早期生长反应因子-1诱骗寡脱氧核苷酸对大鼠球囊损伤后细胞黏附分子-1的影响

目的 观察局部转染早期生长反应因子-1(early growth response factor-1,Egr-1)的诱骗性寡脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotides,decoy ODNs)对球囊损伤颈总动脉后内膜增生及细胞内细胞黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响,并初步探讨Egr-1 decoy ODNs抑制球囊损伤后内膜增生的机制.方法 96只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯损伤组、杂码寡脱氧核苷酸(scrambled decoy ODNs,SCR)组和Egr-1 decoy ODNs组,每组24只.术后3、7、14及21d处死动物,每组6只.应用HE染色、Real time RT-PCR和Western-blotting方法观察大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生情况、Egr-1和ICAM-1的表达及Egr-1 decoy ODNs对它们的影响.结果 ①内皮损伤后3d内膜增厚不明显,7d内膜开始增厚,14d和21d时内膜明显增厚.②Egr-1mRNA和蛋白水平于术后3d开始升高,21d时达到顶峰,而I CAM-1的mRNA和蛋白水平均于术后3d开始升高,7d达高峰,14d时下降.③转染Egr-1 decoyODNs治疗后,在各个时间点内膜增厚程度减轻,Egr-1和ICAM-1表达减少,与假手术组比较差异有统计学意义P ＜0.01).结论 Egr-1 decoy ODNs可能是通过特异性抑制Egr-1的表达,进而抑制ICAM-1的表达,从而减轻血管损伤后内膜增生.     

Egr-1的诱骗性脱氧核苷酸对大鼠颈总动脉损伤后内膜增生的影响

目的：针对大鼠Egr-1的诱骗性寡脱氧核苷酸（decoy ODN），作用于损伤后的动脉内膜，观察其对血管损伤后新生内膜增生的影响。方法：行HE染色观察血管内膜、中膜的厚度改变，并分组进行计算机图象分析。计算出内膜／中膜（I/M）的面积比。结果：治疗组与同一时间点对照治疗组和对照组相比，内膜增生受到抑制，两者之间差异有显著性（P〈0．01）。结论：decoy ODN通过诱骗转录因子与它结合，下调转录因子所调控的基因表达，减轻了大鼠动脉损伤后新生内膜的增生程度。     

激活剂蛋白-1诱骗性寡核苷酸对大鼠颈总动脉损伤后新生内膜的影响

目的探讨激活剂蛋白1(AP1)诱骗性寡核苷酸对大鼠颈总动脉损伤后新生内膜的影响及其作用机制。方法36只Wistar大鼠随机分为3组,每组12只,均建立颈总动脉损伤模型,单纯损伤组不予任何处理;Lipofectin转染试剂组局部释放Lipofectin;治疗组局部释放AP1诱骗性寡核苷酸,3组均于于术后30min、3h、7d处死13取材,观察比较内膜增生程度,免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和c fos。结果单纯损伤组和Lipofectin转染试剂组7d时可见内膜明显增生,且有较多平滑肌细胞表达PCNA,c fos30min表达达高峰。而治疗组内膜增生程度减轻,PCNA、c fos的表达率明显下降,差异有显著意义(P<0.05或P<0.01)。结论局部转染AP1诱骗性寡核苷酸可明显抑制动脉损伤后的内膜增生,下调PCNA、c fos的表达。     

Egr-1的诱骗性脱氧核苷酸对大鼠颈总动脉损伤后内膜增生的影响

目的:针对大鼠Egr-1的诱骗性寡脱氧核苷酸(decoy ODN),作用于损伤后的动脉内膜,观察其对血管损伤后新生内膜增生的影响。方法:行HE染色观察血管内膜、中膜的厚度改变,并分组进行计算机图象分析,计算出内膜/中膜(I/M)的面积比。结果:治疗组与同一时间点对照治疗组和对照组相比,内膜增生受到抑制,两者之间差异有显著性(P<0.01)。结论:decoy ODN通过诱骗转录因子与它结合,下调转录因子所调控的基因表达,减轻了大鼠动脉损伤后新生内膜的增生程度。     

