HSP70/CD80嵌合DNA疫苗对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用

目的 研究HSP70/CD80嵌合DNA质粒对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用,为安全可靠的新型免疫调节性疫苗奠定基础.方法 将40只雌性健康BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、哮喘组、pcDNA3.1载体组、HSP70/CD80嵌合DNA疫苗组,每组10只.用HSP70/CD80嵌合疫苗免疫小鼠后,建立鸡卵清蛋白致敏的小鼠哮喘模型,观察其气道阻力变化,支气管肺泡灌洗液中IL-13、IFN-γ含量的变化.取肺组织进行病理组织学分析,观察肺内炎症情况.结果 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠后,能有效减轻气道炎症(P＜0.05),降低气道阻力(P＜0.05),肺泡灌洗液中IFNl的分泌增加(P＜0.05),IL-13降低.结论 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可促进免疫反应向Th1偏移并增加IFN-γ的生成,减轻气道炎症,降低气道阻力,这为过敏性哮喘新型免疫调节性疫苗的机制及应用研究提供了实验资料.     

Apyrase减轻过敏性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑

目的探讨apyrase(三磷酸腺苷二磷酸水解酶)对过敏性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的作用。方法采用C57BL/6雌性小鼠建立鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发的过敏性哮喘模型,并给予apyrase处理;以非致敏的同背景雌性小鼠作为对照。于最后1次激发24~48 h,完成小鼠气道高反应性测定、支气管肺泡灌洗及取肺组织。病理学方法评价肺组织气道炎症、杯状细胞及气道重塑,瑞氏吉姆莎染色并计数灌洗液的分类细胞,酶联免疫吸附法测定灌洗液细胞因子,实时定量PCR法测定肺组织转录因子(GATA3)水平。结果 Apyrase减轻哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞炎症,降低气道炎性细胞、Th2相关细胞因子及肺组织GATA3核酸水平;减轻气道上皮杯状细胞增生及胶原沉积。结论 Apyrase可减轻小鼠过敏性哮喘的气道炎症及气道重塑。     

Rho激酶与哮喘气道高反应性

炎症细胞和结构细胞促进哮喘患者支气管的急性收缩和慢性气道重建。当前哮喘的治疗不能有效地抑制气道高反应性和气道重建。近来发现Rho激酶在哮喘的发病中起重要作用，而Rho激酶抑制剂可抑制气道平滑肌收缩、调节气道平滑肌特异性的基因转录、减轻气道壁增厚和气道炎症，从而减轻急性和慢性气道高反应性。     

抗SH2-Bβ抗体可减轻哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性

目的:研究SH2-Bβ在支气管哮喘发病中的作用.方法:SH2-Bβ被阻断后,观察哮喘小鼠肺泡灌洗液中细胞数、应用酶联免疫吸附实验肺泡灌洗液、血清及脾细胞培养液中IgE、IL-4含量变化.应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化.结果:同哮喘组比,anti-SH2-Bβ组:1)气道阻力明显降低(P＜0.01);2)肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸细胞数明显降低(P＜0.01);3)血清IgE及脾细胞培养液中IgE、IL-4含量明显降低(P＜0.01).结论:SH2-Bβ参与哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的发病机制.阻断SH2-Bβ可能成为治疗过敏性哮喘的有效新方法.     

细胞因子在慢性支气管炎和肺气肿大鼠气道炎症中的作用

目的:探讨细胞因子在慢性支气管炎(慢支炎)和肺气肿气道炎症中的作用以及红霉素对其气道炎症的防治作用机制。方法:复制慢支炎和肺气肿动物模型,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学计数和分类检查,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组(正常组、对照组、模型组、红霉素治疗组、红霉素预防治疗组)血清和BALF中细胞因子(IL-6、TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1)含量。结果:模型组有核细胞总数、中性粒细胞和单核巨噬细胞分类计数均较对照组显著增高(P<0.05)。而红霉素治疗组与预防治疗组能显著降低BALF中的中性粒细胞数。IL-6、TNF-α、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1在模型组均较对照组有所增高(P<0.05),红霉素治疗组与预防治疗组TNF-α的含量不同程度低于模型组,单核细胞趋化蛋白-1、IL-6的含量不同程度高于模型组。结论:多种炎症细胞,尤其是中性粒细胞、肺泡巨噬细胞以及IL-6、TNF-α、MCP-1等细胞因子在慢支炎和肺气肿气道炎症中起重要作用,红霉素对其气道炎症具有一定的防治作用,其机制与抑制气道炎症中性粒细胞及TNF-α的分泌有关。     

