人源抗M试剂血清的制备和应用

目的:利用南京红十字血液中心废弃抗M抗体阳性血浆制备人源抗M试剂血清,达到报废血液再利用的目的。方法:将抗M抗体阳性的血浆通过中和稀释,冻融浓缩,海藻糖-PEG浓缩等一系列方法,制备成人源化的抗M试剂血清。结果:制备的血清抗M效价可提高4倍,与市售试剂血清相比凝集强度有提高,1～2个月后制备的抗体效价基本不变。结论:利用废弃抗M抗体阳性血浆制备的人源抗M试剂血清亲和力在一定程度上高于市售血清,可适当用于日常标本检测,达到废血再利用的目的。     

抗-Di~a抗体引起的新生儿溶血病1例

正新生儿溶血病(hemolytic disease of the newborn,HDN)是由于母婴血型不合,母亲体内产生与胎儿血型抗原不配合的IgG性质的血型抗体,这种抗体通过胎盘进入到胎儿体内引起的同族免疫性溶血。最常见于ABO溶血病,其次为Rh溶血病,其他血型系统导致HDN比较少见。本文报告1例较罕见Di血型不合引起的HDN。     

抗-HIV快速检测试剂质量考查

目前国内检测艾滋病病毒(HIV)抗体(抗-HIV)最常用的试剂有酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂和快速法(RT)试剂。RT试剂使用的最大优点是操作简便，可单份检测，报告结果快(可在滴加血清样品后3～30分钟观察到结果)。2003年8～12月，本所受中国疾病预防控制中心(CDC)艾滋病(AIDS)参比实验室委托，对国内销售的Abbott公司的快速试剂进行质量考查，现将结果报告如下。     

抗日本血吸虫抗独特型抗体的制备及初步鉴定和应用

本研究用1株针对日本血吸虫尾蚴和童虫表膜抗原的单克隆抗体(N15D9)免疫新西兰兔制备多克隆抗N15D9独特型抗体。结果表明,多克隆抗N15D9独特型抗体具有较高的抗体滴度,经用间接免疫荧光法和ELISA分析,该抗体显示较高的结合特异性,与具有相同靶抗原结合特异性的单克隆抗体有中度的交叉反应。当用抗N15D9独特型抗体作为诊断抗原检测日本血吸虫感染的病人血清时,其阳性检出率为39％。本研究结果初步揭示,抗N15D9独特型抗体具有一定的分子模拟作帮和诊断应用的潜能。     

乙型肝炎病毒X基因的原核表达及血清抗HBx抗体的检测

目的 应用表达蛋白检测乙型肝炎患者血清抗-HBx抗体水平并探讨其临床意义。方法 通过PCR扩增获得HBVX基因，与原核表达载体Pet32a＋连接构建PET32a-HBX原核表达载体，转化E．coli BL21表达获得重组融合蛋白。经切胶透析纯化后，应用重组蛋白HBx建立检测血清中抗-HBx抗体的间接ELISA方法，分别检测正常人组、急性肝炎组、慢性肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组患者血清中的抗-HBx抗体。结果 获得具有免疫原性的HBx融合蛋白；ELISA检测表明，慢性肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组的抗-HBx抗体的水平均高于急性肝炎组，差异具有显著性；在三组之问，慢性肝炎组高于肝硬化组和肝细胞癌组，差异具有显著性，肝硬化组和肝细胞癌组的抗-HBx抗体水平无显著性差异。结论 HBV患者血清中抗-HBX抗体是乙型肝炎病毒感染的一种特异性抗体，是HBV感染的血清学指标之一，可以反映乙型肝炎肝炎患者病情的变化。     

抗酒石酸酸性磷酸酶测定及在骨质疏松症诊断中的应用

目的：建立抗酒石酸酸性磷酸酶测定方法及在原发性骨质疏松症诊断中的临床应用。方法：以1－萘酚磷酸为基质,测定肝素抗凝血抗酒石酸,氟化物抑制酸性磷酸酶,并以双能X线骨密度仪测定戎腰椎2－4的骨密度,结果：抗酒石酸酸性磷酸酶测定方法在本地区老年妇女的参考值为2．9－5．3U／L,该方法的平均批内和批间变异分别为2．7％和5．0％,骨质疏松症该酶活性明显高于健康对照组（P＜0．001）,并与骨密度测定呈显著的相关性（r=0.82),结论：抗酒石酸性磷酸酶测定方法简便,快速,是早期原发性骨质疏松症的筛选,诊断及观察疗效的敏感指标。     

