激光汽化椎间盘的动物实验研究

作者使用波长１．０６μｍ Ｎｄ：ＹＡＧ激光，对１２只成年杂种犬经腹腔进行了椎间盘（Ｌ３～６）的汽化研究。术后按计划如期将动物处死取材进行椎间盘的组织学观察。结果表明：至预定处死期前无１例出现肢体运动及括约肌功能障碍。光镜下，术后即刻椎间盘内空腔形成，空腔边缘可见纤维环、软骨终板及部分椎体松质骨断面。术后２～８周空腔被肉芽组织及纤维组织所充填。术后１２～４０周空腔内纤维组织则为软骨组织所取代。在本研     

复合骨重建兔颈椎的生物学研究

目的：探讨同种异体皮质骨环（HCA）、自体红骨髓（RBM）及异体松质骨（CAB）复合骨重建颈椎的能力，为临床应用提供理论依据。方法：取39只新西兰大耳白兔．切除第4颈椎制成椎体缺损模型并分为3组，A组植入HCA—RBM—CAB复合物．B组植入自体髂骨．C组植入HCA—RBM-丙烯酸树脂骨水泥（acrylic bone cement．ABC），在术后不同时间分别进行大体标本、组织学、X线片、扫描电镜观察，并行生物力学测试．比较三者修复骨缺损的能力。结果：术后2个月x线片及大体标本观察，A组与B组植骨材料与上下颈椎融合，有大量骨痂；C组未完全融合，只有少量骨痂生长：组织学观察示术后1个月A组与B组可见有散在骨岛及骨小梁形成．C组仅可见少量新骨及软骨岛形成．2个月时A组与B组形成大量成熟骨基质、骨小梁及骨髓腔，C组仅有少量编织骨形成．骨细胞不成熟，未形成骨髓腔。术后2个月扫描电镜观察示A组有大量新骨形成。2个月时生物力学测试结果表明A组与B组力学指标无显著性差异（P〉0．05），A、B组与C组比较有显著性差异（P〈0、01）。结论：HCA—RBM—CAB复合物具有较强的成骨能力及生物力学稳定性．可作为有效的椎体重建材料。     

多孔钽复合BMP-7修复兔软骨及软骨下骨缺损的实验研究

目的研究多孔钽与BMP-7复合后对兔关节软骨及软骨下骨缺损修复的作用,探讨其软骨修复能力及与宿主组织的生物相容性。方法取成年新西兰大耳白兔48只,随机分为3组(n=16),制备兔股骨内髁软骨缺损模型,分别于右侧股骨内髁植入复合BMP-7多孔钽材料(A组)、多孔钽材料(B组)及不植入材料(C组)。术后观察动物一般状况,术后4、8、16周取材行大体、组织学、扫描电镜观察,术后16周行Micro-CT观察A、B组组织空隙内软骨及骨长入情况和多孔钽周围成骨情况。结果术后动物存活良好,手术切口均Ⅰ期愈合。大体观察示,随时间延长,A、B组术后缺损区材料表面均出现新生软骨并逐渐覆盖缺损区域,A组术后新生软骨组织出现更早,表面平整光滑,修复程度较B组好;C组术后各时间点缺损区均未修复,表面逐渐被纤维组织填充。除术后4周A、B组软骨缺损修复大体观察评分比较差异无统计学意义(P0.05)外,术后8、16周A组评分均高于B组(P0.05)。扫描电镜观察示,随时间延长,A组材料表面新生软骨及成骨细胞数量逐渐增多,细胞外基质逐渐将材料覆盖,孔隙内长入的新生骨组织逐渐增多,A组新生骨组织及细胞外基质分泌明显多于B组。甲苯胺蓝染色组织学观察示,术后4、8、16周两组多孔钽界面新生软骨及骨组织逐渐增加,出现新生骨小梁并向材料孔隙内生长,骨组织与多孔钽接触趋于紧密,软骨缺损区域逐渐被新生软骨样组织覆盖,新生软骨组织与多孔钽结合越发紧密;A组新生软骨及骨组织多于B组。Micro-CT观测示,术后16周A组组织骨密度、骨小梁厚度、骨小梁数目、骨体积分数均高于B组,骨小梁间隙低于B组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论多孔钽具有良好的生物相容性,其与BMP-7复合后可与宿主形成稳定的连接与整合,对软骨及软骨下骨缺损修复起良好作用。     