Egr-1诱骗寡核苷酸对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增殖及内皮功能的影响

目的探讨早期生长反应因子1(Egr-1)诱骗寡核苷酸(诱骗基因)对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖及内皮功能的影响。方法建立Wistar雄性大鼠颈总动脉球囊损伤模型。随机分4组,每组4个时相点(3,7,14,21d),每个时相点3只大鼠。取大鼠颈总动脉行病理形态学检查和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色,同时测定血清一氧化氮(NO)水平。结果对照组1(对照基因组)和对照组2(转染试剂组)分别与诱骗基因组相比,球囊损伤后7d可见内膜增生,14d、21d增生更明显(P<0.01)。正常动脉未见PCNA表达,动脉损伤后7d,新生内膜及中膜中PCNA阳性表达达高峰,14d后逐渐下降。诱骗基因治疗后,与对照组1和对照组2相比,动脉PCNA表达减少(P<0.01)。诱骗基因组NO含量较两对照组增高,第14d最明显(P<0.01)。结论Egr-1诱骗寡核苷酸可抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖并能升高血中NO水平。     

Egr-1的诱骗性脱氧核苷酸对大鼠动脉损伤后NO、NOS、ET水平的影响

目的：探讨早期生长反应因子-1（Egr-1）的诱骗性脱氧核苷酸（EODN）对实验性大鼠动脉损伤后血管内皮功能的影响。方法：Wistar大白鼠96只，随机分为假手术组、对照组1、对照组2和基因治疗组（各24只）。行左颈总动脉内膜剥脱术后，治疗组经带孔球囊导管末端将含有FITC标记的EODN500μg，转染试剂FuGENE630μl的1mmol／L Mg Cl：液200μl局部加压注入至损伤的血管节段内，使其在局部作用15min；对照组1局部注入200μl的1mmol／LMgCl2液；对照组2局部注入含30μl FuGENE6Reagent的1mmol／LMgCl2液200μl。分别于3，7，14，21d每组各处死动物6只，处死前心脏取血检测一氧化氮、一氧化氮合酶、内皮素浓度。结果：与两对照组比较，EODN治疗组血清一氧化氮和一氧化氮合酶含量均增高（P〈0．05），而血浆内皮素浓度则有所降低（P〈0．05）。结论：Egr-1特异脱氧核酶可改善动脉损伤后血管内皮功能。     

Egr-1的诱骗性脱氧核苷酸对大鼠动脉损伤后NO、NOS、ET水平的影响

目的:探讨早期生长反应因子-1(Egr-1)的诱骗性脱氧核苷酸(EODN)对实验性大鼠动脉损伤后血管内皮功能的影响。方法:Wistar大白鼠96只,随机分为假手术组、对照组1、对照组2和基因治疗组(各24只)。行左颈总动脉内膜剥脱术后,治疗组经带孔球囊导管末端将含有FITC标记的EODN 500 μg,转染试剂FuGENE6 30μl的1mmol/L MgCl2液200 μl局部加压注入至损伤的血管节段内,使其在局部作用15min;对照组1局部注入200 μl的1mmol/L MgCl2液;对照组2局部注入含30 μl FuGENE6 Reagent的1mmol/L MgCl2液200 μl。分别于3,7,14,21d每组各处死动物6只,处死前心脏取血检测一氧化氮、一氧化氮合酶、内皮素浓度。结果:与两对照组比较,EODN治疗组血清一氧化氮和一氧化氮合酶含量均增高(P<0.05),而血浆内皮素浓度则有所降低(P<0.05)。结论:Egr-1特异脱氧核酶可改善动脉损伤后血管内皮功能。     