豚鼠哮喘模型气道重建对气道反应性的影响

目的:通过小剂量致敏原反复致敏建立豚鼠慢性哮喘模型,设定不同时点(4、6、8周)观察气道结构及气道反应性的变化,探讨气道重建对气道反应性的影响。方法:采用低剂量卵白蛋白反复致敏、激发豚鼠,制作哮喘动物模型,应用氯化乙酰胆碱静脉注射进行支气管激发实验,进行支气管肺泡灌洗并计数灌洗液的白细胞总数及分类。应用图像分析系统对豚鼠气道进行形态学测量。结果:哮喘8周组以纤维组织增生及平滑肌厚度增加最为显著。气道高反应性以哮喘4周组增高最明显,而随着与致敏原接触时间的延长,气道高反应性逐渐降低,到哮喘8周组与正常对照组相比已无显著差异。结论:长时间卵白蛋白吸入致敏可以引起哮喘豚鼠气道反应性的变化,这种变化与气道重建的发生相关联。     

哮喘患者血浆类胰蛋白酶、血嗜酸粒细胞和气道高反应性相互关系

为探讨肥大细胞、嗜酸粒细胞和气道高反应性相互关系 ,本文检测了 36例哮喘患者 (哮喘组 )及 2 9例健康人 (对照组 )血浆中激活肥大细胞的特征性标志物类胰蛋白酶值、血嗜酸粒细胞 (EOS )值及乙酰甲胆碱的支气管激发试验 (PC2 0 )值 ,并对三者关系进行分析比较 ,结果 :(1)哮喘组血浆类胰蛋白酶增高率为 36 11% (13/ 36)和EOS增高率为 38 89% (14/ 36 ) ,明显高于对照组 (P分别 <0 0 0 5 ) ;(2 )哮喘组PC2 0 值 <8g/L者占 81 82 % (2 7/ 33) ,显著低于对照组 (P <0 0 0 5 ) ;(3)哮喘EOS增高组的PC2 0 值为 1 2 1g/L ,明显低于EOS正常组的 5 11g/L (P <0 0 1) ;(4 )哮喘类胰蛋白酶增高组中有 61 5 3% (8/13)EOS值增高 ,明显高于类胰蛋白酶正常组的 2 6 0 9% (6/ 2 3) (P <0 0 5 )。综上所述 ,哮喘患者呈气道高反应 ,血EOS和类胰蛋白酶值增高 ;EOS与气道高反应性有关 ;类胰蛋白酶与EOS增高有关 ,但未直接与气道高反应性相关     

气道平滑肌生物力学与哮喘病理机制的研究进展

哮喘病是危害人类健康的重要呼吸疾病,但其病理机制至今依然不完全清楚。由于呼吸依赖于各级肺组织在外力作用下的一系列力学过程,其力学因素必定在呼吸功能方面发挥着重要作用。其中,气道平滑肌细胞对物理环境很敏感,异常的力学因素刺激将可能改变气道平滑肌细胞的结构和／或功能,导致气道平滑肌过度收缩等病理变化。近年来,人们对气道平滑肌生物力学及其在哮喘的病理机制中的作用展开了大量研究,获得了许多重要的发现。本文将围绕气道平滑肌与肺中的力学环境介绍有关研究的最新进展,包括气道平滑肌收缩和骨架纤维的组织结构,气道平滑肌功能长度范围以及适应性,力学刺激引起的气道平滑肌细胞结构和功能的变化,气道平滑肌紧张度对应变诱导的响应的调控,细胞骨架软玻态动力学行为等,并探讨气道平滑肌生物力学与哮喘病病理机制的关系。     