纳米羟基磷灰石/聚酰胺66复合物椎间融合器在山羊颈椎融合中的应用

目的:观察纳米羟基磷灰石/聚酰胺66复合物(n-HA/PA66)椎间融合器在山羊颈椎前路融合中的效果。方法:15只成年雌性山羊随机分成A、B、C组,每组5只,均行经前路C3/4椎间盘切除术,A组椎间置入n-HA/PA66椎间融合器植骨;B组置入钛网植骨;C组采用自体三面皮质髂骨块植骨。分别于术前、术后、术后4周、8周及12周拍X线片观察测量各组手术节段平均椎间高度(disc space height,DSH)、椎间角(intervertebral angle,IVA)及前凸角(lordosis angle,LA);12周时处死动物取颈椎标本进行生物力学测试及组织学检查。结果:术前三组DSH、IVA和LA无显著性差异。术后即刻及术后4周三组间DSH无显著性差异(P0.05);术后8周及12周,A组DSH与B、C组有显著性差异(P0.05);B组和C组差别无显著性(P0.05)。术后即刻及术后4周、8周三组间IVA无显著性差异(P0.05);术后12周,A、B组IVA与C组有显著性差异(P0.05),A组与B组无显著性差异。术后即刻及术后4周、8周三组间LA差异无显著性(P0.05);术后12周,A、B组LA与C组有显著性差异(P0.05),B组与C组无显著性差异。术后12周时,A、B组颈椎标本各向角位移与C组有显著性差异(P0.05);除后伸外A组各向稳定性优于B、C组;平均刚度均强于B、C组;ROM均小于B、C组(P0.05)。A组在植骨区和椎间融合器边缘可见大量成熟的骨小梁组织,材料交界处可见大量纤维骨痂及新生骨形成,骨组织与材料表面已发生嵌合;B组的植骨块与椎体间的新生骨小梁已改建为成熟的骨小梁,部分区域尚可见未完全矿化的类骨质;C组可见较多的纤维骨痂形成,在骨小梁表面有红色的类骨质,部分区域有成熟的骨小梁。结论:n-HA/PA66椎间融合器能有效维持椎间隙高度,促进山羊颈椎前路植骨融合。     

骨质疏松合并颈椎病病人的颈椎椎体病理观察

目的：探讨颈椎椎体骨质疏松在颈椎病发病中的作用。方法：分3组。正常组5例，颈椎间盘突出组（颈椎组）8例，骨质疏松合并颈椎管狭窄（疏松组）8例。标本取血C5椎体上1/4的松质骨。所聚标本分别进行光镜和扫描电镜观察。结果：随病情发展，光镜下，骨小梁逐渐变细，间隙大小不一；电镜下见椎体松质骨逐渐丧失了原有海绵样结构，大量骨陷窝形成，造成骨小梁变细、穿孔、吸收甚至消失。骨小梁未见微骨痂形成。结论：骨质疏松是颈椎病发病因素之一，颈椎椎体骨小梁异常改建是以不断增多的吸收陷窝导致骨小梁穿孔、变细、吸收甚至消失完成的，虽造成椎体变形的主要原因，而微骨折在颈椎变形中可能不起作用。     

