大鼠脊髓急性损伤后神经细胞的凋亡

目的 研究脊髓急性损伤后神经细胞的凋亡及其分布特点。方法 44只大鼠分为对照组（4只）和损伤组（40只）。损伤组脊髓（T8．9）经中度压迫致伤后,分别在伤后30min、2,4,8,24,48,72h和7,14,21d处死取材（每时相点鼠数＝4只）。应用HE、尼氏染色及凋亡细胞原位末端标记法对脊髓组织进行细胞检测。结果 伤后4h,损伤段及邻近段可见末端标记阳性神经细胞;伤后8h,损伤段灰质中阳性细胞数达高峰;伤后24h,白质中阳性胶质细胞数达高峰;伤后72h,相邻节段阳性细胞数达高峰。阳性细胞以白质中胶质细胞为主,主要分布于相邻手段。结论 脊髓损伤后神经细胞凋亡是继发损伤期的重要病理变化。     

细胞凋亡阻断药物对脊髓损伤后神经细胞凋亡的保护作用观察

为观察放线菌酮、甲基强的松龙和神经节苷脂对损伤脊髓神经组织中凋亡细胞的保护作用,将60只SD大鼠致以重度脊髓损伤,并随机分为对照组、放线菌酮组、甲基强的松龙组和神经节苷脂组（n=15）。给药后分别观察体重、局部血流量、凋亡细胞原位标记等指标,并进行神经功能评价和定量组织学分析。结果显示,药物对照局部血流量无明显作用;治疗组神经功能评分、残余神经组织面积明显高于对照组,而TUNEL阳性细胞数量明显低于对照组,说明3种药物均对损伤脊髓组织有明显保护作用,可能是通过对神经细胞凋亡阻断来发挥作用的。     

脑源性神经营养因子转基因细胞移植和甲基强的松龙对损伤脊髓caspase-3表达的影响

目的 探讨大鼠脊髓损伤后腺病毒介导的脑源性神经营养因子（AxCA-BDNF）体外转基因成肌细胞移植和静脉内注射大剂量甲基强的松龙（MP）对大鼠脊髓细胞caspase-3表达的影响。方法 将120只大鼠分为脊髓挫伤组（A组）、脊髓挫伤后AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（B组）、脊髓挫伤后静脉内注射大剂量甲基强的松龙治疗组（C组）、AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植和静脉内注射大剂量，甲基强的松龙治疗组（D组）。伤后1，3，7，14，28d，应用免疫组化法对脊髓损伤区进行细胞凋亡caspase-3蛋白表达的测定，并采用计算机图像分析技术进行定量分析。应用行为学和电生理检查方法观察大鼠运动功能恢复情况。结果A、B、C、D四组中均发现凋亡caspase-3蛋白阳性表达细胞；各组caspase-3免疫反应阳性细胞数依次为A〉B〉C〉D组（P〈0．05），与大鼠后肢功能恢复有平行的变化趋势。结论 体外转基因成肌细胞移植和大剂量甲基强的松龙能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡。     

甲基强的松龙治疗急性脊髓损伤的实验研究及临床疗效观察

目的：通过动物实验和临床疗效观察评价甲基强的松龙（MP）对急性脊髓损伤的治疗作用。方法：动物实验：将90只SD成年大鼠（体重230-250g）随机分为3组（A组：假手术组；13组：尾静脉注射生理盐水组：C组：尾静脉注射甲基强的松龙组），各组分别于术后4h、8h、1d、3d、7d进行运动功能评分、运动诱发电位检查、HE染色观察病理改变。临床研究：对2003-2005年我科收治的85例患者给予大剂量甲基强的松龙治疗（MP组），观察疗效，与前期未用甲基强的松龙治疗的93例（对照组）比较，评价甲基强的松龙的治疗作用。结果：动物实验显示，A、B、C组大鼠在术后8h、1d、3d、7d时相点的BBB评分、运动诱发电位潜伏期、病理改变存在组间差异，A组几乎为正常表现，而C组恢复情况优于B组，更接近于A组。临床观察显示，MP组神经功能恢复速度和程度均优于对照组。结论：MP能够减轻急性脊髓损伤的水肿程度，减少神经细胞凋亡，加快脊髓神经功能恢复速度和程度。     

低温预处理对大鼠脊髓内牵拉后脊髓神经细胞凋亡及神经功能的影响

目的 探讨局部低温预处理对大鼠脊髓内牵拉型脊髓损伤病理形态学改变、神经细胞凋亡和神经功能的影响。方法 将80只4个月龄SD大鼠随机分为低温预处理组（A组）和对照组（B组），建立大鼠脊髓内牵拉型脊髓损伤模型，于损伤后2，4，8，24，48，72h和7d评估脊髓损伤后大鼠运动功能，用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，原位末端标记（TUNEL）法标记凋亡细胞。结果 HE染色镜检显示A组脊髓组织病理学改变明显轻于B组。A、B两组运动功能评分和神经细胞凋亡指数比较，差异有统计学意义（P〈0．05或0．01）。结论 低温预处理可明显减轻大鼠脊髓内牵拉型脊髓损伤早期病理形态学损伤，抑制细胞凋亡，有助于神经功能的恢复。     

