卡介苗多糖核酸对过敏性支气管哮喘外周血单个核细胞TH1/TH2反应的作用

目的观察卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)对支气管哮喘患者外周血淋巴细胞TH1/TH2反应的作用,并与结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)进行比较. 方法缓解期过敏性支气管哮喘患者16例,对照组健康成人13例,分离外周血单个核细胞(PBMC),分别加入不同浓度的BCG-PSN(1、10、100、1000 μg/ml)、TB-PPD(10 μg/ml)、尘螨抗原(DerP, 10 μg/ml)体外培养4 d,不加刺激剂者为阴性对照.收集培养上清,ELISA检测IFN-γ、IL-5浓度的变化. 结果 PSN(1～100 μg/ml)刺激正常人PBMC分泌IFN-γ水平均高于哮喘患者(P＜0.05).BCG-PSN(10 μg/ml)可以刺激哮喘患者PBMC分泌IFN-γ(358.7 pg/ml,范围0～2433.0 pg/ml),但显著低于同等浓度的TB-PPD刺激作用(13 036 pg/ml,范围600.5～35 100.0 pg/ml,P＜0.01).PSN刺激PBMC分泌IFN-γ呈浓度依赖性,当浓度达到100 μg/ml时,与低浓度相比刺激作用显著增强(P＜0.01),与TB-PPD的刺激作用类似.DerP刺激哮喘患者PBMC分泌IL-5水平显著高于正常人(P＜0.05).BCG-PSN刺激PBMC分泌IL-5的作用较弱,显著低于TB-PPD和DerP的刺激作用. 结论 BCG-PSN具有一定的TH1刺激作用,但低于TB-PPD的刺激作用,有待对BCG-PSN组分进一步优化以增强疗效.     

4种中药提取物对尘肺结核患者感染的耐多药结核分枝杆菌感染小鼠细胞免疫的影响

目的 探讨猫爪草、苦参、夏枯草及狼毒4种中药提取物对尘肺结核患者感染的耐多药结核分枝杆菌(multiple drugs resistant bacillus tuberculosis,MDR-TB)感染小鼠免疫功能的调节作用.方法 采用MDR-TB菌液灌胃制备小鼠MDR-TB感染模型,将60只健康雄性小鼠随机分为6组,每组10只.正常组标准饲料喂养,模型组灌服生理盐水,其他4组分别灌服4种中药提取物,采用ELISA法检测小鼠血清中与结核免疫密切相关的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12含量的变化,同时分离出外周血单个核细胞( PBMC),抽提全部RNA,采用RT-PCR法检测PBMC中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12及颗粒裂解肽(GLS)的mRNA变化.结果 猫爪草、苦参、夏枯草及狼毒4组小鼠血清中的IFN-γ含量依次为(2.01 ±0.73) pg/ml、(1.92±0.56) pg/ml、(1.98±0.67) pg/ml和(1.94±0.59) pg/ml,IL-4为(6.01±1.46) pg/ml、(6.12±1.35) pg/ml、( 6.47± 1.46) pg/ml和(6.15±1.44)pg/ml,IL-10为(12.09±3.07) pg/ml、( 12.45±4.01) pg/ml、(12.13±3.43) pg/ml和(12.54±3.78)pg/ml,IL-12为(2.99±0.89) pg/ml、(2.75±0.84) pg/ml、(3.02±0.86) pg/ml和(2.89±0.75) pg/ml.与模型组比较,IFN-γ、IL-12含量明显升高,IL-4、IL-10含量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05),尤其以猫爪草提取物的调节作用最为显著;在mRNA表达水平上,4种中药提取物组小鼠PBMC中IFN-γ、IL-12、GLS表达明显升高,IL-4、IL-10 mRNA表达明显下降,差异有统计学意义(P＜O.05或P＜0.01).结论 4种中药提取物均可明显增强小鼠的细胞免疫功能,其对免疫的调节作用是在基因转录水平上发挥作用的,从而为临床应用治疗尘肺结核提供了理论依据.     