不同充填材料应用于山羊经皮椎体成形术的组织学研究

目的:研究聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、磷酸钙人工骨(CPC)和复合重组人骨形态发生蛋白-2的磷酸钙人工骨(rhBMP-2/CPC)在山羊骨质疏松症模型上行经皮椎体成形术(PVP)后的组织学表现。方法:6～8岁雌性山羊8只,均行双侧卵巢切除术,术后4个月建立骨质疏松症模型。在C形臂X线机监视下,随机选取8只山羊的L2-L6的两节椎体行PVP,分别充填PMMA、CPC和rhBMP-2/CPC,保证每只山羊的两节穿刺椎体的充填材料各不相同,术后4个月处死所有动物,取出椎体,组织学观察。结果:8只山羊16个椎体的PVP均成功,共出现4个椎体的渗漏。肉眼观察:PMMA与松质骨界限清晰,一个椎体取材时交界面出现破碎和脱落现象;而CPC和rhBMP-2/CPC与椎体内松质骨界限不清,互相融合生长。HE染色光镜观察:PMMA与骨小梁松散结合,界限明显,未见PMMA吸收和新生骨形成;CPC均匀分布于骨小梁和骨髓组织内,有CPC吸收现象,同时可见有新生软骨样团块形成,并有新生骨组织形成向其中心长入;rhBMP-2/CPC除了CPC的表现外,可见成骨活动活跃。结论:在组织学上,rhBMP-2/CPC和CPC均具有降解活性和骨传导活性,优于PMMA。rhBMP-2/CPC还具有诱导成骨活性,可能成为PVP中强化骨质疏松性椎体的首选充填材料。     

自体骨髓基质干细胞辅助Mosaicplasty技术促进骨软骨缺损修复整合

目的探讨以基于骨髓基质干细胞(BMSCs)的组织工程技术与自体骨软骨柱镶嵌移植术(Mosaicplasty)相结合的方法修复骨软骨及促进缺损间隙的整合效果。方法12只中国山羊于术前2周抽取骨髓,体外培养自体BMSCs。术中以自制器械分别制造山羊双后肢股骨内髁负重区直径5 mm、深3 mm的复合骨软骨缺损各一处。在Mosaicplasty技术填充缺损后,即以动物自体BMSCs与透明质酸凝胶相复合,注射填充于左后肢骨软骨柱之间及与周围组织的间隙内,右后肢单纯自体骨软骨柱移植作为对照组。术后第4、8、16周分别取材进行组织学、组织化学及蛋白聚糖含量等检测。比较16周时两组的缺损区惨复软骨组织与正常软骨的蛋白聚糖含量。结果两组自体骨软骨柱移植软骨均以透明软骨存活,与周围正常软骨间无明显差异。实验组骨软骨柱的间隙内可见新生软骨修复,组织学表现与周围正常软骨相同。交界区整合良好,间隙消失;对照组各时间点软骨间的间隙为纤维组织或纤维软骨填充,仍有间隙存留。移植软骨的基质、实验组骨软骨柱间隙内的新生软骨基质及Ⅱ型胶原免疫组化染色均为阳性。蛋白聚糖含量比较显示,对照组骨软骨柱间隙内新生组织的蛋白聚糖含量均低于正常软骨和实验组,差异有显著性意义(P< 0．05)。结论基于BMSCs的组织工程技术结合Mosaicplasty技术,可以有效地促进骨软骨缺损间隙的整合,改善修复效果好,有望成为一种理想的促进骨软骨缺损修复的方法。     

