胆管癌分子生物学研究进展

胆管癌发病率低，对其分子生物学研究相对较少。胆管癌预后不良，近年来临床上有发病率升高的趋势。胆管癌亦是多种重要的细胞生长调控基因功能失调的结果，已发现Ｋ－ｒａｓ、Ｃ－ｍｙｃ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２等癌基因和Ｐ５３等抑癌基因的突变或过表达与胆管癌     

胰腺癌切除前后胰液K-ras基因点突变率变化的研究

对13例胰腺癌行胰十二指肠切除前后的胰液标本采用PCR－SSP检测K－ras基因有无穷变。结果发现：切除前胰液K－ras基因点突变率为100％，切除后第3日、第7日及第15日的胰液K－ras基因点突变率分别为15．4％（2／13）、0、0.研究表明：术前对收集的胰液行PCR－SSP检测K－ras有无穷变，有助于判断胰腺肿块的良恶性和胰腺癌的诊断，术后定期检测胶液，有助于及时发现多中心或复发病例，指导治疗，有利于康复。     

胰腺癌切除前后胰液K—ras基因点突变率变化的研究

对13例胰腺癌行胰十二指肠切除前后的胰液标本采用PCR—SSP检测K-ras基因有无突变。结果发现：切除前胰液K—ras基因点突变率为100％，切除后第3日、第7日及第15日的胰液K-ras基因点突变率分别为15.4％(2／13)、0、0。研究表明：术前对收集的胰液行PCR—SSP检测K—ras有无突变，有助于判断胰腺肿块的良恶性和胰腺癌的诊断，术后定期检测胰液，有助于及时发现多中心或复发病例，指导治疗，有利于康复。     

肝门胆管癌的基因组学

肝门胆管癌是指发生在肝门部的肝外恶性肿瘤,约占肝外胆管癌的50％～75％。胆管癌的发病较少见,男女发病差异无统计学意义,50岁以上多见,但国内外胆管肿瘤发病率近年来均有显著上升趋势。基因组学是指研究生物基因组及如何利用基因的一门学问。     

大鼠肝癌早期癌变壮癌基因特点与影像诊断关系的实验研究

目的：探讨大鼠肝癌的癌基因特点与影像诊断的关系。方法：选用SD雄性大鼠40只，以50PPM的二乙基亚硝胺喂水诱癌，分别于6－20周进行MRI、彩超检查，然后与P53原位杂交，H－ras、N－ras、K－ras、免疫组化检测结果对照。结果：诱癌第8周H－ras和N－ras开始有表达，第10周P53和K－ras开始有阳性，12周以后阳性率明显增高。I级癌灶中P53、H－ras、N-ras阳性率达50％－68.75％，II－IV级癌灶为33.33％－55.56％，增生结节P530％，H-ras、N-ras为27.27％－45.45％。MRI检测88.89％的癌灶和68.75％的早期癌灶，明显高于彩超（P＜0.05）。II－IV级癌灶在MRI有典型表现，I级癌灶和增生结节MRI表现有重叠。MRI检测病灶晚于癌基因表达1个月，MRI和彩超检出病灶的癌基因阳性率高于病理检出的病灶，但两者间无显著差别（P＞0.05）。结论：P53、H－ras、N-ras参与早期肝癌癌变过程，定期MRI是检测早期癌变的有效方法，MRI表现结合P53、H－ras、N－ras基因变化能提高早期肝癌癌灶的定性能力。     

胃粘膜组织K-ras、P16基因和EGF表达及意义

目的　检测胃粘膜组织K ras、P16基因及表皮生长因子 (EGF) ,探讨其临床意义。方法　K ras、P16基因采用单链构象多态性分析法 (SSCP) ,EGF采用免疫组化法。结果　K ras在早期胃癌和进展期胃癌的阳性表达率分别为 5 0 %、75 % ,突变率分别为 78.6 %、72 .7% ;P16基因在早期胃癌和进展期胃癌的阳性表达率分别为 2 1.4 %、18.2 % ,突变率分别为 6 4 .3%、6 3.6 %。与对照组 (慢性浅表性胃炎 )相比差异均有显著性。EGF在有淋巴结转移和无淋巴结转移的胃癌组织中阳性表达分别为 76 .9%、38.9% ,两者有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　K ras、P16、的表达和突变与EGF的联合检测为胃癌的早期诊断和预后判断提供了一定的参考价值     