白细胞介素6对哮喘小鼠气道炎症和上皮下纤维化的影响

目的 :研究白细胞介素 6对哮喘小鼠气道炎症和气道结构重建的作用。方法 :雄性BALB C种系小鼠 2 4只 ,随机分成处理组、模型组和对照组 ,每组 8只 ,用卵蛋白致敏和反复激发 4周。每次激发前处理组腹腔内注射 2 0 0 μg白细胞介素 6单克隆抗体 ,模型组注射 2 0 0 μg大鼠IgG ,对照组注射等量的生理盐水。比较 3组气道反应性 (PC1 2 0 )、支气管肺泡灌洗液细胞成分、基底膜和上皮下胶原层厚度的变化。结果 :卵蛋白反复激发诱发小鼠PC1 2 0 显著降低 ,气道内炎症细胞数量明显增多 ,上皮基底膜增厚和上皮下胶原增加。与模型组比较 ,处理组支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞、中性白细胞、嗜酸细胞和淋巴细胞明显上升(P <0 0 5 ) ,基底膜和上皮下胶原厚度分别从 (3 1± 0 4 ) μm和 (4 5± 0 3) μm减少至 (2 2± 0 2 ) μm和 (3 5± 0 2 ) μm(P <0 0 5 ) ,但PC1 2 0 无改变 (P >0 0 5 )。结论 :白细胞介素 6在哮喘中的作用是抑制气道炎症和促进气道结构重建。     

齐留通干预ALOX5对RSV感染后小鼠气道炎症与AHR的影响

目的 观察齐留通干预花生四烯酸5脂氧合酶（ALOX5）蛋白对呼吸道合胞病毒（RSV）感染引起的气道炎症与气道高反应性（AHR）的影响。方法 6～8周雌性Balb/c小鼠随机分为对照组、RSV组和RSV+齐留通组,感染后第5天以Western blot检测各组肺组织中ALOX5蛋白水平。苏木精-伊红（HE）染色观察肺部病理损伤;检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及分类计数;全身体积描述记法检测小鼠气道反应性;ELISA检测BALF中cys-LTs、IL-6、IL-8水平;探针法RTPCR检测肺组织中RSV A2 N基因拷贝数。结果 RSV感染后第5天,小鼠肺组织中ALOX5蛋白水平升高,于齐留通干预后降低。齐留通可显著改善RSV感染后小鼠肺部病理损害、BALF中炎症细胞募集及AHR;齐留通干预后BALF中cys-LTs、IL-6、IL-8水平显著降低,但RSV N基因拷贝数无改变。结论 齐留通可抑制ALOX5蛋白表达,减少炎症因子产生,改善RSV感染后小鼠气道炎症与AHR。     

慢性支气管炎、肺气肿时肺动脉高压与肺血管壁改建与炎症的关系

目的：研究慢性支气管炎(慢支)、肺气肿气道及肺部炎症在肺动脉重塑中的作用。方法:24只雄性Wistar大鼠分3组，每组8只；慢支、肺气肿4周组（A组）、慢支、肺气肿6周组（B组）、正常对照组（C组）。气管内注入脂多糖（LPS）和每天烟熏的混合刺激方法制作慢支、肺气肿动物模型。测定各组血气分析、肺血流动力学和肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数；观测气道、肺泡组织及肺血管的病理组织学改变。结果:（1）A、B组BALF细胞总数显著高于C组，细胞分类及气道壁浸润的细胞中，A组以中性粒细胞为主，B组以淋巴细胞、单核巨噬细胞为主，其气管、支气管及肺组织具有慢支、肺气肿的病理特征。（2）A、B组右心室收缩压（RVSP）、平均肺动脉压（mPAP）、右心室与左心室＋室间隔重量比（RV/LV+S）高于C组（P<0.05）。A、B肌化型动脉（MA）数量比亦高于C组(P<0.05)。（3）A、B组MA百分比、mPAP与平均肺泡面积,BALF细胞总数和中性粒细胞、淋巴细胞、单核巨噬细胞对小气道浸润程度呈正相关，与PaO2无相关性。在A组中，MA百分比、mPAP与BALF细胞数的中性粒细胞百分比呈正相关，而在B组中，与淋巴细胞百分比、单核巨噬细胞百分比呈正相关 。结论：（1）慢支、肺气肿在无低氧血症时已出现肺动脉高压、右心室肥厚及肺动脉重塑，其发生机制与气道及肺部的炎症浸润及炎症破坏程度相关。（2）此阶段肺动脉重塑改变以肺小动脉肌化为主要特点，并与肺血流动力学改变呈正相关。     