兔关节软骨下骨缺损骨移植后移植骨组织学变化实验研究

目的观察兔关节软骨下骨缺损后行骨水泥+自体骨或骨水泥+同种异体骨修复术后不同时间点移植骨组织学变化情况。方法选取30只成年健康新西兰大白兔,随机分为自体骨和同种异体骨组,每组各15只。模拟临床骨巨细胞瘤病灶刮除术,建立关节软骨下骨缺损动物模型,分别填充不同材料修复骨缺损。自体骨组填充骨水泥+自体骨,同种异体骨组填充骨水泥+同种异体骨,分别于术后4、6、8周取出植入骨。先行大体观察,然后通过HE染色切片观察其组织学变化。两组术后4、6、8周植入骨内成骨细胞和破骨细胞数量比较采用两因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。P0.05为差异有统计学意义。结果术后4周自体骨组植入骨骨小梁开始吸收,植骨周围存在部分新生毛细血管和少量中性粒细胞,移植骨与宿主骨相邻的骨基质内可见少量骨细胞和破骨细胞,骨再生现象形成;同种异体骨组植入骨骨小梁未见明显吸收,植骨区可见肉芽组织,骨再生现象不明显。术后6周自体骨组植入骨骨小梁大部分被吸收,骨基质边缘新生毛细血管和新生成骨细胞增多,移植骨周边可见多核破骨细胞和排列不规则的编织骨,为成骨初期;同种异体骨组植入骨可见散在骨小梁及纤维结缔组织包绕死骨,存在溶骨现象,骨基质边缘可见少量新生毛细血管,破骨细胞及成骨细胞数量极少,无编织骨形成。术后第8周自体骨组植入骨骨小梁被吸收,可见大量新生骨、新生毛细血管和板层骨,骨基质边缘有排列较密集的成骨细胞,编织骨较术后6周时体积变小且排列逐步规整;同种异体骨组植入骨周围可见少量新生毛细血管,部分区域钙盐沉积较明显,少量新生骨小梁形成,其周围可见少量成骨细胞和破骨细胞,部分坏死钙化区内有板成骨形成。同种异体骨组术后第4、6、8周成骨细胞数量及术后第4、8周破骨细胞数量均低于自体骨组(P均0.05)。自体骨组和同种异体骨组术后第6、8周成骨细胞数量均高于术后第4周(P均0.05),自体骨组术后第8周成骨细胞数量高于术后第6周(P0.05)。自体骨组术后第8周破骨细胞数量均高于术后第4、6周(P均0.05),同种异体骨组术后第6周破骨细胞数量高于术后第4、8周(P均0.05)。结论关节软骨下骨缺损填充骨水泥+自体骨较填充骨水泥+同种异体骨植入骨区骨融合率高,成骨效能较好,术后不同时间点自体骨成骨细胞和破骨细胞表达较同种异体骨活跃。     

可降解聚乳酸腰椎间融合器植骨融合成骨方式的研究

目的:探讨可降解聚乳酸腰椎间融合器实现椎体间植骨融合的成骨方式。方法:健康9月龄内江猪48只,随机分成两组:实验组24只,采用聚-DL-乳酸可降解腰椎融合器置入L4/5椎间隙并植骨;对照组24只,采用与融合器相同大小自体骨行L4/5椎间植骨。分别于1、3、6、9、12、18个月时取标本进行组织学检查。结果:术后1个月,实验组填充骨与融合器之间没有见纤维组织的长入,在融合器与骨之间可见少量软骨细胞存在;对照组植骨部位见软骨组织与纤维组织交错。术后3个月,实验组中融合器边缘与中央与填充骨和椎体骨接触部分可见明显的胶原纤维、纤维组织、软骨组织交互长入,软骨内化骨形成成熟的骨小梁,但排列很紊乱;对照组中软骨组织逐渐进化为骨组织,骨小梁排列较术后紊乱,部分已钙化成骨。术后6个月,实验组中残存融合器边缘及中空部分仍可见大量纤维细胞、软骨细胞,部分软骨组织已经成骨并钙化;对照组已达到良好的骨性融合。术后9个月,实验组已大部分融合,填充骨与椎体间的界限已消失,手术部位仍可见明显胶原、纤维组织,软骨细胞进化为骨细胞;对照组骨性融合,可见大量软骨组织和成熟板层骨形成。术后12个月,实验组基本达到骨性融合,仍可见明显软骨组织和纤维组织,对照组完全融合,且塑形良好。术后第18个月,两组均达到骨性融合,并且塑形良好接近周围正常骨组织。结论:生物降解可降解聚-DL-乳酸腰椎间融合器在猪的椎间成骨方式主要是软骨内成骨和纤维性成骨,膜内成骨不起重要作用。     

