一氧化氮合酶对增生性瘢痕影响意义的研究

目的观察一氧化氮合酶（Nitrogen oxide synthetase，NOS）在增生性瘢痕与正常皮肤组织及细胞中的表达特征及其差别．并通过应用NO供体或NOS抑制剂对培养的瘢痕成纤维细胞进行体外药物干扰，探索NO、NOS在增生性瘢痕形成中的作用。方法取临床增生性瘢犍下．术病人的瘢痕组织及周围少许正常皮肤，体外培养获得皮肤和穰痕成纤维细胞．通过免疫细胞化学及RT—PCR方法比较两种组织及细胞中NOS的表达及分布的差异。分别以100～500μM的NO供体硝普钠（Sodium nitroprusside，SNP）、NOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L—Arginine methyl，L-NAME）作用于瘢痕成纤维细胞，观察细胞增殖的变化；并用免疫细胞化学和RT—PCR方法比较作用前后成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化。结果免疫组化检测及RT—PCR方法检测显示增生性瘢痕组织及细胞中NOS表达相对于皮肤组织及成纤维细胞中明显减少（p〈0．05）。瘢痕细胞经SNP作用后，细胞增殖显著降低。免疫细胞化学方法和RT-PCR方法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原结果显示，从SNP200μM组开始Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著降低（p〈0．05）。经L—NAME200μM作用后，Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著增加（p〈0．05）。结论增生性瘢痕组织及细胞中NOS含量较正常皮肤组织及细胞明显减少，NO供体SNP对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及胶原表达起到抑制作用，NOS抑制剂L—NAME对其胶原表达则起到促进作用，结果提示NOS表达降低可能与瘢痕增生密切相关，因此改变NO的产生及NOS的活性可望调控瘢痕成纤维细胞的生物学行为．     

内皮型一氧化氮合酶基因体外转染对犬内皮祖细胞功能的影响

目的探讨人内皮型一氧化氮合酶基因(heNOS)转染对犬骨髓源内皮祖细胞(EPC)功能的影响。方法用携带heNOS基因的5型腺病毒作为载体(Ad5-heNOS),对体外定向培养扩增的骨髓源犬EPC进行转染,以未转染的犬EPC作为对照。用酶联免疫吸附试验(ELISA)和硝酸还原酶法检测转染后的EPC中heNOS蛋白的表达和NO的产量,并检测转染后EPC的增殖、黏附、迁移、抗衰老和成血管能力等功能。结果 Ad5-heNOS转染48 h后,转染组EPC的eNOS蛋白表达量和NO产量均明显高于未转染组[(2091.67±172.489)pg/mL vs.(158.00±30.914)pg/mL;(49.5±5.16)μmol/Lvs.(39.7±7.24)μmol/L](均P<0.01);转染组EPC的细胞增殖数、黏附数、迁移数均明显高于未转染组(0.52±0.03 vs.0.31±0.02;28.00±1.41 vs.11.83±1.45;109.67±6.95 vs.72.67±6.29)(均P<0.01),而衰老细胞百分数明显低于未转染组(0.22±0.02 vs.0.32±0.01)(P<0.01);转染heN...     

转染Sp1基因对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原表达的影响

目的 探讨重组Sp1基因转染人增生性瘢痕成纤维细胞的可行性,以及转染Sp1基因对细胞增殖速率和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响. 方法 体外重组Sp1基因,借助真核表达载体系统.转人体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,通过激光共聚焦显微镜观察报告基因表达,并确定细胞转染效率.应用Real-time PCR法比较转染前后Sp1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达;采用CCK8比色法,比较转染细胞与未转染细胞增殖状况. 结果 基因转染后,约30%的被转染细胞表达绿色荧光;Sp1 mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为:5.26±0.76、1.08±0.18、1.09±0.15,转染组Sp1 mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组明显增高(P<0.01,n=5);Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为:2.49±0.40、1.88±0.30,0.96±0.18、0.95±0.18,0.97±0.15、0.93±0.13,转染组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组均明显增高(P<0.01,n=5). 结论 瘢痕成纤维细胞可作为Sp1转染的靶细胞,Sp1基因可能是导致瘢痕异常增生的重要基因.     