五种癌基因蛋白在人胆管癌细胞中共同表达的研究

本文应用免疫组化方法，研究了１６例胆管癌和６例癌旁胆管壁组织的ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ－２，ＥＧＦＲ、ｃ－ｍｙｃ与ｐ５３五种癌基因蛋白的共同表达。结果：１６例胆管癌中，ｐ２１阳性率为８７．５％，ｃ－ｅｒｂＢ－２ ５６．３％，ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３均为５０％，ＥＧＦＲ３１．３％，２种以上癌基因蛋白共同表达者１４例（８７．５％）其中ｐ２１＋ｃ－ｅｒｂＢ－２共同表达率最高（５０％），３种癌基因蛋白共同表达的病例     

ras与肿瘤

ras基因是第一个被鉴定的人类癌基因，其家族的三个密切相关成员是H—ras、K—ras和N—ras，是在人类肿瘤中最常见的癌基因，它们在大约15％的人类恶性肿瘤中被检出。H—ras和K—ras是在1964年从大鼠肉瘤急性反转录病毒中分离出来的，发现它们能够进行细胞转化；N-ras致癌蛋白是从神经胚胎瘤细胞系中发现的。H—ras，K—ras，N—ras分别跨越3、7、35个DNA碱基对序列，相应位于同源染色体11P15．5，12P12．1，1P13位点上，其中K—ras又分为K-rasA和K—rasB两个亚型。其它的Ras基因家族中M-ras，R-ras，Rap1／2和Ral，至少占有50％序列，几个单体G蛋白（Rh0／Ras／Cdc42，Rad，Ran，Arf，Rab／Ypt）至少占有30％序列。Rap1参与体细胞免疫缺陷和血小板激活，而Rap2的功能仍不明确。     

抗—HBe阳性无症状乙肝病毒携带者基因突变的研究

目的 探讨基因突变与无症状乙肝病毒携带者的转归与预后的关系。方法 75例患者符合HBsAg阳性、HBeAg阴性、抗-HBe阳性、抗-HBc阳性和HBV—DNA阳性。采用定量PCR法检测HBV—DNA；ABI PRISM310型核苷酸序列分析仪对HBV—DNA进行测序。结果 在无症状携带者中，前C区基因突变率19例60％，C区突变率46％，X区突变率54％，慢轻肝前C区突变率81％，C区突变率45％，X区突变率56％；慢中肝前C区突变率78％，C区49位pT突变率18．18％，97位I→L突变率36．36％，X区突变率56％；慢重肝前C区突变率87％，C区49位S→T突变率12．5％，97位I→L突变率25．0％，X区突变率75％；肝硬化前C区突变率88％，C区49位pT突变率0，97位I→L突变率33．33％，X区突变率88％；肝癌前C区突变率100％，X区突变率100％。前C区突变及X区突变在无症状携带者、慢乙肝轻型、慢乙肝中型，慢乙肝重型、肝硬化和肝癌各组中检出率差异有统计学意义。随病情进展，突变率有增高的趋势。结论从无症状携带状态至慢乙肝、肝硬化、肝癌的形成和发展，HBV前C区变异及X区变异检出率逐渐升高。前C区变异是导致肝病病情加重的主要因素，X基因变异起协同作用，且x基因变异主要与肝癌的发生密切相关。对ASC检测前C区变异及X基因变异可以预测ASC的预后和转归。对这些发生基因突变的ASC采取有效措施，可能阻止病情进一步发展。     

