早期生长反应因子-1诱骗寡脱氧核苷酸对大鼠球囊损伤后细胞黏附分子-1的影响

目的 观察局部转染早期生长反应因子-1(early growth response factor-1,Egr-1)的诱骗性寡脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotides,decoy ODNs)对球囊损伤颈总动脉后内膜增生及细胞内细胞黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响,并初步探讨Egr-1 decoy ODNs抑制球囊损伤后内膜增生的机制.方法 96只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯损伤组、杂码寡脱氧核苷酸(scrambled decoy ODNs,SCR)组和Egr-1 decoy ODNs组,每组24只.术后3、7、14及21d处死动物,每组6只.应用HE染色、Real time RT-PCR和Western-blotting方法观察大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生情况、Egr-1和ICAM-1的表达及Egr-1 decoy ODNs对它们的影响.结果 ①内皮损伤后3d内膜增厚不明显,7d内膜开始增厚,14d和21d时内膜明显增厚.②Egr-1mRNA和蛋白水平于术后3d开始升高,21d时达到顶峰,而I CAM-1的mRNA和蛋白水平均于术后3d开始升高,7d达高峰,14d时下降.③转染Egr-1 decoyODNs治疗后,在各个时间点内膜增厚程度减轻,Egr-1和ICAM-1表达减少,与假手术组比较差异有统计学意义P ＜0.01).结论 Egr-1 decoy ODNs可能是通过特异性抑制Egr-1的表达,进而抑制ICAM-1的表达,从而减轻血管损伤后内膜增生.     

Egr-1诱骗性寡脱氧核苷酸对大鼠动脉损伤后PCNA和CDK4表达的影响

目的:观察局部转染早期生长反应因子-1(Egr-1)的诱骗性寡脱氧核苷酸(Decoy ODN)对球囊损伤颈总动脉后内膜增生及增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)表达的影响,并初步探讨Egr-1decoy ODN抑制球囊损伤后内膜增生的机制。方法:应用HE染色,Realtime RT-PCR和Western-blot方法观察大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生情况、Egr-1、CDK4和PCNA的表达及Egr-1decoy ODN对它们的影响。结果:Egr-1decoy ODN组内膜增生明显减轻,Egr-1、PC-NA和CDK4的表达减少,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:Egr-1decoy ODN可能是通过特异性抑制Egr-1的表达,进而抑制PCNA和CDK4的表达,而减轻血管损伤后内膜增生。     

Egr-1的诱骗性脱氧核苷酸对大鼠颈总动脉损伤后内膜增生的影响

目的：针对大鼠Egr-1的诱骗性寡脱氧核苷酸（decoy ODN），作用于损伤后的动脉内膜，观察其对血管损伤后新生内膜增生的影响。方法：行HE染色观察血管内膜、中膜的厚度改变，并分组进行计算机图象分析。计算出内膜／中膜（I/M）的面积比。结果：治疗组与同一时间点对照治疗组和对照组相比，内膜增生受到抑制，两者之间差异有显著性（P〈0．01）。结论：decoy ODN通过诱骗转录因子与它结合，下调转录因子所调控的基因表达，减轻了大鼠动脉损伤后新生内膜的增生程度。     

Egr-1的诱骗性脱氧核苷酸对大鼠颈总动脉损伤后内膜增生的影响

目的:针对大鼠Egr-1的诱骗性寡脱氧核苷酸(decoy ODN),作用于损伤后的动脉内膜,观察其对血管损伤后新生内膜增生的影响。方法:行HE染色观察血管内膜、中膜的厚度改变,并分组进行计算机图象分析,计算出内膜/中膜(I/M)的面积比。结果:治疗组与同一时间点对照治疗组和对照组相比,内膜增生受到抑制,两者之间差异有显著性(P<0.01)。结论:decoy ODN通过诱骗转录因子与它结合,下调转录因子所调控的基因表达,减轻了大鼠动脉损伤后新生内膜的增生程度。     