过敏原对支气管哮喘患者Th1/Th2作用影响的研究

目的：通过测定哮喘患者外周血及外周血单个核细胞（PBMC）受特异性过敏原刺激后细胞因子IFN-γ/IL-4、转录因子T-bet/GATA-3的表达变化,探讨Th1、Th2与过敏性哮喘之间的关系。方法：①采用ELISA法检测发作期过敏性哮喘患者血浆IFN-γ/IL-4及PBMC在粉尘螨（Df）刺激下产生IFN-γ/IL-4的水平,并以正常人为对照。②采用半定量RT-PCR反应检测过敏性哮喘患者PBMC受过敏原刺激前后T-betmRNA、GATA-3mRNA的表达水平,并以正常人为对照。结果：①哮喘患者血浆IL-4水平较正常人升高（P=0.0017）,IFN-γ与正常人无明显差异（P=0.7600）,IFN-γ/IL-4的比值显著低于正常人（P=0.0001）。②经过敏原刺激后,哮喘患者PBMC产生的IL-4、IFN-γ水平均较正常人显著升高（t=3.5644,P=0.0010;t=3.3500,P=0.0020）,但哮喘患者IFN-γ/IL-4的比值仍显著低于正常组（t=6.3640,P=0.0001）。③哮喘患者PBMC中GATA-3的表达量较正常人显著增高（t=2.2743,P=0.0280）,而T-bet的表达量与正常人比较无显著变化（t=0.3823,P=0.7044）,哮喘患者T-bet/GATA-3比值与正常人也未见显著差异（t=1.1152,P=0.2834）。④经过敏原刺激后,哮喘患者PBMC中T-bet、GATA-3表达水平较正常人显著增高（t=2.2982,P=0.0276;t=3.7887,P=0.0006）,但T-bet/GATA-3的比值与正常人比较仍无显著差异（t=1.1959,P=0.2491）。结论：在细胞因子及转录因子水平上,过敏性哮喘患者不仅存在着Th2反应增强,也存在着Th1反应的增强,因此用Th1/Th2平衡失调学说尚不能满意解释过敏性哮喘的发病机制。     

哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平及其功能初步研究

目的:观察哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平和功能状态,初步探讨Th17在儿童哮喘发病中的作用.方法:以正常儿童(对照组,n=20)为对照,流式细胞术(FCM)检测哮喘急性发作期患儿(哮喘组,n=26)外周血Th17以及Th1,Th2细胞百分率,ELISA方法检测外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清IL-17,IFN-γ以及血浆IL-17,IL-23,IgE水平.结果:(1) 哮喘组和对照组外周血CD4+T中CD4+IL-17+T比例[(1.25±0.66)% vs (1.27±0.66)%(P>0.05)];CD4+IL-4+T比例[(2.40±2.55)% vs(2.52±1.26)%(P>0.05)];两组比较无统计学意义.哮喘组CD4+IFN-γ+T比例低于对照组[15.79±7.48 vs 24.10±12.70(P<0.05)].(2) PHA活化的PBMC体外培养72 h上清中,哮喘组IL-17水平为17.53(0～245.57)ng/L,低于对照组101.74(25.12～500.60)ng/L(P<0.01);IFN-γ水平与对照组比较无统计学意义[3507±2788 ng/L vs 3027±2737 ng/L];两组血浆中IL-17均<2 ng/L,IL-23均<15 ng/L.(3) 哮喘组血浆总IgE 499.26(2.3～945.1)IU/mL,高于对照组54.57(1.7～318.26)IU/mL(P<0.001);IgE阳性(>150 IU/mL)和阴性(<150 IU/mL)哮喘患儿体外PBMC培养上清中IL-17,IFN-γ水平比较无统计学意义.结论:哮喘急性发作期患儿外周血Th1细胞以及PHA活化的IL-17表达水平降低,Th1水平和Th17功能异常的机制及其在儿童哮喘发病中的作用值得进一步研究.     

毛细支气管炎患儿血清IL-4,IgE测定及与哮喘的相关性研究

目的观察毛细支气管炎患儿血清IL-4,IgE的变化.方法测定36例支气管哮喘发作期,42例毛细支气管炎,36例支气管肺炎患儿血清IL-4,IgE水平.结果毛细支气管炎患儿血清IL-4,IgE水平(分别为141.67±44.97pg/ml,124.76±50.45IU/ml)介于哮喘组(分别为19I.64±38.87pg/ml,199.87±65.63IU/ml)与肺炎组(分别为55.44±27.96pg/ml,79.01±69.28IU/ml)之间,有显著性差异(P均＜0.01).结论毛细支气管炎和哮喘可能存在着相同或相似的免疫学发病机制.     