C-erbB-2癌基因及其表达产物的检测在临床上的应用

已有大量报道证实C－erbB－2癌基因的扩增及其产物的过度表达与肿瘤的发生、发展及预后联系密切。尤以乳腺癌、卵巢癌等的研究为多。本文简要综述C－erbB－2及其表达产物的检测及临床价值。     

侵袭性垂体腺瘤的病理机制与分子生物学研究进展

侵袭性垂体腺瘤在很多方面有其自身的特点，其病因、临床表现、治疗、预后等方面和一般垂体腺瘤均有所不同。近年来，对侵袭性垂体腺瘤的发生机理在分子生物学、分子病理学等方面的研究取得了很大进展。现结合近几年的研究资料，简述侵袭性垂体腺瘤中原癌基因、抑癌基因、生长因子及蛋白降解酶等表达改变及与肿瘤侵袭性的关系。     

胰腺癌患者血浆K-ras和p53基因突变检测的研究

目的　检测胰腺癌患者血浆K ras和p5 3基因突变情况 ,初步分析其诊断价值。方法　本研究包括胰腺癌组 2 4例、其他疾病组 14例和健康对照组 2 1例。提取血浆DNA ,采用突变富集PCR RFLP法检测K ras基因第 12密码子突变 ,PCR SSCP 银染法检测p5 3基因第 5～ 8外显子突变。结果　 2 4例胰腺癌患者中 17例血浆检测到K ras突变 ,3例检测到p5 3突变 ;2 1例健康对照者血浆中均未检测到K ras和p5 3突变 ;在 38例疑为胰腺肿瘤患者中 ,血浆K ras突变诊断胰腺癌的敏感性为 70 % ,特异性为 86 % ,阳性预测值为 90 % ,阴性预测值为 6 3%。结论　本研究提示通过胰腺癌患者血浆标本检测K ras和p5 3基因突变是可行的。血浆K ras突变分析有助于胰腺癌的诊断。     

肝外胆管癌组织中环氧合酶—1与环氧合酶—2表达的研究

目的：研究环氧合酶－1及环氧合酶－2在肝外胆管癌组织、癌旁胆管组织及正常胆管组织中的表达，探讨环氧合酶基因与肝外胆管癌发生与发展的关系，为非类固醇类抗炎药在胆管癌高危人群中的化学预防提供实验依据。方法：应用免疫组织化学SABC法检测56例肝外胆管癌组织，31例癌旁胆管组织和6例正常胆管组织中环氧合酶－1和环氧合酶－2蛋白的表达情况，并结合临床病理指标进行分析。结果：环氧合酶－1在肝外胆管癌组织、癌旁胆管组织及正常胆管组织中的阳性表达率分别为96％（54／56）、94％（29／31）和100％（6／6），其差异无显性意义（P＞0．05），肝外胆管癌组织中环氧合酶－1的表达在临床病理指标间的差异无显性意义（P＞0．05）；环氧合酶－2在肝外胆管癌组织、癌旁胆管组织及正常胆管组织中的阳性表达率分别为86％（48／56）、39％（12／31）和0％（0／6），其差异有极显性意义（P＜0．01），肝外胆管癌组织中环氧合酶－2的表达在不同肿瘤分化程度及是否有淋巴结或远处转移中的差异有显性意义（P＜0．05）。结论：环氧合酶－1蛋白在肝外胆管癌组织中为结构性表达，其表达与胆管癌的形成无关；环氧合酶－2蛋白在肝外胆管癌组织中为诱导性表达，其表达上调与肝外胆管癌的形成关系密切，并与肿瘤分化程度及是否有淋巴结或远处转移有关，其在胆管癌的发生发展中可能起一定作用，提示环氧合酶－2选择性抑制剂非类固醇类抗炎药在胆管癌高危人群中的化学预防可能有效。     

