雌激素对诱发自身免疫性甲状腺炎影响的实验研究

目的自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)的发病,女性多于男性,育龄期女性对AITD的易感性更高于男性,存在明显的性别差异.本文研究女性激素中的雌激素对诱发实验性自身免疫性甲状腺炎(experiment autoimmune thyroiditis,EAT)形成的影响,探讨雌激素在AITD发病机制中的作用.方法选用Wistar大鼠,雌性,10周龄.大鼠随机分为4组①切除大鼠的双侧全部卵巢(OVX),高碘(HI)饮食喂养,诱发EAT为OVX-HI-EAT组;③高碘饮食喂养,诱发EAT为HI-EAT组;③高碘饮食对照组(HI组);④适碘饮食正常对照组(NI组).适碘饮食是用低碘饲料(碘含量≤35μg/kg)加适碘水(含KI为0.3 mg/L)喂养,高碘饮食用低碘饲料加高碘水(含KI为15mg/l)喂养,EAT的诱发采用同种属不同品系的SD大鼠甲状腺球蛋白(Tg)加完全福氏佐剂(complete freund's adjuvant)免疫Wistar大鼠(Tg每次1 mg,每周2次,共3次),诱发EAT的形成,末次免疫的4周后,处死全部大鼠.各组均检测血清中雌二醇(Eα-17β)和泌乳素(PRL)水平,观察甲状腺组织炎细胞浸润程度和炎症反应,测定血清Tg抗体水平.并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测甲状腺组织中干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-10(IL-10)mRNA的表达水平.结果去卵巢高碘饮食诱发EAT(OVX-HI-EAT)组大鼠血清中E2-17β(17.60±1.03)pmol/L和PRL(2.45±0.15)μg/L水平均明显低于未切除卵巢的高碘饮食诱发EAT(HI-EAT)组、高碘饮食(HI)组和适碘饮食对照(NI)组,P＜0.01.OVX-HI EAT组诱发EAT的发病率和甲状腺的炎细胞浸润程度(10例中,甲状腺炎细胞浸润1例为"++",5例为"+")明显低于HIEAT组(8例中甲状腺炎细胞浸润5例为"++",2例为"+").甲状腺组织中Th1细胞因子IFN-γmRNA的表达水平,OVX-HI-EAT组为0.87±0.03(细胞因子/β-actin)低于HI-EAT组(0.99±0.002),P＜0.05.OVX-HI-EAT组Th2细胞因子与IL-10mRNA的表达水平为0.98±0.009(细胞因子/β-actin)高于HI-EAT组(0.83±0.05),P＜0.05.诱发EAT大鼠血清中Tg自身抗体的水平明显高于未诱发EAT组大鼠.结论雌激素水平低下可减少或缓解EAT的发病率和甲状腺的炎症反应,高水平雌激素是构成女性对AITD易感的重要因素,雌激素水平低下致Th1细胞偏于Th2细胞可能是EAT发病率和甲状腺炎症反应得以缓解的主要机制.     

泌乳素对诱发自身免疫性甲状腺炎影响的实验研究

目的 观察和研究泌乳索在诱发实验性自身免疫性甲状腺炎形成中的影响。方法 采用SD大鼠在溴隐亭的干预条件下，诱发实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)，观察大鼠甲状腺组织的病理改变和血清中Tg自身抗体、泌乳露水平及脾脏中的IL—2／IL—2RmRNA的表达。结果 大鼠经溴隐亭干预，诱发的实验性自身免疫性甲状腺炎发病率和甲状腺组织中的炎细胞浸润程度、炎症反应均较未经溴隐亭干预直接诱发EAT组(HI—EAT组)明显减轻，血清中Tg自身抗体平均水平明显高于未诱发EAT大鼠。结论 大鼠经溴隐亭干预，血清中泌乳素水平低下，致IL—2／IL—2RmRNA的表达减少，降低IL—2／L—2R系统对免疫应答的激活作用，其EAT的发病率和甲状腺组织中炎症反应得到缓解，高泌乳素血症也是自身免疫性疾病发病机制中的重要因素。     