比较带蒂筋膜瓣包裹接种自体红骨髓的组织工程骨修复骨缺损时促血管化成骨与膜诱导成骨作用

目的比较带蒂筋膜瓣包裹组织工程骨在修复骨缺损时促血管化成骨与膜诱导成骨的作用,为临床修复骨缺损提供参考依据。方法采用兔自体红骨髓(autologous red bone marrow,ARBM)及含重组人BMP-2的骨诱导活性材料构建组织工程骨。将4～5月龄新西兰大白兔60只(体重2.0～2.5 kg),随机分为A、B、C 3组,A组16只,B、C组各22只。制备长1.5 cm的右尺骨长段骨-骨膜完全缺损模型,A组于骨缺损处植入组织工程骨;B、C组在骨缺损邻近处制备一筋膜瓣包裹组织工程骨后植入骨缺损,B组将筋膜瓣蒂部切断形成游离筋膜瓣,C组为带蒂筋膜瓣。术后4、8、12、16周,每组随机取4只实验动物,取骨缺损区组织进行大体观察、组织学及免疫组织化学染色观察;8、12、16周B、C组各另取2只实验动物行腋动脉墨汁灌注观察。结果大体观察示,术后4、8周A组有纤维结缔组织形成,B、C组筋膜瓣形成类似骨膜样纤维组织,其中B组有软骨样组织形成,C组有新生骨形成;12、16周A组骨痂形成少,B组新生骨较多,C组骨干形成。组织学观察示,术后4、8周A、B组新生血管和骨小梁极少,C组血管丰富且成熟骨小梁及软骨组织形成;12、16周A组新生血管及骨小梁仍较少,B组血管数量较多且成熟骨小梁显著增加,髓腔结构形成但闭阻;C组血管数量减少,成熟骨结构形成,骨髓腔再通。免疫组织化学染色示,C组各时间点CD105、CD34、Ⅷ因子表达均高于A、B组。骨形态计量分析显示,术后各时间点C组新生骨小梁体积明显大于A、B组(P<0.05);A、B组间除4周差异无统计学意义(P>0.05)外,其余时间点差异均有统计学意义(P<0.05)。血管图像分析显示术后各时间点C组骨修复区内血管再生面积比值明显大于A、B组(P<0.05)。墨汁灌注检查示,各时间点B组成骨区为稀疏的墨染区;C组成骨区墨染数量多且较密集,8周达高峰,之后逐渐减少。结论 带蒂筋膜瓣包裹复合自体ARBM的组织工程骨,早期以促血管化成骨作用占主导地位,后期血管化成骨作用逐渐消失,以膜诱导成骨作用为主。     

Histological changes in intervertebral discs after smoking and cessation: experimental study using a rat passive smoking model

Background Passive smoking has been reported to induce intervertebral disc degeneration in rats, and the objective of the present study was to histologically investigate changes in smoking-induced intervertebral disc degeneration after cessation of smoking. Methods Four-week-old rats were subjected to passive smoking for 8 weeks in a smoking box [20 cigarettes a day: one cigarette an hour (inhaled over 3 minutes and followed by ventilation with room air for 5 minutes)] to induce intervertebral disc degeneration. Smoke-free periods of different lengths were then established, and intervertebral discs were histologically analyzed. Results Immediately after 8 weeks of passive smoking, intervertebral discs exhibited cracks, tears, and misalignment of the annulus fibrosus, and increased fibrous tissue was seen in the nucleus pulposus. In addition, the level of interleukin-1β in intervertebral discs was higher in the smoking group than in the non-smoking group. After cessation, progression of degeneration ceased, and the matrix of the nucleus pulposus and annulus fibrosus exhibited increased fibrous connective tissue and proteoglycan. However, there were no changes in annulus fibrosus misalignment. Interleukin-1β levels also remained significantly elevated after 8 weeks of cessation. Conclusions While the annulus fibrosus degeneration caused by smoking was partially irreversible after cessation of smoking, the amount of mucin (proteoglycan) in the nucleus pulposus and annulus fibrosus tended to increase after cessation, thus suggesting the possibility that smoking-induced intervertebral disc degeneration can be repaired to some degree by cessation of smoking.     

