转化生长因子-β1对大鼠肠黏膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肠黏膜缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法:30只SD大鼠随机分成3组(n=10):假手术组(A组)、I/R组(B组)和实验组(C组).C组夹闭肠系膜上动脉(SMA)60 min,再灌注120 min,缺血前10 min经SMA注入TGF-β1溶液0.5 mL;B组以生理盐水代替TGF-β1,余同C组;A组单纯分离肠SMA,不做阻断,余同B组.采用HE染色及Chiu评分法判断小肠黏膜形态学损伤程度,检测门静脉血浆中D-乳酸水平.结果:B组肠黏膜损伤较A组严重,C组肠黏膜损伤较B组明显改善.3组间比较,Chiu评分和门静脉血D-乳酸水平差异均有统计学意义(F=20.490、33.084,P均<0.001);门静脉血浆D-乳酸水平与肠黏膜损伤病理评分呈正相关关系(r=0.881,P<0.001).结论:TGF-β1可以减轻小肠L/R损伤,血D-乳酸水平可以间接反映肠黏膜屏障的通透性,进而评价肠黏膜屏障的损伤程度.     

肾缺血再灌注损伤后内源性转化生长因子β1表达的动态研究

[目的]探讨鼠肾缺血再灌注发生中不同时点转化生长因子β1(TGFβ1)在肾小管上皮细胞及肾小球中的表达的动态变化。[方法]将SD大鼠随机分成正常对照组(假手术组)、单纯缺血组、再灌注2 h组、4 h组、12 h组、24h组,制备双侧肾蒂夹闭模型后,腹主动脉取血测血肌酐、尿素氮,行肾脏组织病理学检查,免疫组化(SABC)法检测TGFβ1蛋白,RT-PCR法检测TGFβ1mRNA。[结果]缺血再灌注后肾脏出现病理改变,肾小管上皮细胞刷状缘脱落,管腔扩张,在12 h病理改变最重,可见管型,间质充血,炎性细胞浸润,24 h时病理改变明显减轻。缺血再灌注后肾功能出现损害并随着再灌注时间的延长而逐渐加重,尿素氮(BUN)及肌酐(Cre)在各组分别是单纯缺血组(225.62±3.05)及(89.36±3.97)、再灌注2 h组(280.58±4.89)及(110.25±6.46)、4 h组(358.36±5.35)及(120.32±6.42)、12 h组(456.56±23.6)及(148.58±2.98),24 h组(540.24±3.08)及(170.26±4.63)损害最重。正常肾脏组织中有少量TGFβ1mRNA及蛋白的表达,主要在肾小管上皮细胞中,肾小球中极少量。与正常对照组TGFβ1mRNA(0.2077±0.0114)及蛋白(0.01166±0.00104)相比,单纯缺血45 m in组(0.2934±0.0411)及(0.02154±0.00135)、再灌注2 h组(0.4550±0.0351)及(0.03039±0.00357)、再灌注4 h组(0.5049±0.0168)及(0.03621±0.00447)和再灌注12 h组(0.6462±0.0249)及(0.07223±0.01290)的肾组织中表达增加,差异有显著性意义(P<0.05);再灌注24 h组(0.2083±0.0098)及(0.01624±0.00119)表达基本恢复,与正常对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。[结论]TGFβ1mRNA及蛋白的表达参与了大鼠肾缺血-再灌注损伤的发生过程。     

大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后的表达

目的 将大鼠转化生长因子β1(TGF—β1)基因转染成骨细胞后，研究转基因细胞表达TGF—β1的情况。方法 通过Lipofectamine介导将TGF—β1基因导人大鼠成骨细胞，转染24h后通过SABC法和原位杂交法检测目的基因瞬时表达的情况。采用G418筛选转染细胞2周，获得阳性细胞克隆，用SABC法检测转染细胞稳定表达TGF—β1的情况。结果 转染24h后，成骨细胞就有明显的TGF—β1蛋白和mRNA高表达。G418筛选2周后的转染细胞仍然有较高的TGF—β1表达。结论 TGF—β1基因转染成骨细胞后可获得稳定的高表达，采用细胞因子基因转染成骨细胞进行骨缺损的基因治疗具有可行性。     