碘对诱发实验性自身免疫性甲状腺炎形成的影响

目的建立诱发型实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)动物模型,研究碘对诱发EAT形成的影响,进一步探讨其可能的作用机制。方法:采用雌性Lewis大鼠诱发EAT并饲以不同碘含量的饮食,观察各组大鼠甲状腺病理改变、血清中Tg自身抗体水平、血清中甲状腺激素水平、脾细胞分泌TNF水平和甲状腺FasmRNA表达水平。结果1.诱发EAT的HI组大鼠炎症范围较广,为较重度炎症。NI组显示为轻度炎症,且为恢复期。LI组显示为滤泡内少量淋巴细胞浸润。2.诱发EAT的HI、NI和LI组大鼠血清中均出现较高水平的Tg自身抗体,3组间无显著性差异。3.诱发EAT的HI组大鼠脾细胞分泌TNE水平高于NI和LI组(P<0.05)。4.诱发EAT的HI、NI和LI组大鼠甲状腺FasmRNA的表达水平均较各自未诱发EAT的大鼠明显升高,其中HI组高于同组的NI和LI组,P<0.01。结论1.高碘饮食可使已诱发EAT的Lewis大鼠甲状腺组织炎症加重且炎症反应持续时间较长,考虑与脾细胞分泌的TNF水平和甲状腺FasmRNA的表达水平较高有关。2.未发现甲状腺组织炎症的程度与自身抗体水平相关。     

泌乳素对诱发自身免疫性甲状腺炎影响的实验研究

目的临床上可观察到有时自身免疫性甲状腺炎常伴有高泌乳素血症,产后甲状腺炎也有较高的发病率(5%～10%).本实验研究泌乳素在诱发实验性自身免疫性甲状腺炎(experiment autoimmune thyroiditis,EAT)形成中的影响,进一步探讨泌乳素在自身免疫性甲状腺炎发病中的作用机理.方法选用SD大鼠,雌性,10周龄.大鼠随机分为4组,即SD大鼠在实验的全过程用溴隐亭(Br)灌胃(每只大鼠溴隐亭灌胃量为1mg·kg-1·d-1),诱发EAT,高碘(HI)饮食喂养为Br-HI-EAT组;SD大鼠高碘饮食喂养,诱发EAT为HI-EAT组;高碘饮食对照组(HI组);适碘(NI)饮食正常对照组(NI组).适碘饮食是用低碘饲料(碘含量≤3 5μg/kg)加适碘水(含KI为0.3mg/L)喂养,高碘饮食用低碘饲料加高碘水(含KI为30g/L)喂养.EAT的诱发采用同种属不同品系的Wistar大鼠甲状腺球蛋白(Tg)加完全福氏佐剂(completefreunds adijuvant)免疫SD大鼠(Tg每次1mg,每2周1次,共进行3次)诱发EAT的形成,末次免疫的4周后,处死全部大鼠.各组均观察其大鼠甲状腺组织的病理改变和血清中Tg自身抗体、泌乳素水平及脾脏中的白细胞介素-2/白细胞介素-2受体(IL2/IL-2R)mRNA的表达.结果大鼠经溴隐亭干预后,诱发EAT的高碘饮食(Br-HI-EAT)组,其血清中泌乳素水平为(2.32±0.096)μg/L低于诱发EAT的高碘饮食(HI-EAT)组(3.56±0.048)μg/L,P＜0.05.Br-HI-EAT组的发病率和甲状腺组织的炎细胞浸润(8例中有2例为"++",3例为"+",5例为"-")明显的轻于HI-EAT组(7例中2例为"+++",1例为"++",4例为"+");未诱发EAT的高碘饮食正常对照组(HI组)和正常对照组(NI组)的甲状腺组织中,未发现明显的炎细胞浸润;BR-HI-EAT组大鼠脾脏IL-2和IL-2RmRNA的表达分别为0.27±0.027和0.48±0.039(细胞因子/β-actin)也较HI-EAT组(0.60±0.013和0.75±0.018)明显降低(P＜0.01);诱发EAT两组大鼠血清中Tg自身抗体平均水平明显高于未诱发EAT大鼠(P＜0.01).结论大鼠经溴隐亭于预,致血清中泌乳素水平下降,其IL-2/IL-2RmRNA的表达也随之减少,降低IL-2/IL-2R系统对免疫应答的激活作用,其EAT的发病率和甲状腺组织中炎症反应得到缓解,可以认为泌乳素水平的变化也是影响自身免疫性疾病发病机制中的重要因素.     