反义c-myc寡脱氧核苷酸对家兔髂总动脉损伤后内膜增生的影响

目的：观察反义c-myc寡脱氧核苷酸(ASODN)对家兔髂总动脉损伤后内膜增生的影响，探讨其防治再狭窄的潜在作用。方法：通过pluronic gel缓释系统和Lipofeclin转染导入系统，将c-myc ASODN作用于家兔髂总动脉损伤后的血管外膜，3周后对所取的血管节段进行组织切片和苏木精-伊红染色，在显微镜下进行形态学观察，并采用图像分析系统进行图像分析，计算出内膜，中膜(I/M)面积比和I／M厚度比，并进行统计学处理。结果：c-myc ASODN可明显抑制内膜增生，而正义c-myc ODN对内膜增生无影响。结论：c-myc ASODN以序列特异性方式抑制了新生内膜的形成。     

阿魏酸钠对球囊损伤大鼠颈总动脉血管内膜增生的影响

目的：研究阿魏酸钠对球囊损伤大鼠颈总动脉内膜增生的影响。方法：制作球囊损伤的大鼠颈总动脉内膜增生模型，Wistar雄性大鼠15只随机分为①对照组(n=7)腹腔内注射生理盐水(4ml／d)。②阿魏酸钠治疗组(n=8)腹腔内注射融于生理盐水的阿魏酸钠(200mg/d)，球囊损伤14d后，损伤区域的血管段取材固定后，分析血管断面组织形态学的变化；免疫组化方法观察增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞以了解血管壁细胞的增殖情况。结果：阿魏酸钠可明显减少新生内膜面积，增加管腔面积，抑制平滑肌细胞的增殖。结论：阿魏酸钠具有抑制血管内膜增生的作用。     

熊果酸对球囊损伤大鼠颈总动脉后内膜增生及PCNA、NF-kB表达的影响

目的：探讨熊果酸对球囊损伤大鼠颈总动脉后血管内膜的增生及增殖细胞核抗原（ PCNA）、核因子kB （ NF-kB）表达的影响。方法32只SD大鼠随机分为假损伤组（对照组）、损伤组和熊果酸低剂量治疗组、高剂量组治疗组。对照组和模型组每天腹腔注射生理盐水及药物助溶剂1%DMSO,熊果酸低剂量治疗组、高剂量组治疗组每天腹腔注射相应药物。分别在术后7 d、21 d取颈总动脉,通过组织学检查、免疫组化结合图象分析技术测定血管壁形态学变化及PCNA、NF-kB的表达情况。结果与损伤组相比,术后21天熊果酸高、低剂量组内膜增生面积及内膜与中膜面积比均明显减少（ P﹤0.05）。与对照组比较,损伤组NF-kB、PCNA表达显著增强（ P﹤0.05）;术后各时间点上熊果酸高、低剂量组较损伤组NF-KB表达明显降低,差异有统计学意义（ P﹤0.05）。结论熊果酸可抑制球囊损伤后血管新生内膜增生,其作用机制可能与抑制NF-kB及PCNA表达有关。     

针对Egr-1mRNA的10—23脱氧核酶抑制大鼠动脉损伤后内膜增生的研究书

目的 探讨针对Egr-1mRNA的10—23脱氧核酶对大鼠动脉损伤后内膜增生的影响和可能的机制。方法 制备大鼠颈动脉球囊损伤模型，96只大鼠随机分为4组。A组为假手术组；B组为1mmol／L MgCl：对照组；C组为FuGENE6对照组；D组为FuGENE6介导的ED5转染组；每组再按术后3，7，14和21d。分为4个亚组，每组6只。术后3、7、14、21d各处死每组动物6只，分别应用RT-PCR和Western—blot技术检测血管组织Egr-1mRNA水平及蛋白合成情况；HE染色观察损伤血管内膜的增生情况；免疫组织化学染色观察PCNA的表达。结果 与B组和C组比较，D组各时间点血管内腱、中膜的犀度和管腔的狭窄率均显著减小（P〈0.01）；正常血管组织有微量Egr-1表达，术后Egr-1mR．NA和蛋白水平逐渐增高，而D组血管组织Egr-1mRNA和蛋白水平较B组和C组均降低（P〈0．01）；免疫组织化学染色显示，术后3dPCNA表达开始增加，7d达高峰。14d开始下降，D组血管壁PCNA阳性细胞百分比明显低于B组和C组（P〈0．01）。B组和C组之间相比较，以上各指标差异均无显著性（P〉0．05）。结论 ED5可能通过抑制Egr-1和PCNA的表达，而减轻血管损伤后内膜增生。     

