LFA-1共刺激诱导狼疮性肾炎外周血单个核细胞IL-1O表达的研究

目的:探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)对活动性狼疮肾炎(LN)外周血单个核细胞(PBMC)白介素10(IL-10)的调节作用.方法:利用半定量RT-PCR技术观察LFA-1共刺激对活动性LN患者PBMC IL-10 mRNA表达的影响.结果:单独抗CD3抗体(30 ng/m1)能诱导LN患者PBMC IL 10 mRNA轻微表达(0.43+0.03vs 0.55±0.44,P＜0.05)而在抗CD3抗体(30 ng/m1)存在的情况下,抗LFA-1抗体(2μg/m1,相当于LFA-1配体)共刺激时明显增加了PBMC IL 10 mRNA表达(1.31±0.08vs 0.55+0.04,P＜0.01).LFA-1中和抗体明显抑制了这种共刺激诱导的IL-10 mRNA表达(1.31±0.08vs0.64±0.03,P＜0.01).抗LFA-1抗体单独刺激时并不引起IL-10 mRNA表达变化(P＞0.05).结论:LFA-1作为共刺激分子诱导IL-10 mRNA表达可能是其参与LN发病的机制之一.     

LFA—1共刺激诱导狼疮性肾炎外周血单个核细胞IL—10表达的研究

目的探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)对活动性狼疮肾炎(LN)外周血单个核细胞(PBMC)白介素10(IL-10)的调节作用.方法利用半定量RT-PCR技术观察LFA-1共刺激对活动性LN患者PBMC IL-10 mRNA表达的影响.结果单独抗CD3抗体(30 ng/m1)能诱导LN患者PBMC IL 10 mRNA轻微表达(0.43+0.03vs 0.55±0.44,P＜0.05)而在抗CD3抗体(30 ng/m1)存在的情况下,抗LFA-1抗体(2μg/m1,相当于LFA-1配体)共刺激时明显增加了PBMC IL 10 mRNA表达(1.31±0.08vs 0.55+0.04,P＜0.01).LFA-1中和抗体明显抑制了这种共刺激诱导的IL-10 mRNA表达(1.31±0.08vs0.64±0.03,P＜0.01).抗LFA-1抗体单独刺激时并不引起IL-10 mRNA表达变化(P＞0.05).结论LFA-1作为共刺激分子诱导IL-10 mRNA表达可能是其参与LN发病的机制之一.     

狼疮肾炎患者白细胞介素13的血浆水平和基因表达

目的探讨狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞介素13(IL-13)mRNA表达及IL-13血浆水平变化及其意义.方法选择10名正常对照者和16名LN患者.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,对LN患者PBMCIL-13mRNA表达量进行分析.同时应用IL-13特异的酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-13血浆水平.结果LN患者PBMC中IL-13mRNA表达量及IL-13血浆水平均较正常对照组增高(IL-13mRNA表达量为1.99±0.29比0.68±0.15,P＜0.001IL-13血浆水平为68.8±14.65比25.92±7.60,P＜0.001).IL-13血浆水平与抗-dsDNA抗体滴度、血清C3浓度、血浆γ球蛋白水平、肾小球活动性指数(GAI)及肾小管间质活动性指数(IAI)均呈一定的等级相关关系(rs分别为0.757、-0.809、0.652、0.854和0.846,P均＜0.01).结论IL-13可能参与LN发病机制.IL-13基因表达及蛋白质分泌水平增高在LN活动性病变中起一定的作用.     