巨噬细胞瘤苗免疫调节作用的研究

目的 观察巨噬细胞肿瘤疫苗对细胞毒性T细胞（CTL）反应及Th1／Th2型细胞因子分泌的调节作用。方法 分别采用MTT法和比色法检测肿瘤细胞杀伤率和清液上乳酸脱氢酶（LDH）含量,采用Western印记法与ELISA法检测脾细胞内及分泌入培养上清的IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子。结果 巨噬细胞肿瘤疫苗接种组的淋巴细胞肿瘤细胞杀伤率与培养上清液LDH水平分别为（36．70±21．02）％和（0．29±0．15）U／ml,明显高于热灭活肿瘤细胞接种组、石蜡诱导的巨噬细胞接种组（P值均〈0．05）。肿瘤细胞冻融物刺激72h后,各组免疫小鼠的脾细胞内均可检测到IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子;同时巨噬细胞肿瘤疫苗接种组脾细胞培养上清中,IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ含量分别为（7．97±3．15）pg／ml、（0．44±0．11）pg／ml、（1．83±0．85）pg／ml和（9．16±4．64）pg／ml,IL-2、IFN-γ的水平均高于热灭活肿瘤细胞接种组和石蜡诱导的巨噬细胞接种组（P值均〈0．05）。结论 巨噬细胞肿瘤疫苗可诱导机体产生特异性抗肿瘤反应,能够促进Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌。     

广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平分析

目的分析广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平。方法随机抽取288例广州市妇女儿童医疗中心儿童院区健康体检的0～14岁儿童静脉抗凝血,经BCG刺激后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th1细胞因子(IFN-γ,TNF-α和IL-2)的水平,并用流式细胞术(FACS)检测IFN-γ和TNF-α的细胞来源。结果 BCG刺激可显著诱导儿童外周血细胞产生IFN-γ(median=726.37 pg/ml),TNF-α(median=934.98 pg/ml)和IL-2(median=48.25 pg/ml)。与不刺激组相比,差别具有统计学意义(n=288,P<0.001)。此外,IFN-γ的产生水平与年龄呈一定的正相关(r2=0.4069,P<0.05)。流式分析结果表明,BCG刺激可诱导CD4+T细胞和非CD4CD8细胞分泌IFN-γ或TNF-α,而不诱导CD8+T细胞产生细胞因子。经BCG刺激后,分别有35.71%和39.29%的儿童CD4+T细胞能够产生IFN-γ和TNF-α。结论广州市0～14岁儿童外周血细胞经BCG刺激后,主要是由CD4+T细胞和非CD4CD8细胞产生Th1细胞因子,但是CD4+T细胞能够产生Th1细胞因子的儿童比例较低,这可能是卡介苗接种免疫效果并不理想的原因之一。     

缬沙坦对原发性高血压患者外周PBMC中IL-17表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂缬沙坦对高血压患者外周血单核细胞中IL-17表达的影响。方法 选取2016年9月~2017年10月在我院收治的原发性高血压患者98例,将所有患者按照随机数字表法分为缬沙坦组和硝苯地平组,各49例,缬沙坦组患者使用缬沙坦治疗,硝苯地平组患者使用硝苯地平缓释片治疗,另选取健康体检者20例为正常组。采集患者治疗前及治疗4周后静脉血,分离PBMC体外培养5 h后用RT-PCR法测定IL-17 mRNA表达水平;培养上清液采用ELISA法测定IL-17浓度。结果 治疗4周后缬沙坦组与硝苯地平组血压变化比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;缬沙坦组治疗后PBMC中IL-17 mRNA表达及培养上清液中IL-17浓度分别为（0.29±0.09）,（76.16±20.56）pg/ml,低于硝苯地平组的（0.50±0.15）,（137.84±39.97)pg/ml,组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 缬沙坦可显著降低高血压患者PBMC中IL-17的表达,有助于延缓疾病发展。     