针对Egr-1mRNA的10-23脱氧核酶抑制大鼠动脉损伤后内膜增生的研究

目的探讨针对Egr-1mRNA的10-23脱氧核酶对大鼠动脉损伤后内膜增生的影响和可能的机制。方法制备大鼠颈动脉球囊损伤模型,96只大鼠随机分为4组,A组为假手术组;B组为1mmol/LMgCl2对照组;C组为FuGENE6对照组;D组为FuGENE6介导的ED5转染组;每组再按术后3,7,14和21d,分为4个亚组,每组6只。术后3、7、14、21d各处死每组动物6只,分别应用RT-PCR和Western-blot技术检测血管组织Egr-1mRNA水平及蛋白合成情况;HE染色观察损伤血管内膜的增生情况;免疫组织化学染色观察PCNA的表达。结果与B组和C组比较,D组各时间点血管内膜、中膜的厚度和管腔的狭窄率均显著减小(P<0.01);正常血管组织有微量Egr-1表达,术后Egr-1mRNA和蛋白水平逐渐增高,而D组血管组织E-gr-1mRNA和蛋白水平较B组和C组均降低(P<0.01);免疫组织化学染色显示,术后3dPCNA表达开始增加,7d达高峰,14d开始下降,D组血管壁PCNA阳性细胞百分比明显低于B组和C组(P<0.01)。B组和C组之间相比较,以上各指标差异均无显著性(P>0.05)。结论ED5可能通过抑制Egr-1和PCNA的表达,而减轻血管损伤后内膜增生。     

缬沙坦对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生和TLR4表达的影响

目的:观察缬沙坦对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生及Toll样受体4(toll like receptor4,TLR4)表达的影响。方法:以1.5F球囊导管建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、球囊损伤组(n=12)、缬沙坦组(n=12)。造模后第1天开始给予缬沙坦10mg.kg-1.d-1灌胃,假手术组及球囊损伤组灌胃等量蒸馏水,14d后取损伤血管段,组织形态学观察并测定内膜增生情况,实时定量PCR检测血管TLR4mRNA的表达。结果:术后14d,球囊损伤组和缬沙坦组可见明显内膜增生,内膜面积及内膜和中膜面积比均显著大于假手术组,而缬沙坦组上述指标均低于球囊损伤组(P<0.05);球囊损伤组和缬沙坦组TLR4mRNA的表达较假手术组升高,与球囊损伤组比较,缬沙坦可降低球囊损伤诱导的TLR4高表达。结论:缬沙坦可抑制大鼠颈动脉球囊损伤引起的血管内膜增生,其作用可能是通过下调损伤血管TLR4的过表达而实现。     

Egr-1诱骗性寡脱氧核苷酸对大鼠动脉损伤后PCNA和CDK4表达的影响

目的:观察局部转染早期生长反应因子-1(Egr-1)的诱骗性寡脱氧核苷酸(Decoy ODN)对球囊损伤颈总动脉后内膜增生及增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)表达的影响,并初步探讨Egr-1decoy ODN抑制球囊损伤后内膜增生的机制。方法:应用HE染色,Realtime RT-PCR和Western-blot方法观察大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生情况、Egr-1、CDK4和PCNA的表达及Egr-1decoy ODN对它们的影响。结果:Egr-1decoy ODN组内膜增生明显减轻,Egr-1、PC-NA和CDK4的表达减少,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:Egr-1decoy ODN可能是通过特异性抑制Egr-1的表达,进而抑制PCNA和CDK4的表达,而减轻血管损伤后内膜增生。     