叶氏狼疮方诱导狼疮肾炎患者T细胞免疫耐受分子机制研究

目的：探讨叶氏狼疮方在诱导狼疮肾炎（lupus nephritis,LN）患者外周血T淋巴细胞免疫耐受中有无作用。方法：密度梯度离心法提取LN患者及健康对照外周血单个核细胞（PBMCs）,设立4个培养亚组：空白（blank）、植物血凝素（PHA）、狼疮方血清（lupus formula serum,LFS）、PHA＋LFS组。双色标记流式细胞术检测PBMCs及其条件培养后CD3＋T细胞表面分子CD28,CD40L,LFA-1a和CTLA-4的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析。结果：活动性LN组外周血T细胞表面CD28、CD40L、LFA-1a和CTLA-4表达水平较健康对照组明显上调（P均〈0.01）;PHA可诱导健康对照T细胞表面CD28和CD40L表达明显上调（P均〈0.01）,但对其CTLA-4和LFA-1a的表达无明显影响（P均〉0.05）;而PHA对活动性LN组外周血T细胞表面上述指标表达均有明显上调作用（P均〈0.05）;叶氏狼疮方对健康人外周血T细胞表面上述指标的表达无明显影响,但可逆转活动性LN患者外周血T细胞表面的CD40L、LFA-1a过度表达（P均〈0.05）,对其CD28和CTLA-4过度表达无明显影响（P均〉0.05）;且叶氏狼疮方对PHA所诱导的活动性LN患者外周血T细胞表面CD28、CD40L和LFA-1a表达增加亦有明显抑制。结论：叶氏狼疮方可能主要通过下调T细胞CD40L和LFA-1a表达水平来诱导LN患者外周T细胞免疫耐受重建。     

凝血酶对狼疮肾炎末梢血单个核细胞分泌Th1/Th2细胞因子的影响

目的探讨狼疮肾炎(LN)患者凝血活性对其Th1/Th2平衡的影响。方法LN患者20例,按红斑狼疮病情活动指数(SLEDAI)分为稳定组11例(SLEDAI<9分),活动组9例(SLEDAI≥9分)。健康对照组8例。采集末梢血单个核细胞(PBMC),进行高、低浓度凝血酶刺激下体外培养。ELISA法检测培养液上清IL-10、IFN-γ水平。RT-PCR检测IL-10和IFN-γmRNA表达。结果凝血酶呈浓度依赖性上调LN患者PBMCIL-10表达,但不影响IFN-γ表达,故增加IL-10/IFN-γ比值。结论凝血酶加重狼疮肾炎患者PBMC分泌Th1/Th2细胞因子的平衡紊乱。     

活动性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞钙调神经磷酸酶活性的检测及白细胞介素-4表达变化

目的：检测活动性狼疮肾炎（LN）患者外周血单个核细胞（PBMC）白细胞介素-4（IL-4）表达及其与钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）活性的关系。方法：体外培养活动性LN患者PBMC，应用发色底物法检测胞浆CaN活性，逆转录PCR检测IL-4mRNA表达。结果：（1）在单纯培养情况下，正常对照组和LN组PBMC均出现一定量CaN活化，活动性LN组显著高于正常对照组[（46．08±5．58）mmol／mg．pr vs（8．81±3．61）mmol／mg．pr，P〈0．01]；在PMA＋Ionomyci刺激下，各组CaN活性均升高，活动性LN组CaN活性明显高于正常对照组[（69．34±12．59）mmol／mg．pr vs（37．12±11．57）mmol／mg．pr，P〈0．01]；（2）LN患者PBMC在单纯培养和PMA＋Ionomycin刺激时IL-4蛋白和mRNA表达均显著高于相应的对照组（P〈0．05）；（3）在单纯培养和PMA＋Ionomycin刺激时，FK506对LNPBMC表达IL-4蛋白和mRNA均有显著抑制作用（P〈0．01）。结论：LN患者PBMC存在CaN过度活化；LN患者PBMC高效表达IL-4与其CaN过度活化密切相关，通过阻断CaN活性可调控IL-4表达。     

白细胞介素10基因转染对心脏移植排斥反应中细胞黏附分子表达的影响

目的探讨白细胞介素10(IL-10)基因转染对小鼠心脏移植排斥反应中细胞黏附分子CD44、选择素E、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法采用小鼠颈部心脏移植模型,将96只小鼠用随机数字表法分为3组,对照组:供、受者各16只,均为C57小鼠;移植组:供、受者各16只,分别为BALB/C、C57小鼠;IL-10组:供、受者各16只,分别为BALB/C、C57小鼠,用IL-10重组腺病毒载体先转染供心。3组均行颈部心脏移植。于术后第5 d取移植心脏,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察CD44、选择素E、LFA-1、VCAM-1及IL-10 mR-NA的表达情况。结果PCR产物电泳及条带密度扫描显示,移植组CD44、选择素E、LFA-1、VCAM-1与对照组比较表达明显增强(P<0.01);IL-10组与移植组比较表达明显降低(P<0.01)。结论IL-10基因转染对心脏移植排斥反应的免疫抑制作用可能与其抑制CD44、选择素E、LFA-1、VCAM-1等细胞黏附分子的表达有关。     