PI3K信号途径在哮喘患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的初步了解磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在急性发作期哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC)中的活化情况,并观察其特异性抑制剂(Wortmannin)对Th1、Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4表达的影响,探讨PI3K信号途径在哮喘T细胞免疫紊乱中可能的作用机制.方法以20例急性发作期哮喘患者作为实验组,15例健康人为对照组.PBMC提取采用Ficoll密度梯度离心法,半定量RT-PCR法测定PBMC中PI3KmRNA的表达,ELISA法测定不同浓度组Wortmannin处理的PBMC培养上清液中IFN-γ、IL-4水平.结果与对照组相比,急性发作期哮喘患者PI3KmRNA表达增高(P＜0.05).哮喘患者PBMC培养上清液IFN-γ水平低下、IL-4水平升高,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05和P＜0.01);同时加入不同浓度Wortmannin共培养后,实验发现均浓度依赖性地抑制了哮喘组及对照组IL-4的产生(P＜0.05或P＜0.01),而同组不同浓度梯度组间比较IFN-γ产生升高,但差异无统计学意义.结论哮喘患者急性发作时可能存在PI3K信号途径的过度活化,其过度活化对Th1型细胞因子IFN-γ影响不明显,有可能主要通过介导Th2型细胞因子IL-4的产生而参与Th1/Th2的失衡.     

屋尘螨特异性免疫治疗的哮喘患儿对尘螨过敏原免疫反应的变化

目的观察经屋尘螨特异性免疫治疗(SIT)的哮喘患儿对尘螨过敏原特异性免疫反应的变化。方法选取54例尘螨过敏性哮喘患儿,其中男性38例,女性16例;年龄6~11岁,平均年龄9岁1个月。27例经标准化屋尘螨过敏原皮下SIT疗程1.5~2.0年患儿作为SIT组,另27例未经SIT患儿作为对照组。应用最大呼气流量-容积曲线测定方法测定肺通气功能,参数为第1秒用力呼气容积(FEV1)占预计值百分比(FEV1%);应用荧光酶联免疫法测定2组患儿血清屋尘螨特异性IgE和特异性IgG4浓度;分离患儿外周血单个核细胞(PBMC),经质量浓度20μg/mL屋尘螨蛋白浸液刺激并培养48 h后,检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的相对数量和可分泌白细胞介素10(IL-10)的Treg细胞百分比;同时留取细胞培养上清液应用酶联免疫吸附分析检测细胞因子IL-4、干扰素-γ(IFN-γ)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平。结果 SIT组患儿肺功能FEV1%与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);SIT组IgG4水平显著高于对照组,差异有极显著统计学意义(P<0.000 1)。SIT组IgE水平与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);两组刺激后Treg细胞百分数分别与各自该组内未经刺激时基础水平的差异无统计学意义。两组间PBMC无论是否经屋尘螨蛋白浸液刺激时Treg细胞百分数的差异无统计学意义(P>0.05);SIT组刺激后Treg细胞百分数高于自身未经刺激基础水平1.56倍。对照组经刺激后与未接受刺激比较,Treg细胞百分数无显著变化;SIT组PBMC培养上清液中IL-4和TGF-β1浓度显著低于对照组,IFN-γ浓度显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论屋尘螨SIT的哮喘患儿对尘螨过敏原特异性免疫反应表现为Treg细胞比率增加,Th1/Th2免疫反应平衡改变,屋尘螨特异性IgG4浓度增高,提示发生对尘螨过敏原特异性免疫耐受的特征。     

血清MCP-1蛋白水平对肺癌及肺结核患者诊断的临床意义

目的 探讨MCP-1蛋白表达在肺癌及肺结核患者中的临床意义。方法 选取2017年1月~2018年12月我院呼吸科收治的40例肺癌及40例肺结核患者为研究对象,同时选取同期在我院体检健康人群40例为对照组,对比三组血清及PBMC上清液中MCP-1浓度及不同期、不同病理类型肺癌患者血清及PBMC上清液中MCP-1浓度和初治和复治肺结核血清及PBMC上清液中MCP-1浓度。结果 肺结核组及肺癌组血清及PBMC上清液中MCP-1浓度高于对照组,且肺结核组高于肺癌组,差异有统计学意义（P＜0.05）;晚期肺癌患者血清及PBMC上清液中MCP-1浓度分别为（152.71±12.56）pg/ml、（419.52±33.93）pg/ml,均高于早期肺癌患者的（73.21±7.90）pg/ml、（312.60±28.62）pg/ml,差异均有统计学意义（P＜0.05）;三种不同病理类型肺癌患者血清及PBMC上清液中MCP-1浓度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;肺结核复治患者血清及PBMC上清液中MCP-1浓度分别为（173.65±13.22）pg/ml、（520.11±67.28）pg/ml,高于肺结核初治患者的（156.21±9.13）pg/ml、（498.34±50.03）pg/ml,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 血清MCP-1蛋白水平于肺癌及肺结核的发生、病情发展有密切的关系,且随病情的进展会升高,临床可将其作为诊治的重要指标。     

IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-17A在肝癌组织中表达及其与乙肝病毒感染的关系

目的:研究Th17(IL-17A)在肝细胞癌发生发展中的作用,尤其与乙肝病毒感染的关系。方法:收集39例原发性肝细胞癌患者的癌与非癌组织,应用流式细胞微球阵列术(CBA)检测IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-17A细胞因子水平,并与患者临床资料进行统计比较分析。结果:肝癌组织中IL-2、IL-4、IFN-γ表达水平好[分别为(4.61±0.28)、(3.37±0.58)、(3.08±1.08)pg/ml]显著低于非癌组织[分别为(5.57±0.59)、(3.77±0.70)、(3.69±1.20)pg/ml],而IL-6、IL-17A水平[分别为(280.09±254.68)、(2.66±1.66)pg/ml]显著高于非癌组织[分别为(6.58±1.92)、(1.49±0.98)pg/ml],同时无论癌组织还是非癌组织,高乙肝病毒载量(>1 000 U/ml)的组织IL-17A的表达[(3.45±1.86)pg/ml]显著高于低病毒载量(<1 000U/ml)的组织[(1.97±1.16)pg/ml]。结论:Th17细胞分泌的细胞因子IL-17A在肝癌组织中高表达,IL-2、IL-4和IFN-γ可能抑制其表达,而IL-6可能促进其表达;乙肝病毒感染有可能促进Th17的表达,从而降低患者的预后。     

CpG ODN抑制EB病毒复制的体外研究

目的:探讨CpG寡脱氧核苷酸链(CpG ODN)体外对EB病毒(EBV)复制的抑制作用.方法:CpG ODN体外预处理人外周血单个核细胞(PBMC)后感染EBV,用荧光定量PCR和ELISA分别检测培养后PBMC中EBV拷贝数和培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)的水平,了解不同剂量、不同时间CpG ODN预处理PBMC中EBV复制和PBMC产生IFN-γ之间的关系.结果:(1)不同浓度CpG ODN预处理组的EBV拷贝数均低于未处理组( P <0.05),其中10 mg/L CpG ODN预处理组EBV拷贝数最低,为(3.85±0.37)×10 8基因拷贝/L;(2)CpG ODN预处理48 h组的EBV拷贝数(11.32±0.83)×10 8基因拷贝/L低于其余各预处理时间组的EBV拷贝数( P<0.05);(3)不同浓度CpG ODN预处理组培养上清液中的IFN-γ均高于PBMC组和PBMC+EBV组( P <0.05),其中 10 mg/L CpG ODN处理组IFN-γ量最高(66.27±6.29)ng/L;(4)CpG ODN预处理48 h的PBMC+CpG ODN+EBV组培养上清液中IFN-γ(51.74±4.09)ng/L高于其余各预处理时间组和PBMC组及PBMC+EBV组( P <0.05).结论:CpG ODN作为一种新型的免疫调节剂,在体外能有效抑制EBV复制,其作用机制可能与诱导PBMC产生IFN-γ有关.     

屋尘螨过敏性哮喘患者白介素-2和白介素-4血清水平及基因多态性

目的:检测分析屋尘螨过敏性哮喘患者白介素-2(IL-2)、IL-4血清水平及基因多态性。方法:首次诊断为屋尘螨过敏性哮喘患者73例(过敏性哮喘组),按其临床表现再分为急性发作期组(n=25)、慢性持续期组(n=23)和临床缓解期组(n=25),另选体检健康人群作为对照组(n=81)。采用ELISA检测各组血清IL-2、IL-4和屋尘螨特异性IgE(SIgE)水平,采用等位基因特异性PCR检测各组IL-2基因rs6534349和IL-4基因rs2227284的单核苷酸多态性(SNP)位点基因多态性。结果:血清IL-2水平在急性发作期组(170.58±29.08pg/ml)及慢性发作期组(179.45±45.34pg/m)均较对照组(227.45±43.34pg/ml)明显降低(P0.01);两组血清IL-4水平分别为98.45±28.85pg/ml和89.34±39.21pg/ml,均较对照组(68.41±30.01pg/ml)明显升高(P0.05);临床缓解期组血清IL-2和IL-4水平与对照组差异无统计学意义(P0.05)。血清SIgE水平在急性发作期组(21.27±2.96pg/ml)、慢性持续期组(19.45±10.38pg/ml)和临床缓解期组(18.34±4.21pg/ml)均明显高于对照组(8.90±4.00pg/ml)(P0.01)。SIgE水平变化与IL-2变化呈负相关(r=-0.421,P0.01),与IL-4变化呈正相关(r=0.522,P0.01)。基因多态性分析显示,过敏性哮喘组患者IL-2rs6534349中GG型明显低于对照组(P0.01),而IL-4rs2227284CC型明显高于对照组(P0.01)。结论:屋尘螨过敏性哮喘与其血清IL-2、IL-4水平及基因多态性具有一定关系。     