人参皂苷Rg1对大鼠血管球囊损伤后原癌基因c-myc表达的影响

目的 观察人参皂苷Rg1( Rg1)对大鼠颈动脉球囊损伤后原癌基因c-myc表达的影响,补充说明Rg1对球囊损伤所致血管狭窄形成的防治机制.方法 建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型,制模后随机分为假手术组、模型组、Rg1低剂量(4 mg/kg)组和Rg1高剂量(16 mg/kg)组.制模次日腹腔注射给药,模型组及假手术组给予等体积生理盐水,连续给药14d后取损伤侧颈总动脉,行H.E.染色并测量管腔面积(Lumen area,LA)以判定血管腔狭窄程度;采用实时荧光定量RT-PCR (real-time RT-PCR)法检测管壁c-myc mRNA的表达.结果 颈总动脉球囊损伤模型组大鼠血管腔面积较假手术组明显狭窄(P＜0.01).Rg1低剂量及高剂量均明显改善球囊损伤所致的颈动脉狭窄,使球囊损伤后狭窄的血管腔面积增大(P＜0.05);Rg1高剂量显著下调损伤血管壁的c-myc mRNA表达(P＜0.01).结论 Rg1能减轻球囊损伤所致大鼠颈动脉狭窄,可能与其下调c-myc基因的表达有关.     

氯沙坦对高脂兔髂动脉球囊内膜损伤后胰岛素抵抗的影响

目的：探讨氯沙坦对高脂饮食兔血管损伤后胰岛素抵抗（IR）的干预作用。方法：对36只高脂饮食免行髂动脉内膜剥脱术，术前、术后分别测定血胰岛素（INS）、血糖、总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇水平，并计算胰岛素敏感性指数（ISI）代替IR程度。结果：INS术后4周和8周较术前升高；ISI呈下降趋势；经氯沙坦干预后，胰岛素和ISI维持在术前水平。结论：氯沙坦能预防高脂饮食兔髂动脉内膜剥脱术后的高胰岛素血症和IR。     

转录因子SP1诱骗性寡核苷酸对猪血管内皮细胞α半乳糖苷链表达的影响

目的:探讨转录因子SP1诱骗性寡核苷酸(decoy ODN)对猪血管内皮细胞系(SV-40-PED)膜蛋白α半乳糖苷链(αGal)表达的影响。方法:SP1诱骗性寡核苷酸转染猪血管内皮细胞系,细胞爬片后荧光显微镜下观察αGal抗原表位的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测蛋白表达情况;RT-PCR法检测SV-40-PED转染前后α1,3半乳糖转移酶(α1,3GT)mRNA。结果:荧光显微镜下细胞爬片可见转染组(decoy ODN组)细胞膜荧光表达明显减弱,部分部位可见点状荧光缺损。Western blot显示decoy ODN/PED的αGal相对吸光度值为48.2±0.9,仅为空转染组(只含有转染试剂oligofectamine)91.6±1.7的52.6%(P<0.05)。转染组α1,3GT基因异构体的mRNA表达量(异构体1为0.42±0.20;异构体2为0.27±0.12)显著低于空转染组(异构体1为0.72±0.17;异构体2为0.50±0.19;P<0.05),但错配组(错义decoy ODN组)及空转染组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SP1 decoy ODN可以靶向性抑制猪血管内皮细胞系αGal基因的表达。     

组织因子抑制子基因局部转移对兔颈总动脉内膜增生的影响

目的：研究组织因子抑制子（TFPI）基因局部转移对兔颈总动脉损伤后内膜增生的影响。方法：36只新西兰纯种雄性大白兔随机分为腺病毒空载组，包载组织因子抑制子（TFPI）基因腺病毒组和生理盐水组（每组12只）。用球囊导管对实验兔行颈总动脉损伤，术后14天取病变血管，免疫组化染色观察表明TFPI在转移局部表达成功；病变最明显处取标本进行HE染色，光学显微镜下观察血管内膜增生，以计算机图像分析系统分析血管内膜、中膜和腔面积的变化，计算内膜增生细胞核抗原增殖指数。结果：TFPI基因局部转移后血管内膜面积明显减少，中膜面积不变，血管腔面积增大。结论：TFPI基因局部转移显著抑制颈总动脉损伤处血管内膜的增生，有可能防治再狭窄。