针对Egr-1mRNA的10—23脱氧核酶抑制大鼠动脉损伤后内膜增生的研究书

目的 探讨针对Egr-1mRNA的10—23脱氧核酶对大鼠动脉损伤后内膜增生的影响和可能的机制。方法 制备大鼠颈动脉球囊损伤模型，96只大鼠随机分为4组。A组为假手术组；B组为1mmol／L MgCl：对照组；C组为FuGENE6对照组；D组为FuGENE6介导的ED5转染组；每组再按术后3，7，14和21d。分为4个亚组，每组6只。术后3、7、14、21d各处死每组动物6只，分别应用RT-PCR和Western—blot技术检测血管组织Egr-1mRNA水平及蛋白合成情况；HE染色观察损伤血管内膜的增生情况；免疫组织化学染色观察PCNA的表达。结果 与B组和C组比较，D组各时间点血管内腱、中膜的犀度和管腔的狭窄率均显著减小（P〈0.01）；正常血管组织有微量Egr-1表达，术后Egr-1mR．NA和蛋白水平逐渐增高，而D组血管组织Egr-1mRNA和蛋白水平较B组和C组均降低（P〈0．01）；免疫组织化学染色显示，术后3dPCNA表达开始增加，7d达高峰。14d开始下降，D组血管壁PCNA阳性细胞百分比明显低于B组和C组（P〈0．01）。B组和C组之间相比较，以上各指标差异均无显著性（P〉0．05）。结论 ED5可能通过抑制Egr-1和PCNA的表达，而减轻血管损伤后内膜增生。     

HO-1减轻大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生

目的 探讨血红素加氧酶-1（HO-1）能否减轻大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生。方法 20只雄性SD大鼠随机分为正常并注射生理盐水组、球囊损伤并注射生理盐水组,球囊损伤并注射氯化血红素组、球囊损伤并注射锌原卟啉组。建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,14天后取各组大鼠的颈动脉。弹力蛋白染色并计算各组大鼠颈动脉的内膜面积与中膜面积的比值（i/m）。Western blot法检测各组大鼠颈动脉内HO-1、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α的表达情况。结果 球囊损伤能够明显诱导大鼠颈动脉i/m值的增加（P<0.01）。球囊损伤并注射氯化血红素组的颈动脉i/m值明显低于球囊损伤并注射生理盐水组（P<0.01）。球囊损伤并注射锌原卟啉组的颈动脉i/m值明显高于球囊损伤并注射生理盐水组（P<0.01）。球囊损伤并注射生理盐水组颈动脉的NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α的表达明显高于正常并注射生理盐水组。球囊损伤并注射氯化血红素组NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α的表达明显低于球囊损伤并注射生理盐水组（P<0.05）。球囊损伤并注射锌原卟啉组NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α的表达明显高于球囊损伤并注射生理盐水组（P<0.01）。结论 球囊损伤能够诱导大鼠颈动脉的炎性反应及内膜增生,HO-1能够减轻大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生。     

卡维地洛对大鼠颈动脉损伤后MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的：观察卡维地洛（CAR）对大鼠颈动脉损伤血管组织MMP-9、TIMP-1表达的影响,探讨卡维地洛防治再狭窄的机制。方法：雄性Wistar大鼠90只,随机分为假手术组、损伤组和CAR组,后两组行颈动脉球囊损伤术。三组均于术后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d处死大鼠。光镜下观察血管损伤后内膜增生情况,用免疫组化和RT-PCR法检测MMP-9、TIMP-1在各组术后不同时间点的表达情况。结果：与损伤组比较,术后14 d CAR组内膜面积、内膜与中膜面积比值显著减少,管腔面积显著扩大（P〈0.05）;与损伤组比较,CAR组术后3-14d MMP-9表达显著减少（P〈0.05）,而TIMP-1表达无显著变化。结论：卡维地洛有效抑制大鼠颈动脉损伤后MMP-9表达,抑制了VSMCs迁移、增殖,改善了细胞外基质的合成与降解平衡,从而减轻再狭窄。     