p27基因转染对增生性瘢痕成纤维细胞-胶原网收缩的影响

目的：研究p27对增生性瘢痕成纤维细胞-胶原网收缩的影响差异，探讨p27在瘢痕形成中的作用。方法：取体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞（HTsFb），p27基因转染HTsFb，建立成纤维细胞-胶原网模型，观察p27基因转染对p27基因转染HTsFb-胶原网收缩的影响差异。结果：p27能抑制HTsFb-胶原网收缩。结论：p27可能通过抑制瘢痕收缩来抑制瘢痕形成。     

异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 评价异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 SD大鼠,雌雄各半,体重240～ 280 g,采用皮下注射去氧皮质酮的方法制备高血压模型,采用随机数字表法,将64只造模成功的大鼠随机分为4组(n＝16):高血压组(H组)、小剂量异丙酚组(P1组)、中剂量异丙酚组(P2组)和大剂量异丙酚组(P3组).P1组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚20、30、40 mg·kg-1·h-13 h,H组给予等容量生理盐水.分别于给药前、给药1h、3h时记录平均动脉压(MAP).给药3h时处死大鼠,摘眼球法采集血样,硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(N0)浓度,取胸主动脉,采用RT-PCR和Western blot法测定eNOS mRNA、iNOS mRNA及其蛋白表达水平.结果 与H组比较,P1组、P2组和P3组给药3h时MAP降低,血清NO浓度升高,主动脉eNOS mRNA及其蛋白表达上调,主动脉iNOS mRNA及其蛋白表达下调,且呈剂量依赖性(P<0.05或0.01).结论 异丙酚降低高血压大鼠血压的机制与下调iNOS表达,上调血管内皮细胞eNOS表达,促进NO释放有关.     

辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠胸主动脉诱导型一氧化氮合酶及内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠胸主动脉诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮型一氧化氮合酶( eNOS)表达的影响.方法 清洁级雌性Wistar大鼠80只,4月龄,体重200～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组:正常对照组(Ⅰ组,n=8)、假手术组(Ⅱ组,n=8)、脓毒症组(Ⅲ组,n=32)和辛伐他汀预处理组(Ⅳ组,n=32).Ⅱ组打开腹腔找到盲肠后还纳腹腔,缝合腹壁切口.Ⅲ组和Ⅳ组采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型.Ⅳ组制备脓毒症模型前经胃管灌注辛伐他汀20 mg/kg,1次/d,连续2周,Ⅰ组～Ⅲ组给予等容量生理盐水.Ⅱ组于假手术后6h处死动物,Ⅲ组和Ⅳ组于盲肠结扎穿孔后3、6、24、48 h分别取8只动物,处死,取胸主动脉,采用Western blot法测定iNOS和eNOS表达水平.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组iNOS和eNOS表达差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ组和Ⅳ组iNOS表达上调,eNOS表达下调(P＜0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组iNOS表达下调,eNOS表达上调(P＜0.05).结论 辛伐他汀预处理可下调脓毒症大鼠血管内皮细胞iNOS表达和上调血管内皮细胞eNOS表达,对血管内皮细胞功能有保护作用.     

转染NF-1基因对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原表达的影响

目的探讨重组NF1基因转染人增生性瘢痕成纤维细胞的可行性,以及转染NF1基因对细胞增殖速率和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法体外重组NF1基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,通过激光共聚焦显微镜观察报告基因表达,并确定细胞转染效率。应用Real time PCR法比较转染前后NF1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达;采用CCK-8比色法,比较转染细胞与未转染细胞增殖状况。结果基因转染后,约50%的被转染细胞表达绿色荧光;NF1 mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为:7.27±1.16、2.01±0.38、1.87±0.29,转染组NF1 mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组明显增高(P<0.01,n=5);Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为:3.01±0.48和2.05±0.25、0.89±0.18和0.94±0.16、0.99±0.11和0.92±0.19;转染组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组均明显增高(P<0.01,n=5)。结论瘢痕成纤维细胞可作为NF1转染的靶细胞,NF1基因可能是导致...     

