结核分枝杆菌蛋白Rv0315的克隆表达及其抗原性研究

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组Rv0315蛋白,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平,并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白Rv0315,其在E.coli BL21plysS（DE3）中主要以可溶性形式表达,分子量（30.3kDa）与预期相符,ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94.0%（45/48）和35.7%（30/84）。结论重组蛋白Rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。     

酶联免疫斑点检测和结核菌素试验在初治肺结核中的辅助诊断价值

目的 比较酶联免疫斑点检测(ELISPOT)和结核菌素试验(TST),探讨ELISPOT在初治肺结核中的辅助诊断价值.方法 选取初治肺结核123例和非结核疾病病例102例作为结核组和对照组,应用6 kD早期分泌靶向抗原/10 kD培养滤过蛋白融合蛋白(ESAT-6/CFP-10)作为抗原对受试者外周血单个核细胞进行ELISPOT(即ESAT-6/CFP-10-ELISPOT),检测斑点形成细胞(SFCs)的数量;同时对受试者行TST.结果 结核组ESAT-6/CFP-10-ELISPOT形成的SFCs数显著高于对照组(P=0.000).结核组中ESAT-6/CFP-10-ELISPOT的敏感度91.1%(111/123)、特异度80.4%(82/102)、阳性似然比4.60、阴性似然比0.12、阳性预测值0.85、阴性预测值0.87,TST的敏感度65.6%(59/90)、特异度45.1%(46/102)、阳性似然比1.31、阴性似然比0.76、阳性预测值0.51、阴性预测值0.60.ESAT-6/CFP-10-ELLS-POT的敏感度和特异度显著高于TST(均P=0.000).菌阳肺结核组和菌阴肺结核组间ESAT-6/CFP-10-ELLSPOT形成SFCs数量差异无显著性(P=0.166),两组ESAT-6/CFP-10-ELISPOT的敏感度分别为91.8%(67/73)和88.0%(44/50),二者比较差异无显著性(P=0.448).结论 ESAT-6/CFP-10-ELISPOT有可能作为辅助诊断初治肺结核的较为准确方法,并为菌阴肺结核提供一定的诊断依据,但诊断的特异度可能受结核潜伏感染影响.TST对初治肺结核的诊断价值较小.     

结核感染T细胞斑点试验的临床应用价值探讨

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-spot assay.tubercle bacillus,T-SPOT.TB)在肺结核诊断中的临床意义及斑点形成细胞数的参考价值。方法应用结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测方法对210例2017年1～12月期间入住某院且临床已诊断肺结核病例(结核病组)和非结核疾病的其他肺部疾病病例(非结核疾病组)66例血液标本进行检测并分析结果。结果以临床诊断为标准,T-SPOT.TB试验敏感度为84.29%(177/210);特异度为78.79%(52/66)。肺结核组斑点形成细胞数(SFC)为(44.80±61.51)(结核特异的混合抗原A,ESAT-6抗原)和(54.97±80.59)(结核特异的混合抗原B,CFP-10抗原);非结核疾病的其他肺部疾病组斑点形成细胞数为(2.71±3.77)(ESAT-6抗原)和(2.55±4.05)(CFP-10抗原),两组结果差异有统计学意义[t=-5.55,P=0.000(A)及t=-5.28,P=0.005(B)]。T-SPOT.TB阳性的肺结核组SFCs为(52.70±63.97)(ESAT-6抗原)和(64.64±84.34)(CFP-10抗原),而T-SPOT.TB阳性的其他肺部疾病组SFCs为(7.00±5.35)(ESAT-6抗原)和(7.71±6.12)(CFP-10抗原),两组差异有统计学意义[t=-2.666,P=0.001(A)及t=-2.519,P=0.000(B)]。T-SPOT.TB阴性的肺结核组SFCs为(2.42±2.00)(ESAT-6抗原),而其他肺部疾病组SFCs为(1.56±2.10)(ESAT-6抗原),两组差异无统计学意义[t=-1.888,P=0.888(A)]。结论 T-SPOT.TB斑点形成数在肺结核诊断中有一定的参考价值,在临床实践中应高度重视斑点形成细胞数高值的受检者,尽早采取防治措施。     

