RIP3在necroptosis信号通路中的胞内定位

目的 研究necroptosis信号通路中受体相互作用蛋白3（RIP3）的胞内定位.方法 SD大鼠原代皮质神经元细胞培养12天,zVAD 20 μmol/L预处理30 min,TNFα 30 ng/ml处理不同时间,Western blot检测胞质、胞核中RIP3蛋白水平,结合免疫荧光观察RIP3的胞内定位.结果 随着TNFα作用时间的延长,胞质、胞核中RIP3蛋白水平均呈上升趋势,胞质中RIP3蛋白水平在8 h达高峰,随后下降,胞核中RIP3蛋白水平在12 h达高峰,即在12 h出现核转位的高峰（P＜0.05）.结论 正常细胞中RIP3存在于胞质,necroptosis时发生核转位.     

ND-308抗脑缺血神经保护作用的研究

目的 观察ND-308对大鼠局灶性脑缺血的保护作用,探讨ND-308抗脑缺血作用的机制.方法 78只健康雄性SD大鼠,采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion)模型,随机分为6组:模型组、假手术组、ND-308小剂量组(5 mg/kg)、ND-308中剂量组(10 mg/kg)、ND-308大剂量组(20 mg/kg),阳性对照依达拉奉组(6 mg/kg),于再灌注后30 min内尾静脉注射给药.缺血2 h再灌注24 h后测定神经行为障碍评分、脑梗死体积,HE染色观察缺血皮层组织形态学变化,采用免疫组织化学染色法测定IL-1β、TNF-α、NF-κB的表达.结果 ND-308治疗组与模型组相比神经系统症状减轻,脑梗死体积缩小,下调脑组织中IL-1β、TNF-α、NF-κB的表达,并呈现一定剂量依赖性,ND-308小剂量组各项与模型组相比无统计学意义(P＞0.05),其余各组与模型组相比P＜0.05或P＜0.01.结论 ND-308对脑缺血再灌注具有保护作用作该作用可能有抑制炎症反应有关.     

消栓通络有效成分组对大鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制

目的研究消栓通络有效成分组(XECG)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及其机制。方法SD大鼠随机分为6组:假手术组,模型组,尼莫地平对照组(4 mg·kg-1),XECG高、中、低剂量组(200、100、50mg·kg-1)。采用线栓法阻断大脑中动脉(MCAO)建立大鼠脑缺血/再灌注(I/R)模型。缺血2h,再灌注24h后,HE染色观察大鼠缺血侧脑组织的病理变化;Western blot法检测缺血侧脑组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)的表达。结果 XECG能明显改善缺血再灌注大鼠脑组织的病理变化,降低缺血侧脑组织TNF-α、IL-1β的表达。结论 XECG对脑缺血再灌注大鼠具有明显的保护作用,其机制可能与降低TNF-α、IL-1β的表达,抑制炎症级联反应有关。     

脑缺血损伤机制研究

大量动物实验及临床研究表明脑缺血及再灌注期间发生着复杂的病理生理变化。一方面，脑缺血再灌注既可挽救濒临梗死的细胞，另一方面加重细胞损伤，导致细胞死亡。目前对脑缺血再灌注损伤机制的研究主要集中在氧自由基、兴奋性氨基酸、细胞内钙超载、炎症反应和细胞凋亡等方面，现综述如下：     