实验性脊柱内固定后相应区域椎间盘超微结构观察

目的　观察脊柱内固定后相应区域椎间盘的超微结构变化。　方法　日本大耳白兔2 4只,随机分成实验组和对照组,每组12只。实验组骨膜下游离T1 0 ～L3棘突和关节突,克氏针制成“L”形,将钢丝横行穿过T1 1、1 2 ,L1、2 的关节突关节,并与置于T1 1 ～L3棘突两旁的克氏针系紧,对相应区域的脊柱行内固定术。对照组未行手术,仅喂养至实验完成。术后6个月,对两组动物摄X线片观察1次,随后处死动物。取两组动物的L1 椎间盘组织(髓核、纤维环内侧及纤维环外侧)行透射电镜观察,对两组T1 2 、L2 椎间盘组织分别行水平面和矢状面透射电镜及扫描电镜观察。　结果　X线片显示,实验组与对照组椎体及椎间隙差别不明显;透射电镜与扫描电镜观察,实验组椎间盘的髓核、纤维环内层细胞的结构改变较纤维环外层早;对照组的髓核、纤维环内层细胞的结构改变与纤维环外层差别不明显。在退变的椎间盘基质中,蛋白多糖颗粒和特殊结构明显减少。髓核与纤维环基质内有蛋白多糖颗粒和一种特殊结构,而特殊结构在髓核与纤维环内层的形态不一致。　结论　脊柱内固定术后6个月,实验组在异常应力环境下发生椎间盘退变。髓核、纤维环内层基质内的特殊结构分布有特殊规律,与蛋白多糖颗粒在椎间盘退变中的生物学行为密切相关。     

异体软骨痂移植的初步结果

目的 通过观察异体软骨痂移植后的生物学过程判断其作为植骨材料的可行性。方法 将1只SD大鼠的双侧股骨干造成闭合骨折,1周时切开获取软骨痂,－196℃冻存2周后移植于5只SD大鼠的左侧胫骨干部分缺损区（此骨缺损模型的成骨活动只表现为膜内化骨的方式）,右侧植入异体松质骨作为对照组。将取材标本制成不脱钙切片,经亮绿和藏红T染色。结果 术后1周取材1例,缺损区实验侧和对照侧均未见有软骨组织和骨组织形成。术后2周处死其余4只大鼠,实验侧（3／4）可见有软骨组织和骨组织形成。骨组织内已有髓腔形成,骨组织周围是软骨组织,与宿主骨之间有纤维组织相隔。结论 异体软骨痂移植后未被吸收,可经软骨内化骨的方式产生骨组织,为软骨痂作为植骨材料的进一步研究和开发提供了初步依据。     

Allograft of cultured chondrocytes into articular cartilage defects in rabbits--experimental study of the repair of articular cartilage injuries

Articular cartilage defects were created by dill holes, 2 mm wide and 3 mm deep, through the articular cartilage into the subchondral bone in the patellar groove of the femur in mature rabbits. The defects received graft of cultured chondrocytes and the matrix obtained from the primary culture of chondrocytes isolated from the articular cartilage or auricular cartilage in immature rabbits. The isolated cells were cultured for 10 to 14 days. For graft, the cultured chondrocytes together with the matrix were detached from the culture chamber using rubber policemen and centrifuged. The repair of the grafted defects or defects without graft (control) was histologically studied 2 to 12 weeks after operation. The defects without the graft were progressively filled with fibrous tissue containing spindle shaped cells, fibers perpendicular to the surface, and matrix showing weak metachromasia with toluidin blue at 8 weeks. The defects received articular cartilage cell graft were occupied by new cartilage tissue consisting colonylike crumps of chondrocytes 2 weeks after operation. The crumps showed strong metachromasia with toluidin blue and strong stainability for safranin-O. By 4-8 weeks, the defects were filled with homogeneous cartilage. At 12 weeks, arrangement of the chondrocytes of the superficial layer of the new cartilage became columnar as seen in the normal articular cartilage. The defects received elastic cartilage cell graft were filled by reformed cartilage with chondrocytes surrounded by elastic fibers 2-12 weeks after operation. The results indicate that allograft of cultured chondrocytes with matrix into the articular cartilage defects accerated the repair process of the defects by formation of the new cartilage derived from the grafted chondrocytes.     