胸腔积液TBAg/PHA比值在结核性胸膜炎早期诊断中的应用价值

目的探讨胸腔积液结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)中结核特异性抗原(TBAg)与植物血凝素(PHA)两者的定量比值(TBAg/PHA)对结核性胸膜炎(TBP)的诊断价值。方法分析2018年1月至2019年3月广州市胸科医院胸腔积液患者447例的临床资料,447例患者中TBP组为316例,非TBP组为131例。进行胸腔积液T-SPOT.TB检测,并对敏感度、特异度、准确度等指标进行诊断性试验评价。结果胸腔积液T-SPOT.TB试验诊断TBP的敏感度为82.3%,特异度为82.4%,准确度82.3%,阳性预测值和阴性预测值分别为91.8%、65.9%。当采用0.25作为TBAg/PHA比值的截断值时,诊断TBP的敏感度、特异度和ROC曲线下面积分别为84.8%、93.5%、0.862(95%CI:0.800～0.925)。TBP组的胸腔积液T-SPOT.TB结果阳性率为82.3%,非TBP组为17.6%,差异有统计学意义(P0.05)。比较胸腔积液T-SPOT.TB试验结果中ESAT-6 sfc、CFP-10 sfc、PHA sfc、ESAT-6/PHA比值、CFP-10/PHA比值和TBAg/PHA比值。除PHA sfc外,TBP组的其他各项指标均高于非TBP组,差异有统计学意义(P0.05)。结论胸腔积液TSPOT.TB试验采用TBAg/PHA比值法对TBP的早期诊断价值明显优于T-SPOT.TB试验定性的结果。     

结核感染T细胞斑点试验对结核病治疗效果的监测价值

目的：探讨结核感染T细胞斑点试验对结核病治疗疗效的监测意义。方法本研究采用T-SPOT.TB试剂盒,检测T细胞中γ-干扰素对结核分支杆菌特异性多肽类早期分泌性抗原靶标6-kD(ESAT-6)和培养滤液蛋白(CFP-10)的应答,对比113例结核感染者治疗前与治疗后T-SPOT.TB结果的变化,其结果根据对该试验中两种抗原的联合与各自应答来分析。结果113例感染者在治疗后T-SPOT.TB结果转阴者有42例(37.2%)。其中,CFP-10转阴率占48.9%(P<0.001),ESAT-6转阴率占20.0%(P=0.238)。ESAT-6的斑点形成细胞(SFCs)/2.5×105外周血单核细胞(PBMCs)的平均数在治疗前和治疗后分别为18.47和16.29(P=0.16),而CFP-10的SFCs/PBMCs的平均数在治疗前和治疗后分别为22.83和15.31(P<0.01)。结论结核病治疗对于T细胞中γ-干扰素引起的ESAT-6和CFP-10抗原应答影响不同,CFP-10的定量应答才是结核病治疗的更有效监测手段。     

培养滤液蛋白10/靶6000蛋白检测对结核性脑、胸膜炎早期诊断的临床研究

目的探讨靶6000蛋白(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)在早期辅助诊断结核性脑、胸膜炎中的价值。方法将收集的29例阳性病例(结核性脑膜炎及胸膜炎的患者)和30例对照病例应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其脑脊液或胸水ESAT-6和CFP-10蛋白,并与用聚丙烯酰胺凝胶块浓缩脑脊液或胸水后检测ESAT-6和CFP-10蛋白浓度进行比较。结果浓缩前的标本:CFP-10的灵敏度为62.1%,特异度为86.7%;ESAT-6的灵敏度为68.9%,特异度为90%;两蛋白联合诊断的灵敏度为79.3%,特异度为96.7%。浓缩后的标本:CFP-10的灵敏度为68.9%,特异度为86.7%;ESAT-6的灵敏度为72.4%,特异度为90%;两蛋白联合诊断的灵敏度为89.6%,特异度为96.7%。浓缩前后病例组与对照组的CFP-10和ESAT-6蛋白的阳性率差异均有统计学意义(均<0.05)。结论 ESAT-6和CFP-10检测结核具有较高的灵敏度和特异度,且简便和廉价,适合用于早期辅助诊断。     