葛根素对大鼠受损颈总动脉 MMP-2和Ⅳ型胶原 mRNA 表达的影响

目的：研究葛根素对大鼠颈动脉球囊损伤后新生血管内膜内基质金属蛋白酶-2（ MMP-2）和Ⅳ型胶原（ COL-Ⅳ） mRNA表达的影响,进一步探讨其对血管重塑的干预作用。方法：将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组和葛根素低、高剂量组,每组各12只。模型组和葛根素组均建立颈动脉球囊损伤模型;葛根素组术前7 d开始给予葛根素灌胃至实验结束,以生理盐水给模型组灌胃。各组分别于术后第14和28天处死6只大鼠,取动脉损伤段,HE染色观察血管形态学变化,采用RT-PCR法检测动脉内MMP-2和COL-Ⅳ mRNA的表达。结果：术后14和28 d,模型组大鼠颈总动脉血管内膜比正常组增厚,用葛根素干预后新生内膜增生有所减轻;与正常组相比,模型组MMP-2和COL-ⅣmRNA表达增高（P＜0．05）;与模型组相比,葛根素组MMP-2 mRNA表达下降,COL-Ⅳ mRNA表达升高（ P＜0．05）。结论：葛根素在大鼠颈动脉内皮细胞损伤后可能是通过下调MMP-2和增强COL-Ⅳ mRNA的表达,抑制平滑肌细胞从中膜到内膜的迁移,从而减轻新生内膜的增生。     

缬沙坦对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生和TLR4表达的影响

目的:观察缬沙坦对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生及Toll样受体4(toll like receptor4,TLR4)表达的影响。方法:以1.5F球囊导管建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、球囊损伤组(n=12)、缬沙坦组(n=12)。造模后第1天开始给予缬沙坦10mg.kg-1.d-1灌胃,假手术组及球囊损伤组灌胃等量蒸馏水,14d后取损伤血管段,组织形态学观察并测定内膜增生情况,实时定量PCR检测血管TLR4mRNA的表达。结果:术后14d,球囊损伤组和缬沙坦组可见明显内膜增生,内膜面积及内膜和中膜面积比均显著大于假手术组,而缬沙坦组上述指标均低于球囊损伤组(P<0.05);球囊损伤组和缬沙坦组TLR4mRNA的表达较假手术组升高,与球囊损伤组比较,缬沙坦可降低球囊损伤诱导的TLR4高表达。结论:缬沙坦可抑制大鼠颈动脉球囊损伤引起的血管内膜增生,其作用可能是通过下调损伤血管TLR4的过表达而实现。     

针对Egr-1mRNA的10-23脱氧核酶抑制大鼠动脉损伤后内膜增生的研究

目的探讨针对Egr-1mRNA的10-23脱氧核酶对大鼠动脉损伤后内膜增生的影响和可能的机制。方法制备大鼠颈动脉球囊损伤模型,96只大鼠随机分为4组,A组为假手术组;B组为1mmol/LMgCl2对照组;C组为FuGENE6对照组;D组为FuGENE6介导的ED5转染组;每组再按术后3,7,14和21d,分为4个亚组,每组6只。术后3、7、14、21d各处死每组动物6只,分别应用RT-PCR和Western-blot技术检测血管组织Egr-1mRNA水平及蛋白合成情况;HE染色观察损伤血管内膜的增生情况;免疫组织化学染色观察PCNA的表达。结果与B组和C组比较,D组各时间点血管内膜、中膜的厚度和管腔的狭窄率均显著减小(P<0.01);正常血管组织有微量Egr-1表达,术后Egr-1mRNA和蛋白水平逐渐增高,而D组血管组织E-gr-1mRNA和蛋白水平较B组和C组均降低(P<0.01);免疫组织化学染色显示,术后3dPCNA表达开始增加,7d达高峰,14d开始下降,D组血管壁PCNA阳性细胞百分比明显低于B组和C组(P<0.01)。B组和C组之间相比较,以上各指标差异均无显著性(P>0.05)。结论ED5可能通过抑制Egr-1和PCNA的表达,而减轻血管损伤后内膜增生。     

Egr-1诱骗寡核苷酸对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增殖及内皮功能的影响

目的探讨早期生长反应因子1(Egr-1)诱骗寡核苷酸(诱骗基因)对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖及内皮功能的影响。方法建立Wistar雄性大鼠颈总动脉球囊损伤模型。随机分4组,每组4个时相点(3,7,14,21d),每个时相点3只大鼠。取大鼠颈总动脉行病理形态学检查和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色,同时测定血清一氧化氮(NO)水平。结果对照组1(对照基因组)和对照组2(转染试剂组)分别与诱骗基因组相比,球囊损伤后7d可见内膜增生,14d、21d增生更明显(P<0.01)。正常动脉未见PCNA表达,动脉损伤后7d,新生内膜及中膜中PCNA阳性表达达高峰,14d后逐渐下降。诱骗基因治疗后,与对照组1和对照组2相比,动脉PCNA表达减少(P<0.01)。诱骗基因组NO含量较两对照组增高,第14d最明显(P<0.01)。结论Egr-1诱骗寡核苷酸可抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖并能升高血中NO水平。     