碱性成纤维细胞生长因子对牵张性脊髓损伤后一氧化氮合酶活性的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对牵张性脊髓损伤后一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用。方法大鼠脊髓T13~L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位监测P1-N1波幅下降至术前波幅70%后,于损伤平面以下经蛛网膜下腔置细导管,治疗组分别于术后即刻0·5、1、2、3、4h经细导管注入bFGF溶液20μl(含bFGF20μg),对照组在相同时间注入等量生理盐水,采用放射强度测定法测定一氧化氮合酶(NOS)含量。结果正常组NOS活性为3·92±1·31,脊髓损伤后各时相点生理盐水组较正常组NOS活性显著增加,而bFGF治疗组NOS活性明显下降,与生理盐水组比较差异有显著性意义(P<0·01)。结论bFGF能够抑制脊髓损伤后NOS的活性,减轻脊髓继发性损害,从而保护脊髓组织。     

重组人肝细胞生长因子对心脏移植冠状血管内膜内皮型一氧化氮合酶的影响

目的探讨重组人肝细胞生长因子（rh-HGF）对大鼠心脏移植冠状血管内膜内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的影响。方法近交系健康雄性Wistar大鼠80只和雄性sD大鼠40只，建立腹腔异位心脏移植模型。实验分3组：同系移植组，异系移植包括对照组和实验组。分别于术后15、60d采集各组标本，沿冠状动脉切取心肌组织，进行免疫组织化学检测冠状血管内膜eNOS的表达，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测冠状血管内膜eNOS mRNA表达，以及观测冠状血管病理变化。结果实验组移植心脏冠状动脉内皮细胞完整，内膜轻度增厚，管腔轻度狭窄，病理改变明显轻于对照组。RT-PCR测定eNOS mRNA在移植心脏冠状动脉内膜的表达，实验组（1．81±0．25）、（1．57±0．24）均明显高于对照组（0．76±0．06）、（0．53±0．04）及同系移植组（0．82±0．06）、（0．89±0．10）表达（P〈0．01）。结论rh-HGF通过上调移植心脏冠状血管内膜eNOS表达，保护冠状血管内皮功能，以预防移植心脏血管病的发生。     

冠心病与内皮型一氧化氮合酶基因多态性的关系

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因-786T/C,4a4b,894G/T等3个多态性位点与冠心病(CAD)发病相关.方法 对146例中国汉族人群CAD患者和113例正常对照进行遗传学分析,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和PCR技术分析2个SNP位点即-786T/C和894G/T,以及1个VNTR位点4a4b,检测各位点基因型和等位基因频率,采用HaploView 4.0及SPSS 13.0软件经x2检验比较两组间各位点基因型及等位基因频率的差异.结果 CAD组中eNOS基因-786T/C位点CC基因型频率为2.0%,4a4b位点4a/4a基因型频率为5.4%,对照组eNOS基因-786T/C位点CC基因型频率为0.0%,4a4b位点4a/4a基因型频率为0.9%,差异有统计学意义(P＜0.05).CAD组和对照组在eNOS基因的894G/T位点等位基因和基因型频率分布差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 eNOS基因-786T/C和4a4b多态性与中国汉族人群CAD存在关联,C等位基因和4a等位基因可能是CAD发病的危险因素.eNOS基因894G/T位点与CAD发病无明显相关.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between the 3 polymorphisms ( -786T/C,4a4b,894G/T) in endothelial nitric oxide synthase (eNOS) gene and coronary artery disease (CAD).Methods 146 patients with CAD and 113 healthy unrelated individuals in a Chinese Han nation were involved.The genotype and allele frequency of each polymorphism of the eNOS gene in these patients and normal controls were examined by using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms (PCR-RFLP) or PCR methods.Genotypes and allele frequency were analyzed by HaploView 4.0 and SPSS13.0 software.Results The frequency of CC genotype of the -786T/C was 2.0%,and that of 4a/4a genotype of the 4a4b was 5.4% in CAD.The frequency of CC genotype of the - 786T/C was 0.0%,and that of 4a/4a genotype of the 4a4b was 0.9% in controls ( P＜0.05 ).There were significant differences in both allele and genotype frequency of -786T/C and 4a4b between CDA group and control group.Between patients with CAD and controls,there were no significant differences in the frequency of the genotypes and alleles of the 894G/T in eNOS gene.Conclusion The - 786T/C and 4a4b polymorphisms of eNOS gene may be associated with CAD.The individuals with C allele of - 786T/C and 4a allele of 4a4b are susceptible to CAD.There is no significant correlation between 894G/T polymorphism in eNOS gene and CAD.     