共刺激后淋巴细胞产生Th1/Th2细胞因子的变化及免疫抑制剂的影响

目的 探讨CD28、CD40通路共刺激后淋巴细胞产生Th1(IL-2、IFN-γ、IL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的变化及免疫抑制剂环孢素(CsA)、雷帕霉素(RPM)及霉酚酸(MPA)对共刺激通路激活后淋巴细胞产生Th1及Th2细胞因子的影响.方法采用单克隆抗体(mAb)与淋巴细胞表面CD3、CD28及CD40L分子结合产生相应刺激信号,单刺激及共刺激组分为:a组,CD3 mAb单刺激;b组,CD3 mAb加CD28 mAb共刺激;c组,CD3 mAb加CD28 mAb加CD40 L mAb共刺激;d组,CD3 mAb加CD28 mAb加CTLA4 mAb共刺激.各mAb的终浓度均为100 ng/ml.干预组分别将终浓度为300 ng/ml的CsA、RPM、MPA加入上述4组.ELISA法测定上述细胞培养上清中的细胞因子值.结果 a、b、c 3组IFN-γ分别为(248.91±11.20)、(555.08±24.42)、(548.19±33.06)ng/ml,IL-2分别为(29.48±8.61)、(1100.82±99.29)、(842.23±29.31)ng/ml,IL-4分别为(32.29±6.76)、(116.02±15.03)、(147.28±18.07)ng/ml,IL-10分别为(147.01±10.47)、(291.79±12.47)、(302.52±35.18)ng/ml.b、c组与a组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);b、c组IL-2、IL-12、IL-4比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).d组IFN-γ、IL-2及IL-10分别为(497.42±29.03)、(739.77±18.58)及(120.33±13.21)ng/ml,与b组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).CsA、RPM及MPA对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA对4种细胞因子产生的抑制作用强于RPM和MPA,其中对IL-2及IL-4的抑制作用更为明显.CsA与CTLA4 mAb有协同作用.共刺激后IL-12产生升高,MPA可抑制单刺激和共刺激后IL-12的产生,CsA和RPM对IL-12的产生无明显抑制作用.结论 CD28、CD40共刺激通路在淋巴细胞活化中起关键作用.CsA、RPM、MPA及CTLA4 mAb对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA的抑制作用更为明显.CD40 L mAb使Th1细胞因子及IL-12水平下降,又促进Th2细胞因子(以IL-4为主)产生,该作用可能是抗CD40 L抗体诱导移植物存活期延长的机制之一.     

川芎嗪对活动期狼疮性肾炎外周血单个核细胞 B7-1和B7-2 mRNA表达的影响

目的：探讨川芎嗪对活动期狼疮肾炎（LN）外周血单个核细胞（PBMC）的B7－1（CD80）和B7－2（CD86）mRNA表达的,影响,为临床使用川芎嗪治疗LN提供理论依据。方法：取活动期LN患PBMC培养,分别以川芎嗪,地塞米松和川芎嗪＋地塞米松进行处理,以PBS对照,采用半定量反转录PCR的方法,检测PBMC的B7－1和B7－2mRNA表达,结果：与对照组相比,川芎嗪组和地塞米松组均能明显抑制B7－2mRNA表达（P＜0．05）,而川芎嗪＋地塞米松组对B7－2mRNA表达的抑制更加明显（P＜0．01）,各组对B7－1mRNA表达均无显影响（P＞0．05）,结论：川芎嗪能下调活动期LN外周血单个核细胞B7－2mRNA表达,合并使用地塞米检能更好地抑制B7－2mRNA表达。     

狼疮肾炎患者尿蛋白通过p38丝裂素活化蛋白激酶信号途径刺激近端肾小管上皮细胞上调表达骨调素

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在狼疮肾炎(LN)尿蛋白介导近端肾小管上皮细胞(HK-2)表达骨调素(DPN)中的作用。方法收集狼疮肾炎患者24h的尿液提纯总蛋白，体外刺激HK-2细胞，分别用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹法观察应用p38MAPK特异性阻断剂SB203580对。HK-2细胞表达OPN mRNA及蛋白的影响：免疫荧光法检测OPN及其受体CD44在细胞中的表达。结果狼疮肾炎患者尿蛋白可刺激HK-2细胞OPN mRNA及蛋白上调表达，并呈时间和浓度依赖性，而SB203580可明显抑制这一作用。结论狼疮肾炎尿蛋白可通过p38MAPK途径刺激HK-2细胞OPN mRNA和蛋白上调表达。     