脂蛋白a抗血管生成机制及其临床应用前景

脂蛋白a [Lp(a)]是一种在肝脏合成并含有多种脂质成分的脂蛋白,主要由低密度脂蛋白（LDL）样颗粒和载脂蛋白a[Apo(a)]组成。目前Lp(a)升高已被认为是多种心血管疾病(cardiovascular diseases, CVD)的独立危险因素。除了具备促动脉粥样硬化、促进炎症反应、促进血栓形成等作用外,由于Lp(a)的内含结构与血管抑素具有同源性,Lp(a)潜在的抗血管生成能力也日渐吸引了学界的关注。本文主要从Lp(a)的结构和功能出发,对Lp(a)的抗血管生成机制进行综述,分析Lp(a)内部组分参与抗血管生成的分子机制,并探讨其在临床应用中的前景。     

异基因造血干细胞移植患者血清抗HLA抗体检测的意义

目的研究血清抗HLA抗体与异基因造血干细胞移植（allo．HSCT）后移植物被排斥、疾病复发及移植物抗宿主病（GVHD）的关系。方法20例allo—HSCT患者在移植前与移植后1、3、6个月动态检测抗HLA抗体。结果移植前抗HLA抗体≥30％与〈30％的患者发生原发植入失败比较无显著性差异（P〉0．05）;在成功植入的17例患者中,移植前和（或）移植后抗HLA抗体I〉30％的5例患者均发生移植物被排斥或疾病复发,而抗HLA抗体均〈30％的12例患者中仅有1例发生,两者有显著性差异（P〈0．005）。移植后抗HLA抗体呈动态升高的3例患者均在植入后且抗HLA抗体〉130％时发生移植物被排斥和疾病复发,而呈动态降低的5例患者仅有1例在植入后发生移植物被排斥。移植前和（或）移植后抗HLA抗体≥30％的5例患者均未发生GVHD;而抗HLA抗体〈30％的12例患者中有9例发生急性和（或）慢性GVHD,发生率75％,两者有显著性差异（P〈0．005）。结论对allo．HSCT受者在移植前、后动态检测抗HLA抗体有助于预测移植物被排斥、疾病复发与GVHD的发生,抗HLA抗体〉130％或呈动态升高者继发植入失败或疾病复发的发生率高,而GVHD发生率较低。     

丙型肝炎患者血清抗核抗体的测定及临床研究

目的 评估慢性丙型肝炎(CHC)患者抗核抗体(ANA)的阳性率,同时探讨CHC患者ANA与肝功能及临床指标的关系.方法 选择2006年1月～2007年5月北京佑安医院住院的慢性丙肝患者共105例,测定血清ALT、AST、TBiL、ALB、ANA、HCV-RNA水平.结果 ANA阳性率为26.7% (滴定度>1∶100),ANA阳性患者年龄较阴性患者大(55.29岁±9.39岁 vs 47.24岁±15.09岁,P=0.01).而在性别、丙肝病毒定量、ALT、AST、TBiL和ALB上差异不显著.结论 ANA在慢性丙肝患者检出率与年龄关系密切,年龄越大ANA阳性率越高.与患者肝功水平、病毒的复制与否无关.     

金标法初筛试剂与诊断试剂检测乙肝表面抗原的结果分析

目的:分析金标法初筛试剂与诊断试剂检测无偿献血者乙肝表面抗原的阳性率、假阳性率及假阴性率的结果。方法:金标法初筛试纸条检测68 326例,诊断试纸条检测55 637例,乙肝表面抗原初检阴性者与初检阳性者均用ELISA法做复检。结果:初筛试剂检测68 326例的HBsAg阳性率为5.96%、假阳性率5.8%、假阴性率2.84%,诊断试剂检测55 637例的阳性率为2.77%、假阳性率2.6%、假阴性率0.47%。结论:金标法初筛试剂检测无偿献血者乙肝表面抗原的阳性率、假阳性率及假阴性率均高于诊断试剂。     

KAI1 PNA探针的制备及其在胰腺癌中的应用

目的：制备DIG标记KAI1 RNA探针和分析KAI1基因在胰腺癌中的表达。方法：以线性KAI1基因DNA质粒为模板，采用体外转录法掺入DIG-11-UTP制备RNA探针，并通过化学发光法检测。应用该探针通过Northern blot对12例正常胰腺组织和30例原发性胰腺癌组织中的KAI1基因mRNA进行分析。结果：该方法标记的KAI1 RNA探针浓度?a1ng/цl时即可检测。Northern bolt分析发现25例无转移的胰腺癌中KAI1基因在2.4kb处存在明显的杂交信号，5例发生转移的晚期胰腺癌杂交信号较弱，正常胰腺组织中该基因的表达水平呈阴性或弱阳性。结论：本法标记的KAI1RNA探针灵敏度高，KAI1基因低表达与胰腺癌转移有关。     