NEP1-40和甲基强的松龙联合治疗对脊髓修复的影响

目的：探讨甲基强的松龙（MP）和NEP1-40联合治疗对大鼠脊髓损伤后脊髓的功能恢复的影响。方法：选用SD大鼠60只,随机分为联合治疗组、MP治疗组、NEP1-40治疗组和对照组4组。建立大鼠中段胸部脊髓后半部横切模型。MP的给药方法为术后30 min内经鼠尾静脉给予MP 30 mg/kg,后给予剂量5.4 mg/（kg.h）,持续23 h;NEP1-40的给药方法为术后3 d于硬膜下管给予NEP1-40 12.5μg/（20μl PBS.d）,连续7 d。对照组给予等量生理盐水。不同时间点进行运动诱发电位（MEP）测定和行为学评价。结果：联合治疗组大鼠潜伏期延迟时间较MP、NEP1-40治疗组和对照组短,5 w时接近正常,其P1波的潜伏时间为5.42 ms,N1波的潜伏时间为5.55 ms（P〈0.01）,其BBB运动评分5 w时为17分（P〈0.01）;联合治疗组的空洞面积百分比不到对照组的一半（P〈0.01）;NF200阳性染色的神经元数目为20.19个/1000μm^2。结论：MP和NEP1-40联合治疗可减少病变范围,减轻白质纤维脱髓鞘病变,增多NF200阳性神经元数目,促进神经再生,改善由于脊髓后半横切所引发的脊髓电生理的障碍,促进了脊髓功能恢复。在治疗脊髓损伤时,MP与NEP1-40有协同作用,促进脊髓功能恢复。     

甲基强的松龙和脑源性神经生长因子联合治疗促进大鼠脊髓损伤后髓鞘再生和功能恢复

目的：研究甲基强的松龙（MP）和脑源性神经生长因子（BDNF）联合治疗对大鼠脊髓损伤后髓鞘再生和功能恢复的影响。方法：采用28只SD大鼠T10脊髓损伤模型，随机分成MP和BDNF治疗组（A组），MP和脑脊液（CSF）对照组（B组），每组14只。应用逆转录-聚合酶链反应（RT－PCR）及免疫组织化学方法观察MP和BDNF联合治疗对脊髓损伤后髓鞘再生的作用，同时采用脊髓运动功能（BBB）评分观察脊髓神经功能的恢复情况。结果：伤后1d，A组中髓鞘蛋白前脂蛋白（PLP）mRNA的表达较B组增加了45．3％，差异有显著性意义（P＜0．05）。伤后10周，A组中快蓝（LFB）和髓鞘碱性蛋白（MBP）阳性的神经髓鞘的表达较B组增加了2倍，差异有显著性意义（P＜0．05）。A组大鼠脊髓神经功能恢复较好。结论：MP和BDNF联合治疗对大鼠脊髓损伤后髓鞘再生和功能恢复有明显的促进作用，是急性脊髓损伤一种有效的联合治疗方案。     

大鼠脊髓占位损伤后细胞凋亡在不同脊髓平面、不同时间的变化及其意义

目的 探讨脊髓占位损伤后不同观察时间、损伤中心两端不同平面神经细胞凋亡的变化。方法 采用脊髓占位损伤模型，在伤后6，24，48，72h、5，7d6个时相点观察损伤中心两侧1．5，3．5，5．5，7．5mm脊髓平面的细胞凋亡情况。结果 脊髓损伤后继发性改变可影响到损伤中心头侧7．5mm、尾侧7．5mm区域，变化开始时间分别在伤后48h和72h；另外在损伤中心，灰质区细胞凋亡高峰晚于白质区出现，灰质区凋亡细胞指数在不同时间变化较大。结论 脊髓占位损伤后神经细胞凋亡在不同平面、不同时间存在明显差异。继发性损伤与神经系统固有的传导通路有关，也与损伤信号中介因素有关。     

大剂量甲基强的松龙致心房颤动1例

糖皮质激素的主要不良反应有钠水潴留、感染、类肾上腺皮质功能亢进症、消化性溃疡、高血压、类固醇性糖尿病、骨质疏松。股骨头坏死。伤口不易愈合、精神异常等，引发心律失常者极为少见。我们在临床上遇到一例病人，她在接受甲基强的松龙（简称甲强龙，MP）冲击治疗过程中发生心房颤动，下面作以简要介绍。     

