特异性乙型肝炎病毒X基因反义核酸体外抗病毒作用

为了观察互补于乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因的三段硫代反义核酸（ＡＳＯＮ）体外抗病毒作用，采用ＥＬＩＳＡ和ＰＡＰ－ＥＬＩＳＡ法检测ＡＳＯＮ作用前后２，２，１５细胞上清中乙型肝炎病毒表面抗原、ｅ抗原及Ｘ抗原（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｘＡｇ）含量变化及细胞原位杂交检测细胞内ＨＢＶＤＮＡ含量变化。结果表明，三段ＡＳＯＮ均可抑制ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢｘＡｇ的表达，其抑制率分别为８０．６５％、６２．７６％和７８．０７％；细胞内ＨＢＶＤＮＡ也明显减少。据此认为，ＨＢｘＡｇ表达量下降可能系ＡＳＯＮ序列特异性封闭作用所致，而ＨＢ－ｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ表达量以及ＨＢＶＤＮＡ含量降低，可能是通过ＨＢｘＡｇ对ＨＢＶＤＮＡ启动子的反式激活功能降低而实现的。     

硫代磷酸反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒抗原表达的体外抑制作用

目的 研究硫代磷酸反义寡核苷酸（Ｓ－ＡＳＯＮ）的抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。方法 作者以２．２．１５细胞作为研究对象，在ＨＢＶ基因Ｓ区和Ｃ区的翻译起始位点设计合成了２段１６聚Ｓ－ＡＳＯＮｓ，采用酶联免疫吸附试验检测了培养细胞上清中表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）的分泌情况。结果 当Ｓ－ＡＳＯＮ浓度为每天２μｍｏｌ／Ｌ时，对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的抑制率可分别达到８８％和７５％，而无关     

乙肝病毒S基因区反义寡核苷酸对表面抗原表达的抑制作用

为了研究硫代反义寡核苷酸的抗乙型肝炎病毒作用，以２．２．１５细胞为靶细胞，在ＨＢＶ Ｓ基因起始区设计了１段ＡＳＯＮ，用酶联免疫吸附法检测了作用细胞的ＨＢＶ的分泌情况。结果显示，ＡＳＯＮ在每天给予２μｍｏｌ／Ｌ的浓度情况下抑制８８％的ＨＢｓＡｇ产生，无关序列的寡核苷酸无明显抑制作用，同时未见ＡＳＯＮ的细胞毒作用。     

不同基因区反义寡核苷酸抑制乙型肝炎病毒基因表达的比较

目的探讨反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）特异性抗病毒作用。方法在ＨｅｐＧ２２．２．１５细胞中观察了４段１６聚针对乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因不同功能区的ＡＳＯＮ对病毒复制的抑制作用。结果ＡＳＯＮ能显著抑制ＨＢＶ基因的抗原表达（Ｐ＜０．００１），在Ｓ基因区设计的ＡＳＯＮ对ＨＢｓＡｇ的抑制作用明显优于Ｃ基因区的ＡＳＯＮ（Ｐ＜０．０５）。反之，在Ｃ基因区设计的ＡＳＯＮ对ＨＢｅＡｇ的抑制作用又明显优于Ｓ和Ｐｒｅ－Ｓ２基因区的ＡＳＯＮ（Ｐ＜０．０１）。４段ＡＳＯＮ的联合用药并不能增强其对ＨＢＶ的抑制作用。结论ＡＳＯＮ可能成为一种有开发潜力的抗病毒药物。     

脂质体干扰素的体外抗乙型肝炎病毒效应

本文采用２．２．１５细胞进行脂质体干扰素与干扰素的体外抗乙型肝炎病毒实验，用ＥＬＩＳＡ法测ＨＢｅＡｇ，用反向血凝法及ＥＬＩＳＡ法测ＨＢｓＡｇ，用斑 交法测ＨＢＶ ＤＮＡ，结果证实，脂质体ＩＦＮ体外对ＨＢｅＡｇ的抑制率较ＩＦＮ高，能较好地抑制ＨＢＶ ＤＮＡ，但与ＩＦＮ一样，对ＨＢｓＡｇ无抑制作用。     