Regulation of airway inflammation and remodeling in asthmatic mice by TLR3/TRIF signal pathway

This paper aims to investigate the effect of Toll-like receptors 3 (TLR3)/TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β (TRIF) signal pathway on the airway inflammation and remodeling in asthmatic mice. C57BL/6 and TLR3^−/− mice were randomly divided into three groups (10 mice per group), including Control group (mice inhaled phosphate buffer saline (PBS)), Asthma group (mice inhaled ovalbumin (OVA)) and polyriboinosinic-ribocytidylic acid (poly (I: C)) group (asthmatic mice were injected intraperitoneally with TLR3 agonist poly (I: C)). Hematoxylin-eosin (HE) staining, Wright-Giemsa staining, Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Immunohistochemistry, Hydroxyproline assay, quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) and Western blot were used to assess for the indices of airway inflammation and remodeling. In terms of WT mice, all asthma groups with or without the addition of poly (I: C) showed exaggerated inflammation and remodeling in the airways as compared to Control group, which were more seriously in poly (I: C) group than Asthma group. Furthermore, we observed the significant inhibition of airway inflammation and remodeling in the TLR3^−/− mice in both Asthma no matter with or without addition of poly (I: C) than the WT mice. TLR3 knockout could obviously relieve the airway inflammation and remodeling in asthma through inhibiting TLR3/TRIF signaling pathway.     

The effects of Th2 cytokines on the expression of ADAM33 in allergen-induced chronic airway inflammation

A disintegrin and metalloprotease domain 33 (ADAM33) has been identified as an asthma susceptibility gene, which is associated with small-airway remodeling. However, the role of ADAM33 in the development of allergic airway inflammation is unclear. The present study used an established murine model of allergen-induced chronic airway inflammation, which was sensitized and then challenged by nebulized 2.5% ovalbumin (OVA) for 8 weeks (30 min/day, three times a week). The expression of ADAM33 mRNA detected by real time RT-PCR was significantly enhanced in the lung tissue of mice with OVA challenge, as compared with the group challenged with saline. This OVA-challenged model showed significant Th2-biased airway inflammation as well as airway remodeling with features of sub-epithelial fibrosis and mucus hyper-secretion. Furthermore, in vitro studies showed that IL-4 and IL-13 could significantly up-regulate the expression of ADAM33 mRNA in human fibroblasts in a concentration- and time-dependent manner as compared to normal controls. These results support the note that Th2 cytokines can up-regulate the expression of ADAM33 mRNA and ADAM33 may play an important role in the development of airway remodeling in allergen-induced chronic airway inflammation.     

外源性H2S干预对O3致哮喘小鼠气道反应性和气道重塑的影响

 目的: 探讨外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H₂S)对臭氧(ozone,O₃)致哮喘小鼠气道反应性和气道重塑的影响。方法: 将15只SPF级C57BL/6雌性小鼠随机分为对照组、O₃组和NaHS+O₃组,每组5只。O₃处理前0.5 h,对照组和O₃组腹腔注射生理盐水,NaHS+O₃组腹腔注射NaHS(H₂S的供体);O₃组和NaHS+O₃组隔天用O₃处理,对照组则呼吸清洁空气。持续4周后无创测定小鼠的气道反应性,随后进行气管环张力测定,通过肺组织HE染色测定支气管基底膜周径(Pbm)和管壁总面积(Wat)并标准化衡量气道重塑程度,并行AB-PAS染色测定肺组织中杯状上皮细胞的变化情况以进一步评价气道重塑程度。结果: 与对照组相比,O₃组小鼠的气道反应性显著增高;NaHS+O₃组明显低于O₃组,但与对照组相比差异无统计学显著性。与对照组相比,O₃组小鼠在乙酰甲胆碱刺激时的气管收缩力显著加大;NaHS+O₃组明显小于O₃组。与对照组相比,O₃组小鼠的支气管壁厚度明显加大;NaHS+O₃组显著小于O₃组但仍大于对照组。与对照组相比,O₃组小鼠肺组织中杯状上皮细胞占气道上皮细胞总面积的百分比显著上升;NaHS+O₃组显著低于O₃组但仍高于对照组。结论: 外源性H₂S对O₃所致哮喘的气道高反应性和气道重塑有缓解与保护作用,有望为临床药物治疗哮喘提供新靶点。     

The effects of nodakenin on airway inflammation,hyper-responsiveness and remodeling in a murine model of allergic asthma

Context: Nodakenin is a major coumarin glucoside in the root of Peucedanum decursivum Maxim, a commonly used traditional Chinese medicine for the treatment of asthma and chronic bronchitis for thousands of years.