二苯乙烯苷对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的作用

目的 观察二苯乙烯苷对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生和细胞外信号调节激酶（ERK）表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、手术组和二苯乙烯苷组（TSG组）.手术组及TSG组均用球囊导管扩张法损伤左侧颈总动脉,TSG组给予二苯乙烯苷灌胃治疗.术后第7天、14天和21天,取损伤血管行苏木精-伊红染色、免疫组化染色及光镜观察,利用计算机图像分析仪分别测量血管内膜和中膜横断面的面积,计算内膜/中膜面积比（I/M）,并用Western Blot检测血管组织中细胞外信号调节激酶（pERK1/2）蛋白表达.结果 与假手术组比较,球囊导管扩张法损伤的左侧颈总动脉内膜/中膜面积比显著增加,受损血管的ERK1/2蛋白的磷酸化加强,二苯乙烯苷能够减少内膜/中膜面积比,抑制pERK1/2的蛋白表达（P〈0.05）.结论二苯乙烯苷抑制内膜增生、延缓损伤血管狭窄的作用可能与减少血管ERK表达有关.     

氯沙坦对血管内皮损伤后血小板活化及AngⅡAT1受体表达的影响吴逸南

目的：研究球囊损伤血管后内膜增生的过程、血小板活化水平、血管紧张素ⅡAT1受体mRNA的变化及氯沙坦对其的影响。方法：随机将72只雄性Wistar大鼠分为对照组、手术组和氯沙坦治疗组，每组24只。分别在术后3、7、14和28d，采用组织学检查、放射免疫法和RT PCR技术检测内膜增生的情况、血小板表面GMP 140的数量、AT1受体mRNA的水平及氯沙坦(30?mg•kg-1•d-1)灌胃对其的影响。结果：① AT1受体mRNA于术后3?d明显增高(P<0.05)，并持续至术后14?d（P<0.01）；② GMP 140于术后3?d明显升高，术后7?d开始下降（P<0.01）；③ 内皮损伤术后3?d已有增殖的血管平滑肌细胞(VSMC)移行至内膜层，7?d内膜开始增生，14?d　VSMC的增殖及内膜增生更为明显，28?d　VSMC的增殖明显减弱，细胞外基质增加，内膜继续增生；④ 应用氯沙坦后AT1受体mRNA表达增加（P<0.05, P<0.01），但血小板表面GMP 140的数量和VSMC的移行、增殖减弱，内膜增生程度减轻（P<0.05, P<0.01）。结论：血管内皮损伤后内膜增生的过程中血小板活化、AT1受体mRNA表达增加，氯沙坦能抑制血小板的活化及VSMC的移行、增殖，减轻内膜增生的程度，上调AT1受体mRNA的表达。     

反义c-myc寡脱氧核苷酸对大鼠腹主动脉损伤后内膜增生的影响

目的观察大鼠腹主动脉损伤后内膜增生的影响,为采用反义ｃｍｙｃ战略防治再狭窄的早期临床试验奠定基础。方法将反义ｃｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）通过ｐｌｕｒｏｎｉｃｇｅｌ缓释系统和Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染导入系统,将其作用于大鼠腹主动脉损伤后的血管外膜,饲养三周后,处死动物,对所取的血管节段进行组织切片和弹力纤维染色,在显微镜下进行形态观察和采用图像分析系统进行图像分析,计算出内膜／中膜（Ｉ／Ｍ）面积之比和Ｉ／Ｍ厚度之比,并进行统计学分析。结果通过形态观察和Ｉ／Ｍ面积和Ｉ／Ｍ厚度之比,发现反义ｃｍｙｃＯＤＮ明显抑制了内膜增生,而且随着反义ｃｍｙｃＯＤＮ剂量的增加,其对内膜增生的抑制作用更加明显,而正义ｃｍｙｃＯＤＮ和错配ｃｍｙｃＯＤＮ与对照组相比,对内膜增生无影响。结论反义ｃｍｙｃＯＤＮ以剂量依赖性和序列特异性方式抑制了新生内膜的形成。为采用反义ｃｍｙｃ途径防治再狭窄的早期临床试验奠定了基础     