犬肺缺血-再灌注损伤后内源性转化生长因子-β1表达的变化

①目的 观察犬肺缺血-再灌注损伤后内源性转化生长因子β1(TGFβ1)表达的变化，探讨TGFβ1在肺缺血-再灌注损伤中的作用，为防治缺血-再灌注损伤提供理论基础。②方法 利用左肺门阻断技术模型，将本地健康杂种犬28只随机分成正常对照组，缺血组，再灌注1、4、8、16、24h组，每组4只，采用原位杂交和逆转录聚合酶链式反应技术，检测各组TGFβ1mRNA的表达水平。③结果 正常对照组肺中有少量TGFβ1mRNA表达，主要在肺泡上皮细胞、微血管内皮细胞和支气管黏膜上皮细胞内。在缺血45min时，TGFβ1基因表达略有增加；再灌注4h后，TGFβ1mRNA表达显著增加；再灌注8h后达到高峰；再灌注24h后恢复正常。④结论 犬肺缺血-再灌注损伤后，TGFβ1mRNA表达量随损伤时间不同而变化，其可能参与缺血-再灌注所致的内脏损伤后的自我修复。     

转化生长因子β_1对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF - β1)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法　用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型 ,立体定向下侧脑室内注入TGF - β1,观察不同剂量TGF - β1对局灶脑缺血再灌注损伤及对细胞凋亡、肿瘤坏死因子 (TNF -α)表达的影响。结果　TGF - β1小剂量、高剂量治疗组TNF -α表达及细胞凋亡较对照组均明显降低 ,神经功能缺陷评分明显下降 ,小剂量与高剂量组比较无明显差异。结论　TGF - β1对脑缺血再灌注损伤具有保护作用 ,且与剂量无明显关系 ;其机制可能为抑制TNF -α表达及细胞凋亡。     

电针刺激头部穴位对急性脑缺血再灌注损伤大鼠血清中转化生长因子-β1含量的影响

目的探讨电针刺激头部穴位对急性脑缺血再灌注损伤大鼠血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)含量的影响。方法将72只健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,分别为8、32、32只;再根据缺血再灌注12、24、48、72 h不同的时间点,电针组和模型组再随机分为4个亚组,每组8只。线栓法制备大脑中动脉闭塞再灌注模型。电针组选取头部百会穴、水沟穴,进针后将针柄分别连接至G6805-1型针灸治疗仪上,刺激参数:疏密波,频率2 Hz/150 Hz,强度3 mA,时间30 min;模型组和假手术组不予电针治疗。运用神经功能缺损评分(NSS)评价急性脑缺血再灌注12、24、48、72 h后各组大鼠神经功能缺损情况,酶联免疫吸附测定法检测急性脑缺血再灌注12、24、48、72 h大鼠血清中TGF-β1含量。结果模型组与电针组大鼠脑缺血再灌注12、24、48、72 h NSS和TGF-β1含量均较假手术组升高(P<0.05);与模型组比较,电针组各时相NSS均减低(P<0.05),TGF-β1含量均升高(P<0.05)。结论电针刺激能促进脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的修复,增加TGF-β1的含量,可能利于减缓脑缺血后的免疫炎症反应。     

转化生长因子β1对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型，立体定向下侧脑室内注入。TGF—β1，观察不同剂量TGF—βl对局灶脑缺血再灌注损伤及对细胞凋亡、肿瘤坏死因子(TNF—α)表达的影响。结果TGF—β1小剂量、高剂量治疗组TNF—a表达及细胞凋亡较对照组均明显降低，神经功能缺陷评分明显下降，小剂量与高剂量组比较无明显差异。结论TGF—β1对脑缺血再灌注损伤具有保护作用，且与剂量无明显关系；其机制可能为抑制TNF-α表达及细胞凋亡。     