Memantine对大鼠局灶性脑缺血损伤的长期神经保护效应

目的：探讨N-甲基-D-天门冬氨酸盐（NMDA）受体拮抗剂美金刚（MEM）对大鼠局灶性脑缺血损伤的长期神经保护作用.方法：将70只SD大鼠随机分为假手术组（n=6）和对照组,MEM5,10,20mg/kg组（n=16）.除假手术组外,其余各组动物均行线栓法阻闭大脑中动脉（MCAO）120min.MEM各组分别在脑缺血后15min腹腔注射MEM5,10,20mg/kg,对照组在脑缺血后15min腹腔注射等容积生理盐水.再灌注7d后进行神经功能评分,处死动物后行2,3,5-氯化三苯四唑（TTC）染色,测定脑梗死容积百分比,酶联免疫法检测脑组织肿瘤坏死因子α（TNFα）,白细胞介素-6（IL-6）含量.结果：再灌注7d后,神经功能评分MEM10,20mg/kg组均明显优于对照组,MEM20mg/kg组优于MEM10mg/kg组（P〈0.01）,MEM5mg/kg组与对照组相比较差异无显著性.脑梗死容积MEM10,20mg/kg组明显小于对照组,MEM20mg/kg组小于MEM10mg/kg组（P〈0.01）,MEM5mg/kg组与对照组相比较差异无统计学意义.脑组织中炎症因子TNFα,IL-6含量对照组较假手术组显著升高（P〈0.01）,MEM10,20mg/kg组较对照组明显降低（P〈0.01）.MEM5mg/kg组较对照组TNFα,IL-6含量差异无统计学意义.结论：MEM对大鼠局灶性脑缺血损伤有长期神经保护效应,此神经保护效果呈剂量依赖性,其机制可能与降低脑组织TNFα,IL-6含量相关.     

雌激素对脑缺血的神经保护作用机制

由于老龄化人口的增加，缺血性脑血管病的发病率急剧增高。因其发病率高、复发率高、死亡率高的特点，已成为目前严重危害人类健康的主要疾病之一。近年来一些基础研究和临床试验均提示雌激素的水平与缺血性脑血管病的发生、发展有一定的联系。据流行病学调查研究表明，绝经前女性较同年龄男性的脑缺血病发生率低，而绝经后女性的脑缺血病发生率明显增高。此外，临床上使用雌激素的替代疗法可明显缓解绝经期症状，降低脑缺血性疾病的发作。现将雌激素对脑缺血损伤的神经保护作用可能机制综述如下。     

犬全脑缺血后头部选择性浅低温对脑内源性神经保护的影响

目的研究犬全缺血后浅低温对脑内源性神经保护的影响。方法15只健康杂种犬随机分为3组：手术对照组（A组,n=4只）,缺血再灌注组（B组,n=5只）,浅低温治疗组（C组,n=6只）。A组动物完成麻醉和手术后心脏不停跳观察8h。B组和C组动物心脏停跳18min,心脏复苏成功后,B组动物观察8h,C组动物接受浅低温[（34±0．5）℃]治疗。实验结束时开颅取右顶叶脑皮质供测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）含量和免疫组织化学法显示小白蛋白（PV）和热休克蛋白70（HSPm）阳性神经元。结果B组动物脑内GSH、GSH-Px、T-SOD、Mn-SOD、Cu-ZnSOD、PV阳性神经元数量显著低于A组（P〈0．05或P〈0．01）,而HSP70—LI阳性神经元数量明显高于A组[（15．6±3．7）vs（5．5±2．1）,P〈0．05]。C组动物脑内GSH、T-SOD、Cu-ZnSOD、PV阳性神经元和HSP70-LI阳性神经元数量明显高于B组PV-Ⅰ神经元密度：（34．7±6．3）vs（23．8±5．3）,P〈0．05;HSP70—LI阳性神经元密度：（27．1±4．9）vs（15．6±3．7）,P〈0．05。结论脑内内源性神经保护作用增强可能是浅低温治疗脑缺血的机制之一。     

脑缺血后内源性激活神经干细胞的机制研究

脑缺血再灌注损伤发生、发展的机制的研究，一直是近年来神经科学的研究热点。脑缺血后，神经细胞由于缺血、缺氧，细胞膜上的离子泵及细胞膜的通透性受到影响，造成神经细胞水肿、坏死。脑内的神经干细胞（neuron stem cell，NSC）在多种因素的作用下通过增殖、迁移、分化三个过程，可以填补和部分修复坏死的脑组织，使神经功能部分恢复，本文就脑缺血后激活内源性NSC机制作一综述。     

大鼠脑缺血后脑组织脑红蛋白mRNA的动态表达及保护机制研究

脑红蛋白（neuroglobin,Ngb）是2000年由Burmester等。首先发现的一种新的携氧球蛋白,广泛表达于神经组织,急性缺血的情况下表达上调,在脑的适应性保护中起重要作用。免疫共沉淀实验证明Ngb与钠钾ATP酶β2亚基存在相互作用。本研究拟采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术对大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织中Ngb及钠钾ATP酶α亚基mRNA水平的变化进行观察,     