瘦素对实验性自身免疫性甲状腺炎影响的实验研究

目的研究瘦素在诱发实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）形成中的影响。方法采用C57BL／6J小鼠在外源性瘦素干预下诱发EAT，观察小鼠甲状腺组织病理改变、淋巴细胞增殖水平、脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平以及血清中甲状腺过氧化物酶抗体（TPO—Ab）、甲状腺球蛋白抗体（Tg—Ab）和瘦素水平。结果小鼠经外源性瘦素干预后，其血清中瘦素水平高于EAT组和对照组，实验性自身免疫性甲状腺炎的发病率和甲状腺组织中炎细胞浸润程度也较直接诱发EAT组明显增高。诱发EAT两实验组间比较，脾细胞增殖水平未见明显差异，但瘦素干预组脾细胞培养上清中IFN-γ水平较EAT组明显升高（P=0．000），而IL-4水平则低于EAT组（P=0．000）。两实验组小鼠血清中TPO—Ab和Tg—Ab水平均明显高于未诱发EAT对照组，但两组间比较均未见明显差异。结论瘦素的前炎症作用在实验性自身免疫性甲状腺炎的发生、发展中有重要免疫调节作用。     

碘对易感性不同大鼠诱发自身免疫性甲状腺炎的影响

目的研究碘对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)易感性不同大鼠诱发EAT的影响,进一步探讨碘和易感性在自身免疫性甲状腺炎(AT)发病中的影响。方法采用猪甲状腺球蛋白(Tg)对不同碘摄入量的Lewis大鼠(EAT易感品系)和Wistar大鼠(EAT非易感品系)进行免疫,诱发EAT形成。观察大鼠甲状腺组织的病理改变和炎细胞浸润程度,用放射免疫分析法检测血清中Tg鄄Ab、TPO(甲状腺过氧化物酶)鄄Ab和甲状腺激素(TT3、TT4)水平。结果①诱发EAT的各组大鼠甲状腺组织均有不同程度的炎细胞浸润,不同碘水平的Lewis大鼠诱发EAT的甲状腺炎症反应均重于诱发EAT的Wistar大鼠,且甲状腺的炎症反应随碘摄入量的增加而加重。②诱发EAT的Lewis大鼠TPO鄄Ab水平明显高于Wistar大鼠各EAT组(P<0.01)。Tg鄄Ab和TPO鄄Ab水平随着碘摄入量的增加亦有升高的趋势。③100倍碘水平的各组T4水平下降(P<0.05),各组的血清T3水平比较差异无统计学意义。结论①EAT易感的Lewis大鼠诱发EAT的甲状腺炎症反应和血清中TPO鄄Ab水平均明显高于EAT非易感的Wistar大鼠。②碘摄入量的增加明显加重EAT的炎症反应,在EAT易感的Lewis大鼠中表现更为明显。③诱发EAT大鼠的甲状腺组织炎症程度和TPO鄄Ab水平相一致。因此,可认为TPO鄄Ab与EAT的发生、发展及甲状腺病变程度的关系更     