人白细胞相关抗原B27及细菌多肽在脊柱关节病发病中的作用

目的了解细菌多肽应具备什么基本条件才能被人白细胞相关抗原（ＨＬＡ）Ｂ２７递呈而导致脊柱关节病。方法以来自衣原体热休克蛋白６０、能与Ｂ２７分子结合的９肽作为原型，用人工方法将９肽的每一个氨基酸残基均以另外１９种氨基酸替换，将合成的１８０种９肽分别与Ｂ２７Ｔ２细胞孵育，观察其与抗Ｂ２７单克隆抗体Ｂ２７Ｍ２的反应性。结果与Ｂ２７分子结合的９肽其第２位氨基酸残基应是精氨酸，以其它１９种氨基酸替换均使Ｂ２７Ｍ２的反应性明显降低；第６，８，９位氨基酸残基的选择性亦较高，仅有６～８种氨基酸能诱导与Ｂ２７Ｍ２的反应性；第３，５，７位氨基酸残基没有什么选择性，几乎任何一种氨基酸残基对Ｂ２７Ｍ２反应性的影响均不大。结论第２，９位氨基酸残基是９肽与Ｂ２７紧密结合所必需的，而第６，８位氨基酸可能与抗Ｂ２７单克隆抗体的识别有密切关系     

Evidence of apoptotic smooth muscle cells in proliferative intima of injured arteries

Objective To investigate the occurrence and extent of apoptosis in the course of restenosis. Methods The experimental models of vessel narrowness and intima thickness were established in minipigs’ iliac arteries by balloon injury and specimens were retrieved on the 1st, 3rd, 6th,12th and 30th days for dynamic observation. Apoptotic smooth muscle cells (SMCs) were detected by terminal deoxynucleotidyl transferase- mediated dUTP nick- end labeling (TUNEL). Results Apoptotic SMCs occurred only in the thickened intima 12 days after injury accompanied with the proliferative SMCs, the percentage of apoptosis was 1. 94%±0. 42% on the 12th day and 1. 36%±0. 31% on the 30th day respectively. The low frequency of apoptosis compared with the proliferative SMCs was a feature in the restenotic pathology. Conclusions Apoptosis participates in the pathogenetic process of intimal thickening and its level was low compared with proliferation. The findings suggest that attempts to modulate apoptosis after vessel injury constitute a theoretical approach to the prevention of restenosis.     

大蒜素局部应用对动脉损伤后新生内膜及NF—κB、TNF—α表达的影响

目的观察大蒜素局部应用在大鼠颈总动脉球囊损伤模型中对新生内膜及NF-κB、TNF-α表达水平的影响。方法30只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组,左侧颈总动脉不行球囊损伤;对照组,大鼠左侧颈总动脉球囊损伤后立即经带孔球囊导管给予生理盐水;药物组,大鼠左侧颈总动脉球囊损伤后立即经带孔球囊导管给予大蒜素高（100μg／ml）、中（50μg／m1）、低（25μg／ml）浓度,共3组。每组于术后14d取颈总动脉组织,行HE染色观察新生内膜组织形态学改变,计算内膜面积（IA）,及内膜／中膜面积比（IA／MA）;免疫组织化学方法检测NF-κB、TNF—α的表达水平。结果假手术组未见内膜增生,对照组与假手术组相比新生内膜明显增厚,药物组较对照组新生IA及IA／MA显著降低（P〈0．01）,但是药物组各组间差别无统计学意义。假手术组未见NF-κB、TNF—α染色阳性细胞,药物组与对照组相比NF-κB、TNF-α阳性细胞百分比显著降低（P〈0．01）,并且呈浓度依赖性。结论大蒜素通过局部短时间应用可以抑制血管球囊损伤后新生内膜增生,其机制可能是通过抑制TNF—α／NF—κB信号通路实现的。