大豆异黄酮对雌性大鼠缺血脑组织的保护作用

目的 探讨大豆异黄酮对去势雌性SD大鼠永久性局灶性脑缺血组织的神经保护作用。方法 雌性SD大鼠双侧卵巢切除后，随机分成大豆异黄酮组和对照组。异黄酮组(HISO)灌胃给予120mg/kg的大豆异黄酮，对照组以等剂量的溶剂灌胃。1月后各实验组均采用线栓法建立右侧永久性大脑中动脉阻断模型。缺血24h后立即断头取脑，冠状切片，应用免疫组化法检测不同实验组大鼠缺血侧C-fos表达的情况。TUNEL法原位检测细胞凋亡。结果 大豆异黄酮组与对照组相比，缺血侧C-fos表达阳性细胞数明显减少；凋亡细胞数明显减少。结论 大豆异黄酮具有类雌激素的作用，它对缺血性脑损伤具有保护作用，而减弱大脑缺血边缘区的C-fos表达及神经细胞凋亡可能是它发挥神经保护作用的机制。     

Inflammatory reaction after focal cerebral ischemia in mouse

Inflammationisacriticalprocessafterstroke 1　Studieshaverevealedtheover expressionofinflammatoryfactorsandtheaccumulationofinflammatorycellsinischemictissues 1,2 　Intercellularadhesionmolecule 1(ICAM 1) ,oneoftheadhesionmolecules ,isexpressedconstitutivelyonthesurfaceoftheendotheliumandcanbeupregulatedbyharmfulstimulation 1,2 　ReportsalsoshowedthatinflammatoryfactorsincludingMCP 1,IL 1βandTNFαcaninducetheoverexpressionofICAM 1 3 7CD11b/CD18(Mac 1) ,asubgroupoftheintegrinfamilyofadh…     

Preconditioning of intravenous parecoxib attenuates focal cerebral ischemia/reperfusion injury in rats

Background  Several studies suggest that cyclooxygenase-2 (COX-2) contributes to the delayed progression of ischemic brain damage. This study was designed to investigate whether COX-2 inhibition with parecoxib reduces focal cerebral ischemia/reperfusion injury in rats.

Methods  Ninety male Sprague-Dawley rats were randomly assigned to three groups: the sham group, ischemia/reperfusion (I/R) group and parecoxib group. The parecoxib group received 4 mg/kg of parecoxib intravenously via the vena dorsalis penis 15 minutes before ischemia and again at 12 hours after ischemia. The neurological deficit scores (NDSs) were evaluated at 24 and 72 hours after reperfusion. The rats then were euthanized. Brains were removed and processed for hematoxylin and eosin staining, Nissl staining, and measurements of high mobility group Box 1 protein (HMGB1) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) levels. Infarct volume was assessed with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Results  The rats in the I/R group had lower NDSs (P <0.05), larger infarct volume (P <0.05), lower HMGB1 levels (P <0.05), and higher TNF-α levels (P <0.05) compared with those in the sham group. Parecoxib administration significantly improved NDSs, reduced infarct volume, and decreased HMGB1 and TNF-α levels (P <0.05).

Conclusions  Pretreatment with intravenous parecoxib was neuroprotective. Its effects may be associated with the attenuation of inflammatory reaction and the inhibition of inflammatory mediators.

     

糖尿病合并脑缺血大鼠模型对炎症因子的影响

目的比较炎症因子在单纯性脑缺血和复合性脑缺血不同时间点的变化,分析糖尿病炎症因素对脑缺血的影响。方法通过复制大脑中动脉缺血模型,观察大鼠脑部缺血的损伤情况;采用酶联免疫法(ELISA)检测血清中的肿瘤坏死因子a(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、环氧化酶-2(COX-2)的含量。结果 TNF-α、IL-1、COX-2在糖尿病组中的水平均高于正常组,差异有统计学意义,P<0.05;与正常组相比单纯脑缺血组模型在3、7d中呈高表达趋势,差异性明显,P<0.05;复合脑缺血组与糖尿病组比较,表达均降低,差异性显著,P<0.05。复合脑缺血组与单纯脑缺血组比较,TNF-α、IL-1 3d时组间比较降低、COX-2升高,7d时组间比较均降低,差异性明显,有统计学意义,P<0.05。结论在糖尿病状态下,炎症因子在缺血不同时期既有累积现象,又有特异性的表达,与疾病的发生发展密切相关。     