肾上腺功能低下与自身免疫性甲状腺炎易感性的实验研究

目的研究肾上腺功能低下与自身免疫性甲状腺疾病(AITD)易感性的关系及外环境因素中的碘对易感和非易感个体诱发AITD的影响,并探讨其发病机理.方法选用Wistar大鼠,雌性,8周龄.大鼠随机分为6组①切除大鼠1+2/3侧肾上腺(ADX),模拟肾上腺功能低下或不全,高碘(HI)饮食喂养,诱发实验性自身免疫性甲状腺炎(experiment autoimmune thyroiditis,EAT),为去肾上腺高碘饮食EAT诱发组(ADX-HI-EAT组);②去肾上腺(ADX),适碘(NI)饮食喂养,诱发EAT为ADX-NI-EAT组;③适碘(NI)饮食喂养,诱发EAT为NI EAT组;④去肾上腺(ADX),高碘饮食对照组(ADX-HI组);⑤去肾上腺(ADX)适碘饮食对照组(ADX-NI组);⑥适碘饮食正常对照组(NI组).适碘饮食是用低碘饲料(碘含量≤35 μg/kg)加适碘水(含KI为0.3mg/L)喂养,高碘饮食用低碘饲料加高碘水(含KI为0.3mg/L)喂养,高碘饮食用低碘饲料加高碘水(含KI为30g/L)喂养.EAT的诱发采用同种属不同品系的SD大鼠Tg加完全福氏佐剂(freunds complete adjuvant)免疫Wistar大鼠(Tg每次2mg,每2周1次,共3次)诱发实验性甲状腺炎(EAT)的形成,末次免疫的4周后,处死全部大鼠.各组均观察其大鼠的发病率和甲状腺组织炎症反应,检测Tg自身抗体和Th1/Th2型主要细胞因子干扰素γ和白细胞介素-4(IFN-γ和IL-4)mRNA表达水平,同时还检测免疫应答协同刺激分子CD86mRNA的表达.结果 EAT非易感的Wistar大鼠切除大部分肾上腺后,促腺上腺皮质激素(ACTH)刺激实验证实肾上腺皮质储备功能较正常对照组明显低下(P＜0.01).切除肾上腺高碘饮食诱发EAT(ADX-HI-EAT)组的甲状腺组织炎细胞浸润明显和炎症反应较重,14例中2例为甲状腺组织炎细胞浸润为"+++",3例为"++",5例为"+",无炎细胞浸润者为4例.次之是去肾上腺适碘饮食诱发自身免疫性实验性甲状腺炎组(ADX-NI-EAT),10例中1例为"+++",2例为"++",2例为"+",无炎细胞浸润者为5例.适碘饮食诱发EAT(NI-EAT)组,8例中7例无炎细胞浸润,仅1例为"±".切除肾上腺高碘饮食对照组(ADX-HI)、切除肾上腺适碘饮食对照组(ADX-NI)和正常对照组(NI)大鼠甲状腺,均未发现明显的炎细胞浸润.大鼠切除肾上腺给予高碘饮食其EAT的发病率和甲状腺炎症反应较未切除肾上腺适碘组明显增加.ADX-HI-EAT和ADX-NI EAT组大鼠甲状腺组织中IFN-γmRNA表达水平分别为0.85±0.057和0.78±0.067(细胞因子/β-actin)明显高于NI-EAT、ADX HI、ADX-NI和NI组(P＜0.01).结论肾上腺功能低下或不全是构成EAT易感性的重要因素,高碘饮食会明显地增加易感大鼠(肾上腺切除)的发病率和甲状腺炎症反应.体内CD4+Th细胞向Th1细胞偏移,Th1/Th2型细胞群的失衡在EAT的发病机理中具有重要作用.     

碘过量和甲状腺球蛋白免疫诱发NOD小鼠甲状腺炎的病变特征

目的 观察碘过量和甲状腺球蛋白(Tg)免疫诱发甲状腺炎的病变特点,进一步了解碘过量在自身免疫性甲状腺炎发病中的作用机制.方法 选用NOD小鼠,饮0.05%碘化钠(NaI)水和(或)Tg皮下免疫.观察甲状腺形态学改变和细胞凋亡情况;检测血清中TT4、TSH、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平;检测颈部淋巴结和脾脏淋巴细胞对Tg刺激的增殖反应和脾脏细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)和1γ-干扰素(IFN-γ)水平;实时荧光定量PCR法检测甲状腺绀织内IL-4、IFN-γ、趋化冈子配体10(CXCL10)、细胞间黏附因子1(ICAM-1)mRNA的表达.结果 碘过量组甲状腺滤泡扩张、胶质潴留;大昔淋巴细胞浸润和结构破坏;滤泡上皮细胞凋亡数量增加(34.66±2.78//vs 5.1 1±0.62,P<0.01);总T4下降、TSH升高,无自身抗体产生;淋巴结和脾脏细胞对Tg刺激增殖实验呈阳性反应.脾脏细胞上清中IL-4水平无升高,而IFN-升γ高[(1.272±0.049 vs 1.139±0.025)ng/L,P<0.01];甲状腺组织中除了IL4外,IFN-γ、CXCL10、ICAM-1 mRNA表达升高(均P<0.01).而Tg组甲状腺内有少量散在淋巴细胞浸润,产生了甲状腺自身抗体,脾脏细胞上清中IL-4水平升高[(18.508±0.113绑13.368±0.016)ng/L,P<0.01].碘和Tg联合作用炎症反应加重.结论 碘过量所致的NOD小鼠甲状腺炎主要是以Th1反应为主的器官特异性自身免疫性疾病.碘过量联合Tg免疫对诱发实验性自身免疫性甲状腺炎具有协同作用.     