人内皮型一氧化氮合成酶基因重组腺病毒载体构建及其在人血管平滑肌细胞的表达

目的 利用AdMax腺病毒载体系统构建人内皮型一氧化氮合成酶基因(heNOS)重组腺病毒并检测其在体外培养人血管平滑肌细胞中表达.方法 将质粒PMSCV-heNOS通过聚合酶链反应(PCR)法扩增出heNOS全长基因,插入PSUCMV中构建成腺病毒穿梭质粒PSUCMV-heNOS,转化DH5α大肠杆菌,挑选细菌单克隆进行DNA测序,酶切鉴定正确;通过PSUCMV-heNOS与质粒pBHGE3在293细胞中同源重组,得到携带heNOS基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(AdCMV-he-NOS).转染体外培养的人血管平滑肌细胞,MTT检测细胞增殖,用免疫组织化学和Western blot等方法检测heNOS蛋白的表达.结果 (1)PCR产物电泳结果,酶切鉴定和测序鉴定结果证实构建人eNOS重组腺病毒载体成功,病毒滴度达3.5×l010PFU/ml;(2)根据体外培养的人血管平滑肌细胞(HVSMCs)形态学变化,免疫组织化学进行平滑肌细胞表型标志物α-actin染色,证实为HVSMCs;(3)转染120 h,AdCMV-heNOS病毒感染复数(MOI)分别为50、150、250、300、450、A570值分别为1.410±0.081、1.357±0.150、1.303±0.311、0.995±0.248、0.731±0.101,其中感染复数300明显稳定抑制血管平滑肌细胞的增殖,差异有统计学意义(P＜0.01).免疫组织化学和Western blot检测显示转染细胞heNOS蛋白明显表达.结论 heNOS重组腺病毒的构建及其表达为血管内膜增生等疾病的基因治疗提供可能.

Abstract：

Objective To construct recombinant adenovirus vector carrying the human endothelial nitric oxide synthase gene (heNOS) and detect its expression in human vascular smooth muscle cells in vitro. Methods heNOS was cloned by polymerase chain reaction (PCR) using plasmid PMSCV-heNOS,heNOS cDNA was inserted into adenovirus shuttle plasmid-PSUCMV to generate a recombinant plasmid PSUCMV-heNOS, transfected into E. coli DH5α, and positive clones were correctly constructed and confirmed by DNA sequencing analysis and restriction endonucleas analysis. The plasmid PSUCMV-heNOS was co-transfected with pBHGE3 in 293 cells to generate replication-defective recombinant adenovirus vector carrying heNOS gene. Human vascular smooth muscle cells were transfected by Ad-heNOS. The effect on the proliferation of human vascular smooth muscle cells was investigated by MTT assay. The expression of heNOS was detected by immunohistochemistry staining and Western blotting. Results ( 1 ) PCR, restrictive digestion, and sequencing revealed the successful construction of the recombinant adenovirus vector carrying heNOS gene and its titer was 3.5 × 1010 PFU/ml; (2) It was confirmed that the human vascular smooth muscle cells cultivated in vitro were characterized by morphology and immunohistochemistry strain of α-actin; (3) At 120 h, the A570 values in multiplicity of infection (MOI) 50, 150,250,300,450 were respectively 1. 410 ±0. 081, 1. 357 ±0. 150, 1.303 ±0. 311,0. 995 ±0. 248 and 0. 731 ±0. 101. The proliferation of human vascular smooth muscle cells was significantly and stably inhibited with MOI 300 of AdCMVheNOS ( P ＜ 0. 01 ). Immunostaining and Western blotting with heNOS in engineered cells were positive.Conclusion The successful construction of AdCMV-heNOS and expression may provide an opportunity for the gene therapy of vascular intimal hyperplasia.     