MGMT、K-ras在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的 探讨DNA修复酶06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）及癌基因K—ras在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与肺癌发生、发展的关系。方法 采用免疫组化SABC法,检测60例手术切除、病理证实的非小细胞肺癌病人癌及癌旁组织中MGMT、K—Fas的表达。结果 60例外科手术切除的非小细胞肺癌组织中,MGMT蛋白的阳性表达率为33％,明显低于（P〈0．05）其在癌旁组织中的表达率（63％）;K—ras蛋白的阳性表达率63％,明显高于（P〈0．05）其在癌旁组织中的表达率（30％）。MGMT蛋白在NSCLC中的阳性表达率与肿瘤的P—TNM分期、淋巴结转移、吸烟史有关（P〈0．05）;与患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度及肿瘤的大小无关（P〉0．05）。K—ras蛋白在NSCLC中的阳性表达率与肺癌的组织学类型、肿瘤的大小、淋巴结转移、吸烟史有关;与患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度及P—TNM分期无关（P〉0．05）。结论 在NSCLC中,MGMT蛋白的表达与K—ras蛋白的表达呈负相关,提示MGMT表达缺失可能导致癌基因K—ras激活,并与肺癌的发生、发展相关。K—ras蛋白表达与吸烟有关,并在腺癌中高表达,提示K—ras可能为烟草致癌的靶基因及肺腺癌癌变的关键基因。联合监测两种蛋白可能对肺癌的辅助诊断有一定意义。     

ras基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化的关系研究

【目的】探讨ras 基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化之间的关系。【方法】采用聚合酶链反应—单链DNA 构象多态性分析法,对30 例侵蚀性葡萄胎石蜡包埋组织Haras 基因Exon Ⅰ突变情况进行了检测。【结果】侵蚀性葡萄胎组织分化Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级,Haras 基因第一外显子点突变率依次为15 .4 % ,40 .0 % ,71 .4 % ,经秩和检验,差异有显著性( P< 0 .01) 。【结论】ras 基因突变与侵蚀性葡萄胎恶性程度有关,恶性程度越高,ras 基因突变率越高;提示ras 基因突变对疾病预后有负影响。     

中国人群Kell血型K阳性的分子特征及分型试剂盒的研制和应用

目的 了解中国人群Kell血型中K＋型的分子生物学特征，并研制序列特异性引物-聚合酶链（PCR-SSP）试剂盒，为制订血型检测策略提供依据。方法 测序分析血清学鉴定K＋标本，确定K＋突变类型，根据突变类型分别设计K、k基因型的特异性引物，研制PCR-SSP扩增试剂盒，同时分析100名上海地区献血者、23名外籍献血者、72名新疆地区维吾尔族献血人群的K／k基因型，并随机抽取阳、阴性标本进行测序。结果 血清学鉴定为K＋的突变类型为C698T突变；经研制的K／kPCR-SSP试剂盒可以特异性扩增K基因和k基因。1例新疆标本基因型为K＋k＋；3例外籍献血者标本基因型为K＋k＋，其余均为K-k＋。结论 本研究中所有中国人K＋的分子生物学特征与西方人一致，经研制的PCR-SSP试剂盒可直观有效地检测KELK／k基因型。不同种族、不同地区献血者K＋频率的差异有显著性，制订相关检测法规或条例时应有所考虑，建议外国人献血、产前检查时加做K＋检测。     

湘潭地区乙型肝炎病毒基因型与YMDD基因区序列突变及BCP区突变关系探讨

【目的】对湘潭地区HBV感染者的基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变情况及关系进行探讨。【方法】对952例不同类型的HBV感染者的样本同时进行基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变检测和分析。【结果】湘潭地区HBV各种基因型分布比例为：B型占73．32％,C型占12．08％,B、C型混合感染14．60％。YMDD基因区序列突变结果显示：YMDD野生型,占88．66％,其余为YMDD突变型。BCP区突变结果显示：1762A／1764G（野生型）占70．59％,1762T／1764A（突变型）占19．75％,其余为混合型。基因型、相关性分析显示：HBVB型和C型YMDD基因区序列突变率无显著性差异（P〉0．05）,序列突变类别存在显著性差异（P〈0．05）,HBVC型YVDD突变率要高于B型。C型BCP区突变率要高于B型（P〈0．01）。HBV YMDD野生型和突变型的BCP区突变率存在显著性差异（P〈0．01）,HBV YMDD突变型标本BCP区突变率与YMDD野生型相比无差异,但YVDDBCP区突变率要高于其他类别。【结论】①湘潭地区流行的HBV基因型主要为B型和C型,其中B型为优势基因型,具有南方地区的特点。②拉米夫定治疗前通过HBV基因型检测来预测抗病毒应答可能并无实际意义。③HBV基因分型、YMDD基因区序列突变、BCP区突变检测的应用,将有助于临床上对乙肝患者的预后和转归进行正确评价。     