热灭活白念珠菌通过Dectin-1诱导外周血单个核细胞表达IL-12和IFN-γ

为研究Dectin-1在热灭活白念珠菌刺激外周血单个核细胞(PBMC)免疫应答中的作用。我们用不同浓度昆布多糖(Dectin-1封闭剂)与PBMC共培养1 h后,再用热灭活白念珠菌刺激PBMC 4 d;同时用不同剂量的Dectin-1激活剂酵母聚糖(zymosan)刺激PBMC 4 d,收集培养液上清,经ELISA检测IL-12和IFN-γ水平。结果发现,昆布多糖可以部分抑制热灭活白念珠菌刺激PBMC合成IL-12和IFN-γ的能力,酵母聚糖可以诱导PBMC合成IL-12和IFN-γ。因此,Dectin-1是介导热灭活白念珠菌诱导PBMC产生IL-12和IFN-γ的受体之一。     

IL-33增强体外培养的外周血单个核细胞细胞因子的分泌以及杀伤功能

目的探讨白细胞介素33(IL-33)是否能在体外增强外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子和杀伤功能。方法常规分离培养健康人PBMC,分别经CD3单克隆抗体(m Ab)/CD28mAb/IL-2、CD3mAb/CD28mAb/IL-2/IL-12、CD3mAb/CD28m Ab/IL-2/IL-12/IL-33三种组合刺激培养72 h,收集细胞。经实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(granzyme B)mRNA的水平;CCK-8法检测各组细胞对A549人肺腺癌细胞的杀伤活性;采用流式细胞术分析各组细胞IFN-γ、程序性死亡蛋白1(PD-1)的水平。结果各组因子组合刺激的PBMC,形态无明显差异;qRT-PCR检测发现,IL-33刺激组的PBMC中IFN-γ、granzyme B mRNA的水平升高;IL-33刺激组的PBMC对A549的杀伤能力更强;IL-33刺激组的PBMC中CD3+CD8+细胞亚群IFN-γ的水平升高、PD-1的水平降低。结论 IL-33能够在体外增强PBMC的效应功能。     

海洛因依赖者血清中Th1和Th2细胞产生主要细胞因子水平的研究

目的:通过检测Th1、Th2细胞产生主要细胞因子IFN-γ、IL-4在海洛因依赖者血清中水平的变化,为充分认识海洛因对机体免疫功能的影响提供依据。方法:93例海洛因依赖者按吸食海洛因时间长短分为三组(2年以内、5～10年、10年以上),31例正常人血清作为对照组,用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组人血清IFN-γ、IL-4水平。结果:各组海洛因依赖者血清细胞因子IFN-γ水平高于正常对照组(P0.05),而IL-4水平低于正常对照组(P0.05)。吸食海洛因2年到5-10年到10年以上,IFN-γ水平呈先高后低变化(108.52±25.84pg/ml、133.13±36.35pg/ml、113.4±38.17pg/ml),IL-4水平呈先低后高变化(129.18±83.42pg/ml、76.35±47.01pg/ml、139.74±111.37pg/ml)。结论:Th1、Th2细胞产生主要细胞因子IFN-γ、IL-4在海洛因依赖者血清中水平改变明显,证明海洛因依赖者存在Th1/Th2功能紊乱。特别是吸食5～10年间以Th1亢进,Th2降低为主。     