内皮型一氧化氮合酶在大鼠糖尿病膀胱病变中的作用

目的 探讨大鼠糖尿病膀胱病变组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达及意义.方法 雄性SD大鼠36只.随机分为正常组、多尿组和糖尿病组,每组12只.采用尿动力学方法对大鼠膀胱容量、单次排尿量、膀胱内最大压力、残尿壁和排尿率等指标进行评价,应用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测大鼠膀胱组织中eNOS mRNA和蛋白质的表达水平,统计学分析其与膀胱功能的相关性.结果 6周时正常组大鼠最大膀胱容量、单次排尿量、残余尿量分别为(0.75±0.04)、(0.70±0.02)和(0.06±0.00)ml,多尿组分别为(1.62±0.15)、(1.52±0.30)和(0.11±0.01)ml,糖尿病组分别为(2.29±0.16)、(2.06±0.25)和(0.23±0.01)ml,与正常组和多尿组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);12周时正常组上述指标分别为(0.86±0.06)、(0.80±0.04)和(0.07±0.00)ml,多尿组分别为(1.93±0.10)、(1.77±0.11)和(0.13±0.02)ml,糖尿病组分别为(2.65±0.26)、(2.09±0.21)和(0.56±0.06)ml,各组间差异具有统计学意义(P＜0.01).糖尿病组与6周时相比,各指标增加,其中残余尿量差异具有统计学意义(P＜0.01).6周时3组排尿率分别为(93.3±2.1)%、(93.2±2.7)%和(90.0±2.5)%,组间差异无统计学意义(P＞0.05);12周时分别为(93.1±2.2)%、(93.8±3.2)%和(78.1±2.6)%,糖尿病组小于其他2组(P＜0.05).各组膀胱内压力差异无统计学意义.糖尿病组膀胱压力曲线出现压力小波动,曲线不规则.6周时各组膀胱组织中eNOSmRNA表达相对灰度值分别为0.81±0.12、0.90±0.12和1.98±0.16,糖尿病组高于其他2组,差异具有统计学意义(P＜0.01);12周时为0.87±0.17、1.05±0.11和2.89±0.23,糖尿病组与6周时相比增加(P＜0.01).6周时各组eNOS蛋白表达相对灰度值分别为0.98±0.12、0.93±0.14和2.28±0.16,糖尿病组高于其他2组(P＜0.01);12周时为1.03±0.13、1.14±0.11和3.12±0.20,糖尿病组与6周时相比增加(P＜0.01).糖尿病组大鼠膀胱eNOS蛋白表达强度与排尿率旱负相关(r=-0.669,P＜0.01).结论 膀胱组织中eNOS mRNA和蛋白表达上调可能参与了糖尿病膀胱病变的发生发展.     

神经源性膀胱组织中一氧化氮合酶表达的特点和意义

目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型NOS(iNOS)和内皮型NOS(eNOS)在神经源性膀胱组织中表达状况,探讨一氧化氮在神经源性膀胱组织中产生及作用特点.方法 神经源性膀胱患儿30例.男18例,女12例.年龄(6.3±3.1)岁.30例均行手术治疗,术中留取膀胱组织标本,采用免疫组织化学方法检测膀胱组织中nNOS、iNOS和eNOS表达状况,10例正常膀胱组织标本作对照. 结果 正常膀胱体部组织nNOS阳性表达,走行在平滑肌纤维之间,分布于平滑肌细胞表面,膀胱基质也有表达,组织化学评分(HS)为2.8～4.0和1.2～2.7;平滑肌细胞iNOS阴性表达,平滑肌细胞基质有少量稀疏表达,HS为0～0.4和0～0.1;eNOS表达分布于血管内皮细胞中,分布稀疏,平滑肌细胞无表达.膀胱颈部组织表达高于膀胱体部组织,以nNOS表达为主.神经源性膀胱组织中以iNOS表达为主,nNOS表达明显减少;eNOS主要分布于膀胱基质的内皮细胞,膀胱平滑肌、成纤维细胞阴性表达;病变膀胱组织血管稀疏,微血管密度100倍视野下可见到(6.8±3.2)个血管灶,低于正常膀胱组织的(16.7±6.3)个(P＜0.01).结论 正常膀胱组织nNOS主要分布在膀胱颈中,NO合成主要受nNOS调节.神经源性膀胱患者膀胱组织中氮能神经元分布稀疏,nNOS表达减少,iNOS表达上调,NO的合成与调节可能主要来源于iNOS,受iNOS水平调节,eNOS表达下降,提示膀胱组织血供不良.     