结核分枝杆菌特异性蛋白片段Rv3388和6种特异抗原在结核抗体检测中的应用价值

目的 对结核分枝杆菌( MTB) PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病诊断中的价值. 方法 利用基因合成技术重叠延伸PCR扩增Rv3388蛋白637~731位的编码基因片段, 原核表达并纯化重组蛋白pET32a/Rv3388637-731 ,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法对该抗血清进行免疫原性分析. 同时对这7种MTB特异性蛋白的特异性及敏感性进行评价. 结果 重组蛋白pET32a/Rv3388637-731在大肠杆菌中的表达量占全菌蛋白的80%,ELISA显示有较强的免疫原性. 7 种 MTB特异性抗原具有不同的反应模式,单个抗原检测敏感性较差. 结论 对MTB PE家族的蛋白结构分析,表达并纯化重组蛋白pET32a/ Rv3388637-731 ,7种蛋白在血清抗体检测中具有抗原互补性,不同抗原与机体反应存在不同反应模式,提高结核抗体检测敏感性应多种抗原联合检测.     

结核感染T细胞斑点试验在监测脊柱结核治疗效果中的应用价值

目的应用结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)监测脊柱结核治疗效果(手术疗效和抗结核治疗效果),进一步探讨其应用价值。方法选取2015年1月-2017年10月脊柱结核感染患者42例,抽取受试者外周静脉血,应用T-SPOT.TB技术,使用结核分枝杆菌特异性融合抗原早期分泌性抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为刺激物进行检测,并详细记录患者基本资料信息,动态分析患者入院时、手术前1 d、手术后1 d和术后12个月的T-SPOT.TB结果。结果 42例患者均接受手术治疗,T-SPOT.TB在脊柱结核入院时的诊断阳性率为83.3%(35/42),7例脊柱结核患者T-SPOT.TB结果呈假阴性改变。患者入院时、手术前1 d、手术后1 d及术后12个月ESAT-6对应的斑点形成细胞(SFC)数量分别为(34.1±20.8)、(33.8±20.9)、(31.2±18.7)、(17.9±13.8)个;CFP-10对应的SFC数目分别为(51.5±45.7)、(49.7±44.7)、(47.8±43.1)、(26.5±23.4)个。经过配对样本t检验,术后12个月和入院时比较ESAT-6和CFP-10刺激形成的SFC数量显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。其中31例(73.8%)患者ESAT-6对应的SFC数目下降,33例(78.6%)患者CFP-10对应的SFC数目下降。结论脊柱结核患者经过外科病灶清除术加上12个月抗结核治疗后,T-SPOT.TB定量结果(SFC数量)较术前明显下降,可为监测脊柱结核患者治疗效果提供一定价值。     

T-SPOT.TB 在肺外结核诊断应用价值

目的：探讨 T-SPOT.TB（结核感染 T 细胞酶联免疫斑点试验）在肺外结核诊断应用价值。方法：收集在我院就诊肺外结核患者84例作为研究对象,同时选取非结核病患者20例作为对照,比较不同患者中 T-SPOT. TB 检测阳性率和 ESAT-6和 CFP-10的 SCF 数量的差异;比较 T-SPOT.TB、TB-Ab 和 ESR 检查诊断肺外结核的效能比较。结果：肺外结核 T-SPOT.TB 检测阳性率（85.71%）明显高于非结核疾病组（10.0%）,且差异具有统计学意义。肺外结核组 ESAT-6和 CFP-10的 SCF 数量分别为39（0-180）和27（0-125）显著高于非结核疾病组的 SCF 数量为6（0-35）和5（0-27）,且差异具有统计学意义。T-SPOT.TB 诊断肺外结核的灵敏度85.71%、特异度90.0%、准确率86.54%;TB-Ab 诊断肺外结核的灵敏度67.86%、特异度70.0%、准确率68.27%;ESR 诊断肺外结核的灵敏度54.76%、特异度60.0%、准确率55.77%;T-SPOT.TB 诊断肺外结核的诊断效能优于 TB-Ab 和 ESR。结论：T-SPOT. TB 在肺外结核中的阳性率高于非结核患者,T-SPOT.TB 诊断肺外结核有较好的灵敏度和特异度。     

不同抗原酶联免疫斑点检测技术对结核性胸膜炎辅助诊断价值的比较

目的 探讨结核分枝杆菌不同抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)对结核性胸膜炎的辅助诊断价值.方法 分离55例结核性胸膜炎患者和43例恶性胸腔积液患者的胸腔积液单个核细胞(PEMCs),经早期分泌抗原靶6 kD(ESAT-6)、培养滤液蛋白10 kD (CFP-10)、ESAT-6/CFP-10融合蛋白(E/C)...