实验性大鼠腮腺细胞缺血再灌注TGF—β1的表达

目的：探讨TGF—β1(Transforming growth facto-r-β1-转化生长因子—β1)在实验性大鼠腮腺导管细胞、腺泡细胞的表达区别与形态学改变的关系。材料和方法：采用颈总动脉结扎法建立腮腺缺血再灌注模型，用光镜、免疫组化的方法，观察腮腺导管细胞、腺泡细胞形态学及TGF—β1的表达变化。结果：实验组在缺血再灌注早期，开始出现形态学改变，中期明显，后期渐修复。在缺血和再灌注时间均相同时，TGF—β1在导管细胞较腺泡细胞表达高，前者增殖抑制明显。结论：①实验性腮腺缺血再灌注大鼠腮腺导管细胞有形态学改变。②TGF—β1在导管细胞表达比腺泡细胞高，导管细胞可能比腺泡细胞更客易发生增殖抑制。     

大鼠双后肢缺血预处理对移植胰缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：探讨大鼠双后肢缺血预处理对移植胰缺血-再灌注损伤的影响,并分析其可能的发生机制.方法：36只糖尿病大鼠随机分为缺血-再灌注组（I/R组,n=6）;缺血预处理组（IPC组,n=6）;缺血预处理＋L-精氨酸甲基脂组（IPC＋L-NAME组,n=6）和缺血预处理＋8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤组（IPC＋DPCPX组,n=6）;缺血预处理＋纳洛酮组（IPC＋Nal.组n=6）;缺血预处理＋维生素C（IPC＋AA组,n=6）.检测各组再灌注前、后血糖,再灌注后2 h血清中肿瘤坏死因子α（TNF-a）、胰腺组织中髓过氧化酶（MPO）和丙二酰二甲醛（MDA）含量,并利用TUNEL查移植胰凋亡细胞.结果：①再灌注后,I/RR组、IPC＋L-NAME组、IPC＋Nal.组和IPC＋AA组血糖、血清中TNF-α、胰腺组织中MPO和MDA比IPC组含量高,IPC＋DPCPX组与IPC组无显著差异.②再灌注后,I/R组、IPC＋L-NAME组和IPC＋AA组胰腺组织凋亡指数比IPC组高,与IPC＋Nal.组和IPC＋DPCPX组较IPC组无显著性差异.结论：①双后肢缺血预处理对大鼠移植胰的缺血-再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与再灌注后一氧化氮（NO）、氧自由基和阿片样物质的释放有关.②腺苷与这种保护作用可能无关,阿片样物质介导的保护作用不是通过减少细胞凋亡途径来完成的.     

苓桂术甘汤对缺血再灌注大鼠心肌TGF-β1 mRNA及蛋白表达的影响

目的：观察苓桂术甘汤对缺血再灌注大鼠心肌转化生长因子TGF—β1 mRNA及蛋白表达的影响,探讨苓桂术甘汤减轻心肌缺血再灌注损伤的机制。方法：40只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,辛伐他汀组,苓桂术甘汤组。辛伐他汀组药量为20mg．kg-1．d-1,苓桂术甘汤组药量为50g．kg-1．d-1,另2组给生理盐水0．1mL／kg。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型。缺血30min、再灌注2h后,采用RT-PCR和westernblotting检测心肌细胞TGF-β1 mRNA及蛋白表达的变化。结果：模型组大鼠心肌的TGF-B1mRNA及蛋白表达水平较假手术组明显增加（P〈0．01）,苓桂术甘汤和辛伐他汀组大鼠心肌的TGF-β1 ,mRNA及蛋白表达水平较模型组明显降低（P〈0．01）,辛伐他汀组和苓桂术甘汤组之间无显著差异（P〉0．05）。结论：苓桂术甘汤减轻缺血再灌注大鼠心肌损伤可能与下调心肌组织TGF—β1 mRNA及蛋白的表达有关。     