3种诱导自身免疫性甲状腺炎动物模型的效果比较

目的 采用3种诱导方法建立小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)动物模型，比较其成功性和效果及实验方法的简易程度。为自身免疫性甲状腺疾病发病机理的深入研究和探讨，提供较理想的EAT动物模型。方法 采用①同种不同系的甲状腺球蛋白(Tg)与完全福氏佐剂(Complete freund’s adjuvant，CFA)免疫实验动物。②同种不同系的甲状腺组织移植入实验动物腹腔中。③同种不同系Tg致敏的淋巴细胞被动转移给同系实验动物，分别诱发EAT动物模型，同时设立正常小鼠作为对照组。4周后，观察甲状腺组织病理改变和检测血清中Tg抗体水平等。结果 Tg CFA组小鼠血清中的自身Tg-抗体水平与正常未免疫组比较，高出约5倍之多，其甲状腺组织亦发生明显的炎症反应，淋巴细胞浸润指数≥2为5例，为本实验组例数的50％。其它2种方法诱发小鼠EAT的实验组中，其甲状腺组织未发现明显的炎症反应和炎细胞浸润。结论 根据形成EAT的2个标准即自身Tg-抗体水平和甲状腺组织淋巴细胞的浸润程度，比较3种诱发小鼠EAT实验方法，可以认为采用Tg cFA免疫动物，建立EAT动物模型有较高的成功性和可靠性，且诱导EAT的实验方法较简单，易行。可为自身免疫性甲状腺疾病发病机理的实验研究提供较满意的动物模型。     

干扰素γ、白细胞介素12及腺苷脱氨酶同工酶对结核性胸腔积液的诊断价值

目的　研究胸腔积液中干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素 12 (IL 12 )的浓度及腺苷脱氨酶同工酶 (ADA2 )的活性三者在结核性胸腔积液诊断中的临床价值。方法　以 2 0 0 2年 3月～ 2 0 0 3年2月期间在北京大学人民医院、北京胸科医院、北京结核病胸部肿瘤研究所等医院的未经治疗的胸腔积液患者为研究对象 ,其中结核性胸腔积液 14 1例、恶性胸腔积液 4 9例。应用酶速率法检测胸腔积液标本中腺苷脱氨酶 (ADA)、ADA2 的活性 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测IFN γ和IL 12的浓度。比较两组胸腔积液中ADA和ADA2 活性 ,以及IFN γ和IL 12浓度之间的区别。结果　 (1)结核性胸腔积液组ADA、ADA2 活性分别为 (5 1 6± 10 9)U/L和 (4 7 9± 6 9)U/L ,恶性胸腔积液组ADA、ADA2 活性分别为 (2 0 4± 4 4 )U/L、(13 2± 3 2 )U/L ,结核性胸腔积液组的ADA、ADA2 活性显著高于恶性胸腔积液组 (P <0 0 1)。结核性胸腔积液组IFN γ和IL 12浓度分别为 (112 1± 4 5 8)ng/L及 (10 4 3± 32 3)ng/L ,恶性胸腔积液组IFN γ和IL 12浓度分别为 (2 4 8± 5 9)ng/L和 (6 1 8±10 8)ng/L ,结核性胸腔积液组的IFN γ和IL 12浓度水平显著高于恶性胸腔积液组 (P <0 0 1,0 0 5 ) ;(2 )ROC曲线分析结果 ,IFN γ以 6 1 7ng/L为诊