Objective: In this work, the anti-asthma potential of nodakenin was studied by investigation of its effect to suppress airway inflammation, hyper-responsiveness and remodeling in a murine model of chronic asthma.

Materials and methods: BALB/c mice sensitized to ovalbumin (OVA) were challenged with aerosolized OVA for 8 weeks, orally administered with nodakenin at doses of 5, 10 and 20?mg/kg before each OVA challenge.

Results: Compared with the model group, nodakenin treatment markedly inhibited airway inflammation, hyper-responsiveness and remodeling, showing improvement in subepithelial fibrosis, smooth muscle hypertrophy, and goblet cell hyperplasia, and decreased levels of interleukin (IL)-4, IL-5, IL-13 and matrix metalloproteinase-2/-9 in bronchoalveolar lavage fluid, and the level of OVA-specific IgE in serum. In addition, the NF-κB DNA-binding activity in lung tissues was also reduced by nodakenin treatment.

Conclusions: These data indicated that nodakenin might mitigate the development of chronic experimental allergic asthma.     

动态观察过敏原诱导的哮喘小鼠模型从急性炎症到慢性重塑的发展

目的:动态观察对比卵白蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠模型从气道的急性炎症到慢性重塑的相关炎症指标及气道重塑指标的变化。方法:60只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组和哮喘组。哮喘组给予OVA致敏和激发,正常对照组给予等量生理盐水(NS)作为对照,第21天开始,连续激发3 d,观察急性炎症反应;而后每周激发1次、每次激发后24 h内取材1次连续5周;动态观察对比OVA激发组和NS对照组小鼠气道炎症细胞的浸润情况、灌洗液细胞因子水平和气道重塑相关指标。结果:与NS组比较,OVA组肺组织的炎症细胞浸润明显,炎症因子升高;气道上皮细胞向杯状细胞转化明显;支气管外周胶原沉积显著。OVA组内比较,24 d组炎症细胞和炎症因子上升明显,而上皮细胞向杯状细胞的转化以及支气管外周胶原沉积相关重塑指标不明显,52 d组上皮细胞向杯状细胞的转化以及支气管外周胶原沉积相关重塑指标最为显著,而炎症细胞和炎症因子有所下降。结论:连续3次OVA激发可成功模拟炎症细胞和炎症因子显著的急性哮喘模型;每周1次、连续5周的OVA激发方式可成功模拟重塑明显的慢性哮喘模型。     

阿奇霉素对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道炎症和气道黏液高分泌的影响

目的:研究阿奇霉素对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)模型大鼠的防治作用,从气道炎症及黏液高分泌角度探讨其作用机制。方法:将18只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、慢阻肺模型组、阿奇霉素治疗组,每组6只。通过烟熏及大鼠气管内注入脂多糖(LPS)的方法建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型。HE染色观察大鼠肺组织病理变化。肺功能仪检测大鼠肺通气功能。ELISA检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-8、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。Western blot及real-time PCR检测支气管肺组织中MUC5ac和Toll样受体4(TLR4)蛋白及mRNA的表达。结果:模型组大鼠支气管肺组织HE染色结果符合慢阻肺病理改变。与模型组比较,治疗组损伤程度显著减轻。模型组与对照组比较,肺功能明显下降,大鼠BALF中IL-8、IL-17、TNF-α含量明显增高(P0.05),肺组织中MUC5ac和TLR4蛋白及mRNA表达水平显著增高(P0.05)。与模型组比较,治疗组肺功能的下降减轻,大鼠BALF中IL-8、IL-17、TNF-α含量的升高受到明显抑制(P0.05),肺组织中MUC5ac和TLR4蛋白及mRNA表达水平的受到明显抑制(P0.05)。结论:阿奇霉素可降低慢阻肺模型大鼠BALF中IL-8、IL-17和TNF-α水平,抑制肺组织内MUC5ac和TLR4蛋白表达,通过减轻气道炎症及黏液高分泌来达到防治慢阻肺的作用。