CVF在大鼠移植心脏缺血再灌注损伤中的保护作用研究

目的 研究中华眼镜蛇毒因子(cobra venom factor, CVF)对同种大鼠移植心脏缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法 近交系雄性B/N大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,建立腹腔异位心脏移植模型.实验组术前给予CVF尾静脉注射,观察移植心的存活时间,并设B/N大鼠同系对照组.免疫组化法测定各组术后第1、3、5 天移植心脏的C3沉积,并观察移植心的病理变化.结果 接受CVF 20 μg/kg,2 d 1次,尾静脉给药的大鼠,移植心存活时间明显延长,平均达(11.69±0.72)d,而对照组为(6.65±0.35)d(P＜0.01),组织内C3沉积较对照组同期明显减轻,病理损害程度减轻,优于同期对照组.结论 CVF消耗补体显著延长移植心脏存活时间,能明显减轻近交系大鼠移植心脏缺血再灌注损伤.     

FTY720对大鼠同种异体异位心脏移植物缺血-再灌注损伤的影响

目的:观察FTY720对同种异体异位心脏移植物缺血-再灌注损伤的影响并探讨其相关机制.方法:利用Cuff技术建立颈部异位心脏移植模型.FTY720组(n=6)受体鼠自术前3 d开始至手术当日管饲FTY720,剂量为3 mg/kg;对照组(n=6)受体鼠自术前3 d开始至手术当日管饲生理盐水,剂量为1 mL/kg.于移植后8 h切取移植心脏,电镜下观察心肌组织超微结构变化;TUNEL法测细胞凋亡,计算凋亡指数;测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性.结果:移植后8 h,FTY720组心肌细胞形态基本正常,仅轻度水肿,间质水肿和炎性细胞浸润不明显;电镜超微结构显示心肌肌丝排列整齐,肌原纤维间轻度水肿,线粒体饱满,嵴密,水肿不明显,无明显的肌丝断裂现象.FTY720组只有少量心肌细胞凋亡,凋亡指数为(9.20±1.12),对照组心肌细胞凋亡明显,凋亡指数为(16.10±1.65)(t=8.475,P<0.001).FTY720组SOD活性较对照组升高[(51.03±5.54)mmol/g vs.(28.39±2.38)mmol/g],而MDA含量[(10.90±1.93)U/g vs.(16.27±1.36)U/g]和MPO活性[(4.38±1.43)mU/g vs.(9.26±1.41)mU/g]下降(t分别为9.197、5.571和5.592,P均<0.001).结论:FTY720能减轻大鼠移植心脏缺血-再灌注损伤.     

诱导血红素氧合酶-1对小肠移植缺血再灌注损伤的影响

目的：探讨诱导血红素氧合酶-1（HO-1）是否可减轻大鼠小肠移植缺血再灌注损伤及其机制。方法：SD大鼠分成3组：Ⅰ组：血晶素（Hemin）组（n=20）；Ⅱ组：Hemin＋卟啉锌（ZnPP）组（n=20）；Ⅲ组：生理盐水组（n=20）。建立小肠移植缺血再灌注损伤模型。移植后6、12、24、48h分别从各组随机取5只大鼠，切取移植小肠进行HO-1活性测定．普通病理学检查及细胞凋亡检测。结果：术后各时段Ⅰ组HO-1活性均显著强于Ⅱ组及Ⅲ组（P〈0．05），而Ⅱ组和Ⅲ组比较无显著差异（P〉0．05）。各组移植肠缺血再灌注损伤以术后12h最为明显。Ⅰ组表现轻度，而Ⅱ组和Ⅲ组表现中度缺血再灌注损伤。术后各时段Ⅰ组细胞凋亡数少于Ⅱ组和Ⅲ组，差别有统计学意义（P〈0．05），而Ⅱ组和Ⅲ组比较无统计学意义（P〉0．05）。结论：诱导HO-1可通过抑制细胞凋亡而减轻移植肠缺血再灌注损伤。     