白细胞介素6在狼疮性肾炎患者小管间质的表达及其意义

探讨白细胞介素6(IL-6)在狼疮性小管间质病变中的作用。方法 采用ELISA方法与原位分子杂交技术(后者结合IBAS计算机图像分析系统),分别检测42例活动期狼疮性肾炎(LN)患者尿IL-6浓度与其中的15例肾小管间质IL-6mRNA水平。结果 42例活动期LN患者有36例尿IL-6>5pg/mg·cr,其增高程度与尿β_2-m及NAG活性水平呈显著正相关;其中15例肾组织切片中,肾小管间质均有IL-6mRNA表达,并且小管间质病变愈严重,其表达量愈高,而健康肾组织小管间质几无IL-6mRNA表达。结论 LN患者活动期尿IL-6浓度异常增高与肾小管间质IL-6mRNA异常表达有关,提示IL-6在狼疮性小管间质损害过程中可能具有重要作用。     

Increased excretions of beta2-microglobulin, IL-6, and IL-8 and decreased excretion of Tamm-Horsfall glycoprotein in urine of patients with active lupus nephritis

Tubulointerstitial nephritis is a less frequently recognized but important complication of systemic lupus erythematosus. We have investigated the cytokine beta2-microglobulin (beta2M) and Tamm-Horsfall glycoprotein (THG) excretions in the urine of systemic lupus erythematosus patients to identify indices for evaluation of tubulointerstitial inflammation in lupus nephritis (LN). Daily urine was collected from 15 patients with active LN, from 12 patients with inactive LN, and from 17 normal subjects. The amounts of soluble interleukin (IL) 2 receptor, IL-6, IL-8, beta2M, and THG in urine were measured. Beta2M and THG were regarded as indicators of proximal and distal renal tubule function, respectively. The urinary excretions of IL-6 and IL-8 were significantly higher in patients with active LN than in those with inactive LN and in normal individuals. The excretion of soluble IL-2 receptor in all three groups of subjects was not significantly different. On the other hand, the excretion of beta2M in patients with LN was significantly higher than that in normal individuals. The excretion of beta2M in patients with active or inactive LN was not significantly different. The THG excretion was lower in patients with active LN and tubulointerstitial inflammation as compared with patients with inactive LN or normal individuals. Six patients underwent pulse cyclophosphamide therapy during the course of experiments. Five of them showed a decrease in IL-8 and IL-6 excretions in urine after the treatment. The excretions of beta2M and THG in urine, in addition to IL-6 and IL-8, can reflect the renal inflammatory activity in patients with lupus tubulointerstitial nephritis as well as in those having lupus glomerulonephritis.     

巨噬细胞移动抑制因子在狼疮肾炎患者血清和尿液中的表达

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在狼疮。肾炎（LN）发病过程中的分子生物学机制及其在疾病进展中的作用。方法选择我院LN患者30例，用酶联免疫吸附方法测定LN患者血清和尿液MIF浓度，并将血清和尿液MIF浓度与狼疮活动指数、24h尿蛋白定量、血尿和肌酐清除率（Ccr）进行相关性分析，以20名健康体检者作对照组。结果LN患者血清和尿液MIF浓度均高于对照组（P〈（）．01）；活动期LN患者治疗后尿液MIF浓度较治疗前降低（P％0．（）1），而血清MIF浓度治疗前、后无统计学差异（P〉0．05），活动期较静止期LN患者血清和尿液MIF浓度升高（P〈0．01），LN患者血清和尿液MIF浓度与狼疮活动指数呈正相关（r分别为0．598和0．641，P〈0．01）；LN患者血清和尿液MIF浓度均与24h蛋白尿定量呈显著正相关（r分别为0．524和0．749，P〈0．01），与血尿和Ccr均无相关性（P〉0．05）。结论LN患者尿液MIF浓度明显升高，与病情活动程度相关，对于判断患者病情的活动有一定价值。     

Levels of IL-17 and Th17/Treg ratio reflect clinical and pathological activity in patients with lupus nephritis