三螺旋形成寡核苷酸抑制乙型肝炎病毒复制及抗原合成的实验研究

目的 探讨三螺旋形成寡核苷酸抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。方法 针对ＨＢＶ核心启动子ＳＰ１位点,合成２１ｍｅｒ硫代磷酸三螺旋形成寡核苷酸及２１ｍｅｒ无关对照寡核苷酸。采用ＬＥＩＳＡ,斑点杂交法分别检测了经寡核苷酸处理的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞及空白对照组细胞培养上清ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶ ＤＮＡ水平。结果 ＴＦＯ２１组２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ及ＨＢＶ ＤＮＡ分泌量明显低于空白对照组。ＴＦ     

肝舒胶囊在体外细胞培养中抗HBV活性的研究

目的：研究肝舒胶囊在２．２．１５细胞培养中抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。方法：用２．２．１５细胞体外培养,对肝舒胶囊抗ＨＢＶ活性进行评价。结果：肝舒胶囊５ｇ／Ｌ加药后４ｄ对２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的抑制率为５１．１６％和７４．８３％,在加药后第８天抑制作用达高峰,对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的抑制率分别为７５．７２％和８０．０２％。     

丙型肝炎患者胃粘膜中病毒抗原的检测

了解肝炎患者胃粘膜组织中忆型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染状况。采用免疫组化Ｓ－Ｐ法以抗－ＨＣＶＮＳ３单克隆抗体及抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃ多克隆抗体对３３例慢性丙型肝炎患者胃粘膜组织中ＨＢＶ和ＨＣＶ进行了检测。同时还用双标记技术对二种抗原进行了双重染色以了解其在胃粘膜组织中的分布。ＨＣＶＮＳ３、ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ的检出率分别为３３．３３％（１１／３３）、４８．４８％（１６／３３     

乙型,丙型肝炎病毒与肝细胞癌的关系

乙型、丙型肝炎病毒与肝细胞癌的关系山东省千佛山医院（２５００１４）王文奇为进一步探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的关系，我们测定了２６例ＨＣＣ患者的血清ＨＢ－ｓＡｇ、抗ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ、抗ＨＢｃ和抗Ｈ...     

多聚酶链式反应在慢性乙型肝炎血清学标志物检测中的应用

作者应用多聚酶链式反应检测９５例慢性乙型肝炎患者的血清标本，ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｃ阳性组，ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ阳性组，ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｃ阳性组，抗－ＨＢｓ阳性组，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ阳性组其ＨＢＶＤＮＡ阳性率分别为９６．５５％（２８／２９例），７８．９５％（１５／１９例），４０％（８／２０），２０％（２／１０例），１０％（１／１０例），并提出乙型肝炎病毒复制和传染性     

反义寡核苷酸对H1δ9细胞中了型肝炎病毒

在Ｈ-１δ９细胞中观察反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）及其硫代修饰物（Ｓ－ＡＳＯＤＮ）对丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因复制与表达的抑制作用。方法在分子水平证实互补于ＨＤＶ基因链核酶自裂位点和Ｓｔｅｍｌ区的ＡＳＯＤＮ可抑制核酶自裂的基础上，进一步台成针对该区６８４－６９８位核苷酸的１５聚ＡＳＯＤＮ及Ｓ－ＡＳＯＤＮ，在培养的ＨＩδ细胞中加人不同寡核苷酸，分别采用ＥＬＩＳＡ和斑点杂交法检测上清中ＨＤＡｇ及细胞中的ＨＤＶｃＤＮＡ。结果加人终浓度为６μｍｏｌ／Ｌ的Ｓ－ＡＳＯＤＮ后２４ｈＨ１δ９细胞中ＨＤＶＲＮＡ复制及ＨＤＡｇ分泌均受抑制，抑制率分别为８４５％和７６．１４％。Ｓ－ＡＳＯＤＮ的终浓度为２、４、６μｍｏｌ／Ｌ时，其抑制作用呈剂量依赖关系。在同等剂量时，ＡＳＯＤＮ与Ｓ－ＡＳＯＤＮ抑制作用相近。结论提示所用ＡＳＯＤＮ及Ｓ－ＡＳＯＤＮ均能有效抑制转基因细胞中ＨＤＶ基因的复制与表达，为进一步在动物体内研究Ｓ－ＡＳＯＤＮ抗ＨＤＶ的作用提供了实验依据。     