自身免疫性疾病抗体检测微阵列制备条件的优化和初步应用

目的优化制备蛋白质微阵列的几个关键因素,初步建立自身免疫性疾病抗体检测微阵列,以期用于自身免疫性疾病的诊断。方法选择与制备蛋白质微阵列有关的4个因素,即温育时间、封闭剂、封闭时间和与二抗结合时间,进行正交优化,得出制备蛋白质微阵列的最优化条件,并根据该条件,进一步确定6种自身抗原适合的点样浓度及血清的最佳稀释度。根据优化条件,制备出同时检测6种自身抗体的微阵列,并初步应用,与间接免疫荧光(IIF)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法加以比较,对结果进行评价。结果制备蛋白质微阵列的最佳优化条件是温育2h,封闭剂采用含有1%小牛血清白蛋白和2．5%蔗糖的PBST,封闭时间为30min,与二抗反应30min,6种自身抗原适合点样浓度从100μg/ml到300μg/ml不等,最佳血清稀释浓度是1∶2。微阵列法对抗核抗体(ANA)的检测与IIF法相比,灵敏度是88．6%,特异度是83．3%,微阵列法对其他5种自身抗体的检测与ELISA法相比,灵敏度在80．0%～88．2%之间,特异度在90．2%～98．6%之间。结论上述优化条件适合于制备自身免疫性疾病抗体检测微阵列,微阵列检测结果与现有常规方法检测结果比较一致,值得推广应用。     

结核分枝杆菌rHpsX-MPT64融合蛋白的制备与临床应用

目的 构建结核分枝杆菌融合基因hpsX-mpt64原核表达系统,建立基于rHpsX-MPT64为包被抗原酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)并对其用于结核患者血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法 PCR扩增并克隆结核分枝杆菌hpsX和mpt64基因,以连接引物PCR构建hpsX-mpt64人工融合基因,建立上述目的基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的重组蛋白,Western Blot检测其免疫性。分别以rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64为包被抗原,建立相应ELISA检测150例健康人群、73例非结核肺部疾病患者和277例活动性肺结核患者血清标本中抗体。结果 克隆的hpsX和mpt64及构建的hpsX-mpt64融合基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表达量分别为细菌总蛋白的20.3%、28.5%和26.5%,其提纯物电泳后均显示单一条带。基于rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64为包被抗原的ELISA对涂阳患者血清抗体检出率明显高于涂阴患者(P<0.01),检测活动性结核患者血清抗体的敏感性分别为59.2%、61.4%和74.4%,特异性分别为90.6%、83.9%和91.0%,rHpsX-MPT64为包被抗原敏感性明显高于rHpsX和rMPT64抗原(P<0.01)。结论 基于rHpsX-MPT64为包被抗原的ELISA有较高的敏感性和特异性,重组融合蛋白为抗原有助于进一步提高检测结核病血清学诊断的敏感性。     

Food-bound B12 absorption and serum total homocysteine in patients with low serum B12 levels

This study was undertaken to determine whether measurements of serum total homocysteine (Hcys) and bound B12 absorption are useful in determining which patients with low- or low-normal levels of serum B12 are B12 deficient. In 40 patients with low or borderline serum levels of B12, food-bound B12 absorptions were determined using a body counter in an iron room, and were related to serum total Hcys levels. Food-bound B12 absorption was decreased in 16 patients and in an additional four, absorption of the free vitamin was also decreased. Homocysteine levels were elevated in four of the 16; in three of the four who had both decreased bound and free B12 absorptions, Hcys was elevated. If elevation of the Hcys level indicates tissue deficiency of B12, the 75% incidence of normal levels of Hcys in these patients with low food-bound B12 absorptions suggests the existence of a cohort of patients who may be at risk to develop, but have not yet developed, B12 deficiency. Only long term follow-up will reveal how many ultimately will become B12 deficient. Am. J. Hematol. 59:42–45, 1998. © 1998 Wiley-Liss, Inc.     

Further studies on the use of serum gastrin levels in assessing the significance of low serum B12 levels

The reported incidence of low serum vitamin B12 levels in patients ranges from 4% to 8%. In only a small percentage can this be ascribed to readily diagnosed pernicious anemia, malabsorption syndrome, or to gastrointestinal surgery. This leaves a number of patients in whom the meaning of the low serum B12 is not immediately apparent. In 71 patients with intact gastrointestinal tracts, hematological indices did not adequately separate patients with decreased absorption of unbound B12 from those with normal absorption. A low absorption of B12, either unbound or food-bound, was found, however, when the level of serum gastrin was elevated. In contrast, a normal absorption of unbound B12 was likely (95% of 44 patients) when the serum gastrin was normal.     