β-七叶皂甙钠对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中单核细胞趋化因子-1表达的影响

目的 了解β-七叶皂甙钠对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达的影响作用。方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型，分治疗组和缺血再灌注组，每组包括缺血再灌注后1、6、12h，24、48和72h。每组5只。治疗组给予β-七叶皂甙钠腹腔内注射，缺血再灌注组不予处理。以免疫组织化学法检测不同时期视网膜中的MCP-1的表达。在不同时间段擞大鼠视网膜ERG检测。结果 β-七叶皂甙钠治疗组各期MCP-1的表达低于缺血再灌注未治疗组，而EKGb波波幅明显高于未治疗组（P〈0．05）。结论 β-七叶皂甙钠能下调视网膜缺血再灌注损伤中MCP-1的表达而对视网膜具有保护作用。     

缺血-再灌注大鼠白介素-1β的变化及对肺脏病理学的影响

目的 探讨大鼠肾缺血再灌注后血清IL-1β和肺脏病理学的变化.方法 用无损伤动脉夹钳夹大鼠双侧肾蒂45min制成肾缺血再灌注损伤模型.假手术组只暴露双肾,不钳夹肾蒂.观察缺血再灌注(IR)后2h、6h、12h、24h和72h血清IL-1β的变化和以上各点肺脏病理学的改变.结果 对照组血清IL-1β和Scr水平均为最低,缺血再灌注2h后各值均逐渐升高,12h达峰值,缺血再灌注12h肺组织病理改变最严重.结论 肾缺血再灌注后,其血清IL-1β和Scr水平增高.IL-1β参与了肺组织的病理生理过程.     

益生注射液抗大鼠移植心缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨中药益生注射液对大鼠移植心缺血再灌注损伤的保护作用.方法 采用封闭群SD大鼠20只,随机分为两组,对照组的离体心脏用4 ℃生理盐水保存3 h后,行心脏移植,术后不给任何药物处理;实验组的离体心脏则用含益生注射液的4 ℃生理盐水保存3 h后,行心脏移植,术后每天腹腔注射益生注射液,剂量为8 mg/kg,连续9 d.分别采集受体术前和术后1、3、5、7、9 d血液,检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 对照组与实验组相比,术前两组血浆的MDA含量和SOD活性相似;术后第1天,对照组血浆MDA含量升高,并明显高于实验组(P＜0.05),而SOD活性下降,并明显低于实验组(P＜0.05);此后,两组的血浆MDA含量和SOD活性逐渐恢复到正常,但实验组恢复较快.结论 益生注射液对大鼠移植心缺血再灌注损伤有保护作用.     

实验性大鼠腮腺细胞缺血再灌注TGF-β_1的表达

目的 :探讨TGF - β1(Transforminggrowthfacto -r - β1—转化生长因子 - β1)在实验性大鼠腮腺导管细胞、腺泡细胞的表达区别与形态学改变的关系。材料和方法 :采用颈总动脉结扎法建立腮腺缺血再灌注模型 ,用光镜、免疫组化的方法 ,观察腮腺导管细胞、腺泡细胞形态学及TGF - β1的表达变化。结果 :实验组在缺血再灌注早期 ,开始出现形态学改变 ,中期明显 ,后期渐修复。在缺血和再灌注时间均相同时 ,TGF - β1在导管细胞较腺泡细胞表达高 ,前者增殖抑制明显。结论 :①实验性腮腺缺血再灌注大鼠腮腺导管细胞有形态学改变。②TGF - β1在导管细胞表达比腺泡细胞高 ,导管细胞可能比腺泡细胞更容易发生增殖抑制     