显微解剖联合PCR-SSCP在胆囊癌前病变基因变异研究的应用

目的　研究慢性胆囊疾患胆囊上皮细胞K ras、P5 3基因变异情况 ,进行癌前病变的预测和监测。方法　取手术切除慢性胆囊疾患的胆囊 ,福尔马林固定、石蜡包埋连续切片 ,HE染色 ,显微镜下微解剖选取癌前病变部位 ,立体显微镜下回收组织细胞 ,抽提DNA行K ras、P5 3的PCR SSCP分析。结果　检测 11例 ,9例K ras基因有变异 ,其中ex on 1变异 7例 ,exon 1和exon 2变异 2例 ;P5 3基因的exon 5～ 9未检测到变异。结论　采用显微解剖并PCR SSCP分析可进行胆囊癌前病变基因变异研究 ,实现癌前监测 ,适时确立手术时机 ,对胆囊癌的防治具有重要意义     

超声对胆管癌分期诊断探讨—关于胰腺、十二指肠浸润诊断

目的：为探讨体表超声判断胆管癌浸润胰腺、十二指肠的可能性、诊断标准及诊断率，并完善胆管癌超声分期研究。方法：观察肿瘤的发生部位，与胰、十二指肠的边界关系等，分析３５例手术病理确诊的下段胆管癌（包括壶腹癌１８例）对周围组织浸润的诊断结果。结果：确定了超声对胆管癌浸润胰腺的诊断标准，分为Ｐａ１－Ｐａ３三个程度。另确定了超声对胆管癌浸润十二指肠的诊断标准，分为Ｄｕ（－）、Ｄｕ（＋）两个程度。对照手术及病理结果，超声对胰腺浸润诊断正确率达７４％；对十二指肠浸润诊断正确率仅为３５％。结论：超声对胆管癌胰腺浸润的诊断率较高，对十二指肠浸润诊断有一定局限性。     

560例中国结直肠癌患者K-ras基因突变研究

目的探讨结直肠癌患者K-ras基因突变状态并为个体化治疗提供指导。方法采用嵌套和COLD-PCR的方法分析560例结直肠癌患者K-ras基因突变状态。结果 560例患者K-ras基因总体突变率27.08%,128例血浆标本突变率为0,432例组织标本突变率为27.08%。突变类型包括G12S、G12C、G12D、G12A、G12V、G13R、G13C、G13D、Q61K、Q61L,2种不同K-ras基因突变率比较,差异有统计学意义(P0.000 1)。362例男性患者的突变率为20.44%,包括G12S、G12C、G12D、G12V、G13R、G13C、G13D、Q61K、Q61L;198例女性患者的突变率为21.72%,包括G12S、G12C、G12D、G12A、G12V、G13R、G13D,不同性别间K-ras基因突变率比较,差异无统计学意义(P=0.722 7)。80例年轻患者的突变率为20%,包括G12S、G12C、G12D、G12V、G13D;127例中年患者的突变率为33.07%,包括G12S、G12D、G12A、G12V、G13R、G13C、G13D、Q61K、Q61L;353例老年患者的突变率为16.71%,包括G12C、G12D、G12V、G13R、G13D,不同年龄间K-ras基因突变率比较,差异有统计学意义(P=0.000 5)。结论 560例结直肠癌患者K-ras基因突变类型主要为G12D、G12V、G13D,K-ras基因突变在不同标本类型、不同年龄间存在差异,不同性别间无差异。