P13K信号途径在哮喘患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的：初步了解磷脂酰肌醇3激酶（P13K）在急性发作期哮喘患者外周血单个核细胞（PBMC）中的活化情况，并观察其特异性抑制剂（Wortmannin）对Th1、Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4表达的影响，探讨PI3K信号途径在哮喘T细胞免疫紊乱中可能的作用机制。方法：以20例急性发作期哮喘患者作为实验组，15例健康人为对照组。PBMC提取采用Ficoll密度梯度离心法，半定量RT-PCR法测定PBMC中PI3KmRNA的表达，ELISA法测定不同浓度组Wortmannin处理的PBMC培养上清液中IFN-γ、IL-4水平。结果：与对照组相比，急性发作期哮喘患者PI3KmRNA表达增高（P〈0．05）。哮喘患者PBMC培养上清液IFN-γ水平低下、IL-4水平升高，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05和P〈0．01）；同时加入不同浓度Wortmannin共培养后，实验发现均浓度依赖性地抑制了哮喘组及对照组IL-4的产生（P〈0．05或P〈0．01），而同组不同浓度梯度组间比较IFN-γ产生升高，但差异无统计学意义。结论：哮喘患者急性发作时可能存在PI3K信号途径的过度活化，其过度活化对Th1型细胞因子IFN-γ影响不明显，有可能主要通过介导Th2型细胞因子IL-4的产生而参与Th1／Th2的失衡。     

当归及其多糖对隐孢子虫感染小鼠的免疫调节作用

目的 探讨当归及当归多糖对隐孢子虫感染小鼠的免疫调节作用.方法 连续8 d灌服给小鼠醋酸地赛米松后,于第9 d经口接种1×10^6个隐孢子虫卵囊1次,建立隐孢子虫感染模型,再经当归水煎剂及当归多糖灌胃治疗10 d,计数粪便隐孢子虫卵囊,观察肠组织病理学改变,检测T细胞亚群和血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平.并设正常对照、模型对照和西药对照组.结果 与模型组比较,西药组、当归水煎剂组和当归多糖组小鼠卵囊排除数量减少（第4天分别为300个、50个、238个和230个）,肠组织病理学改变较轻,免疫学检测发现CD4^＋T细胞[分别为（38.85±8.16）%、（47.98±11.90）%、（55.85±6.63）%、（51.43±8.42）%]CD4^＋/CD8^＋[分别为1.98±0.47、2.25±0.53、2.51±0.55、2.42±0.23）]及IL-2的水平[分别为（28.75 4±1.93）pg/ml、（69.02±10.47）ps/ml、（42.91±4.48）pg/ml、（40.90±0.79）pg/ml]IL-4的水平[分别为（42.00±6.79）pg/ml、（64.26±6.07）pg/ml、（58.31±9.13）ps/ml、（54.95±8.99）pg/ml]和IFN-γ的水平[分别为（28.73±8.71）ps/ml、（45.40±6.11）pg/ml、（84.40±7.63）pg/ml、（78.40±6.32）pg/ml]明显升高（F值分别为13.58、19.37、24.22、54.36和35.74 P值均小于0.05）.结论 当归水煎剂和当归多糖通过增强机体免疫功能促进隐孢子虫感染的免疫抑制小鼠的恢复.     

类风湿关节炎T细胞亚群4-1BB的表达与其分泌TH1/TH2细胞因子的关系

目的探讨体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)T淋巴细胞上共刺激分子4-1BB的表达,及与其分泌T_H1/T_H2细胞因子的关系。方法应用流式细胞术检测体外培养的30例RA患者和20例正常对照者T细胞活化前后4-1BB的表达,并且应用ELISA方法检测培养上清液中IFN-γ、IL-4水平。结果RA患者CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB明显高于正常对照组(表达百分率分别为18.56%±4.08%和10.33%±2.13%;1.24%±0.12%和0.87%±0.09%,P<0.01),经抗CD3单抗体外刺激后CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB均显著高于活化前(表达百分率为33.21%±4.29%和21.35%±8.12%,P<0.01)。RA患者CD4~ T/CD8~ T比值明显升高,而且与4- 1BB~ CD4~ T细胞数呈正相关关系(r=0.84,P<0.01),RA患者T淋巴细胞培养液上清中IFN-γ、IL-4均高于正常对照组(P<0.05),经抗CD3单抗体外刺激后上清液中IFN-γ及Ib-4均明显高于活化前,以IFN-γ升高最为显著(P<0.01)。而且抗CD3单抗刺激前后4-1BB~ CD4~ T细胞数与培养上清液中IFN-γ水平均呈正相关关系(r=0.721,r=0.487,P<0.05)。结论类风湿关节炎患者T细胞表达的4-1BB在类风湿关节炎的发生发展中具有重要意义,4-1BB可能通过对CD4~ T细胞活化,促使T_H1细胞因子分泌,参与关节炎症和免疫损伤。