缺血再灌注损伤对移植心脏急性排斥反应的影响

目的:探讨缺血再灌注损伤对移植心脏急性排斥反应的影响.方法:分别建立有IRI(同种系和异系)和避免IRI(同种系和异系)4种大鼠异位心脏移植模型,并设立空白对照组,于术后第7天取供心检测移植心脏,采用RT-PCR方法检测移植心脏MHC-2 mRNA、B7-1/B7-2 mRNA表达情况及应用免疫组织化学染色方法观察CD4+T细胞在供心的浸润情况.结果:同种系两组心脏移植研究表明,IRI增强了移植心脏的免疫源性,但CD4+T细胞浸润情况两组间无明显差异(P>0.05);结合同种异系两组心脏移植研究表明,同种异系移植心脏的免疫源性比同种系两组心脏移植均明显增强,且IRI的异系组增加更明显,CD4+T细胞浸润情况更显著(P<0.05).结论:IRI促进移植心脏排斥反应的发生,不停跳心脏移植由于避免了IRI,因此有助于减轻急性排斥反应发生的强度或延缓急性排斥反应的发生.     

重组腺相关病毒介导的HO-1基因转染对大鼠移植肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨重组血红素氧合酶-1基因（Heme oxygenase-1,HO-1）腺相关病毒（rAVV-HO-1）对大鼠自体移植肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法将48只雄性成年Lewis鼠随机分为两组。转染组（n=24）在供肾切取时应用rAVV-HO-1原位灌注;对照组（n=24）用磷酸盐缓冲溶液（PBS）原位灌注。所有供肾保存于4℃的UW液中24 h后行自体移植,同时切除对侧肾脏。留取术后3h、3d、7d的血清和尿标本以比较血肌酐、尿蛋白;取移植后3 h、3 d、7 d时的肾组织标本,以RT-PCR、免疫组化分析移植肾HO-1基因及蛋白的表达,间接法测定HO-1的活性。结果将rAVV-HO-1原位灌注后,转染组移植后3 h、3 d、7 d移植肾HO-1mRNA的表达强度分别为（0.55±0.13）,（0.82±0.19）和（0.39±0.09）,对照组移植后3 h、3 d、7 d的HO-1mRNA表达强度分别为（0.11±0.07）、（0.10±0.09）和（0.09±0.03）,转染组在各时间点的HO-1 mRNA表达都明显高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。免疫组化结果显示转染组移植后3 h可见HO-1蛋白表达,而对照组无表达。3 d、7 d后转染组移植肾可见HO-1蛋白强阳性表达,而对照组仅可见HO-1蛋白微弱表达,两组具有显著差异。转染组移植后7 d血肌酐水平为（2.14±0.87）mg/dL,明显低于对照组（7.33±2.31）mg/dL,移植后7 d治疗组尿蛋白为（5.10±1.23）μg/mL,明显少于对照组（11.61±3.39）μg/mL,差异均有统计学意义（P〈0.05）。移植后3 d、7 d治疗组胆红素浓度明显高于对照组（P〈0.05）。结论用rAVV-HO-1转染大鼠移植肾可以诱导移植肾中HO-1的稳定表达,并对移植肾缺血再灌注损伤具有保护作用。     

β-七叶皂甙钠对大鼠移植心脏再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的：观察β-七叶皂甙钠（β－AESCIN）对移植心脏再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法：建立大鼠腹腔移植模型，实验组在取供心时通过主动脉根部注入0.1mg（2ml）β－AESCIN；对照组注入2ml生理盐水。心脏移植6h后，取供心，用原位法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞指数，同时观察心肌组织 肌酸激酶（CK－MB）及脂质过氧化物后，取供心，用原位法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞指数（AI）明显下降（P＜0.05），心肌中CK－MB外漏减少（P＜0.01），LPO产生明显下降（P＜0.05）。结论：细胞凋亡存在于移植心脏灌注损伤中，β-AESCIN能显著降低移植心脏细胞凋亡指数，减轻心肌组织损伤，其机制可能是通过有效阻止氧自由基产生而发挥作用。