片得到较好的杂交效果。     

肝素对人髓性白血病细胞系K562生长的影响

目的：探讨肝素对髓性白血病细胞系K562增殖及凋亡的影响。方法：采用细胞直接计数法和MTT法检测肝素对K562细胞增殖的影响，应用流式细胞术和Hoechst 33342荧光染色法检测肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡的影响。结果：5—200U／ml的肝素既不促进也不抑制K562细胞的增殖，且能抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡。抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡作用，并与肝素呈量效关系。结论：肝素对K562细胞增殖无影响，但具有抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡的作用。     

黄芩素对人白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察黄芩素对人白血病细胞K562生长的抑制作用及对细胞凋亡率的影响。方法:体外培养K562细胞,将对数生长期K562细胞数调整到1×105/m l,将黄芩素加入各实验孔,将黄芩素的终浓度调整为25.0,50.0,100.0,200.0,400.0μg/m l,每个浓度设4个复孔,分别培养细胞48 h和72 h,采用MTT比色法观察黄芩素对K562细胞的生长抑制作用。将对数生长期K562细胞数调整为1×107/m l,加入黄芩素50.0,100.0,200.0μg/m l作用48 h后,收集细胞用流式细胞仪进行检测,并计算凋亡细胞百分数。结果:黄芩素对人白血病K562细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性。黄芩素50.0,100.0,200.0μg/m l诱导K562细胞凋亡,有明显的凋亡峰(AP峰)出现。结论:黄芩素对人白血病细胞K562的增殖有抑制作用,其机制可能与促进K562细胞的凋亡有关。     

氧化苦参碱对人白血病K562细胞株凋亡作用的研究

目的探讨氧化苦参碱（Oxymatrine,Oxy）对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞凋亡的影响。方法用Oxy处理K562细胞,MTT法检测药物对细胞的抑制作用;荧光显微镜及透射电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例,琼脂糖凝胶电泳技术观察DNA降解。结果 Oxy能够抑制K562细胞生长,对K562细胞的IC50约为2.33mg.mL-1。Oxy作用后的K562细胞呈现凋亡形态学改变,流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为7.03%～54.99%,琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA梯状带。结论 Oxy能够诱导K562细胞发生凋亡。     

青蒿虎酯对人急性髓系白血病原代细胞及其细胞株K562增殖和凋亡的影响研究

背景　目前急性髓系白血病（AML）长期治疗仍面临着高复发率、治疗相关死亡风险及化疗相关毒副作用等多重挑战。而青蒿素作为我国学者首次从菊科植物黄花蒿中提取出的化合物（青蒿琥酯为其类衍生物）,其近年来在白血病、肿瘤疾病治疗中的作用逐渐引起广泛关注。目的　探究青蒿虎酯对人AML原代细胞、细胞株K562增殖和凋亡的影响。方法　采用密度梯度法分离2016年10月-2018年10月于河南省儿童医院血液科就诊的符合纳入标准的24例初治或复发AML患儿的骨髓液中的AML原代细胞。并购买AML细胞株K562进行研究。将AML原代细胞及细胞株K562均分为对照组和实验组（依次为对照组1和实验组1,对照组2和实验组2）,其中对照组1及对照组2不予青蒿琥酯干预,实验组1和实验组2分别添加终浓度为12.5、25.0、50.0 μg/ml的青蒿琥酯液（分别记为终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1及终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2）。采用细胞计数法观察AML原代细胞、细胞株K562存活情况;采用MTT法检测其生长抑制情况;采用流式细胞术检测其凋亡情况。结果　终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h、72 h AML原代细胞存活率低于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预72 h AML原代细胞存活率低于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h、72 h AML细胞株K562存活率低于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预72 h AML细胞株K562存活率低于终浓度12.5μg/ml实验亚组2（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预24 h、48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预24 h、48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组2（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h AML原代细胞凋亡率高于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h AML原代细胞凋亡率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h AML原代细胞凋亡率高于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h AML原代细胞凋亡率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组2（P<0.05）。结论　青蒿琥酯能够有效抑制AML原代细胞及细胞株K562的增殖并诱导其凋亡,可为青蒿素治疗AML提供实验依据。     

苦参碱对K562细胞培养液中PGE_2含量的影响

目的 :研究苦参碱诱导 K5 62细胞分化的胞外信号。方法 :运用酶联免疫法 ,动态检测苦参碱作用于 K5 62细胞后 ,培养液中 PGE2 含量的变化。结果 :培养液中 PGE2 含量在苦参碱作用于K5 62细胞 2天后有增高 ,并与苦参碱浓度有关。结论 :在苦参碱诱导 K5 62细胞分化的过程中 ,PGE2 含量的增高可能涉及到 PLA2 的激活 ,并且 PGE2 可能作为胞外信号影响 K5 62细胞的增殖与分化。     

核糖体蛋白L6在K562/A02和K562细胞株中的表达差异

目的探讨核糖体蛋白L6（ribosomal proteinL6，RPL6）在急性髓细胞性白血病耐药细胞系K562／A02和敏感细胞系K562中的差异表达。方法分别从K562／A02和K562细胞中提取总RNA，以内参对照RT—PCR检测fuPL6基因表达。结果RPL6在飚62／A02细胞中的表达较K562高（P〈0．001）。结论在耐药细胞系K562／A02高表达RPL6可能与白血病耐药有关。     

小牛血去蛋白提取物取代小牛血清培养K562细胞的研究

目的 评价小牛血去蛋白提取物（DECB）取代小牛血清培养K562的生长情况,从而分析DECB对白血病细胞生长方面的意义及其可能的作用机制.方法应用形态学、MTT分析法、流式细胞术对在低血清以及无血清条件下的白血病细胞进行检测和观察.结果人白血病K562细胞在DECB取代小牛血清的培养基中,细胞发生一系列形态学改变,DECB在一定范围内（0.2%～1%）对K562的增殖率有剂量和时间的依赖关系.结论DECB在一定范围内能够代替小牛血清在细胞培养过程中起作用,有利于细胞的生长与增殖.