Objective To explore the correlation of Th17/Treg ratio and related cytokines with clinical and pathological activity in patients with lupus nephritis (LN). Methods The patients with lupus nephritis were enrolled into this study from June 2011 to Feb 2012. The demographic data, clinical activity and pathological index were recorded and analyzed in details. The frequency of Th17 and Treg in peripheral blood CD4+ T lymphocytes was tested by flow cytometry and the ratio of Th17 to Treg was calculated. The levels of such cytokines as IL-6, IL-10, IL-17, IL-23, TGF-β1 were detected by ELISA. Results A total of 60 patients with LN were enrolled in this study. Of them, 90% were female, 10% were male, the average age was (36.39±14.23) (14-75) years old, the duration was 1.00(0.33-9.25) years, the average SLEDAI was (9.50±4.61). Compared with control group, the ratio of Th17 to Treg in LN group was significantly higher [(0.95±0.67) vs (0.29±0.13), P＜0.05]; further the Th17/Treg ratio in active LN group was much higher [(1.33±0.71) vs (0.57±0.33), P＜0.01] compared with inactive LN group. The ration of Th17 to Treg was positively correlated with SLEDAI and AI (r＝0.650, P＜0.01; r＝0.675, P＜0.01). The level of serum IL-10 was negatively correlated with SLEDAI and AI(r＝-0.567, P＜0.01; r＝-0.422, P＜0.01). The level of serum IL-17 was positively correlated with SLEDAI and AI (r＝0.559, P＜0.01; r＝0.479, P＜0.01). The level of IL-23 was positively correlated with SLEDAI and AI (r＝0.339, P＜0.05; r＝0.350, P＜0.05). The levels of serum anti-dsDNA and C3 were not correlated with SLEDAI and AI in patients with LN(P＜0.01). As the diagnostic indicator of active LN(SLEDAI≥10), the AUCs of Th17/Treg, IL-17, IL-23 were 0.92 (0.83-1.00), 0.91 (0.81-1.00) and 0.67(0.51-0.83), respectively. As the diagnostic marker of AI＞8,the AUCs of Th17/Treg and IL-17 were 0.87(0.76-0.99) and 0.84 (0.69-0.99). Conclusions The ratio of Th17 to Treg and the level of serum IL-17 are good indicator for evaluating both clinical and pathological activity in patients with LN. The levels of IL-10 and IL-23 show better correlation with SLEDAI and AI than the traditional indicator anti-dsDNA and C3.     

狼疮肾炎患者血清和尿白细胞介素-18水平检测及其临床意义

目的：检测狼疮肾炎(LN)患外周血清和尿液白细胞介素—18(IL—18)水平并探讨其临尿意义。方法：血清和尿液IL-18含量采用酶联免疫吸附方法(ELISA)。结果：LN组血清IL—18水平显高于正常对照组(P＜0、01)，活动期LN血清IL—18水平显高于缓解期患(P＜0．01)3LN组尿IL—18水平显高于正常对照组(P＜0．05)，活动期LN患尿IL—18水平显高于缓解期患(P＜0．05)。LN患血清IL—18水平与SLEDAI、抗dsDNA抗体成正相关关系，与补体C3呈负相关关系，而与血白蛋白、血肌酐无相关关系；活动期LN患尿IL—18水平与狼疮肾组织活动性指数(AI)、24h尿蛋白排泄量均呈正相关关系。结论：LN血清和尿IL—18水平显增高，IL—18可能在LN的病理生理过程中起重要作用。LN血清和尿IL—18水平均与狼疮病情活动密切相关，可作为判断狼疮疾病活动性的候选参考指标。     

白细胞介素13基因在人肾组织的表达及其意义

目的 探讨白细胞介素13（IL-13）基因在原发性非IgA系膜增生性肾炎（MsPGN）、原发性局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）和狼疮肾炎（LN）患者肾组织的表达及意义。方法 采用原位杂交技术（ISH）检测34例上述3种肾脏病患者及4例对照组肾组织中IL-3 mRNA表达量的变化,分析IL-3基因表达量与肾功能变化的关系。结果 IL-13 mRNA在FSGS、MsPGN和LN患者肾组织内表达均增高,而对照者肾组织内无明显IL-3 mRNA表达。LN患者肾小管间质区IL-3 mRNA表达水平与狼疮活动相关,MsPGN及PSGS患者肾小管间质区IL-13 mRNA表达量与肾功能变化及24h尿蛋白量相关。结论 IL-13可能直接参与人类肾小球疾病的免疫反应过程。