大鼠局部脑缺血后NADPH-d神经元的变化

目的：观察缺血性脑损害中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）神经元的变化规律,探讨一氧化氮（ＮＯ）参与缺血性脑损害的机制。方法：采用组织化学染色方法观察大鼠局灶性脑缺血后尼克酰胺腺啶呤二核酸磷黄递酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）阳性神经元的变化规律。结果：大鼠局灶性脑缺血后ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性神经元明显增加,缺血２ｈ后出现形态学改变,且以细胞皱缩、胞浆致密为主要死亡方式。结论：ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性元对缺血性损害相对耐受,细胞凋     

大鼠脑缺血再灌流损伤后的组织学观察

目的 :建立一个新的脑缺血再灌流损伤动物模型 ,观察脑组织的形态结构变化 ,为脑缺血再灌流损伤的进一步实验研究提供依据。方法 :结扎大鼠左侧颈总动脉 ,从其右侧颈总动脉向远心端插管放血持续 30min、6 0min、90min和 12 0min ;再从大鼠左侧股静脉插管输血回体内 ,然后解除左侧颈总动脉结扎 ,同时停止放血后观察。结果 :脑组织呈缺血性改变 ,随着缺血时间延长 ,缺血性损害加重 ,再灌后进一步恶化。结论 :该脑缺血模型稳定 ,重复性好 ,不同脑区缺血再灌流神经元损伤呈现不同形态学改变。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后死亡相关蛋白激酶的表达及意义

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时死亡相关蛋白激酶(Death associated related protein kinase,DAPK)的表达变化及其与脑缺血再灌注损伤的关系。方法 线拴法建立局灶性脑缺血再灌注模型,SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和缺血再灌注组,缺血组于栓塞3h后分别再灌注12h、24h、3d、7d。HE染色观察组织病理变化;免疫组化法检测DAPK的表达;原位杂交法检测DAPK mRNA的表达。结果 缺血组DAPK免疫阳性反应于再灌注后24h开始增强并于3d时达高峰,随后下降;DAPK mRNA的表达于再灌注3d时达高峰,随后下降。结论 脑缺血再灌注损伤诱导DAPK表达增强;DAPK在缺血性脑损伤中起重要作用。     

氯丙米嗪对大鼠局灶性脑缺血损伤后运动功能的作用

目的：研究氯丙米嗪对脑缺血的作用。方法：在局灶性脑缺血的大鼠应用氯丙嗪，与脑缺血对照组比较，在缺血后1，3，7，14和28d测试神经学功能。结果：氯丙米嗪组的网屏握持功能较对照组明显改善，而两组的胶布撕脱试验之间无明显差别。结论：氯丙米嗪可提高局灶性脑缺血后的肌力。     

万拉法新对大鼠局灶性脑缺血损伤后运动功能的作用

目的:研究万拉法新对局灶性脑缺血的作用. 方法:采用线栓大脑中动脉缺血大鼠模型,分为局灶性脑缺血对照组和局灶性脑缺血万拉法新组. 于缺血后1,3,7,14和28 d测试神经学功能. 结果:于缺血14 d和28 d,缺血万拉法新组的网屏握持时间分别为(56±13)s,(70±13) s,较缺血对照组(38±14) s,(52±7)s明显延长(P<0.05),而在各时间点下两组的胶布撕脱试验之间无明显差别(P>0.05). 结论:万拉法新可提高局灶性脑缺血后的肌力.     

大鼠局灶脑缺血基质金属蛋白酶-2的表达

目的 研究大鼠局灶脑缺血后基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2, MMP-2)在不同时相的表达,探讨MMP-2与缺血性损伤的关系.方法 制作大鼠自体血栓性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,在不同时点用免疫组化染色观察MMP-2表达情况,并与假手术组进行对照.结果 缺血6 h后MMP-2表达很少,24 h表达上调,5 d达最高水平.MMP-2主要表达在星形细胞、巨噬细胞.结论 缺血后出现MMP-2表达的上调,影响缺血性卒中的转归.