血清HBeAg阴性与HBeAg/IC及A1896变异的关系

目的探讨血清ＨＢｅＡｇ阴性（双抗体夹心法）与ＨＢｅＡｇ／ＩＣ形成及ＨＢＶ变异株Ａ１８９６的关系，评价ＨＢｅＡｇ／ＩＣ检测的临床意义．方法单克隆抗ＨＢｅ固相ＥＬＩＳＡ检测血清中ＨＢｅＡｇ／ＩＣ；套式多聚酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ；３＇碱基特异多聚酶链反应判断Ａ１８９６变异；ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ，研究对象为１１７例慢性ＨＢＶ感染者，２０例健康对照统计处理采用卡方检验．结果ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ检出率明显高于ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阴性血清，Ｐ＜０００１（９１３％ｖｓ３６２％）；２９份ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性血清中仅５例（１７２％）检出Ａ１８９６，而且其中２例与野毒株（Ｇ１８９６）混合感染并伴ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性．２９份中１７份（５８７％）为ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性的Ｇ１８９６感染；血清抗ＨＢｅ阳性组Ａ１８９６检出率高于抗ＨＢｅ阴性组，Ｐ＜００５（２５％ｖｓ３２％）．结论ＨＢｅＡｇ／ＩＣ为ＨＢＶ活跃复制指标；临床ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性患者仍多数为Ｇ１８９６感染，ＨＢｅＡｇ／ＩＣ形致双抗体夹心法不能检出ＨＢｅＡｇ；抗ＨＢｅ应答可能为促使前Ｃ变异的重要因素     

重型肝炎患者丙型肝炎病毒抗体的存在状态及其意义

采用合成肽酶免疫分析法（ｓｐＥＬＩＳＡ）和美国Ｏｒｔｈｏ公司第２代ＥＬＩＳＡ（２ｎｄＥＬＩｓＡ）对１０３例重型肝炎患者血清丙型肝炎病毒抗体（抗ＨＣＶ）作筛选，阳性血清用重组免疫印迹法（４·ＲＩＢＡ）作鉴定，并用逆转录聚合酶链反应检测ＨＣＶＲＮＡ，以重新评价重型肝炎患者血清抗ＨＣＶ存在状态及其意义。发现ｓｐＥＬＩＳＡ和２ｎｄＥＬＩＳＡ检测抗ＨＣＶ的阳性率分别为２２．３３％（２３／１０３）和１９．１０％（１７／８９），阳性血清经４·ＲＩＢＡ鉴定仅５９．０９％（１３／２２）阳性，ＨＣＶＲＮＡ检出率亦仅为６０．００％（９／１５）。动态观察，约１／３抗ＨＣＶ阳性患者抗ＨＣＶ持续２～４周消失。血清反复冻融可使阳性检测吸光值（Ａ４９２）下降，阴性检测Ａ４９２值升高。血清抗ＨＣＶ阳性和（或）ＨＣＶＲＮＡ阳性患者均合并乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染，但合并ＨＣＶＲＮＡ阳性患者预后较差。结果提示单独ＨＣＶ感染不是本地区重型肝炎发生的主要原因，部分患者抗ＨＣＶ存在可能属既往感染或系“被动输入”所致，也可能为假阳性，检测ＨＣＶＲＮＡ对于确切了解重肝患者ＨＣＶ感染状况和判断预后有一定的意义。     

丙型肝炎病毒感染后肾小球肾炎

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与肾小球肾炎病变的关系。方法应用免疫组化技术以丙型肝炎病毒抗体（抗ＨＣＶ）ＮＳ３和抗ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体对２１例丙型肝炎患者尸检石蜡包埋肾组织中的丙型肝炎抗原（ＨＣＡｇ）进行检测。结果ＨＣＡｇ的检出率为６１９％（１３／２１），其中膜增殖性肾炎（ＭＰＧＮ）１１例，系膜增殖性肾炎（ＭｓＰＧＮ）１例，１例未见明显病变。ＨＣＡｇ阳性颗粒定位于肾小球系膜区、系膜细胞及肾小管上皮细胞胞浆内。２１例中有１７例血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）标志呈阳性，同单纯ＨＢＶ感染组相比，本组患者出现肾小球肾炎病变更为多见（χ２＝８５，Ｐ＜００１）。结论ＭＰＧＮ型是ＨＣＶ感染后肾小球肾炎病变的主要类型。     

肝毒清对HBV转染细胞表达功能的抑制

以乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）转染细胞作为模型，观察了纯草药方肝毒清对２．２．１５细胞分泌ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和Ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）的影响，并以抗病毒药物无环鸟苷为对照。提示草药肝毒清在体外有一定的抗病毒作用。     