高压氧对脊髓损伤后凋亡相关基因影响的研究进展

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)可以分为原发性的损伤与继发性损伤两大类。目前SCI的治疗方法可以有很多种,如手术治疗、高压氧治疗、基因治疗及药物治疗等。其中,高压氧治疗方式在临床中的应用已有较长的历史,也取得了一些可喜的成就;同时,高压氧可以使SCI引起的神经细胞出现凋亡这一过程发生逆转。作者主要论述高压氧对SCI后凋亡相关基因影响的研究进展。     

脊髓牵拉损伤后七叶皂苷钠对细胞凋亡的抑制作用

目的观察脊髓牵拉损伤后七叶皂苷钠对细胞凋亡的抑制作用。方法实验组大鼠脊髓损伤前尾静脉推注七叶皂苷钠6 mg/kg。将T10脊髓水平方向牵拉1.7 mm,持续5 m in。检测神经细胞bc l-2、bax表达;原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记技术观察凋亡细胞。结果(1)bc l-2:实验组7 d达高峰为(43.61±5.89)%;对照组7 d时为(26.85±4.61)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。(2)bax:实验组3 d达高峰为(36.19±5.42)%;对照组3 d时为(44.15±6.81)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)各时间点实验组细胞凋亡指数较对照组低。结论脊髓损伤前应用七叶皂苷钠能抑制因脊髓牵拉损伤引起的神经细胞凋亡。     

Bcl-xL基因转染对脊髓损伤细胞凋亡的影响

目的观察脂质体介导的Bcl—xL基因体内转染对大鼠脊髓损伤后伤区脊髓细胞凋亡和神经功能恢复的影响。方法制备大鼠胸段脊髓T8.9压迫损伤模型。38只大鼠分成三组：(1)损伤 pSFFV．Bcl—xL转染组(实验组，15只)；(2)损伤 pSFFV．GFP转染组(对照组，15只)；(3)假损伤组(8只)。将阳离子脂质体质粒混合后直接注入大鼠损伤脊髓，伤后3d和7d利用半定量逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)和免疫组化检测Bcl—xL基因体内表达；原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡；采用开放场地试验BBB评分和斜板试验，评价神经功能。结果脊髓损伤后3d和7d损伤局部Bcl—xL mRNA和蛋白较对照组和假损伤组表达明显增多；TUNEL结果显示，实验组损伤节段细胞凋亡数比对照组明显减少，神经功能改善。结论脂质体介导Bcl—xL体内转基因治疗可有效转染脊髓的神经细胞；外源性Bcl—xL在损伤脊髓的过度表达可减少脊髓不完全性损伤后凋亡引起的神经元死亡和增强神经细胞成活，促进神经功能恢复。     

雌激素影响急性大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的相关性实验研究

目的在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,观察不同时间点雌激素对脊髓胶质细胞,神经元凋亡的影响,以期为临床急性脊髓损伤的治疗提供理论依据。方法健康成年大鼠72只,随机分为两组,其中单纯损伤组（单纯打击损伤）36只,雌激素组（手术加雌激素）36只。脊髓损伤动物模型的制备：用自制Allen打击器25gcm致伤力撞击脊髓,制成脊髓损伤动物模型。雌激素组每日肌注雌激素（100μg／kg）直至处死,单纯损伤组仍每日肌注生理盐水0．5ml直至处死。组织切片的制备：脊髓损伤后1d、3d、5d、8d、14d、21d共6个时间段分批处死动物。4％多聚甲醛心肌灌注固定24h,切取每只大鼠T5～T13节段脊髓组织,常规制成切片,给于Bcl－2检测,TUNEL原位末端标记,检测大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的情况。脊髓损伤后2周给予Gale评分及斜板维持试验。结果Bcl－2蛋白检测：在脊髓损伤后的第1天,脊髓组织即开始较高表达Bel－2蛋白。单纯损伤组Bcl－2高峰发生在损伤后3天,而雌激素组伤后8天达到高峰,此时Bcl－2蛋白不仅表达在神经细胞中,更多的在胶质细胞中大量表达,且此状态一直维持到伤后14天才开始下降,伤后21天仅少量表达（P〈0．05）。TUNEL原位标记检测：单纯损伤组24小时已出现不少阳性细胞,以胶质细胞为主．3～8天达到高峰,此后逐渐回落,但21天时仍有阳性细胞,应用雌激素治疗后,凋亡细胞明显减少（P〈0．05）。脊髓损伤后2周Gale评分及斜板维持率雌激素组优于单纯损伤组（P〈0．01）。结论雌激素在脊髓损伤中通过改善微循环,促进Bcl－2蛋白的表达,清除氧自由基,抗氧化作用能够抑制脊髓损伤早期神经细胞和胶质细胞的凋亡,从而减轻脊髓继发性损伤．促进脊髓神经功能的恢复。所以脊髓损伤后早期应用雌激素配合其它药物阻止神经细胞和胶质细胞的凋亡可能有助于减轻脊髓损伤的损害程度,促进脊髓神经功能的恢复,为SCI的治疗提供一个新的途径。     

汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡和相关基因表达的影响

目的 动态观察汉防己甲索( tetrandrine,Tet)对大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)后神经细胞凋亡和相关基因表达的影响,为该病治疗研究提供实验依据. 方法 将95只成年SD大鼠随机分为空白对照组、急性脊髓损伤组(ASCI组)、汉防己甲素(Tet)组和甲基强的松龙组(Mp)组.空白对照组5只大鼠,其他每组30只大鼠.除空白对照组外,所有动物均用改良Allen重物打击法制作脊髓损伤模型.于术后8h、1,3,7,14和21 d每组处死5只大鼠,观察损伤段脊髓的形态结构、细胞凋亡调控基因(Bcl -xl和Bcl -xs)的表达,运用流式细胞仪对标本进行凋亡细胞半定量分析. 结果 (1)组织学改变:除空白组无明显改变外,ASCI组组织水肿,神经元变性,部分坏死,可见大量炎性细胞浸润;Tet组损伤程度减轻;Mp组更轻,无明显坏死及炎性细胞浸润.(2)凋亡基因表达检测:除空白组外,余各组在相同时相点,Bcl -xs表达量ASCI组较多,Tet组明显减少,Mp组更少;而Bcl -xl表达量则反之,且各组在伤后7d达高峰.(3)凋亡细胞半定量分析:除空白对照组外,各组凋亡细胞数均在伤后7d达峰值,之后逐渐减少;同一时相点各组间凋亡细胞比较,Tet组明显少于ASCI组,而多于Mp组. 结论 ASCI后Tet对凋亡调控基因的表达有明显的积极干预作用,可显著减少神经细胞凋亡;应用Tet治疗ASCI应越早越好,7d内有效;与甲基强的松龙相比,Tet对ASCI的疗效较弱.     

脊髓压迫性损伤后脱髓鞘病变及caspase-12表达变化

目的 研究脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后脱髓鞘病变与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)表达变化之间的关系,探讨CSCI后脱髓鞘病变机制.方法 成年SD大鼠75只,按随机数字表法分为5组:正常组、对照组、压迫1d组、3d组、7d组,每组15只.采用自行设计制作的脊髓压迫模型,通过电镜和TUNEL染色、免疫荧光双标分别检测各组CSCI后神经纤维脱髓鞘的超微结构以及少突胶质细胞凋亡情况;运用免疫印迹技术检测与细胞凋亡有关的caspase-12表达.结果 CSCI后神经纤维出现脱髓鞘病变,并随着压迫时间延长而逐渐加重;脊髓损伤后出现少突胶质细胞凋亡,压迫7d组与正常组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).caspase-12表达也随压迫时间延长而上调.结论 caspase-12介导了少突胶质细胞凋亡,是CSCI后神经纤维脱髓鞘病变的机制之一.     

神经节苷脂对大鼠脊髓损伤后神经元的保护作用

目的 通过观察单唾液酸四己糖神经节苷脂( monosialotetrahexosyl gangliosides,GM-1)对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2（microtubule - associated protein 2,MAP -2）和胆碱乙酰转移酶( choline acetyhransterase,ChAT)的表达及运动功能的影响,探讨GM -1对大鼠脊髓损伤后神经元的保护作用及其机制。方法 Wistar雌性大鼠66只（体重260～ 300 g）,随机取6只作为正常对照组,余60只采用改良Allen打击法于Tt0节段制作大鼠急性脊髓损伤模型,并按随机数字表法分为GM -1组（A组）和等渗盐水对照组（B组）,每组30只大鼠。分别于术后1,3,7,14和28 d采用改良Tarlov评分法评价大鼠脊髓损伤后后肢运动功能恢复程度后处死取材,每组各时相点6只大鼠。以免疫荧光染色观察大鼠脊髓损伤后MAP -2和ChAT的表达情况。结果 术后7d起,Tarlov评分在A、B组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),即A组大鼠运动功能恢复优于B组。免疫荧光染色发现,A组术后各时相点MAP -2及ChAT呈阳性表达的细胞数量较B组同时相点明显增多（P＜0.05）。结论 脊髓损伤后大鼠神经功能的恢复与MAP -2及ChAT的表达呈一定的相关性;GM -1可通过增强脊髓损伤后MAP -2及ChAT的表达来保护神经元。