自体骨软骨移植与含富集骨髓干细胞松质骨移植修复兔关节软骨缺损

目的:评价自体骨软骨移植与含富集骨髓干细胞松质骨镶嵌移植两种方法修复全层关节软骨缺损的生物学特征和效果。方法:采用新西兰大白兔制作左右后肢全层软骨缺损模型,分别进行自体骨软骨镶嵌移植、含富集骨髓干细胞松质骨镶嵌移植修复,对照组不作任何修复,每组12只。术后第4、8、12周处死动物取材,分别进行膝关节活动度测定、大体观察、光镜观察与电镜观察。结果:移植实验组在第12周时均能以类透明软骨组织修复缺损,对照组为纤维肉芽组织。形态学检查表明,两种方法均能以类透明软骨组织覆盖缺损,骨软骨移植组无明显免疫排斥现象,随着时间延长,修复高度逐渐增加。骨软骨移植组同含富集骨髓干细胞松质骨镶嵌移植组效果无显著差别。结论:骨软骨移植、含富集骨髓干细胞松质骨镶嵌移植两种方法均能以类透明软骨组织修复全层关节软骨缺损,含富集骨髓干细胞松质骨镶嵌移植更适用于较大面积软骨缺损的修复。     

关节－干骺端软骨细胞移植修复兔桡骨缺损

目的研究组织工程软骨移植于成年兔桡骨缺损后的生长、分化与转归特点,以及引导性骨再生和骨缺损的修复机制。方法取自一日龄新生兔关节－干骺端复合物的软骨细胞在几丁质纤维网中增殖21d后装入硅胶管内,套接在成年兔桡骨干1cm的缺损处（实验组12只）;对照组10只在缺损处套接空硅胶管,2只仅填入裸几丁质纤维。术后4周两组各处死3只动物取材,其余在术后16周取材。结果实验组术后4周3只动物的工程软骨组织在骨缺损内形成软骨样组织,术后16周9只动物中有2只动物的缺损愈合。对照组术后4周已开始骨愈合,术后16周9只动物的骨缺损全部愈合。结论新生兔关节－干骺端复合物的软骨细胞在成年兔桡骨缺损区（套管内）未肥大钙化,未再现软骨内化骨过程。缺损内的工程软骨可能因占据空间、阻碍成骨成分进入而中断了骨缺损修复过程。引导性骨再生的机制可能是人工膜管加强了骨膜的天然引导作用而促进了骨愈合。     

骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞生长因子激发纤维环细胞成骨的潜能

目的研究联合使用重组人骨形态发生蛋白（recombinant human bone morphogenetic protein-2，rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）椎间盘纤维环细胞成骨潜能的激发作用。方法向体外培养的纤维环细胞中分别及联合加入rhBMP-2和bFGF，观察纤维环细胞的表型表达特点。结果联合使用rh-BMP-2和bFGF能够明显促进椎间盘细胞增殖，提高细胞内碱性磷酸酶活力，增加I型胶原分泌，提高钙盐沉积程度，提高骨钙素的表达水平。结论联用rhBMP-2和bFGF能够诱导纤维环细胞向成骨细胞方向分化，分泌钙盐并形成钙结节。     

Changes in vascularity of cartilage endplate of degenerated intervertebral discs in response to melatonin administration in rats