快速简便筛检乙型肝炎病毒C基因启动子变异的方法及应用

目的明确中国乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）区段变异特点及其可能的临床意义。方法应用错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法，结合核苷酸序列分析，检测１４３例ＨＢｓＡｇ阳性的ＨＢＶ慢性感染者中Ｘ基因／ＢＣＰ区的核苷酸（ｎｔ）１７６２碱基由Ａ→Ｔ和１７６４碱基由Ｇ→Ａ变异。结果在１１４份ＨＢＶＤＮＡ阳性血清中，３７例感染ＢＣＰ变异株，其中３１例为慢性肝炎病例，６例为慢性ＨＢＶ无症状感染者（ＡｓＩ）；其中４１例ＨＢｅＡｇ阳性ＡｓＩ中仅２例检出，１８例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＩ中也有４例检出。ＨＢｅＡｇ阳性的６５例中，１３例有ＢＣＰ区变异，而ＨＢｅＡｇ阴性的４９例中，２４例有ＢＣＰ区变异（Ｐ＜０．０１）。结论错配ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检测这一对点突变，具有快速、简便、适用的优点；ＨＢＶ毒株ＢＣＰ变异可能与肝病变活动有一定关系。     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA

为了更准确、简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究。发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平。检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）、ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝炎１３例（Ｂ组）、ＨＢｓＡｇ阴性和乙型肝炎病毒核心抗体（抗－ＨＢｃ）阳性正常对照组３０例（Ｃ组）及ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（－）肝硬化患者１２例（Ｄ组），分别有４５．５％、３０．８％、１３．３％和１００％患者血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性。ＨＢＶＤＮＡ在一些抗－ＨＢｓ（＋）肝病患者和所谓健康人的血清中也存在。Ａ、Ｂ两组检出有ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ感染患者分别占８１．８％和５３．８％。提示套式和免疫套式ＰＣＲ是简便、快速而又高度敏感的检测方法；ＨＢＶ感染可能是引起ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝病的重要原因，且ＨＢｓＡｇ阴性肝病病因大多与病毒感染有关；应该重新认识自然感染者血清中抗－ＨＢｓ的临床意义。     

HBV感染者血清HBeAg/IC和HBV DNA间的关系

资料与方法：ＨＢＶ感染者１１７例,正常对照２０例,研究对象排除其它肝炎病毒感染,半年内未经抗病毒及免疫治疗。采用ＥＬＩＳＡ及Ｎａｓｔｅｄ－ＰＣＲ方法分别检测ＨＢＶ感染者血清中ＨＢｅＡｇ／免疫复合物（ＩＣ）和ＨＢＶ ＤＮＡ。 结果：１１７例ＨＢＶ感染者血清中共检出ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性２３例,ＨＢＶＤＮＡ阳性 ５５例, ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性者中 ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９１．３％（２１／２３例）,而ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阴性的９４例中ＨＢＶ ＤＮＡ阳性３４例,阳性率为３６．２％,两组差异有非常显著性,ｘ２＝８．１５…     

反基因及反义寡核苷酸抑制乙型肝炎病毒复制与表达的研究

目的 探讨反基因及反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。方法 设计合成针对ＨＢＶ核心启动子Ｓｐ１位点（１７３４ｎ－１７５４ｎｔ）及前Ｃ ＲＮＡ,前基因组ＲＮＡ５’端起始区（１８１４ｎｔ－１８３４ｎｔ）的２１聚硫代修饰反基因寡核苷酸（ＤＮａｎ２１）及反义寡核苷酸（ＯＤＮａｓ２１）。将各寡核苷酸与２２．１．５细胞温育。     

肝细胞癌患者乙、丙和丁型肝炎病毒感染状况

为探讨乙型、丙型和丁型肝炎病毒（ＨＢＶ，ＨＣＶ和ＨＤＶ）感染对肝细胞癌（肝癌）发生的意义，本文作者采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应法对７２例广东籍肝癌患者ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＤＶ血清标志以及血浆ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ阳性率分别为８４．７％和１８．１％，显著高于１２８名健康对照者。ＨＢｓＡｇ和／或ＨＢＶＤＮＡ总阳性率为９３．１％，抗－ＨＣＶ和／或ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２７．８％，ＨＢＶ和ＨＣＶ重叠感染率为２２．２％。其中６１例ＨＢｓＡｇ阳性肝癌的ＨＤＶ血清标志检出率为１４．８％，明显高于６１例ＨＢｓＡｇ阳性的肝炎对照者。结果表明，广州地区肝癌的发生，主要与ＨＢＶ和ＨＣＶ感染密切相关外，且可能与ＨＤＶ感染有关。