IL-28B基因变异与丙型肝炎的易感性及其自然清除的关系

目的探讨IL-28B基因变异与丙型肝炎的易感性和丙型肝炎病毒（HCV）自然清除之间的关系。方法利用焦磷酸测序的方法对411例HCV感染者（男性225人,女性186人）及100例健康对照人群进行了IL-28B基因变异位点rs12979860的多态性检测;对HCV感染者进行病毒定量的检测,比较HCV感染人群和健康对照人群,慢性丙型肝炎（CHC）人群和丙型肝炎自愈人群IL-28B基因变异位点的差异以及不同基因型的携带者病毒定量的差异。结果中国健康人群IL-28B基因变异位点rs12979860的最小等位基因频率为6%,与日本人相近,与欧洲人群相差较大。SNP（rs12979860）位点的等位基因频率和基因型频率在HCV感染人群和健康对照人群之间差异无统计学意义（P=0.066;P=0.072）,C/C基因型CHC人群病毒定量水平高于C/T基因型,二者之间差异有统计学意义（P=0.02）;丙型肝炎自愈人群中C/C基因型和C/T基因型差异无统计学意义（P=0.64）。结论 CHC人群rs12979860 SNP基因型与健康人群表达无明显差别,该基因型（rs12979860）不是HCV的易感基因,其CC基因型并不能预测丙型肝炎发生自愈的病程。     

微生态制剂的研制与应用

前言随着微生态学理论研究的不断深入。微生态制剂（或称微生态调节剂ｍｉｃｒｏｅｃｌｏｇｉａｌｍｏｄｕｌａｔｏｒ）也随之迅速地发展起来。从本世纪初梅切尼科夫（ＥｌｉｅＭｅｔｃｈｎｉｋｏｆ）在欧洲提倡饮用酸牛奶可健康长寿以来,微生态制剂亦从此而风行于世界各...     

福州汉族献血者RHD和RHCE基因的多态性分析

目的：探讨福州市汉族献血者RHD和RHCE基因的多态性。方法：应用PCR-SSP等技术分析206名福州市汉族献血者的RHD和RHCE基因。用Arlequin3.5软件计算RHD、RHCE基因频率,检验Hardy-Weinberg平衡,计算最大可能性RH单倍型频率。结果：206名福州市汉族献血者都携带RhD抗原,都存在所检测的RHD基因第1、3、4、5、6、7、9和10外显子。206名献血者中,RHD、RHd、RHDel、RHCe、RHcE、RHce和RHCE基因频率分别为0.9660、0.0267、0.0073、0.6788、0.1667、0.0857和0.0688;DCe、DcE、Dce、DCE、dCe、dce、DelCe和DelcE单倍型频率分别为0.6580、0.1661、0.0733、0.0685、0.0145、0.0122、0.0065和0.0008。福州市汉族献血者RHD、RHEC各基因座基因频率均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P〉0.05）。结论：福州市汉族人群RHD、RHd、RHCe、RHcE、RHce和RHCE等基因和DCe、DcE、Dce、DCE、dCe、dce等单倍型都达到多态水平。在RhD血型阳性中国人中,可能有相当数量的人携带诸如RHd、RHD1227A、RHD207A、RHD710delC等基因。     

A quantitative assessment of serum chylomicron by light scattering intensity: Application to the intestinal fat absorption test

A novel fat absorption test to clarify the malabsorption syndrome was developed using a micronephelometric technique and compared with the classic conventional technique using ¹³¹I-triolein. An integrity of time-sequential light scattered from chylomicron-related turbidity in serum was determined between 0 and 300 min after butter fat load, being expressed in terms of the light scattering intensity (LSI). A good correlation was obtained between LSI and the serum level of chylomicron-triglyceride determined by an ultracentrifugation technique (r=0.819, P < 0.001). The maximal LSI was consistently observed at 180 min after administration of a test meal in the normal group (n= 39), whereas the malabsorption syndrome group (n= 35) was distinctly different and could be further classified according to four patterns of LSI changes. In addition, an inverse correlation was found between this fat absorption test and the ¹³¹I-triolein absorption test. It was concluded that the micronephelometric technique which does not use a radionuclide is advantageous in its simple and safe evaluation of fat malabsorption syndrome.