We carried out an experimental investigation of cartilage endplate vascularity of degenerated intervertebral discs produced by exogenous melatonin (MEL) treatment. Adult Swiss albino rats were divided into three groups: control, operated degeneration, and MEL treatment. There were five rats in each group and, using a posterior approach, cuts were made parallel to the endplates in the posterior annulus fibrosus in five consecutive intervertebral discs between the 5th and 10th vertebral segments of the rats' tails. At 8 weeks, five of these animals were treated with exogenous MEL (s.c. injection of 30 μg/100 g body weight daily for 4 weeks). In each experimental group, one animal was examined using CT scanner to study the density of the cartilage endplate of the disc. To evaluate the bone growth and vascularity of the cartilage endplate region, the animals were killed for subsequent histopathological evaluation. We found that the vascular channel counts and percentage areas from animals treated with MEL were significantly lower than from the operated degeneration animals. Accordingly, the density histogram in the MEL group showed a spike profile for both the vertebral body and the cartilage endplate, indicating an increase in the amount of higher density tissues in these regions. Our results demonstrate that the use of MEL reduces the cartilage endplate vascularity of degenerated intervertebral discs, suggesting that it may have an osteoinductive effect on bone formation. Further studies are needed to characterize fully the relevance of our findings for the treatment of disorders such as postmenopausal osteoporosis.     

低温等离子体射频消融术应用于椎间松解的组织学观察

目的评价低温等离子体射频消融术应用在椎间松解及其自然转归的组织学变化。方法将12只2.0~2.5月龄的健康雌性山羊随机分为低温等离子体消融组(消融组,n=6)和传统胸椎椎间盘切除组(传统组,n=6)。每只动物均处理中段6个胸椎椎间盘(T_5/T_6/T_7/T_8/T_9/T_(10)/T_(11)),光镜下分别比较2种术式术后即刻和术后12周自然转归的组织学变化。结果消融组术后即刻椎间盘组织(纤维环,髓核和软骨终板)基本被去除,仅在软骨终板和骨性终板交界处残留一薄层软骨终板,表面光整,厚度均匀,周围组织细胞形态基本正常。传统组术后即刻纤维环、软骨终板有不同程度的剩余,骨性终板无明显破坏,松解面凹凸不平,刀痕周围的组织细胞形态正常。消融组术后12周显微镜下见椎间残留有部分薄层软骨终板已被不同程度的钙化,椎间前后缘融合稍差;椎间中部被大量成纤维细胞连接,软骨细胞增生更加明显,椎体骨小梁和终板下骨小梁之间无明确的界限,潮标前移变薄。传统术后12周显微镜下见软骨终板大部分消失,仅在近椎体后缘残留;终板下骨小梁排列不规则,上下终板下骨小梁之间未呈连续性生长,而是被大量由软骨细胞和成纤维细胞组成的组织连接,其中可见新生的毛细血管,上下潮标不对称并前移。结论采用低温等离子体消融术行椎间准备可以较好地去除软骨终板,处理后的终板面较传统组光整,且对周围健康组织影响小,和传统组都能获得早期的椎间融合倾向。     

AAV2-hVEGF165与AAV2-hTGFβ1对退变兔椎间盘纤维环细胞的生物学效应

目的采用基因治疗方法，把AAV2-hVEGF165和AAV2-hTGFβ1共转染兔纤维环细胞，观察其生物学活性，并进一步评价人血管内皮生长因子165（hVEGF165）和人转化生长因子β1（hTGFβ1）逆转椎间盘退变的可行性。方法分离并培养兔椎间盘纤维环细胞，以腺相关病毒（AAV2）为载体，分别携带hVEGF165和hTGFβ1eDNA，转染兔纤维环细胞。用Westernblotting检测hVEGF165和hTGFβ1的表达，并用同样的方法检测纤维环细胞中Ⅰ型胶原的表达。结果AAV2能够感染兔椎间盘细胞。用Westernblotting可以检测到AAV2-hVEGF165和AAV2-hTGFβ1在退变椎间盘细胞中的表达，并且，两种因子联合转染纤维环细胞时Ⅰ型胶原的表达要比分别转染是显著增高。结论hVEGF165和hTGFβ1共同转染培养的兔退变纤维环细胞，Ⅰ型胶原的表达显著增高。