脑出血患者一氧化氮、一氧化氮合酶的变化及临床意义

目的 探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)与脑出血的关系。方法 测定76例脑出血患者及66例健康人血浆NO、NOS含量，分析上述指标在出血后3个时期的变化以及与患者颅内血肿量、是否合并蛛网膜下腔出血和临床预后的关系。结果 与对照组相比，脑出血1～3d组NO、NOS含量明显高于4～7d组、14d组和对照组，NO、NOS变化与颅内血肿量和／或合并蛛网膜下腔出血有一定关系。结论 NO、NOS参与了脑出血病理生理过程，其变化对病情的预后有一定的意义。     

shRNA慢病毒转染串珠素对大鼠硬膜外瘢痕中成纤维细胞增殖能力的影响

目的 通过研究经shRNA慢病毒转染串珠素的大鼠硬膜外瘢痕组织成纤维细胞的增殖能力,探讨其对硬膜外瘢痕组织形成的影像. 方法 30只Wistar大鼠行椎板切除术,建立模型,于培养4周后提取硬膜外瘢痕组织.通过组织块贴壁法培养硬膜外瘢痕组织中的成纤维细胞并将细胞分为3组:未转染组(空白对照组)、荧光蛋白(GFP)慢病毒转染组(GFP组)和shRNA慢病毒转染组(shRNA组,内含GFP).成纤维细胞转染成功后,分别通过Western-blot、荧光定量PCR及MTT法检测3组的成纤维细胞的RNA、蛋白质表达及细胞增殖的差异. 结果 Western-blot检测显示shRNA组串珠素蛋白明显低于空白对照组和GFP组.荧光定量PCR检测显示shRNA组串珠素RNA表达低于空白对照组和GFP组.MTT检测显示0h各组吸光度(A)值差异均无统计学意义(P＞0.05),24 ～ 96 hshRNA组吸光度值(A)低于空白对照组和GFP组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 经shRNA慢病毒转染串珠素能抑制大鼠硬膜外瘢痕组织成纤维细胞的增殖.     

良性前列腺增生组织NO合酶表达的免疫组化研究

为探讨一氧化氮合酶（ＮＯＳ）在良性前列腺增生（ＢＰＨ）组织中的表达及其意义，采用免疫组化法对２４例ＢＰＨ组织中ＮＯＳ表达进行检测。结果显示：ＮＯＳ在ＢＰＨ组织神经纤维和神经节均有表达，血管内皮细胞和腺体上皮细胞亦可见ＮＯＳ表达。２４例ＢＰＨ中，外周区强阳性１７例，弱阳性７例；移行区强阳性１０例，弱阳性１４例，两者比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。提示ＢＰＨ组织中存在一氧化氮（ＮＯ）神经传导通路，ＮＯ可影响前列腺平滑肌张力。     

大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶基因表达的变化

目的　探讨大鼠脊髓损伤后3种类型一氧化氮合酶（NOS）mRNA表达的变化规律。方法　成年SD大鼠36只,随机分为种类6组,每组6只大鼠。建立大鼠脊髓压迫伤模型,以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定伤段脊髓组织神经型（nNOS）、诱导型（iNOS）及内皮型（eNOS）一氧化氮合酶的mRNA表达情况。结果　脊髓压迫伤后nNOSmRNA及NOSRNA表达增强,伤后6h达到高峰0.633±0.012、1.236±0.207;iNOSmRNA表达亦增高,但在伤后24h才达到高峰1.043±0.049。结论　脊髓损伤后NOSmRNA的表达增强,但不同类型的NOSmRNA变化规律不同,增强或抑制不同NOSmRNA的表达可能减轻脊髓继发性损伤。